專利名稱：制備一種十肽凍干品的新方法
cetrorelix是用作乙酸鹽的帶末端酰胺基團的十肽。歐洲專利申請299402中介紹了合成方法和某些藥理作用。
可能按0.1-20mg劑量經(jīng)皮下注射此活性物質(zhì)。該十肽的水溶液不穩(wěn)定，在最終容器中不能進行高壓消毒。按所述條件進行慣常消毒，該十肽有分解的趨勢。為了獲得可注射的溶液，因此需研制低壓凍干品。
然而，將被低壓凍干的溶液中活性物質(zhì)的量是如此之低以至于在活性物質(zhì)濃度低時，在無助劑物質(zhì)的溶液干后，只有疏松的絨毛狀物在安瓿瓶的壁上形成，用蒸汽流對此小瓶上的絨毛狀物進進轉(zhuǎn)移以消毒。因此，必須使用形成穩(wěn)定餅狀物的增量劑。在濃度高時，可以不用此助劑物質(zhì)。下述助劑物質(zhì)可用作增量劑已糖醇類，尤其是甘露糖醇、葡萄糖醇、山梨糖醇，如D-山梨糖醇、半乳糖醇、altritol如D-和L-altritol、艾杜糖醇(如D-和L-艾杜糖醇)，其旋光性形式(D-和L-形式)及相應(yīng)的外消旋體。特別使用甘露糖醇，如D-甘露糖醇、L-甘露糖醇、DL-甘露糖醇、山梨糖醇和/或半乳糖醇，其中，優(yōu)選D-甘露糖醇。使用的已糖醇也可是已糖醇類混合物，即如甘露糖醇和山梨糖醇和/或半乳糖醇的混合物。由于半乳糖醇在水中的溶解度較如甘露糖醇低，所以按重量計，半乳糖醇在水中的含量將不超過如3%。此外，甘露糖醇和山梨醇如可按任何比例進行混合。
除已糖醇外，也可加入其他慣常藥用助劑物質(zhì)，如氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、白蛋白和當量增量劑、也可用脲和氯化納作增量劑。按重量計，用于凍干的溶液中，每份重cetrorelix時，此類增量物質(zhì)的總量如為0-16.9份，例如0.1-7份。在所說最終低壓凍干品中，這類助劑物質(zhì)的總量可達16.9份(以每份重已糖醇為基準計)。詳細講這類助劑物質(zhì)的量取決于存在的已糖醇的量，且按每份重cetrorelix計，在最終低壓凍干品中，已糖醇和其他這類助劑物質(zhì)的量可到這樣程度，即不超過17份。如在低壓凍干品中，僅存在0.1份重已糖醇，其他助劑物質(zhì)可達16.9份重；在如存在8.5份已糖醇時，按cetrorelixl份重為基準計，其他助劑物質(zhì)的量加可達8.5份重。
然而，在研制低壓凍干品時發(fā)現(xiàn)此活性物質(zhì)在制備期間的行為變化很大且是不可預(yù)計的。頭幾批產(chǎn)品可得到好的結(jié)果，但在無菌過濾期間立刻出了困難，而且?guī)着a(chǎn)品不合乎要求。
據(jù)下述公知技術(shù)報導(dǎo)，寡肽，尤其帶未端酰胺官能團的寡肽有形成凝膠的趨勢POwell,M.F.;PharmaceuticalResearch,1258-1263(8)1991;Dathe,M:Int.J:PeptideProteinRes。344-349(36)1990;Szejtli,J.;PharmaceuticalTechnologyInternational16-22,1991。在無菌過濾期間，從過濾速度上可清楚地看到這一點，的確常憑器官感覺可檢查出這種溶液的粘度有所增加。而且凝膠層仍在無菌過濾器上，于是不再可能制備含有完全按所定義的活性物質(zhì)含量的藥物。
下表1列出了頭11批產(chǎn)品的各種結(jié)果。
活性物質(zhì)的含量在100%-36%間波動。
表1乙酸cetrorelix批劑量活性物質(zhì)含量1100ug1002500ug1003500ug904500ug365500ug1006500ug8571mg8081mg10092mg100102mg80112mg100為了避免形成凝膠，公知技術(shù)中列出了通過實驗篩選出的下述添加劑可以考慮使用的有機溶劑有如乙腈、正丁醇、叔丁醇、乙醇、異丙醇、辛醇和芐醇。也可使用鹽和緩沖溶液，如乙酸鹽緩沖溶液、檸檬酸鹽緩沖液、氯化鈉、磷酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鹽緩沖溶液、乙酸胍、脲。聚合物也可使用，如凝膠、聚乙二醇600、羥乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇。也介紹了使用氨基酸，如丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸。所用的酸有檸檬酸、辛酸、鹽酸和乙酸?？墒褂玫纳韺W(xué)上可接受的表面活性劑是潔爾滅、十六烷醇、膽汁酸、卵磷酯、多乙氧基醚、司盤(Spans)和普盧蘭尼克R(Pluronics)。業(yè)已使用的碳水化合物和環(huán)糊精有如葡萄糖、乳糖、甘露糖醇、蔗糖、α-、β-和γ-環(huán)糊精、羥基丙基-α-和-β-環(huán)糊精、羥乙基環(huán)糊精及甲基環(huán)糊精。實驗過這些助劑物質(zhì)作過濾劑以防止凝膠的形成。
然而發(fā)現(xiàn)并未使該問題得到滿意解決。用乙酸酸化只有部分獲得成功。而且還存在著高的過濾損失這樣的缺點。此外還驚奇地發(fā)現(xiàn)cetrorelix易溶于30%(V/V)的乙酸中，然后用注射用水把此溶液中的cetrorelix的最終濃度調(diào)到3%并加入甘露糖醇。雖然在公知技術(shù)中敘述過末端酰胺基團在酸性介質(zhì)中易于水解，但對于cetrorelix來說，并未發(fā)現(xiàn)此種情況。按此法制備的溶液在過濾期間不存任何困難。發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)的量總是合乎要求的。而過濾速度又能確保滿意的生產(chǎn)程序。在現(xiàn)有技術(shù)Sucker第557-559頁上(Fnchs和Speiser(出版者)，“PharmazentischeTechozologie”第二版，(1991)Thieme-verlag,StnttgartnewYork)介紹了無菌低壓凍干的一般方法。在德國專利公開說明書(Dos)3735614中也披露了低壓凍干工藝。此低壓凍干品用于治療女性不育。迄今為止一直所用的一種治療方法是用人絕經(jīng)促性腺激素刺激卵泡成熟，然后用人絨〔毛〕膜促性腺激素引發(fā)排卵。這樣引發(fā)的排卵在32小時后發(fā)生。以此收集的卵可用于體外受精。
用顯效藥進行這種治療的缺點是在于這樣一個事實，即在刺激期成熟的卵泡高達10個，卵泡成熟數(shù)的這種增加會在黃體化激素(LH)中導(dǎo)致激素水平峰值的出現(xiàn)。這些峰值會引起卵泡早期成熟，排卵時間不能準確預(yù)計。在所治療的病例中，這種有害排卵約發(fā)生25%。由于這種不定期的排卵期不能用于收集卵，且必須在1個月以后重復(fù)整個治療。
慣常刺激治療的另一缺點是需要有4周長的治療期才獲得滿意的抑制。在1-2%的病例中，此顯效藥繼續(xù)呈現(xiàn)出過度刺激綜合征，其中卵泡細胞肥大。在多囊卵巢情況下，過度刺激的危險特別大。過度刺激綜合征是一種可導(dǎo)致死亡的嚴重副作用。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)此種特定治療中拮抗藥cetrorelix呈現(xiàn)下述特點用cetrorelix治療5天以上即可獲得完全的抑制。不會出現(xiàn)過度刺激綜合征。此外，在第二治療周期可使用較少HMG(卵泡刺激素)，該第二治療周期為引發(fā)排卵期。用此進行的體外受精治療有著重要的費用優(yōu)點。如當畸形管存在時，則用體外受精，進行這種治療必須盡可能準確的測定排卵周期和排卵時間。由于用HMG/HCG(人絨促性素)刺激，常會過早發(fā)生早期排卵的LH增加或此增加不能維持足夠長的時期，迄今為止做到這一點仍是十分有限的。然而為為精確確定受精時間，要想獲得成功的治療，避免這種過早成熟的增加尤為重要。這可減少患者肉體和精神上的負擔且最佳利用醫(yī)院后勤。為了通過使用外源促性腺激素(HMG/HCG)同時刺激卵泡成熟和在任何時候監(jiān)測激素的狀態(tài)，有必要盡可能完全地抑制內(nèi)源激素的產(chǎn)生〔LH-FSH(促卵泡激素)〕以最可靠地實現(xiàn)上述目的。只有當獲得的卵泡數(shù)目足夠大(4-6)，大約有同樣的成熟度時才能用注射大丸劑HCG的辦法來引發(fā)排卵。
對患者來說，使用拮抗藥基本上是比較成功和安全的。使用根據(jù)本發(fā)明的cetrorelix低壓凍干品的另一方面是可以保護男性患者的性腺。用cetrorelix低壓凍干品對男性患者進行預(yù)治療且其性腺活性得到了加強。這樣，其他有害的有毒劑，如放射性治療或用細胞抑制劑的治療對性腺敏感組織影響的可能性就無或很小了。
制備例用一適宜的玻璃器皿制備約1.5升注射水。在另一玻璃器皿中制備210g注射用水，加入91.17g乙酸。攪拌下，把計算量的乙酸cetrorelix(1.62-1.695g，取決于所用此批的含量)溶解在所制的30%乙酸中。把此溶液轉(zhuǎn)移到裝有1.5升注射用水的所說玻璃器皿中，加入82.2g甘露糖醇，使之溶解并用注射用水把此溶液配制到3039g。
工藝過程中進行的測定PH2.5-3.0密度1.009-1.017g/cm3(20℃下)折射率1.227-1.340在440nm處和20℃下測得的。
于無菌條件下，用適宜的膜過濾器(孔徑0.2μm)對所說溶液進行過濾消毒。把最初的100ml流出液丟棄。用過熱蒸汽對過濾器消毒以防止冷凍干燥的cetrorelix溶液在貯存期間再度污染。
立即在無菌條件下把所說溶液裝入無色注射瓶(DIN2R，1類水解型)中并塞上無菌冷凍干燥塞，其一般裝入量為2.0ml(2.026g)。
于注射瓶洗滌機中對2ml的注射瓶進行洗滌，熱空氣干燥并予以滅菌。對該洗凈的冷凍干燥瓶進行高壓消毒。把封閉的注射瓶轉(zhuǎn)移到冷凍干燥設(shè)備中，于-40℃板溫下冷凍。按板溫-40℃升到40℃的干燥程序干燥。在所說冷凍干燥設(shè)備中注入無菌氮，于該設(shè)備中密封注射瓶，其所說塞用卷邊蓋固定，用目視法檢查注射瓶密封是否合乎要求，挑選出不合乎要求的并將其毀掉。
將1mg白色、園形、冷凍干燥餅狀cetrorelix低壓凍干品裝于用淺色凍冰干燥塞和黃色觸關(guān)式(flip-off)卷邊蓋密封的2ml無色注射瓶內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種帶3-15個氨基酸的肽和任選的一種或幾種增量劑的低壓凍干品，其特征在于將1份重肽溶解在100-10，000份重乙酸中，然后將其轉(zhuǎn)移到水中，把這樣獲得的溶液低壓凍干。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的低壓凍干品，其特征在于所用的增量劑是甘露糖醇。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1的低壓凍干品，其特征在于所說肽是cetrorelix。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的低壓凍干品用于治療女性不育癥的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2的低壓凍干品用于保護性腺的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的低壓凍干品用于制備治療女性不育癥的藥物的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2的低壓凍干品用于制備保護性腺的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的低壓凍干品和制備方法及該低壓凍干品用于治療女性不育癥和保護性腺的藥物的用途。
文檔編號A61K38/09GK1112019SQ94101378
公開日1995年11月22日 申請日期1994年2月18日 優(yōu)先權(quán)日1993年2月19日
發(fā)明者J·恩格爾, B·瓦克特, D·索爾比, T·萊思曼 申請人:Asta藥物股份公司