專利名稱：神經(jīng)激肽a的拮抗劑的制作方法
本申請是美國申請?zhí)?15202(申請日期1989年2月24日)的部分繼續(xù)申請，而申請?zhí)?15202是現(xiàn)已放棄的申請?zhí)?08，926(申請日期1988年6月20日)的繼續(xù)。
本發(fā)明是關(guān)于神經(jīng)激肽A拮抗劑的新的肽衍生物。
P物質(zhì)和有關(guān)的速激肽、神經(jīng)激肽A以及神經(jīng)激肽B是一組天然存在的肽類，它們廣泛分布于身體組織內(nèi)并具有各種生物作用。雖然P物質(zhì)和神經(jīng)激肽B的激動(dòng)劑和拮抗劑是已知地，神經(jīng)激肽A的激動(dòng)劑也是已知的，但是神經(jīng)激肽A的拮抗劑還沒有報(bào)道。申請人現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一類神經(jīng)激肽A的拮抗劑。該類化合物不僅從生物化學(xué)觀點(diǎn)來看是有意義的，而且該類化合物還具有有價(jià)值的藥理學(xué)和醫(yī)學(xué)用途。
下述結(jié)構(gòu)1的肽衍生物或其藥學(xué)上適用的鹽是神經(jīng)激肽A的拮抗劑。該類新的肽衍生物是神經(jīng)激肽A的拮抗劑，因此它們是有用的止喘劑、抗炎劑和抗關(guān)節(jié)炎劑。
X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-Y 1 其中X為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、2-10個(gè)碳原子的?；? A1為一個(gè)鍵或?yàn)橛?～4個(gè)氨基酸組成的基團(tuán); A2為一個(gè)鍵或?yàn)锳sp或Glu; A3為任何氨基酸; A4為phe或N-Me-phe; A5為Ile、Val、Leu、phe、Ala、Tyr、Nle、Met或N-Me-Val; Ab為Gly或Sar;以及 Y為下式基團(tuán)
其中B為下式中的一個(gè)基團(tuán)，
-CH2-S-， -CH2-O-， -CH＝CH-，
這里R為氫原子或1-4個(gè)碳原子的烷基，或者為苯基亞烷基，其中亞烷基部分可以是直鏈的或帶支鏈的，并有1-6個(gè)碳原子，其中苯基部分可以是未被取代的或者是用C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基或鹵素單取代的; R1和R2各自獨(dú)立地選自異丙基、異丁基、仲丁基、正丁基和2-(甲硫基)乙基。
本申請中常用的表示氨基酸和氨基以及羧基末端基團(tuán)的縮寫如下 Gly(或G)-甘氨酸 Ala(或A)-丙氨酸 Val(或V)-纈氨酸 Leu(或L)-亮氨酸 Ile(或I)-異亮氨酸 Fum-富馬酰 Orn-鳥氨酸 Pro(或P)-脯氨酸 Phe(或F)苯丙氨酸 Trp(W)色氨酸 Met(或M)甲硫氨酸 Ser(或S)絲氨酸 Thr(或T)蘇氨酸 Cys(或C)半光氨酸 Tyr(或Y)酪氨酸 Asn(或N)天冬酰胺 Gln(或Q)谷氨酰胺 Asp(或D)天冬氨酸 Glu(或E)谷氨酸 Lys(或K)賴氨酸 Arg(或R)精氨酸 His(或H)組氨酸 Nle-正亮氨酸 Hyp-羥基脯氨酸 Glt-戊二酰基 Mal-馬來?；? Npa-β-(2-萘基)丙氨酸 3，4-dehyropro-3，4-脫氫脯氨酸 Pgl-苯基甘氨酸 NMepgl-N-甲基-苯基甘氨酸 Sar-肌氨酸(N-甲基甘氨酸) Psubphe-對位取代的苯丙氨酸 Subphe-鄰位、間位或?qū)ξ弧位蚨〈谋奖彼? DAla(或a)-D-丙氨酸 AC-乙?；? Suc-琥珀?；? Pclphe-對-氯-苯丙氨酸 PNO2phe-對-硝基-苯丙氨酸 NMeVal-N-甲基-纈氨酸 烷基和烷氧基中的烷基部分包括直鏈、帶支鏈或環(huán)狀的烷基例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基異戊基、仲戊基、環(huán)戊基、己基、異己基、環(huán)己基和環(huán)戊基甲基本發(fā)明中苯基亞烷基的亞烷基部分可以含有1-4個(gè)碳原子，并且可以是直鏈的或帶支鏈的，例如可以是亞甲基、1，2-亞乙基、1，2-亞丙基、亞丁基、異亞丙基和仲-亞丁基。本發(fā)明中苯基亞烷基的苯基部分可以是未被取代的，或者也可以是在鄰位、間位或最好是在對位單取代的。未被取代的苯基或?qū)?羥基苯基是較好的。2-10個(gè)碳原子的?；ǜ骰鶊F(tuán)有1～2個(gè)羰基部分的直鏈、帶支鏈、環(huán)狀、飽和與不飽和的?；缫阴；郊柞；㈢牾；ⅠR來?；臀於；?、鹵素包括氟、氯、溴或碘。本發(fā)明中的X基團(tuán)，其中氫、烷基或?；糠直贿B接到氨基末端氨基酸的α氨基上。其中氨基末端氨基酸的氨基用兩個(gè)烷基或酰基取代的上述肽也被認(rèn)為是在本發(fā)明的肽的范圍內(nèi)。
很顯然，本發(fā)明的肽衍生物包括其中天然存在的神經(jīng)激肽A的兩個(gè)碳末端氨基酸的正常肽酰胺鍵變化了的肽類，并且這兩個(gè)變化了的氨基酸在這里化學(xué)上以基團(tuán)Y表示。應(yīng)用肽化學(xué)家規(guī)范命名法則，基團(tuán)Y包括兩個(gè)Leu殘基(即其中R1和R2各自為仲丁基)，它們的酰胺鍵通過還原羰基而轉(zhuǎn)變?yōu)閬喖谆?，基團(tuán)Y可以表示為Leuφ〔CH2NH〕Leu。該符號表明，倒數(shù)第二個(gè)Leu的酰胺羰基還原為亞甲基。用于敘述本發(fā)明的肽衍生物的其他術(shù)語符號有φ〔CH2S〕、φ〔CH2O〕、φ〔CH＝CH〕、φ〔C(O)CH2〕、φ〔CH(OH)CH2〕和φ〔φ〔NHC(O)〕。
關(guān)于A1定義中所用的術(shù)語“一個(gè)鍵”，是指基團(tuán)X直接結(jié)合到基團(tuán)A2上，或者如果A2也是一個(gè)鍵的話，那么X直接結(jié)合到基團(tuán)A3上。同樣，關(guān)于A2定義中所用的術(shù)語“一個(gè)鍵”，是指A1直接結(jié)合到基團(tuán)A3上，或者如果A1也是一個(gè)鍵的話，那么X直接結(jié)合到基團(tuán)A3上。
這里所用的術(shù)語“任一氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成制備天然存在的肽的類似物時(shí)在肽化學(xué)領(lǐng)域中常用的其他“非蛋白”α-氨基酸。天然存在的氨基酸有甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸半胱氨酸、脯氨酸、組氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷胺酸、谷氨酰胺、精氨酸、鳥氨酸和賴氨酸?！胺堑鞍住宝?氨基酸的實(shí)例有正亮氨酸;正纈氨酸;別異亮氨酸;高精氨酸;硫代脯氨酸;脫氫脯氨酸;羥基脯氨酸(Hyp)，高絲氨酸，環(huán)己基甘氨酸(Chy);a-氨基-正-丁酸(Aba);環(huán)己基丙氨酸(Cha);氨基苯基丁酸(Pba);在苯基部分的鄰、間或?qū)ξ挥?個(gè)或2個(gè)選自以下取代基取代的苯丙氨酸，這些取代基是(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、鹵素或硝基，或者在苯基部分的鄰、間或?qū)ξ挥脕喖锥趸〈谋奖彼?β-2-和3-噻吩基丙氨酸;β-2-或3-呋喃基丙氨酸;β-2-、3-和4-吡啶基丙氨酸;β-(苯并噻吩-2-和3-基)丙氨酸;β-(1-和2-萘基)丙氨酸;絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸的0-烷基化衍生物;S-烷基化的半胱氨酸;酪氨酸、3，5-二碘酪氨酸的0-硫酸酯以及天然存在氨基酸的D-異構(gòu)體。
除甘氨酸之外，天然的氨基酸含有一手性碳原子。除非另有說明本申請中所述的具有旋光的氨基酸均為L-構(gòu)型。按常規(guī)，所畫肽的結(jié)構(gòu)，氨基末端是在鏈的左邊，羧基末端是在鏈的右邊。與上述和通常習(xí)慣相一致，所畫基團(tuán)B左邊的化合價(jià)鍵連接到帶有“H”、基團(tuán)“R1”和基團(tuán)“NH”的基團(tuán)Y的碳原子上，而基團(tuán)B右邊的化合價(jià)鍵連接到帶有“H”、基團(tuán)“R2”和基團(tuán)“CoNH2”的基團(tuán)Y的碳原子上。
式1的多肽可以與無毒的有機(jī)酸或無機(jī)酸作用形成藥學(xué)上適用的鹽?？尚纬珊线m鹽的無機(jī)酸的實(shí)例有鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，以及酸式金屬鹽，例如磷酸-氫鈉和硫酸氫鉀?？尚纬珊线m鹽的有機(jī)酸的實(shí)例有一元羧酸、二元羧酸或三元羧酸。上述有機(jī)酸的實(shí)例有乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水相酸、2-苯氧基苯甲酸和磺酸(如甲磺酸和2-羥基乙磺酸)。羧基末端氨基酸部分的鹽包括與任何合適的無機(jī)堿或有機(jī)堿作用生成的無毒的羧酸鹽。舉例來說，這些鹽包括與堿金屬，如鈉或鉀;堿土金屬，如鈣和鎂;包括鋁在內(nèi)的ⅢA族輕金屬;有機(jī)伯、仲和叔胺，如包括三乙胺在內(nèi)的三烷基胺、普魯卡因、二芐基胺、1-乙烯胺(1-ethenamine)、N，N′-二芐基亞乙基二胺、二氫樅酸基胺、N-(低級)烷基哌啶以及與任何其他合適的胺生成的鹽。
對于任何類屬基團(tuán)的化合物，其中某些基團(tuán)是較好的。申請人優(yōu)先選用的式1肽衍生物是，其中X為氫和A1為一個(gè)鍵，申請人優(yōu)先選用的式1肽衍生物是，其中X為Glt、Mal、Fum，特別是Suc。申請人還優(yōu)先選用的式1肽衍生物是，其中A1為His-Lys-Thr，Lys-Thr，Thr，Asp-Val-Pro-Lys-Ser，Val-Pro-Lys-Ser，Pro-Lys-Ser，Lys-Ser，Ser，PGlu-Pro-Ser-Lys，Pro-Ser-Lys，Ser-Lys或Lys。申請人特別優(yōu)先選用的式1肽衍生物是，其中A1為His-Lys-Thr，Lys-Thr或Thr。申請人優(yōu)先選用其中A2為Asp的式1肽衍生物。申請人也優(yōu)先選用下述式1肽衍生物，其中A3為Gly、Gln、Asn、Sar，尤其是Ala或Ser。申請人還優(yōu)先選用下述式1肽衍生物，其中A4為phe，以及其中A5為Val和其中A6為Gly。申請人優(yōu)先選用下述式1肽衍生物，其中B為-CH2NH-和其中R1為異丁基即2-甲基丙基，以及其中R2為2-甲硫基乙基、異丁基或正丁基申請人特別優(yōu)先選用其中R1和R2各自為異丁基的上述化合物。最優(yōu)先選用的式1肽衍生物是H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕-Leu-NH2，其中R為氫或甲基。
本發(fā)明的蛋白質(zhì)可以用熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易了解的多種方法制得。該方法包括固相順序合成法，該方法是應(yīng)用已建立的自動(dòng)控制方法，例如可以應(yīng)用自動(dòng)控制的肽合成儀進(jìn)行。為了制備本發(fā)明的肽衍生物，將相對于碳末端改變了肽連接的變化了的二肽或其前體結(jié)合到樹脂載體上。用于制備各個(gè)改變肽連接的方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是已知的，并且可以容易地由精通肽的化學(xué)家掌握。從Chorev和Goodman，Int.J.Pept.Protein Res.，21(3)，258～68(1983)中，可以了解其中B為-NHCO-基團(tuán)的上述式1肽衍生物，即φ〔NHCO〕化合物的制備方法。從Holladay和Rich，Tetrahadron Letters，24(41)，4401～04(1983)中，可以了解其中B為-COCH2-或-CH(OH)CH2-基團(tuán)的上述式1肽衍生物，即φ〔COCH2〕和φ〔CH(OH)CH2〕化合物的各自制備方法。從SaSaKi和Coy，PePtides，Vol.8，pp，119-121，1987中，可以了解其中B為-CH2NH-基團(tuán)的上述式1肽衍生物，即φ〔CH2NH〕化合物的制備方法，并且下面將更詳細(xì)地?cái)⑹觥腟patola和Darlak，Tetrahedron Letters，44(3)，821～833(1988)中，可以了解其中B為-CH2S基團(tuán)的上述式1肽衍生物，即φ〔CH2S〕化合物的制備方法。從TenBrink，J.org，Chem.，1987，52，418～22中可以了解，其中B為-CH2O-基團(tuán)的上述式1肽衍生物即φ〔CH2O〕化合物的制備方法。
具體地說，其中B為CH2N(R)-基團(tuán)的本發(fā)明化合物可以通過還原式3的N-甲氧基-N-甲基酰胺為式4的醛而制得。還原反應(yīng)可以用一般已知的方法進(jìn)行，并且熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的人員可以容易地完成，例如可以用氫化鋁鋰(LAH)來進(jìn)行。向冷卻的(一般約為0℃)式3化合物在惰性溶劑(例如醚溶劑，如四氫呋喃(THF或乙醚)的溶液中加入約1摩爾當(dāng)量的LAH，通?？梢匀菀椎赝瓿缮鲜鲞€原反應(yīng)。在反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成以后(通常在約30分鐘之后)加入例如10%硫酸氫鉀或硫酸氫鈉，然后加入水，使反應(yīng)混合物冷卻。接著用溶劑，如乙醚提取水混合物，用冷的稀鹽酸洗滌乙醚相，干燥并除去溶劑，可以使產(chǎn)物分離出來。粗產(chǎn)物可以用例如硅膠柱層析進(jìn)行純化，用55%乙酸乙酯/己烷進(jìn)行洗脫。

然后使式4的醛與結(jié)合到樹脂上的式6氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，
其中R和R2同式1中的定義，并且其中

代表樹脂。例如用氰基硼氫鈉還原最初生成的席夫堿，得到結(jié)合在樹脂上變化了的二肽(式7)
其中R、R1和R2同式1中的定義，并且其中

代表樹脂。
然后，按通常方式將A6到A1氨基酸依次加到結(jié)合了變化二肽的樹脂中。
按通常方式，從相應(yīng)N-Boc受保護(hù)的酸制備N-甲氧基-N-甲基酰胺(式3)。將羰基二咪唑加到N-Boc保護(hù)的氨基酸在醚溶劑(例如乙醚)的干燥溶液中。使反應(yīng)混合物攪拌10分鐘～1小時(shí)，一般約為15～20分鐘。將N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽的DMF溶液和立體受阻的胺(如二異丙基乙胺)加入，于室溫下攪拌混合物約6小時(shí)到約24小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑，分離出所需化合物，通過在硅膠柱上進(jìn)行快速層析純化粗制品，用二氯甲烷進(jìn)行洗脫。
所用的載體樹脂可以是固相制備多肽技術(shù)領(lǐng)域中常用的合適樹脂最好是與0.5～3%二乙烯苯交聯(lián)的聯(lián)苯乙烯，該聚苯乙烯-二乙烯苯樹脂或者被氯甲基化或者被羥甲基化，以便提供與開始引入的α-氨基受保護(hù)的氨基酸反應(yīng)形成酯的位點(diǎn)。
Bodanszky等(Chem.Ind.(London)38，1597-98(1966))敘述了羥甲基樹脂。氯甲基樹脂可以從BioRadLaboratories，Richmond，California購買，并且Stewart等編著的“Solidphasepeptidesynthesis”(FreemanandCo.，SanFrancisco1969)中第一章1-6頁敘述了該樹脂的制備方法。應(yīng)用Gisin的方法(Helv.Chem.Acta，56，1476(1973)，可以將受保護(hù)的氨基酸結(jié)合到樹脂上。許多結(jié)合了受保護(hù)氨基酸的樹脂是市場上可以買得到的。為了制備其中羧基末端是Thr殘基的本發(fā)明多肽，作為一個(gè)實(shí)例，可以應(yīng)用叔丁氧基羰基(BOC)保護(hù)的Thr結(jié)合的芐基化、羥甲基化的苯基乙酰氨基甲基(PAM)樹脂，并且它們是市場上可以買到的。
在將α-氨基受保護(hù)的氨基酸結(jié)合到載體樹脂上之后，應(yīng)用任何合適的方法(例如應(yīng)用三氟乙酸的二氯甲烷溶液、單獨(dú)應(yīng)用三氟乙酸或應(yīng)用HCl的二氧六環(huán)溶液)脫去保護(hù)基。脫保護(hù)基反應(yīng)在0℃～室溫下進(jìn)行。為了脫去特定的α-氨基保護(hù)基團(tuán)，可以應(yīng)用其他一般的裂解試劑和條件。在脫去α-氨基保護(hù)基之后，其他氨基受保護(hù)的氨基酸可以按所需的順序逐步結(jié)合。另外，多級氨基酸基團(tuán)可以在與載有氨基酸序列的樹脂結(jié)合之前用溶液法進(jìn)行偶合。
引入多肽序列的各個(gè)氨基酸的α-氨基保護(hù)基團(tuán)可以是本技術(shù)領(lǐng)域已知的保護(hù)基團(tuán)。α-氨基保護(hù)基團(tuán)有(1)?；捅Ｗo(hù)基團(tuán)，例如甲?；⑷阴；?、鄰苯二甲酰、甲苯磺酰(tosyl)、苯磺?；⑾趸?苯基硫基、三苯甲基硫基、O-硝基苯氧基乙?；挺?氮代丁酰;(2)芳族氨基甲酸乙酯型保護(hù)基，例如芐氧基羰基和取代的芐氧基羰基，如P-氯代芐氧基羰基、P-硝基芐氧基羰基、P-溴代芐氧基羰基、P-甲氧基芐氧基羰基、1-(P-聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基羰基和二苯甲氧基羰基;(3)脂肪族氨基甲酸乙酯保護(hù)基，例如叔丁氧基羰基(Boc)、二異丙基甲氧基羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基和烯丙氧基羰基;(4)環(huán)烷基氨基甲酸乙酯型保護(hù)基，例如環(huán)戊氧基羰基、金剛烷氧基羰基和環(huán)己氧基羰基;(5)硫代氨基甲酸乙酯型保護(hù)基，例如苯基硫代羰基;(6)烷基型保護(hù)基，例如三苯甲基(trityl)和芐基;和(7)三烷基硅烷基，例如三甲基硅烷最好的α-氨基保護(hù)基是叔丁氧基羰基。
選擇合適的偶合試劑在本技術(shù)領(lǐng)域是熟知的。如果加入的氨基酸為Gln、Asn或Arg，那么特別合適的偶合試劑為N，N′-二異丙基碳二亞胺和1-羥基苯并三唑。應(yīng)用上述試劑可阻止形成腈和內(nèi)酰胺。其他的偶合劑有(1)碳二亞胺類，例如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺和N-乙基-N′-(γ-二甲氨基丙基碳二亞胺;(2)氨腈類，例如N，N-二芐基氨腈;(3)烯酮亞胺類;(4)異噁唑鹽類，例如N-乙基-5-苯基-異噁唑-3′-磺酸鹽;(5)在環(huán)中含1到4個(gè)氮原子的芳香族含氮單雜環(huán)酰胺，例如咪唑酰胺類、吡唑酰胺類和1，2，4-三唑酰胺類。常用的特定雜環(huán)酰胺有N，N′-羰基二咪唑和N，N-羰基-二-1，2，4-三唑;(6)烷氧基化的乙炔，例如乙氧基乙炔;(7)能與氨基酸的羧基部分形成混合酸酐的試劑，例如氯甲酸乙酯和氯甲酸異丁酯;或者是需偶合的氨基酸的對稱酸酐，例如Boc-Ala-O-Ala-Boc(8)在1個(gè)環(huán)氮原子上有羥基的含氮雜環(huán)化合物，例如N-羥基鄰苯二甲酰亞胺，N-羥基琥珀酰亞胺和1-羥基苯并三唑。其他活性試劑和它們在肽偶合中的應(yīng)用見Kapoor，J.pharm.Sci.，59，P.1-27(1970)。申請人優(yōu)先應(yīng)用對稱酸酐作為除Arg、Asn和Gln以外所有氨基酸的偶合試劑。
各個(gè)受保護(hù)的氨基酸或氨基酸序列以約4倍過量引入固相反應(yīng)器中，并在介質(zhì)(二甲基甲酰胺∶二氯甲烷＝1∶1，或者單獨(dú)用二甲基甲酰胺，最好單獨(dú)用二氯甲烷)中進(jìn)行偶合。如果發(fā)生不完全的偶合，那么在固相反應(yīng)器中偶合下一個(gè)氨基酸之前，先重復(fù)偶合操作然后再脫去α-氨基保護(hù)基團(tuán)。在合成的各個(gè)階段，用E.Kaiser等(Analyt.Biochem.34，595(1970)所述的水合茚三酮反應(yīng)監(jiān)測偶合反應(yīng)完成與否。
在得到所需要的氨基酸序列之后，從樹脂上切下肽。這可以通過水解來完成，例如可以用甲硫醚、對甲苯酚和甲苯硫酚的無水氫氟酸處理結(jié)合多肽的樹脂。
已知在固相肽合成的技術(shù)領(lǐng)域中，當(dāng)接長肽鏈時(shí)，許多氨基酸帶有需要保護(hù)的官能團(tuán)。應(yīng)用和選擇合適的保護(hù)基團(tuán)，對于熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的工作人員來說是熟知的，并且將根據(jù)肽上需要保護(hù)的氨基酸和存在的其他受保護(hù)的氨基酸殘基進(jìn)行選擇應(yīng)用。支鏈保護(hù)基的選擇是嚴(yán)格的，因?yàn)樵诿撊ウ?氨基部分的保護(hù)基時(shí)，支鏈保護(hù)基必須是不脫去的基團(tuán)。例如，賴氨酸合適的支鏈保護(hù)基為芐氧基羰基和取代的芐氧基羰基，該取代基可以選自鹵素(如氯、溴、氟)和硝基，例如2-氯芐氧基羰基，對-硝基芐氧基碳基，3，4-二氯芐氧基羰基，甲苯磺?；?，叔戊氧基羰基，叔丁氧基羰基和二異丙基甲氧基羰基。蘇氨酸和絲氨酸的醇羥基可以用乙?；⒈郊柞；?、叔丁基、三苯甲基、芐基、2，6-二氯芐基或芐氧羰基進(jìn)行保護(hù)。天冬氨酸和谷氨酸的羧羥基可以用芐基或環(huán)己基進(jìn)行保護(hù)。較好的保護(hù)基為芐基。
上述基團(tuán)可以用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法脫去。脫去保護(hù)基一般在肽鏈合成完成之后進(jìn)行，但是保護(hù)基也可以在任何其他合適的時(shí)間脫去。
式1肽衍生物作為神經(jīng)激肽A拮抗劑的作用可以用Buck等所述的方法(Science 226;987-989，1984)，以上述肽與碘化了的神經(jīng)激肽A競爭哺乳動(dòng)物神經(jīng)激肽A(NK2)受體的能力來表示;或用Bristow等所述的方法(British J.Pharmacol.90211～21，1987)，以上述化合物刺激或抑制神經(jīng)激肽A誘導(dǎo)的磷脂酰肌醇的轉(zhuǎn)換來表示;或用Dion等所述的方法(Life Sciences 412269-2278，1987)，以上述化合物拮抗神經(jīng)激肽A導(dǎo)致的平滑肌收縮作用來表示。
根據(jù)本發(fā)明的肽衍生物作為神經(jīng)激肽A拮抗劑的能力，本發(fā)明化合物可以用作為免疫抑制劑，并可用于治療關(guān)節(jié)炎、氣喘、疼痛、炎癥、腫瘤、胃腸道運(yùn)動(dòng)過強(qiáng)、杭延頓氏(Huntington′s)疾病、精神病、神經(jīng)炎、神經(jīng)痛、頭痛(包括偏頭痛)、高血壓、尿失禁、蕁麻疹、類癌瘤綜合癥、流感或感冒?？诜蚍墙?jīng)胃腸道給藥的有效劑量可以由熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的工作人員容易地確定，有效劑量是引起拮抗神經(jīng)激肽A(NK2)受體作用的劑量。例如，本發(fā)明肽的有效劑量可以從約每天0.5μg/Kg體重～500mg/Kg體重。一般以含約1mg～500mg有效化合物的單位劑量形式服用，并且每天可以服1-4次或4次以上的單位劑量形式。這里應(yīng)用的術(shù)語“病體”是指哺乳動(dòng)物，例如靈長目動(dòng)物，包括人、羊、馬、牛、豬狗、貓、大白鼠和小白鼠。
雖然本發(fā)明的某些肽衍生物口服可以通過腸部，但申請人優(yōu)先選用非口服給藥途徑，例如皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射;或長效注射給藥;植入片制劑;或者將含有本發(fā)明的肽衍生物以氣霧劑形式或以干粉形式應(yīng)用到粘膜(如鼻、喉和支氣管)上。對于非經(jīng)胃腸道給藥，本發(fā)明化合物可以按溶液劑或懸浮劑形式注射給藥，溶液劑或懸浮劑是將化合物溶于或懸浮于生理上可接受的稀釋劑和藥學(xué)上適用的載體中，它們可以是滅菌液體(如水和油)，可以用或不用表面活性劑和其他藥學(xué)上適用的輔助劑。。在上述制劑中可以應(yīng)用的油的實(shí)例有石油產(chǎn)品、動(dòng)物油、植物油或合成油，例如花生油、豆油和礦物油。一般來說，水、鹽水、葡萄糖水溶液和有關(guān)的糖溶液、乙醇和二元醇(如丙二醇或聚乙二醇)是較好的液體載體，它們尤其適用于注射溶液劑。
本發(fā)明化合物可以按長效注射劑或植入片制劑的形式給藥，長效注射劑和植入片制劑是使有效成份以緩釋的方式進(jìn)行配制?？梢詫⒂行С煞謮撼尚⊥鑴┗蛐〉膱@柱體，并以長效注射劑或植入片經(jīng)皮下或肌內(nèi)注入式植入，植入片可以應(yīng)用惰性材料，例如生物降解聚合物或合成的硅氧烷，如由Dow-Corning公司生產(chǎn)的硅橡膠、硅氧橡膠。
實(shí)例 本發(fā)明以下述非限制性實(shí)例詳細(xì)地?cái)⑹觥?br> 例1 H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-φ〔CH2NH〕-Leu-NH2和H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-φ〔CH2N(CH3)〕-Leu-NH2二種肽對神經(jīng)激肽A受體的拮抗作用，通過其對磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換的影響加以證實(shí)。
收集若干只地鼠膀胱，切碎并浸入含120mMNaCl和5mMKCl的50mMTris-HCl緩沖液(pH7.4中，在4℃條件下制成勻漿，然后以48，000Xg的速度離心15分鐘。沉淀物重新混懸于含10mMEDTA和300mMKCl的50mMTris-HCl緩沖液(pH7.4)中，于44℃放置30分鐘。混懸液以48000Xg離心15分鐘。沉淀物用50mMTris-HCl(pH7.4)緩沖液洗滌二次后，以48，000Xg離心15分鐘。沉淀物重新混懸于保溫緩沖液中在每只試管中加入此混懸液一份(約含3-5mg組織)，作為該試驗(yàn)的第一步。試管內(nèi)含保溫緩沖液，其組成如下50mMTris-HCl緩沖液(pH7.4)，0.02%牛血清蛋白(BSA)，40μg/ml桿菌肽，4μg/ml抑糜蛋白酶素，4μg/ml甲(乙)酰-亮-亮-精三肽，2mM MnCl2，0.1nM125碘化組氨酰神經(jīng)激肽A(Amersham公司)以及濃度范圍為0.03nM-100μM的標(biāo)題指出的二種肽或標(biāo)準(zhǔn)品。將含組織和保溫緩沖液的試管置室溫120分鐘，使達(dá)平衡。然后立即將各管內(nèi)容物用事先浸泡過0.5%BSA的Whatman GF/B濾紙過濾，并迅速用冰冷卻的50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.4)沖洗濾紙兩遍。用加碼計(jì)數(shù)儀定量測定與濾紙結(jié)合的放射性。比結(jié)合(最大)定義為1μM未標(biāo)記的神經(jīng)激肽A存在和缺乏條件下的結(jié)合之差。受試肽或標(biāo)準(zhǔn)品對碘化后的神經(jīng)激肽A結(jié)合的競爭作用以其最大競爭作用的百分比表示。標(biāo)題中二種肽的半數(shù)抑制濃度(IC50)，即抑制50%受體結(jié)合所需要的濃度為100-200nM(

圖1)。
例2 H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-φ〔CH2NH〕-Leu-NH2和H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-φ〔CH2N(CH3)〕-Leu-NH2二種肽對神經(jīng)激肽A受體的拮抗作用，通過其對磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換的影響加以證實(shí)。
集中若干只地鼠膀胱，并用組織唐粹器研磨成350μm大小。將研磨過的組織移入Krebs-Hepes緩沖液，于37℃保溫，每15分鐘換一次新鮮緩沖液，共二次(30分鐘)。然后將膀胱組織移入含100～200μci3H-肌醇的Krebs-Hepes緩沖液中，于37℃保溫。接著用含10mM Li+的Krebs-Hepes緩沖液洗滌組織并在37℃再保溫30分鐘，每15分鐘更換一次新鮮緩沖液。在含Li+緩沖液的試管中順序加入膀胱組織碎塊一份(約10～20mg/每只試管);受試肽25μl;不同濃度的神經(jīng)激肽A25μl，最終體積為250μl。在受試肽濃度范圍為1nM-100μM和神經(jīng)激肽A濃度范圍為1nM-10μM的條件下評價(jià)受試肽對神經(jīng)激肽A受體的阻斷作用。此外還在給出的受試肽諸濃度下單獨(dú)評價(jià)受試肽的激動(dòng)活性。室溫放置30分鐘后依次加入940μl氯仿-甲醇(1∶2)，310μl氯仿和310μl水，以終止磷脂酰肌醇的轉(zhuǎn)換。每只試管旋轉(zhuǎn)15秒鐘后，以3000rpm離心10分鐘，使有機(jī)相與水相分離。將900μl上層水相加到0.5ml Biorad AG-1×8(甲酸鹽)離子交換柱上。自各試管抽取底層氯仿50μl，移入計(jì)數(shù)瓶，干燥后加入閃液計(jì)數(shù)。加在離子交換柱上的樣品則依次用以下各液洗脫 (1)10ml水 (2)5ml5mM四硼酸二鈉/60mM甲酸鈉溶液 (3)10ml1M甲酸銨的0.1M甲酸溶液 收集最后一次(第三次)洗脫液，吸取1ml與6mlACS閃爍液混合，計(jì)數(shù)，然后計(jì)算每一樣品中這一部分的計(jì)數(shù)值(總的肌醇磷酸)和相應(yīng)的有機(jī)相計(jì)數(shù)值的比值。再將在受試肽和(或)標(biāo)準(zhǔn)品存在條件下的此比值與對照管(即沒有興奮性激動(dòng)劑)的比值作比較。繪制劑量一反應(yīng)曲線，用圖解分析法或偏助于計(jì)算機(jī)程序的幫助，測定受試肽促進(jìn)或抑制神經(jīng)激肽A誘導(dǎo)的磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換的能力，并以圖2和圖3表示。
例3 地鼠膀胱收縮標(biāo)本 將取自Syrian種雄性金黃地鼠(75～100g)的半條膀胱，按Dion等(Life Sciences 412269～2278，1987)報(bào)告的方法，在31℃和1g靜止張力條件下，懸浮于Tyrode′s緩沖液中，加入10μM腦啡肽酶抑制劑thiorphan后15分鐘，再加入每種受試肽。首先繪制無受試肽存在下累計(jì)的劑量-反應(yīng)曲線，然后再冷制有受試肽存在下累計(jì)的劑量-反應(yīng)曲線。受試肽以累加方式加入，以確定它們本身是否具有肌肉收縮作用。在下一個(gè)累計(jì)濃度加入以前，都要使觀察到的受試肽作用處于平穩(wěn)狀態(tài)。在這些條件下，NKA收縮效應(yīng)的半數(shù)效應(yīng)量(EC50)一般為10nM，與文獻(xiàn)報(bào)告的值一致。收縮效應(yīng)的數(shù)據(jù)以產(chǎn)生大于靜止張力克數(shù)表示。在三只離體地鼠膀胱組織中，每只給予H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2或H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2直到濃度達(dá)10μM，均未產(chǎn)生任何收縮效應(yīng)。圖4和圖5說明在受試肽存在和缺乏的條件下，作為精經(jīng)激肽A功能之一的膀胱收縮力的改變。
實(shí)例4 Ⅰ.Boc-Leu-醛合成(Fehrentg，J.A.和Castro，B.Shnthesis，1983，676～678) A.N-叔-Boc-亮氨酸N-甲氧基-N-甲酰胺 15.0mmolesBoc-亮氨酸水合物溶于30ml無水乙醚。該溶液用無水MgSO4干燥，過濾除去固體。將16.5mmoles羰基二咪唑加到濾液中，于室溫下攪拌20分鐘。向生成的溶液中加入由22.5mmoles O，N-二甲基羥胺鹽酸鹽、15ml二甲基甲酰胺和3.9ml二異丙基乙胺組成的懸浮液，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌過夜。用75ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，并用1N冷的鹽酸(3×40ml)、飽和NaHCO3(3×40ml)和飽和NaCl(1×40ml)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥、過濾、真空除去乙酸乙酯，分析數(shù)據(jù)R5(硅膠F254)0.51(乙酸乙酯/己烷，3/2);1H-NMR(CDCl3)TMS(內(nèi)標(biāo))δ＝0.95ppm(2d，6H，J＝6.6Hz);1.42(s，11H);1.64～1.80(m，1H);3.20(s，3H);3.80(s，3H);4.72(m，1H);5.10(d，1H，J＝7.5Hz).質(zhì)譜M+H+＝理論值275，測得值275。
B.Boc-亮氨酸醛 2.5mmoles Boc-亮氨酸N-甲氧基-N-甲酰胺溶于30ml無水乙醚。向該溶液中加入3.2mmoles氫化鋁鋰(1M四氫呋喃溶液)。反應(yīng)物于室溫下攪拌20分鐘，然后小心地加入0.6g NaHSO4的10ml水溶液。將反應(yīng)混合物加到75ml乙醚中，用1N冷的鹽酸(3×30ml)、飽和NaHCO3(3×30ml)和飽和Nacl(1×30ml)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥，過濾，真空除去溶劑。分析數(shù)據(jù)Rf(硅膠60 F254)0.68(乙酸乙酯/己烷3/2)。質(zhì)譜M＝H+理論值216，實(shí)測值216。
Ⅱ.Leu-樹脂的合成 在自動(dòng)控制的肽合成儀上應(yīng)用一般的固相肽合成技術(shù)進(jìn)行合成。在形成0.5mmolesBoc-Leu-樹脂之后，脫去Boc保護(hù)基，并用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗滌樹脂，并干燥。
Ⅲ.形成還原酰胺鍵(Leuφ〔CH2NH〕) 2mmoles Boc-Leu醛溶于10ml1%乙酸的二甲基甲酰胺溶液，將該溶液加到含有0.5mmoles Leu-樹脂(見上述Ⅱ)的反應(yīng)容器中。向該混合物中加入150mgNaCNBH3的2ml二甲基甲酰胺溶液，將混合物振搖4小時(shí)，取出反應(yīng)容器，先用二甲基甲酰胺然后用二氯甲烷洗滌樹脂。
Ⅳ.〔φ〔CH2NH〕9，Leu10〕NKA4-10的合成 在自動(dòng)迅制的肽合成儀上，通過順序加入其余的氨基酸(Gly Val、phe、Ser(Bzl)和Asp(Chxl))，完成肽的合成。從樹脂上切下肽，用無水HF∶苯甲醚＝10∶1使保護(hù)基全部脫去。用反相HpLc技術(shù)純化肽。分析數(shù)據(jù)氨基酸分析(HCl)消化法)Asp(1.03);Ser(0.93);Gly(1.01);Val(0.96);Phe(0.74).肽含量53.4%?？焖僭愚Z擊質(zhì)譜M+H+理論值735，實(shí)測值735。
Ⅴ.〔φ〔CH2NCH3〕9、Leu10〕NKA4-10的合成 0.5mmolesN-甲基-Leu-樹脂(按照上述Ⅱ的方法從Boc-N-甲基亮氨酸制備)與上述Ⅰ制備的2.0mmolesBoc-Leu醛反應(yīng)。然后按上述Ⅳ進(jìn)行肽合成。分析數(shù)據(jù)氨基酸分析(HCl消化法)Asp(1.01);Ser(0.89)Gly(1.02);Val(1.00);phe(0.98)。肽含量53.5%，快速原子轟擊質(zhì)譜M+H+理論值749，實(shí)測值749。
Ⅵ.〔φ〔CH2NCH2R〕9，Leu10〕NKA4-10的合成 按照上述步驟Ⅱ和Ⅲ的方法制備Boc-Leu〔φ(CH2NH)-Leu樹脂。然后在NaCNBH3存在下，按上述Ⅲ的方法使該樹脂與2.5mmoles R-CHO在10ml1%HOAC的二甲基甲酰胺溶液中反應(yīng)。按上述Ⅳ的方法完成肽的合成。
圖解 圖1表示H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2和H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NCH3〕Leu-NH2二種肽拮抗結(jié)合神經(jīng)激肽A(KNA)受體的能力，通過檢驗(yàn)其替代來源于地鼠膀胱的I125標(biāo)記的NKA的能力加以證實(shí)(例11)。橫座標(biāo)(X軸)為對數(shù)座標(biāo)，表示NKA受體激動(dòng)劑或拮抗劑的濃度，以nm表示;縱座標(biāo)(y軸)表示觀察到的每種受試激動(dòng)劑或拮抗劑的比結(jié)合，以最大比結(jié)合的百分比表示。


神經(jīng)激肽A

神經(jīng)激肽A(3-10)

神經(jīng)激肽A(4-10)

H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-L Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2

H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2 受試的激動(dòng)劑為神經(jīng)激肽A和神經(jīng)激肽A的二個(gè)片段，一為由第3至第10個(gè)氨基酸組成的NKA片段(NKA(3-10)，一為由第4至第10個(gè)氨基酸組成的NKA片段(NKA(4-10))。圖中數(shù)值為6-12次實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。半數(shù)抑制濃度(IC50)在圖上由50%抑制點(diǎn)估計(jì)而得。
圖2說明H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ(CH2NH〕Leu-NH2拮抗NKA受體結(jié)合的能力通過其對地鼠膀胱中磷脂酰肌醇(PI)轉(zhuǎn)換的影響加以證實(shí)(例2)。橫座標(biāo)(X軸)為對數(shù)座標(biāo)，表示NKA受體激動(dòng)劑或拮抗劑的濃度，以nM表示?？v座標(biāo)(Y軸)表示觀察到的PI轉(zhuǎn)換，以對照的百分比表示。


NKA

NKA+10μM H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2 從圖中可看出，H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2可導(dǎo)致NKA劑量一反應(yīng)曲線以競爭方式明顯右移。圖中數(shù)值為一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤 圖3說明H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NCH3〕Leu-NH2(樣品29916)拮抗NKA受體結(jié)合的能力，通過其對地鼠膀胱中磷脂酰肌醇(PI)轉(zhuǎn)換的影響加以證實(shí)(例2)。橫座標(biāo)(X軸)為對數(shù)座標(biāo)，表示NKA受體的激動(dòng)劑或拮抗劑的濃度，以nM表示。縱座標(biāo)(Y軸)表示觀察到的PI轉(zhuǎn)換，以對照的百分比表示。


NKA

H-Asp-Ses-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2

H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2

NKA+1μM H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2

NKA+10μM H-Asp-Ser-phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2

NKA+100μM H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2 1，10和100μM H-Asp-Ser-Phe-Val Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2可導(dǎo)致NKA劑量一反應(yīng)曲線以競爭方式明顯右移。這些數(shù)據(jù)的Schild圖的斜率為-0.99，表示屬于競爭性拮抗作用;PA2為7.66H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2的濃度高達(dá)100μM也僅顯示5%的激動(dòng)活性，而H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2只有12%的激動(dòng)活性。圖中靠值為一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖4說明H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2對地鼠膀胱標(biāo)本中NKA介導(dǎo)的收縮活性的拮抗作用(例3)。橫座標(biāo)(Y軸)為對數(shù)座標(biāo)，表示NKA濃度或NKA中含10μm H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2的濃度以nM表示。圖中數(shù)值為一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次所得結(jié)果的平均值±輕準(zhǔn)誤。
圖5說明H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2對地鼠膀胱標(biāo)本中NKA介導(dǎo)的收縮活性的拮抗作用(例3)。橫座標(biāo)(X軸)為對數(shù)座標(biāo)，表示NKA濃度或NKA中含10μM H-Asp-Ser Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2的濃度，以nM表示。圖中數(shù)值為一個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次所得結(jié)果的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。
權(quán)利要求
1、制備下式肽衍生物或其藥物上適用的鹽的方法。
其中X為氫、有1-6個(gè)碳原子的烷基或有2-10個(gè)碳原子的?；?；
A1為一個(gè)鍵或?yàn)橛?-4個(gè)氨基酸組成的基團(tuán)；
A2為一個(gè)鍵或者為Asp或Glu；
A3為任一氨基酸；
A4為phe或N-Me-phe；
A5為Ile、Val、Leu、phe、Ala、Nle、Tyr、Met或N-Me-Val；
A6為Gly或Sar；和
Y為下式基團(tuán)，
其中B為下式基團(tuán)之一，
這里R為氫原子或有1-4個(gè)碳原子的烷基?；?yàn)楸交鶃喭榛?，其中亞烷基部分為直鏈或帶支鏈的、并具?-6個(gè)碳原子、其中苯基部分為未被取代的或由C1-4烷基、C1-6烷氧基、羥基或鹵素單取代的；
R1和R2分別獨(dú)立地選自異丙基、異丁基、仲丁基、正丁基和2-(甲硫基)乙基；
該方法包括將α-氨基受保護(hù)的氨基酸以A6-A1順序固定到結(jié)合在樹脂上的下式化合物上，并脫去氨基保護(hù)基，得到末端氨基增長的肽鏈。
其中R1、R2和B的定義同上，并且其中Boc為丁氧羰基保護(hù)基團(tuán)，
代表樹脂。
2、權(quán)利要求1所述的方法，其中X為氫。
3、權(quán)利要求1所述的方法，其中A1為一個(gè)鍵，X為Glt、Mal、Fum或Suc。
4、權(quán)利要求1所述的方法，其中A1為一個(gè)鍵，X為Suc。
5、權(quán)利要求1所述的方法，其中A1為His-Lys-Thr、Lys-Thr、Thr、Asp-Val-Pro-Lys-Ser、Val-Pro-Lys-Ser、Pro-Lys-Ser、Lys-Ser、Ser、PGlu-Pro-Ser-Lys、Pro-Ser-Lys、Ser-Lys或Lys。
6、權(quán)利要求1所述的方法，其中A1為His-Lys-Thr、Lys-Thr或Thr。
7、權(quán)利要求1所述的方法，其中A2為Asp。
8、權(quán)利要求1所述的方法，其中A3為Gly、Gln、Asn、Sar、Ala或Ser。
9、權(quán)利要求1所述的方法，其中A3為Ala或Ser。
10、權(quán)利要求1所述的方法，其中A4為Phe。
11、權(quán)利要求1所述的方法，其中A5為Val。
12、權(quán)利要求1所述的方法，其中A6為Gly。
13、權(quán)利要求1所述的方法，其中B
。
14、權(quán)利要求1所述的方法，其中R1為異丁基。
15、權(quán)利要求1所述的方法，其中R2為2-甲硫基乙基、異丁基或正丁基。
16、權(quán)利要求1所述的方法，其中R1和R2分別為異丁基。
17、權(quán)利要求1所述的方法，其中X為氫、Glt、Mal、Fum或Suc;A1為一個(gè)鍵、His-Lys-Thr、Lys-Thr、Thr、Asp-Val-Pro-Lys-Ser、Val-Pro-Lys-Ser、Pro-Lys-Ser、Lys-Ser、Ser、PGlu-Pro-Ser-Lys、Pro-Ser-Lys、Ser-Lys或Lys;A2為一個(gè)鍵Asp或Glu;A3為Gly、Gln、Asn、Sar、Ala或Ser;A4為Phe或N-Me-Phe;A5為Ile、Val、Leu、Phe、Ala、Tyr、Nle、Met或N-Me-Val;A6為Gly或Sar;B為-Ch2NH-;并且S1和R2各自獨(dú)立地選自異丙基、異丁基、仲丁基、正丁基或2-(甲硫基)乙基。
18、權(quán)利要求17所述的方法，其中X為氫。
19、權(quán)利要求17所述的方法，其中A1為一個(gè)鍵、His-Lys-Thr、Lys-Thr或Thr。
20、權(quán)利要求17所述的方法，其中A2為一個(gè)鍵或Asp。
21、權(quán)利要求17所述的方法，其中X為氫;A1為His-Lys-Thr、Lys-Thr或Thr;A2為Asp。
22、權(quán)利要求17所述的方法，其中A3為Ala或Ser。
23、權(quán)利要求17所述的方法，其中A4為Phe。
24、權(quán)利要求17所述的方法，其中A5為Val。
25、權(quán)利要求17所述的方法，其中A6為Gly。
26、權(quán)利要求17所述的方法，其中B為
。
27、權(quán)利要求17所述的方法，其中R1為仲丁基。
28、權(quán)利要求17所述的方法，其中R2為2-(甲硫基)乙基、仲丁基或正丁基。
29、權(quán)利要求17所述的制備H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔CH2NH〕Leu-NH2或H-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leuφ〔〔CH2N(CH3)〕Leu-NH2的方法。
30、用作為藥物的下式肽衍生物或其藥學(xué)上適用的鹽，
X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-Y
其中X為氫，有1-6個(gè)碳原子的烷基或有2-10個(gè)碳原子的?；?
A1為一個(gè)鍵或由1-4個(gè)氨基酸組成的基團(tuán);
A2為一個(gè)鍵或Asp或Glu;
A3為任一氨基酸;
A4為Phe或N-Me-Phe;
A5為Ile、Val、Leu、Phe、Ala、Tyr、Nle、Met或N-Me-Val;
A6為Gly或Sar;和
Y為下式的基團(tuán)，
其中B為下式的基團(tuán)之一，
-CH2-S-，
-CH2-O-，
-CH＝CH-，
-CH(OH)CH2-，and
其中R為氫原子或有1-4個(gè)碳原子的烷基，或?yàn)楸交鶃喭榛渲衼喭榛糠譃橹辨溁驇еф湹?，并且?-6個(gè)碳原子，其中苯基部分為未取代的或由C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基或鹵素單取代的;
R1和R2各自獨(dú)立地選自異丙基、異丁基、仲丁基、正丁基和2-(甲硫基)乙基。
全文摘要
本申請敘述了神經(jīng)激肽A的拮抗劑，它是天然存在的神經(jīng)激肽A的衍生物，其中在羧基末端連接兩個(gè)氨基酸的酰胺鍵被改變。應(yīng)用一般的競爭結(jié)合和生物化學(xué)試驗(yàn)以及一般的生理學(xué)試驗(yàn)，確證了本發(fā)明化合物的拮抗作用。本文還敘述了上述衍生物在與神經(jīng)激肽A有關(guān)的許多方面的應(yīng)用。
文檔編號A61P11/08GK1039597SQ8910420
公開日1990年2月14日 申請日期1989年6月20日 優(yōu)先權(quán)日1988年6月20日
發(fā)明者斯蒂芬·H·布克, 約翰·L·克拉坦尼斯基, 舍斯特·F·哈斯曼, 詹姆斯·R·麥克卡西, 斯科特·L·哈比森 申請人:默里爾多藥物公司