專利名稱：紫杉酚或Taxotere或紫杉浸膏與環(huán)糊精形成的包合配合物，其制備和使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紫杉酚〔2aR-〔2aα，4β；4αβ，6β，9α(αR*，βS*)，11α-12α，12aα，12bα〕〕-β-(苯甲?；被?-α-羥基苯-丙-6，12-b-雙(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氫-4，11-二羥基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亞甲基-1H-芳癸并〔3，4〕-苯基-〔1，2-b〕oxet-9-基酯或Taxotere(丁氧基羰基-10-脫乙酰-N-脫苯甲酰基紫杉酚)和紫杉浸膏(除紫杉酚外，還含有其它雙萜taxan-衍生物如頭孢甘露糖寧(cephalomannine)，10-脫乙酰-紫杉酚，脫乙酰漿果赤霉素(baccatine)-III，漿果赤霉素-III，肉桂酰-紫杉寧(taxicine)，紫杉素(taxusine)與一種環(huán)糊精衍生物或環(huán)糊精-衍生物-混合物形成的包合配合物。
盡管紫杉酚顯示出很有前景的生物效應(yīng)和顯著的抗癌活性，它的醫(yī)療應(yīng)用面臨著許多困難-taxan微溶于水，例如25℃下紫杉酚的水溶解度在0.55-0.59μg/ml之間(在Cyclolab測(cè)定的)-紫杉酚對(duì)光和pH非常敏感，在其分解過(guò)程中形成生物鈍性產(chǎn)物。-由于所用的有細(xì)胞毒性的溶劑(Cremophor EL)給出的紫杉酚在藥理學(xué)上的結(jié)果受到有效性的挑戰(zhàn)。(Denis，J.NJ.Am.Chem.Soc.110.5917.1988和Fjaellskog M.L.等Lancet，342-873.1993和Webster，L.等.J.Natl.Cancer Inst.85.1685.1993)已知許多改善上述不利特征的方法-使用加溶劑(比例為1∶1的Cremophor EL-無(wú)水乙醇混合物，Natl.Cancer Institute，PACLITAXEL Documentation)；-用磷脂酰-乙醇胺形成化學(xué)修飾的微膠束(Patent of LipidSpecialities，Itc.EP 118316)-將乙醇-聚山梨酸酯用作加溶劑(Patent of Rhone-PoulencRorer EP 522936，和Rhone Poulenc Rorer EP 522937)-使用脂質(zhì)體(Liposomal)紫杉酚配方(例如，Aquilar，R.和Rafaelloff，R.WO 93/18751以及Alkan，M.H.等J.Liposome Research 3.42.1993)還有一些通過(guò)形成合成衍生物來(lái)提高紫杉酚的水溶解度的實(shí)驗(yàn)。(例如Zhao，H.等所著，J.Nat.Prod.54.6.1607.1991.，Kingston，D.I.Xang，Y.Y.EP.Pat.Appl.EP 537905和Deutsch，H.M.等.US.pat.5.157.049)化學(xué)修飾的、溶解度提高的紫杉酚衍生物的生物效應(yīng)變差，主要是多劑耐性顯示出上升趨勢(shì)并且細(xì)胞毒性(恰恰是生物效應(yīng))減弱。
在紫杉酚的胃腸外應(yīng)用過(guò)程中，為解決這些困難，還合成了水溶解度提高的紫杉酚-前體藥物(Matthew A.等J.Med.Chem.35.1.145.1992)。
Bartoli等希望通過(guò)紫杉酚的微囊包封改進(jìn)紫杉酚溶解度差的普遍問(wèn)題(Bartoli H；等J.Microencapsulation 7.2.191.1990)。
在制備特別是含有紫杉酚的胃腸外藥品中存在許多困難，因?yàn)榧词乖诖嬖诖罅肯礈靹┮约八陀袡C(jī)溶劑的混合物的情況下，雙萜類型(確切地說(shuō)是親油的taxan衍生物)也不能被配制成合適的穩(wěn)定的濃溶液。(Tarr，B.Pharm.Res.4.2.162.1987)。
當(dāng)前，正式注冊(cè)的(例如，在the National Institutes ofHealth and the National Cancer Institute)胃腸外紫杉酚類型被配制成聚氧乙烯化蓖麻油(Cremphor EL)和乙醇(比例為1∶1)中的6mg/ml濃乳濁液，在使用時(shí)這些乳濁液必須稀釋10倍。這些胃腸外產(chǎn)品面臨許多不如意的副作用，其中最重要的是由胃腸外幾乎不能容許的Cremophor EL引起的過(guò)敏性副作用。此外，在Cremophor EL-乙醇溶劑中制成的紫杉酚配方不是透明溶液，而是略帶乳白色的(Trissel，L.A.Am.J.Hosp.Pharm.50.300.1993)，而且在解釋或與其它一些藥品共同使用時(shí)存在形成沉淀的可能性。
在日本的一次會(huì)議上，據(jù)報(bào)道，與乙醇和乙酸乙酯一起使用的糖基和麥芽糖基-β-環(huán)糊精將紫杉酚的溶解度提高到20-110μg/ml(Mikuni，k.等1993)。
根據(jù)我們的這項(xiàng)發(fā)明，通過(guò)使用合適的環(huán)糊精和/或環(huán)糊精衍生物和/或其混合物可以實(shí)現(xiàn)紫杉酚和taxan衍生物的水溶解度的提高，而在紫杉酚和環(huán)糊精之間不形成任何化學(xué)鍵。
可用下述方法制備本發(fā)明的包含配合物a)在水介質(zhì)中，將紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物反應(yīng)，用原本已知的方式從混合物中分離配合物。
b)以固體形式，將紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物反應(yīng)。
c)紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物進(jìn)行高能研磨。
可通過(guò)過(guò)濾、離心、冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥將配合物從混合物中分離。
按照或參考公開(kāi)的匈牙利專利申請(qǐng)No.T/52366中的方法進(jìn)行紫杉酚或Taxotere或紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物的高能研磨。
可優(yōu)選下列環(huán)糊精衍生物-7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精-無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精-琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精-2-羥基丙基-β-環(huán)糊精-可溶性陰離子-β-環(huán)糊精(CDPSI)-β-環(huán)糊精-γ-環(huán)糊精本發(fā)明的一些包合配合物改善了水溶解度和穩(wěn)定性，例如，紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與-7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精-無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精-琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精形成的包合配合物，因此，它們可用作藥物配方中的活性組分。
含有有效量的用作活性組分的由紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物(優(yōu)選7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精，無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精，琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精)形成的包合配合物的本發(fā)明藥物配方以及常規(guī)的藥物裝灌，稀釋和配合劑都可用原本已知的方式制備。
本發(fā)明的其它包合配合物不能或不能顯著提高水溶解度，例如，紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與-2-羥基丙基-β-環(huán)糊精-可溶性陰離子-β-環(huán)糊精聚合物(CDPSI)-β-環(huán)糊精-γ-環(huán)糊精形成的包合配合物，但是，它們可用來(lái)例如從紫杉酚生產(chǎn)細(xì)胞發(fā)酵液中提取紫杉酚。
用下述實(shí)施例闡述本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1室溫下在10ml 40％含水7-2，6-二-O-甲基化β-環(huán)糊精中處理11.6mg紫杉酚(sigma Chemicals Co.USA)30分鐘，直至得到略帶渾濁的溶液。此溶液再于無(wú)菌的0.22μm乙酸纖維素膜濾器上過(guò)濾，得到清澈的紫杉酚水溶液，其中溶解的紫杉酚濃度為992-1000μg/ml(而25℃下紫杉酚的水溶解度是0.55-0.59μg/ml)。
清澈、無(wú)菌過(guò)濾的紫杉酚水溶液可在正常情況下貯藏8周而不變質(zhì)。
上述紫杉酚水溶液可被冷凍干燥，得到3.94g白色、有些接近非晶形的固體產(chǎn)物，它可與水接觸而再溶解。溶解的溶液含有1000μg/ml溶解的紫杉酚，這種溶液的pH在5.7-6.2之間。通過(guò)X射線粉末衍射法和差式掃描量熱法證明包合配合物以固體形式存在。實(shí)施例2無(wú)規(guī)甲基化β-環(huán)糊精(平均取代度＝1.8)以不同濃度溶解于生理緩沖鹽水(pH7.6)中，室溫下這些溶液與紫杉酚基質(zhì)共同保溫12小時(shí)。每種樣品含有初始濃度為5mg/ml的紫杉酚。平衡后的懸浮液進(jìn)行膜過(guò)濾，用HPLC分析溶解的紫杉酚。得到的溶解度數(shù)據(jù)列于表1中。表1紫杉酚在不同濃度無(wú)規(guī)甲基化βCD溶液中的水溶解度
既然葡萄糖不能導(dǎo)致任何溶解度的提高，溶解度的提高就是因?yàn)槿芤褐凶仙挤雍图谆?βCD間配合物的形成。實(shí)施例3
在有磺基丙氧基-β-環(huán)糊精存在下，用與實(shí)施例2中相同的方法將紫杉酚溶解。在研究條件(25℃，水中，中性pH)下，發(fā)現(xiàn)磺基丙氧基-β-環(huán)糊精不適于紫杉酚的溶解。與此相反，發(fā)現(xiàn)這種衍生物在溶液中與紫杉酚發(fā)生不利的相互作用，由于這種相互作用，紫杉酚分解為未知產(chǎn)物。實(shí)施例4發(fā)現(xiàn)水溶性的陰離子-β-環(huán)糊精聚合物(氯甲代氧丙環(huán)-交聯(lián)羧基甲基化-β-環(huán)糊精，簡(jiǎn)寫(xiě)為(CDPSI)是比甲基化β-環(huán)糊精潛力小的加溶劑。溶解度的提高列于表2中。表2離子水溶性β-環(huán)糊精聚合物存在下紫杉酚的水溶解度
實(shí)施例5用2-羥基丙基化β-環(huán)糊精(HPBCD)溶解和配制紫杉酚。在表3中給出由HPBCD溶液達(dá)到的溶解度提高。
表3用HPBCD溶解紫杉酚
實(shí)施例6發(fā)現(xiàn)單琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精(一種起酸性作用的甲基化-β-環(huán)糊精)是一種改善紫杉酚水溶解度的有潛力的加溶劑。室溫下紫杉酚在1ml 10％琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精水溶液中攪拌12小時(shí)。過(guò)濾懸浮液，用HPLC檢測(cè)溶解的紫杉酚。在10％琥珀酰-甲基-βCD水溶液中溶解的紫杉酚的濃度為244μg/ml，而40％琥珀酰甲基-βCD溶液使溶解的紫杉酚的濃度達(dá)到993μg/ml。因此，單琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精的加溶能力幾乎與72，6-二-O-甲基化-β-環(huán)糊精一樣高。實(shí)施例78.5mg紫杉酚和26.6mg(大約1∶2的摩爾比)7-2，6-二-O-甲基化-βCD與0.25mt乙醇∶水(1∶2)混合物充分研磨，直至得到均相的膏。濕膏于空氣中干燥至恒重并制成粉。得到的白色固體含有21.8％紫杉酚。發(fā)現(xiàn)來(lái)自如實(shí)施例7的產(chǎn)物的殘存紫杉酚在試管內(nèi)的溶解性能以120-140倍遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)未配合的紫杉酚。另外，此配方中紫杉酚的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性也有改善。實(shí)施例88.5mg紫杉酚和52.9mgγ-環(huán)糊精在2.5ml 33％(V/V)含水乙醇中充分?jǐn)嚢?小時(shí)。通過(guò)冷凍干燥除去溶劑，得到白色的微晶產(chǎn)物。通過(guò)熱分析證實(shí)，在紫杉酚/γ-環(huán)糊精配方中，紫杉酚的熱穩(wěn)定性改善了。根據(jù)實(shí)施例8的配合物的DSC圖形上，在紫杉酚溶化范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出吸熱熱流動(dòng)的跡象，它指出藥物的配合狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)結(jié)晶紫杉酚γCD配方適于直接壓片。還通過(guò)X射線衍射法證實(shí)了新晶格形成這一事實(shí)。
紫杉酚和γCD的相互作用沒(méi)有導(dǎo)致溶解度提高，相反，γCD的作用恰恰相反，因此，γCD水溶液可通過(guò)形成穩(wěn)定晶體配合物(從中可再提取殘存紫杉酚)將紫杉酚從多組分混合物(例如，得自紫杉短葉蘇木酚地下莖樹(shù)皮)中除去。實(shí)施例9室溫下50mgβ-環(huán)糊精和8.5mg紫杉酚在2.5ml水-乙醇(1∶2)混合物中反應(yīng)12小時(shí)。通過(guò)噴霧干燥或冷凍干燥除去溶劑，得到一種白色微晶固體，X射線粉末衍射法表明它是一種新晶態(tài)的包合配合物。發(fā)現(xiàn)固體紫杉酚/β-環(huán)糊精配方適合于直接壓片。發(fā)現(xiàn)得自βCD配方的紫杉酚在試管中溶解率優(yōu)于游離紫杉酚在水中和pH7.6緩沖液中的溶解率。實(shí)施例10通過(guò)室溫下將2.5mg Taxotere在1ml40％含水無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精(DS＝1.8)中充分?jǐn)嚢?2小時(shí)溶解合成紫杉酚類似物-Taxotere(丁氧基羰基-10-脫乙?；?N-脫苯甲?；仙挤?。用這種方式所達(dá)到的溶解度提高是游離紫杉酚衍生物在水中溶解度的850倍。根據(jù)實(shí)施例10的冷凍干燥產(chǎn)物是一種非晶形粉末，在正常條件下表現(xiàn)出良好的濕潤(rùn)性和改善的水溶性。甲基化β-環(huán)糊精造成的溶解度提高證實(shí)了溶液中包合配合物的存在。(相同濃度的葡萄糖不能改善Taxotere的溶解度)。實(shí)施例11根據(jù)本發(fā)明的含有紫杉酚和加溶劑的可稀釋濃縮溶液10mg紫杉酚(Sigma Chemicals No.T-7402，Lot.No.23H0464)10ml 40％晶體7 2，6-二-O-甲基/β-環(huán)糊精的水溶液于氮?dú)庀卤芄鈹嚢?2小時(shí)。再將所得透明溶液通過(guò)0.22μm膜無(wú)菌過(guò)濾到無(wú)菌注射安瓿中，并封瓶。無(wú)菌溶液可用生理上可接受的稀釋劑進(jìn)一步稀釋至所需濃度，溶液在2個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的(25℃下貯藏60天，發(fā)現(xiàn)活性組分的損失低于3％)。實(shí)施例12通過(guò)將1mg紫杉酚(Sigma Chemicals No.T-7402，Lot.No.23H0464)溶解于1ml 40％無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精制備含有水凝膠的紫杉酚，將此溶液與25mg甲基纖維素充分混合30分鐘，得到透明無(wú)色的局部用途凝膠，它對(duì)人皮膚沒(méi)有刺激，溶解的紫杉酚保存良好。
權(quán)利要求
1.紫杉酚〔2aR-〔2aα，4β；4αβ，6β，9α(2R*，βS*)，11α-12α，12aα，12bα〕〕-β-(苯甲酰基氨基)-α-羥基苯-丙酸6，12-b-雙(乙酰氧基)-12-(苯甲酰氧基)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氫-4，11-二羥基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亞甲基-1H-芳癸并〔3，4〕-苯基-〔1，2-b〕oxet-9-基酯或Taxotere(丁氧基羰基-10-脫乙酰-N-脫苯甲?；仙挤?或紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物形成的包合配合物。
2.紫杉酚與一種環(huán)糊精衍生物形成的包合配合物。
3.一種紫杉短葉蘇木酚(brevifolia)無(wú)溶劑浸膏(除紫杉酚外，還含有其它雙萜taxan-衍生物如頭孢甘露糖寧(cephalomannine)，10-脫乙酰-紫杉酚；脫乙酰漿果赤霉素(baccatine)-III；漿果赤霉素-III，肉桂酰-紫杉寧(taxicine)；紫杉素(taxusine等)與一種環(huán)糊精衍生物形成的包合配合物。
4.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精形成的改善了水溶解度和穩(wěn)定性的包合配合物。
5.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精形成的改善了水溶解度和穩(wěn)定性的包合配合物。
6.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精形成的改善了水溶解度和穩(wěn)定性的包合配合物。
7.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與2-羥基丙基-β-環(huán)糊精形成的包合配合物。
8.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與可溶性陰離子-β-環(huán)糊精-聚合物(CDPSI)(平均分子量為36-8000)形成的包合配合物。
9.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與β-環(huán)糊精形成的包合配合物。
10.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與γ-環(huán)糊精形成的包合配合物。
11.紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與一種環(huán)糊精衍生物形成的包合配合物的制備方法，包括a)在水介質(zhì)中，將紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與一種環(huán)糊精衍生物反應(yīng)，用原本已知的方式從混合物中分離配合物。b)以固體形式，將紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與一種環(huán)糊精衍生物反應(yīng)。c)紫杉酚或Taxotere或一種紫杉短葉蘇木酚浸膏與一種環(huán)糊精衍生物進(jìn)行高能研磨。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，特征是，通過(guò)過(guò)濾、離心、冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥將配合物從混合物中分離。
13.含有有效量的用作活性組分的由紫杉酚或Taxotere或一種紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物(優(yōu)選7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精，無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精，琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精)形成的包合配合物的藥物配方以及常規(guī)的藥物裝灌，稀釋和配合劑。
14.口服，胃腸外用藥治療人類癌癥的方法，包括以有效量的由紫杉酚或Taxotere或紫杉浸膏與一種環(huán)糊精衍生物(優(yōu)選7-2，6-O-二甲基-β-環(huán)糊精，無(wú)規(guī)甲基化-β-環(huán)糊精，琥珀酰-甲基-β-環(huán)糊精)形成的包合配合物給人用藥。
15.用紫杉酚或Taxotere或紫杉浸膏與環(huán)糊精衍生物(優(yōu)選2-羥基-丙基-β-環(huán)糊精，可溶性陰離子-β-環(huán)糊精-聚合物，β-環(huán)糊精，γ-環(huán)糊精，最優(yōu)選γ-環(huán)糊精)形成的包合配合物從紫杉酚生產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)物的發(fā)酵液中提取紫杉酚。
全文摘要
本發(fā)明涉及紫杉酚或Taxotere和紫杉浸膏(除紫杉酚外，還含有其它雙萜taxan-衍生物)與一種環(huán)糊精衍生物或環(huán)糊精-衍生物-混合物形成的包合配合物。根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)使用合適的環(huán)糊精和/或環(huán)糊精衍生物和/或其混合物可實(shí)現(xiàn)紫杉酚和Taxan-衍生物的水溶解度的提高。可在水介質(zhì)中，固體形式或通過(guò)高能研磨制備包合配合物。根據(jù)本發(fā)明的藥物配方在癌癥的治療中起著極其重要的作用。
文檔編號(hào)A61K31/337GK1123030SQ9419207
公開(kāi)日1996年5月22日 申請(qǐng)日期1994年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月12日
發(fā)明者L·圣特, J·薩吉里, A·韋克蒙 申請(qǐng)人:奇諾英有限公司