專利名稱：新型肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型類鴉片肽類似物，它們是δ類鴉片受體拮抗劑，并涉及它們的合成及作為止痛化合物和免疫抑制化合物的用途。
Naltrindole作為一種已知的非肽類δ類鴉片拮抗劑，由P.S.Portoghese等在J.Med.Chem.31，281-282(1988)中述及。Naltrindole與本發(fā)明的化合物相比，有相似的δ-拮抗力，但δ選擇性低得多。此外，Naltrindole在受體結(jié)合測定中表現(xiàn)很高的μ類鴉片受體親和力(Kiμ＝12nM)，在豚鼠回腸(GPI)測定中表現(xiàn)很強(qiáng)的拮抗性質(zhì)(Ke＝29nM)，參見P.S.Portoghese，J.Med.Chem.34，1757-1762(1991)。
另一種已知的δ-拮抗劑是腦菲肽類似物N，N-二烯丙基-Tyr-Aib-Aib-Phe-Leu-OH(ICI174864)，由R.Cotton等在Eur.J.Pharmacol.97，331-332(1984)中述及。與本專利申請所述的δ拮抗劑相比，ICI 174864具有低得多的δ-選擇性(低10-300倍)，在MVD測定中具有低得多的拮抗力(低40-100倍)。
四肽，作為一種有效的δ拮抗劑，最近由P.W.Schiller等人在FASEB J.6(NO.4)，A 1575(1992)，在國際尼古丁研究會議(INRC)(keystone，CO，6月24-29日(1992))及第二屆日本多肽化學(xué)研討會(shizuoka，日本，11月9-13日(1992))上公開。
現(xiàn)在已意外地發(fā)現(xiàn)如下式Ⅰ所示化合物具有-對δ受體的卓越選擇性-較高的δ拮抗力-完全無μ拮抗性質(zhì)-在某些情況下，混合的μ激動/δ拮抗性質(zhì)(C-端具有羧基酰胺基的TIPP類似物)本發(fā)明的化合物具有結(jié)構(gòu)式Ⅰ
其中R1是H、CH3(CH2)n(其中n＝0-12)、
，
，CH2-CH＝CH2或精氨酸;
R2是H、CH3(CH2)n(其中n＝0-12)、CH2、
，CH2-CH＝CH2;
R3、R4、R5、R6全部是H或R4和R5都是H，R3和R6都是低級烷基或R3、R5、R6全部是H，R4是F、Cl、Br、OH、NH2或NO2;
R7是C＝O或CH2;
R8是H或低級烷基;
R9是
其中m為0-2，或
R10是H、F、Cl、Br或I，且m是0-2;
R11是OH、NH2或
其中R12是H、NO2、F、Cl、Br或I，m是0-2，R13是COOH、CONH2、CH2OH或任何其它氨基酸或肽片斷，或R11是
其中R14是COOH、CONH2、CH2OH或任何其它氨基酸或肽片斷;但是下列化合物除外其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R8全部是H，R7是C＝O，R9是
且R11是Phe-OH、Phe-NH2、OH或NH2。
本說明書中低級烷基含1-6個碳原子。
本發(fā)明中特別優(yōu)選的化合物是下述化合物，其中R7為CH2(作為還原肽鍵的部分)。一個還原肽鍵使化合物具有較高的δ拮抗力，增加其δ-選擇性，使其在有機(jī)溶劑中具有較好的穩(wěn)定性及對于酶降解的抵抗作用。
本發(fā)明中進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是下述化合物，其中R4和R5為H，R3和R6為甲基。
肽合成中應(yīng)用的許多Boc-氨基酸衍生物可購得。2，6-二甲基-酪氨酸(Dmt)可用J.H Dygos等在Synthesis，8(8月)，741-743(1992)中所述方法制備，2-氨基四氫化萘2-羧酸可用P.W.Schiller等在J.Med.Chem.34，3125-3132(1991)中所述方法制備。
所有的肽均由固相技術(shù)制備，C端具有游離羧基的肽的固相合成用普通的聚苯乙烯/二乙烯苯樹脂，而肽酰氨的合成用對-甲基二苯甲基胺樹脂。所有肽的制備中氨基采用Boc保護(hù)。合成按照廣泛應(yīng)用于發(fā)明人所在實驗室(P.W.Schiller等;Biochemistry 16，1831-1832(1977))的做法進(jìn)行。偶聯(lián)反應(yīng)在惰性溶劑CH2Cl2或DMF中進(jìn)行，用二環(huán)己基碳化二亞胺/1-羧基苯并三唑(DCC/HOBt)做為偶聯(lián)劑。每步偶聯(lián)反應(yīng)后用茚三酮顏色試驗仔細(xì)檢查偶聯(lián)反應(yīng)的完全性。充分連接好的肽鏈從樹脂上斷下，并在0℃、在作為凈化劑的茴香醚存在下用液態(tài)HF處理完全脫保護(hù)(60-90分鐘)。
含有CH2NH2肽鍵電子等排物的類似物用Sasaki和Coy(Y.Sasaki及D.H.Coy，Peptides 8，119-121(1987))設(shè)計的固相合成法制備。利用此方法，CH2NH肽鍵可由還原烷基化反應(yīng)直接引入，此反應(yīng)在Boc-氨基酸醛和樹脂一結(jié)合肽上的氨基之間應(yīng)用氰基硼氫化鈉在酸性DMF中進(jìn)行。這種方法沒有明顯的外消旋作用。Boc-Tic醛由相應(yīng)的Boc-Tic N-甲氧基-N-甲酰胺通過已報導(dǎo)的非消旋化LiAlH4還原方法合成(J.A Fehrentz及B.Castro，Synthesis，676-678(1983))含有還原肽鍵的肽從樹脂上斷下并以上述方式用HF/茴香醚處理脫保護(hù)。
用固相肽合成法得到的粗產(chǎn)品需通過各種色譜技術(shù)或其它方法進(jìn)一步純化。HF斷鍵及樹脂萃取后，按常規(guī)在Sephadex(交聯(lián)葡聚糖凝膠)(G-15或G-25)上進(jìn)行硅膠過濾。隨后的各種純化步驟包括在Sephadex G-25上的分配色譜(應(yīng)用各種丁醇-乙酸-吡啶-水二相系統(tǒng))，離子交換色譜(DEAE-Sephadex，SP-Sephadex和CM-纖維素)，用1%三氟乙酸中的甲醇線性梯度洗脫(低壓)的十八硅烷基-硅膠柱反相色譜。如果需要，最后用半制備HPLC進(jìn)行純化使之呈均一性。根據(jù)分離的對象，半制備μ-Bondapak C-18柱(Waters;0.7×25cm)每次可純化2-20mg肽物質(zhì)，在此采用這種柱子。應(yīng)用幾種高靈敏度、高效的分析方法可表明所制備肽的均一性及確證其結(jié)構(gòu)。純度的確定利用至少二個溶劑系統(tǒng)的薄層色譜。另外，在實驗室按常規(guī)應(yīng)用二或三個不同溶劑系統(tǒng)的分析HPLC作為高靈敏度的純度檢驗方法。肽結(jié)構(gòu)的確證主要根據(jù)氨基酸分析及快原子轟擊一質(zhì)譜(FAB-MS)。在氨基酸分析中，肽于脫氣管內(nèi)在含有少量苯酚的6N HCl中，在110℃水解24小時(考慮到氨基酸的降解，有時水解也持續(xù)12及48小時)。水解產(chǎn)物的分析在裝配有系統(tǒng)AA積分儀的Beckman Model 121C氨基酸分析儀上進(jìn)行。應(yīng)用FAB質(zhì)譜確定肽正確的分子量。
具體類似物的實施例實施例1H-Tyr-Tic-Hfe-Phe-OH
Boc-Phe-O-樹脂(1g，0.61mmol Boc-Phe/g樹脂，Peninsula，Belmont，CA)按如下順序用試劑洗滌CH2Cl2(3×1分鐘)，50%(V/V)TFA的CH2Cl2溶液(30分鐘)，CH2Cl2(5×1分鐘)，10%(V/V)DIEA的CH2Cl2溶液(2×5分鐘)，CH2Cl2(5×1分鐘)。然后用HOBt(205mg，1.52mmol)和DCC(313mg，1.52mmol)在CH2Cl2/DMF(3∶1V/V)中使Boc-Hfe-OH(425mg，1.52mmol)偶聯(lián)反應(yīng)17小時。然后用CH2Cl2(3×1分鐘)，EtOH(1分鐘)，CH2Cl2(3×1分鐘)洗滌樹脂。這個洗滌及反應(yīng)的順序可重復(fù)應(yīng)用于經(jīng)以下改性的每個殘基的加成。
Boc-Tic-OH偶聯(lián)后，用CH2Cl2/DMF(3∶1，V/V)(3X)洗滌樹脂，并用等量的Boc-Tic-OH，HOBt及DCC在CH2Cl2/DMF(3∶1，V/V)中再進(jìn)行17小時的偶聯(lián)反應(yīng)。同樣的再偶聯(lián)步驟也用于偶聯(lián)Boc-Tyr(Boc)-OH。最后用50%(V/V)TFA的CH2Cl2溶液(30分鐘)脫保護(hù)后，樹脂用CH2Cl2(3×1分鐘)和EtOH(3×1分鐘)洗滌并在干燥器中干燥。干燥樹脂先用20ml HF加1ml茴香醚在0℃處理90分鐘然后室溫處理15分鐘。蒸除HF后，樹脂用Et2O萃取三次后用7%AcOH萃取三次。混合的乙酸萃取液經(jīng)冷凍干燥后得到固體狀肽粗品。
肽的純化先用0.5N AcOH在Sephadex G-25柱上進(jìn)行硅膠過濾，然后用0-80%線性梯度的MeOH的1%TFA溶液在十八硅烷基硅膠柱上進(jìn)行反相色譜處理。蒸除溶劑后，純的肽溶解于濃AcOH中經(jīng)冷凍干燥得到固體狀純品。
產(chǎn)量45mg
FAB-MSMH+＝648TLC(硅膠)Rf0.75 n-BuOH/AcOH/H2O(4/1/5，有機(jī)相)Rf0.70 n-BuOH/吡啶/AcOH/H2O(15/10/3/12)氨基酸分析Tyr 0.96，Hfe 1.03，Phe 1.00實施例2H-Tyr-Ticψ[CH2-NH]Phe-Phe-OH此肽的合成與實施例1的情況相同，用同樣的樹脂，但Tic2和Phe3殘基間還原肽鍵的引入需要在Boc.-Tic醛及樹脂結(jié)合的H-Phe-Phe二肽的氨基之間進(jìn)行還原烷基化反應(yīng)。
由N-叔丁氧羰基-L-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-N-甲氧基，N-甲酰胺制備N-叔丁氧羰基-L-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-醛(Boc-Tic醛)在攪拌的Boc-Tic-OH(2.8g，10mmol)和三乙胺(1.33ml，10mmol)的CH2Cl2溶液中加入BOP(苯并三唑-1-基-氧三(二甲基氨基)六氟合磷氫酸鏻(3.48g，10mmol)。五分鐘后，向溶液中加入N-二甲基鹽酸羥胺(1.2g，12mmol)和三乙胺(1.68ml，12mmol)。反應(yīng)進(jìn)行17小時。然后用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物并用3N HCl、NaHCO3飽和水溶液及NaCl飽和水溶液洗滌。有機(jī)溶液用MgSO4干燥后，蒸除溶劑。所得粗品N-叔丁氧羰基-L-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-N-甲氧基，N-甲酰胺用EtOAc/己烷(1∶2，V/V)在硅膠上進(jìn)行色譜純化。
產(chǎn)量2.1g(65%)，油狀物TLC(硅膠)Rf 0.57 EtOAc/己烷(1/1)Rf 0.30 EtOAc/己烷(1/2)NMR(CDCl3)δ1.45(9H，叔丁基)，300(2H，H-4)，3.18(3H，NCH3)，3.8(3H，OCH3)，4.42-4.90(3H，2H-1和1H-3)，7.17(4H，芳基)。
向攪拌的N-叔丁氧羰基-L-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-N-甲氧基，N-甲酰胺(1.2g，4mmol)的30ml乙醚溶液中加入190mg(5mmol)氫化鋰鋁。還原反應(yīng)進(jìn)行1小時，然后用KHSO4(954mg，7mmol)的水(20ml)溶液水解反應(yīng)混合物。然后分離出水層，用三份50ml乙醚萃取。四份有機(jī)相合并后用3N HCl，NaHCO3飽和水溶液及NaCl飽和水溶液洗滌，最后用MgSO4干燥。蒸除溶劑后得到油狀純品醛。
產(chǎn)量635mg(60%)，油狀物TLC(硅膠)Rf 0.84 EtOAc/己烷(1/1)Rf 0.57 EtOAc/己烷(1/2)NMR(CDCl3)δ1.5(9H，叔丁基)，3.0-3.27(2H，H-4)，4.4-4.8(3H，1H-3和2H-1)，7.0-7.2(4H，芳基)，9.43(1H，CHO)。
Boc-Tic醛和H-Phe-Phe-O樹脂間的還原烷基化反應(yīng)樹脂用DMF(2×1分鐘)洗滌后，向其中加入Boc-Tic醛(392mg，1.52mmol)的含1% AcOH的DMF溶液。然后將氰基硼氫化鈉(115mg，1.83mmol)在40分鐘內(nèi)分批加入并繼續(xù)反應(yīng)3小時。
N-端酪氨酸殘基偶聯(lián)及脫保護(hù)后，將肽從樹脂斷下并按實施例1所述方法純化及冷凍干燥。
產(chǎn)量180mgFAB-MSMH+＝633TLC(硅膠)Rf 0.73 n-BuOH/AcOH/H2O(4/1/5，有機(jī)相)Rf 0.69 n-BuOH/吡啶/AcOH/H2O(15/10/3/12)氨基酸分析Tyr 0.95，Phe 1.00按照本發(fā)明已合成如下化合物并作為δ拮抗劑進(jìn)行了測試。
δ類鴉片拮抗劑的體外藥理學(xué)試驗a)生物測定依據(jù)對小鼠輸精管(MVD)及豚鼠回腸(GPI)對電刺激引起收縮的抑制作用。在GPI測定中，類鴉片效應(yīng)主要由μ類鴉片受體傳遞，而在MVD測定中，對收縮的抑制作用主要是由于與δ類鴉片受體的相互作用。在這些測定中拮抗力用所謂的Ke值表示(H.W.Kosterlitz及A.J.Watt，Br.J.Pharmacol.33，266-276(1968))。激動力用IC50值表示(對電誘導(dǎo)收縮產(chǎn)生50%抑制作用時的激動劑濃度)。
利用離體器官的生物測定GPI和MVD生物測定根據(jù)P.W.Schiller等在Biochem.Biophys.Res.Commun85，1332-1338(1978)中和J.Di Maio等在J.Med.Chem.25，1432-1438(1982)中所報導(dǎo)的方法進(jìn)行。在每個回腸及輸精管樣本中以[leu5]腦菲肽為標(biāo)準(zhǔn)物做對數(shù)劑量-響應(yīng)曲線，被測試化合物的IC50值用A.A Waterfield等在Eur.J.Pharmacol.58，11-18(1979)中的方法標(biāo)準(zhǔn)化。TIPP-相關(guān)拮抗劑的Ke值由在有固定拮抗劑濃度時的IC50(DR)與無固定拮抗劑濃度時的IC50值(a)的比值確定(Ke＝a/(DR-1))，見H.W.Kosterlitz及A.J.Watt，Br.J.Pharmacol.33，266-276(1968)。這些測定依據(jù)MVD試驗，應(yīng)用三種不同的δ-選擇激動劑([leu5]腦菲肽，DPDPE和[D-Ala2]deltorphin I])結(jié)果見下表Ⅰ。
表Ⅰ在MVD測定中與TIP(P)有關(guān)多肽的Ke值(對δ激動劑[leu5]腦菲肽，[
]腦菲肽(DPDPE)和[D-Ala2]deltorphin I的拮抗力)。
(現(xiàn)有技術(shù)已知的化合物用(P)標(biāo)記)
a.3-8次測定平均值±SEMb.H-Tyr-Tic-Phe-Phe-NH2，H-Dmt-Tic-Phe-Phe-NH2和H-Dmt-Tic ψ[CH2-NH]Phe-Phe-NH2是混合的μ激動劑/δ拮抗劑，在豚鼠回腸測定(GPI)中其IC50S值分別為1700±220nM，18.2±1.8nM和7.71±0.32nM。
結(jié)論TIPP-相關(guān)δ拮抗劑的μ拮抗作用或μ激動作用-GPI測定中，濃度高達(dá)10μM時，所有化合物未表現(xiàn)μ拮抗活性。
-GPI測定中，具有自由C-端羧基的TIPP-相關(guān)肽表現(xiàn)很弱的μ激動力(IC50＞10μM)。而具有C-端羧基酰胺官能團(tuán)的TIPP-衍生肽在GPI測定中表現(xiàn)完全的μ激動力(例如H-Dmt-Tic-Phe-Phe-NH2在GPI測定中的IC50值為18.2±1.8nM)。
類鴉片受體結(jié)合測定化合物的μ和δ類鴉片受體結(jié)合常數(shù)(Kiμ，Kiδ)按相對選擇性的μ及δ放射配體從小鼠腦膜中的結(jié)合點的移位來確定(所測量的IC50值的計算根據(jù)Cheng和Prusoff(Y.C.Cheng和W.H.Prusoff(Biochem.Pharmacol.22，3099-3102(1973)的公式進(jìn)行)。
下表2給出類鴉片受體結(jié)合測定的結(jié)果。Kiμ/Kiδ的比值是δ-選擇性的定量度量。
比值越高，δ-選擇性越好。
類鴉片受體結(jié)合研究在結(jié)合測定中所有新的類似物的μ-，δ-和K-類鴉片受體親和力的確定依據(jù)μ-、δ-和K-選擇性放射配體從小鼠腦膜結(jié)合點的移位。對于K-配體，應(yīng)用豚鼠腦膜均漿，因為豚鼠腦中K-結(jié)合點的相對比例比在小鼠腦中高。我們實驗室所用的實驗過程是經(jīng)過改良的Pasternak等(Mol.Pharmacol.11，340-351(1975))的結(jié)合測定方法。來自加拿大繁殖實驗室(Canadian Breeding Laboratories)的雄性Sprague-Dawley鼠經(jīng)斷頭，去除小腦后，將其腦在30體積的冰冷標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中(50mM Tris-HCl，pH7.7)制成均漿。在4℃經(jīng)30，000xg離心30分鐘后，膜在原體積的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中重組并在37℃保溫30分鐘(釋放結(jié)合的內(nèi)生配體)。隨后離心并將其顆粒在原體積的新鮮標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中再懸浮，制成最終的膜懸浮液。取等分的(2ml)這種與含被測肽的1ml標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液及一種下述最終濃度的放射配體在25℃保溫1-2小時[3H]DAMGO，μ-選擇性，0.7nM;[3H]DSLET，[3H]DPDPE或[3H]TIPP，δ-選擇性，1.0nM和[3H]U69，563，K-選擇性，0.5nM。保溫過程經(jīng)過濾而終止，過濾于4℃真空條件下用Whatman GF/B濾器進(jìn)行。用二份5ml冰冷的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液洗滌后濾器轉(zhuǎn)移到閃爍管中，用1ml Protosol(New England Nuclear)處理30分鐘后加入0.5ml乙酸及10ml Aquasol(New England Nuclear)。振搖30分鐘后，閃爍管以40-45%的效率計數(shù)。所有的實驗都做雙份并且至少重復(fù)三次。三個放射配體中每個的具體結(jié)合情況分別在1微摩爾濃度的冷的DAMGO，DSLET和U69，563存在時進(jìn)行保溫實驗。具體結(jié)合的半數(shù)最大抑制量(IC50)值可從半對數(shù)圖中得到。由所得的IC50值，可根據(jù)Cheng和Prusoff方程(Biochem，Pharmeol.22，3099-3102(1973))計算出結(jié)合抑制常數(shù)(Ki)。在研究中，μ-，δ-和K-典型結(jié)合測定中Ki值的比值是被研究化合物受體選擇性的度量(例如Kiμ/Kiδ表示δ-受體對μ-受體的選擇性)。本發(fā)明所述化合物對K-受體都沒有顯著的親和力。
表2
a. 3次測定平均值±SEM潛在的用途純的δ拮抗劑可與μ激動型止痛藥(如嗎啡)合并使用以防止耐藥性和依賴性的發(fā)展，這一點受到E.E.Abdelhamid等，J.Parmacol.Exp.Ther.258，299-303(1991)研究結(jié)果的啟發(fā)。后一研究也表明具有混合的μ激動/δ拮抗性質(zhì)的化合物可作為不產(chǎn)生耐藥性及依賴性的治療用止痛藥。本專利申請所述具有C-端羧基酰胺基的TIPP-相關(guān)肽是第一個已知的混合μ激動/δ拮抗劑。
本專利申請所述的δ拮抗劑也可做為免疫抑制劑用于治療。較低δ-選擇性及低“純度”δ拮抗劑naltrindole的免疫抑制效應(yīng)由K.Arakawa等在Transplantation Proc.24，696-697(1992);Transplantation 53，951-953(1992)中作了報導(dǎo)。
縮寫Aib＝α-氨基異丁酸Atc＝2-氨基四氫化萘-2-羧酸Boc＝叔丁氧羰基Cpm＝環(huán)丙基甲基DAMGO＝H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(NαMe)-Gly-olDCC＝二環(huán)己基碳化二亞胺DIEA＝二異丙基乙基胺Dmt＝2，6-二甲基酪氨酸DPDPE＝
腦菲肽DSLET＝H-Tyr-D-Ser-Gly-Phe-Leu-Thr-OHEt＝乙基
FAB-MS＝快原子轟擊質(zhì)譜GPI＝豚鼠回腸Hex＝己基Hfe＝高苯丙氨酸HOBt＝1-羧基苯并三唑MVD＝小鼠輸精管1-Nal＝3-(1′-萘基)丙氨酸2-Nal＝3-(2′-萘基)丙氨酸Phe(PNO2)＝4-硝基苯基丙氨酸Phg＝苯基甘氨酸Tic＝1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸TIP＝H-Tyr-Tic-Phe-OHTIP-NH2＝H-Tyr-Tic-Phe-NH2TIP(ψ)＝H-Tyr-Ticψ[CH2-NH]Phe-OHTIPP＝H-Tyr-Tic-Phe-Phe-OHTIPP-NH2＝H-Tyr-Tic-Phe-Phe-NH2TIPP(ψ)＝H-Tyr-Ticψ[CH2-NH]Phe-Phe-OHTyr(3-Br)＝3-溴酪氨酸Tyr(3-Cl)＝3-氯酪氨酸Tyr(3-F)＝3-氟酪氨酸Tyr(NαMe)＝Nα-甲基酪氨酸U69，593＝(5α，7α，8β)-(-)-N-甲基-[7-(1-吡咯啉基)-1-氧雜螺[4.5]癸-8-基]苯乙酰胺。
權(quán)利要求
1.式Ⅰ的化合物
其中R1是H、CH3(CH2)n(其中n=0-12)、
，
，CH2-CH=CH2或精氨酸；R2是H、CH3(CH2)n(其中n=0-12)、CH2、
，CH2-CH=CH2；R3、R4、R5、R6全部是H或R4和R5都是H，R3和R6都是低級烷基或R3、R5、R6全部是H，R4是F、Cl、Br、OH、NH2或NO2；R7是C=O或CH2；R8是H或低級烷基；R9是
其中m為0-2，或
其中R10是H、F、Cl、Br或I，m是0-2；R11是OH、NH2或
其中R12是H、NO2、F、Cl、Br或I，m是0-2，R13是COOH、CONH2、CH2OH或任何其它氨基酸或肽片斷，或R11是
其中R14是COOH、CONH2、CH2OH或任何其它氨基酸或肽片斷；但是下列化合物除外其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R8全部是H，R7是C=O，R9是
且R11是Phe-OH、Phe-NH2、OH或NH2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1式Ⅰ的化合物，其中R7是還原肽鍵的一部分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1式Ⅰ的化合物，其中R4和R5都是氫，R3和R6都是甲基。
4.應(yīng)用于治療的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
5.用做止痛劑的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
6.用做免疫抑制劑的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
7.用固相合成法制備根據(jù)權(quán)利要求1的肽的方法。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，包括增加的將Boc-Tic-OH殘基接到二肽樹脂上(再偶聯(lián)步驟)及增加的將Boc-Tyr(Boc)-OH接到肽樹脂上(再偶聯(lián)步驟)的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8中任一項的方法，其中適宜的隋性溶劑是CH2Cl2或CH2Cl2/DMF(3∶1V/V)的混合溶劑，偶聯(lián)劑是N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺/1-羥基-苯并三唑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的一些肽的制備方法，這些多肽通過在酸化的DMF中用氰基硼氫化鈉在Boc-Tic醛和樹脂結(jié)合的肽的氨基間還原烷基化反應(yīng)而在Tic2殘基及3-位殘基之間含有還原肽鍵(-CH2-NH-)。
11.制備N-叔丁氧羰基-L-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-醛(Boc-Tic醛)的方法，此化合物用于制備根據(jù)權(quán)利要求10的肽，其中Tic2殘基與3-位殘基間含有還原肽鍵(-CH2NH-)。
12.含有有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物及一種或多種藥用載體的藥物制劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物作為止痛藥劑制備中的活性成分的用途。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物作為有免疫抑制效應(yīng)的藥物制劑制備中的活性成分的用途。
15.治療疼痛的方法，在這種方法中給需要這種治療的病人服用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
16.產(chǎn)生免疫抑制效果的方法，在這種方法中給需要這種治療的病人服用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
式I的化合物，它們的制備方法，藥劑及它們的用途。其中R
文檔編號A61P25/28GK1096515SQ94100129
公開日1994年12月21日 申請日期1994年1月5日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月5日
發(fā)明者P·希勒 申請人:阿斯特拉公司