專利名稱:一種藥物制劑的制備過程的制作方法
1-(5-氧代己基)-3，7-二甲基黃嘌呤(己酮可可堿)可用作為改善血液流動(dòng)性質(zhì)的藥物，這已為大家所熟知。據(jù)認(rèn)為其機(jī)制可能是血液粘性應(yīng)力的減弱是由于紅細(xì)胞的變形性所致，而這種變形性可為己酮可可堿所改善(Deutsche Mediz，Wochenschrift107(1982)，1674)。此外，己酮可可堿也可體外抑制血小板凝集，但其濃度要高于治療劑量下所達(dá)到的藥物濃度〔IRCS(Med.Sci.)8(1980)，293，Thrombos.Haemostas.46(1981)272〕。
此外，據(jù)報(bào)道給予大鼠己酮可可堿能增加大鼠主動(dòng)脈體外釋放有抗凝集作用的物質(zhì)。亦有報(bào)道，因此而增加的這種抗凝集物質(zhì)(據(jù)認(rèn)為是前列腺環(huán)素)的釋放，可被給予大鼠的乙酰水楊酸所抑制(Vasa10(1981)249)。我們所作的有關(guān)試驗(yàn)證實(shí)了這一結(jié)果(見下述)。
0-乙?；畻钏釋?duì)人血小板凝集有抑制作用(Br.J.Clin.Pharmac.7(1979)283)。并據(jù)認(rèn)為它對(duì)預(yù)防血栓形成和中風(fēng)可能有有價(jià)值的治療作用(Blood 52 (1978)1073，N.Engl.J.Med.299(1978)53)。據(jù)報(bào)道其作用機(jī)制為乙酰水楊酸能抑制集中在血小板內(nèi)的環(huán)氧合酶(J.Clin.Invesf.56(1975)624)和抑制促進(jìn)凝集的凝血氧烷A2的生物合成。然而，乙酰水楊酸也能抑制血管壁內(nèi)的環(huán)氧合酶，因而抑制前列腺環(huán)素(它抑制凝集作用)的合成。但對(duì)血管環(huán)氧合酶的這種抑制作用僅在大劑量水楊酸下才出現(xiàn)(Pharmacol，Research Commun.10 (1978)759)，所以推薦使用低劑量乙酰水楊酸來達(dá)到抗血栓形成作用(Lancet，ⅲ(1979)1213，Prosta-glandins and Medicines 4 (1980)439)。然而還有報(bào)道乙酰水楊酸的抗血栓形成作用隨劑量增加而增強(qiáng)，而在對(duì)前列腺環(huán)素和凝血氧烷生物合成有明顯抑制作用的劑量下效果最佳(Prostaglandines，Leukotrienes and Medicine 12 (1983)235)。
通過制成乙酰水楊酸和黃嘌呤衍生物7-(2-二乙氨乙基)-1，3-二甲基黃嘌呤的酸-堿加合物可以把它們的有利作用綜合起來，這種加合物的治療作用文獻(xiàn)已有敘述(GB Laid-Open Applicafion 2096138)。此外，也有報(bào)道這種結(jié)合的、同時(shí)給予的乙酰水楊酸和己酮可可堿對(duì)裝有人工心瓣膜病人血小板存活時(shí)間的影響(Singapore Med Journal 20 Suppl 1 (1979)30)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，按特定順序并經(jīng)過一段時(shí)間間隔相繼給予A)黃嘌呤衍生物或其活性代謝物和B)乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽，有可能大大提高對(duì)因血液成分(尤其是血小板或紅細(xì)胞以及白細(xì)胞)損壞引起的或以此為特征的疾病的療效。這種先給予黃嘌呤衍生物(特別是己酮可可堿)，隔10分鐘到4小時(shí)再給予乙酰水楊酸或其鹽的序貫給藥方法比同時(shí)給予這兩種藥物加合物的效果要好得多。事實(shí)上后一種給藥方法使這種影響減弱。這就是為什么同時(shí)給予黃嘌呤衍生物如己酮可可堿和乙酰水楊酸只能達(dá)到單獨(dú)給予乙酰水楊酸時(shí)所達(dá)到的抗血栓形成和抗凝集作用的原因(見下述，表1和2)。
因此本發(fā)明涉及以這樣一種方式使含A)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物(見專利權(quán)利要求
書1)或氧代烷基-或羥烷基黃嘌呤的前藥或它們的活性代謝物和B)O-乙?；畻钏峄蚱淇晒┧幱玫柠}以及含或不含C)一種藥用賦形劑的制劑首先釋放A)組分。這樣可以用于治療因血液成分(尤其是血小板或紅細(xì)胞以及白細(xì)胞)損壞引起的或以此為特征的疾病。換言之，根據(jù)本發(fā)明這種制劑(由于它有超加作用)適用于抗血栓形成，促進(jìn)血液流動(dòng)，抗炎，鎮(zhèn)痛，抗凝集和細(xì)胞抑制。因而本發(fā)明也涉及使用含A)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物或式(Ⅰ)或(Ⅱ)的氧代烷基黃嘌呤的前藥或式如(Ⅰ)的羥基黃嘌呤的前藥或它們的活性代謝物和B)O-乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽以及含或不含C)即制備能首先釋放組分A)的序貫釋放劑型的藥物賦形劑的制劑治療因血液成分損壞引起的疾病。本發(fā)明還涉及如權(quán)利要求
3所述的藥物制劑的制備和用這種制劑作為人用和獸用藥。根據(jù)本發(fā)明這種復(fù)方產(chǎn)品有可能使黃嘌呤衍生物甚至在乙酰水楊酸之前釋放(即被生物利用)。
特別突出的優(yōu)點(diǎn)是由于序貫給藥的超加作用，所以黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸的給藥劑量可以減少至假如單獨(dú)給予時(shí)只顯示極弱的藥理作用。這樣，也同時(shí)可以避免這些藥物在高劑量下產(chǎn)生的副作用。這一點(diǎn)很重要，因?yàn)楸娝苤诔Ｓ脛┝肯?，乙酰水楊酸能產(chǎn)生不良副反應(yīng)(例如British J.of Clinical Pharmacology 1980，10 Suppl 2和International Meeting on side effecfs of Anti-inflammatory，Analgesic Drugs，Verona，Sept 13～15，1982，文摘)如哮喘，過敏性蕁麻疹，鎮(zhèn)痛藥致腎病和消化性潰瘍。此外，黃嘌呤衍生物也可能產(chǎn)生不良副反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明，這種復(fù)方產(chǎn)品能令人驚異地大幅度地減少為人治療所需的乙酰水楊酸劑量和黃嘌呤衍生物的數(shù)量，這樣可以大大改善總的毒理學(xué)耐受性(見下述)。
適宜的黃嘌呤衍生物為式如(Ⅰ)的1，3，7，-三取代化合物，其R1和R3中有一個(gè)為3～8C的直鏈烷基、(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個(gè)基團(tuán)R2和R3或R1和R2為1～8C(R1和R3)和1～4C(R2)直鏈或支鏈烷基，這兩個(gè)烷基取代基的碳原子的總數(shù)不超過10。
在這種情況下，式(Ⅰ)的黃嘌呤化合物最好是其R1或R3為5～6C的烷基、(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，兩個(gè)烷基取代物R2和R3或R1和R2總計(jì)含2～6個(gè)碳原子的化合物。
在這些化合物中，又以R1或R3帶一個(gè)己基、5-氧代己基或5-羥己基的那些化合物較好。這些化合物包括1-己基-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-羥己基)黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-氧代己基)黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤和1-(5-氧代己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤。
另一組適宜的黃嘌呤包括式如(Ⅱ)的化合物，其中R為1～4C烷基。
不一定要用式如(Ⅰ)和(Ⅱ)的氧化烷基黃嘌呤和式如(Ⅰ)的羥烷基黃嘌呤本身，也可以用其前藥，這樣只在體內(nèi)經(jīng)過生物轉(zhuǎn)換后釋放出具有如式(Ⅰ)和(Ⅱ)取代基的有治療作用的黃嘌呤化合物。適于這種意圖的是那些縮醛化的氧代烷基黃嘌呤，其中羰基用式如(Ⅲ)的結(jié)構(gòu)單元取代(見專利權(quán)利要求
第6項(xiàng))和具有結(jié)構(gòu)單元R6-CO-O-(Ⅳ)(代替羥基)的O-?；u烷基黃嘌呤，其中R4和R5各為不超過4C的烷基或一起構(gòu)成亞乙基，亞丙基或亞丁基，R6為不超過4C的烷基，苯基，取代苯基，吡啶基或取代吡啶基。
適于藥用的乙酰水楊酸鹽為那些帶金屬陽離子，銨，胺陽離子或季銨陽離子的鹽，雖然也可用其它金屬的陽離子如鋁、鋅和鐵，但最好用堿金屬如鋰，鈉、鉀和堿土金屬如鎂和鈣的金屬陽離子。
適于藥用的胺陽離子是那些伯、仲或叔胺如烷胺例如甲基一，二甲基一，三甲基一，乙基一，二丁基一，三異丙基一，N-甲基己基一，芐基一，β-苯乙胺，亞乙基二胺，二亞乙基三胺，哌啶，嗎啉，哌嗪，一、二和三乙醇胺，乙基二乙醇胺，N-丁基乙醇胺及類似的胺等。
黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸也可以同時(shí)給藥以達(dá)到超加作用，但還是以分開的制劑單位給藥為好。盡管這些組分可以混合在一起給藥，但其劑型要能保證時(shí)間上的序貫性。制劑單位可以是固體劑型如膠囊(包括微囊，通常它不含賦形劑)，片劑(包括包衣和藥丸)或栓劑。當(dāng)用膠囊時(shí)，膠囊材料要承擔(dān)起賦形劑的功能。內(nèi)含物可以是粉末，膠體，乳劑，分散劑或溶液。然而，最直接和最方便的辦法是制備含這兩種有效成分的口服和經(jīng)口給藥配方。它含有計(jì)算量的活性化合物和所需的藥物賦形劑，其性質(zhì)要使得活性化合物的釋放是序貫進(jìn)行的。也有可能采用合適的配方(栓劑)供直腸給藥用。同樣，也可制成透皮貼膏和胃腸道外(腹腔，靜脈，皮下或肌肉)注射劑，例如用適當(dāng)?shù)亩嗍易⑸鋯卧葎┬汀?br>這種類型的復(fù)方產(chǎn)品可采用常規(guī)過程制備。根據(jù)本發(fā)明，活性化合物的序貫釋放(生物劑用度)可通過常規(guī)的包裹方法制備，如將含乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽如DL-賴氨酸單乙酰水楊酸鹽的片劑、藥丸或顆粒用含活性化合物如己酮可可堿包裹(參考Sacker，F(xiàn)uchs和Speiser，Pharmazeutische Technologie，Stuttgart 1978，P 424)。最好與膨脹劑(分泌粘液的物質(zhì))，樹脂如聚苯乙烯或其它常用藥劑配合使用，以增強(qiáng)耐受性。這些片子，藥丸或顆粒按常規(guī)方法制成藥核。它也可含常用的賦形劑和其它輔料如淀粉，例如土豆淀粉，玉米淀粉或小麥淀粉，纖維素或它們的衍生物，尤其是微晶纖維素，硅膠，各種糖如乳糖，碳酸鎂和/或磷酸鈣。包衣或外層含例如己酮可可堿可用常規(guī)的制藥工藝如用模壓，浸漬，流化床或包衣罐包裹在藥核上，包衣溶液通常含糖和/或淀粉糖漿，并加入明膠，阿拉伯膠，聚乙烯基吡咯酮，合成纖維素酯，表面活性物質(zhì)，增塑劑，染料和類似的添加物，主要根據(jù)工藝要求而定。
也可用層片的劑型來達(dá)到活性化合物序貫釋放(這種劑型也包括非正園形藥心片)，Sucker等采用過這種方法。在這種劑型中，吸收最快的一層含黃嘌呤，最好與分泌粘液的物質(zhì)或其它提高耐受性的常用物質(zhì)配方。有效成分的釋放可以根據(jù)不同層釋放速度的差異加以控制。這種差異可通過采用適當(dāng)?shù)某Ｓ幂o料如上所述的那些物質(zhì)。例如兩種活性成分(如己酮可可堿和乙酰水相酸)的梯度釋放也可通過在含乙酰水楊酸的組分內(nèi)加入緩釋劑來實(shí)現(xiàn)。在適當(dāng)?shù)膱龊弦部捎脻B透膜如纖維素或聚苯乙烯為基質(zhì)的材料，或離子交換樹脂，或采用微囊劑型(它耐胃液的作用，所以能延遲釋放)。然而，含乙酰水楊酸的藥核也可以用例如聚甲基丙烯酸酯(Eudragit
)包衣，也能達(dá)到延遲釋放的效果。
所有常用的流動(dòng)性調(diào)節(jié)劑，潤滑劑如硬脂酸鎂和脫模劑都可用于各種劑型的制造。
乙酰水楊酸與黃嘌呤衍生物如己酮可可堿的重量比可以在較寬的范圍內(nèi)變動(dòng)。對(duì)于一種特定的復(fù)方其組分的正確比例可按下述實(shí)驗(yàn)程序容易地確定。黃嘌呤衍生物例如己酮可可堿的重量比(以一份的乙酰水楊酸為基準(zhǔn))通常在最小值為0.1和最大值為50之間。最小值在0.3～0.5較好，但在2左右最好，最大值在10左右較好，也可以通過這些實(shí)驗(yàn)程序來確定黃嘌呤和乙酰水楊酸給藥的最適時(shí)間間隔或從藥物制劑中釋放的最適速率。黃嘌呤衍生物例如己酮可可堿首先釋放，然后在15分鐘到4小時(shí)后再釋放乙酰水楊酸組分。時(shí)間間隔為20～90分鐘，以30～60分鐘最好。當(dāng)然，給藥劑量與許多因素如治療對(duì)象(即人還是動(dòng)物，其年齡，體重，一般健康狀態(tài))，癥狀的嚴(yán)重程度，需要治療的疾病類別，用其它藥物合并治療的情況，治療的次數(shù)等有關(guān)。一般日劑量的給藥次數(shù)不超過5次，最好1～3次。各個(gè)有效成分的重量比應(yīng)在上述范圍內(nèi)，并且組分的數(shù)量應(yīng)在治療對(duì)象能耐受的有效劑量范圍內(nèi)。
例如，當(dāng)人用時(shí)單味乙酰水楊酸的推薦劑量為500～2，000毫克，最好為1，000毫克，每日服2～3次，而單味己酮可可堿的推薦劑量為200～800毫克，最好是300～600毫克，每天2～3次。從這些重量比以及乙酰水楊酸與己酮可可堿的比例，有可能正確地計(jì)算它們的數(shù)量。因而，根據(jù)本發(fā)明，適宜的治療包括給予例如1個(gè)以上，最好是3～8個(gè)單次量的復(fù)方。每個(gè)單次量含100～600毫克，至少為200最好不超過400毫克的黃嘌呤衍生物，特別是己酮可可堿和10～2，000毫克例如不超過400毫克的乙酰水楊酸或其等當(dāng)量的鹽。當(dāng)然，其數(shù)量與單次量的數(shù)目以及所治療的疾病有關(guān)。單次量可由例如幾片片劑組成，同時(shí)服入，然而，根據(jù)本發(fā)明，即使所用的乙酰水楊酸量特別小(例如10～50毫克/日以下)也可以獲得良好的療效，它比給予相同數(shù)量的單味水楊酸要好得多。
根據(jù)本發(fā)明，此復(fù)方也可以和已知的抗血栓形成藥和血小板凝集抑制劑一樣使用。體內(nèi)應(yīng)用包括給予人和動(dòng)物以預(yù)防動(dòng)、靜脈血栓形成，例如防止短暫性局部缺血發(fā)作和心肌梗塞以及中風(fēng)的長期預(yù)防，動(dòng)脈硬化預(yù)防和術(shù)后用藥以防止術(shù)后血栓形成，和癌癥后使用以防止或減弱轉(zhuǎn)移作用等。也可用于使用心肺機(jī)和腎透析裝置的病人，同樣也可用于裝有人工心瓣膜，人工血管等的病人。當(dāng)然，用于各組分各自真正的適應(yīng)癥如改善血液流動(dòng)(間歇性跛行)和鎮(zhèn)痛及抗炎(包括慢性炎癥)也是可能的。在抗炎用制劑中，黃嘌呤衍生物與組分B的比通常在0.1～1之間。而在其它制劑中，此比例一般在0.5～30之間。
體內(nèi)研究
在大鼠腸系膜的小動(dòng)脈內(nèi)用激光產(chǎn)生血管內(nèi)血栓形成，并以此為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)本發(fā)明的己酮可可堿和乙酰水楊酸復(fù)方的療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用活檢顯微鏡檢查進(jìn)行分析(Nature，218(1968)887和Haemostasis 13(1983)61和IRCS Med.Sci.12(1984)91)。
將受試物質(zhì)溶于0.9%的氧化鈉溶液中(含1%羥甲基纖維素(Serva，Heidelberg)，口服，腹腔或靜注給藥。對(duì)照組動(dòng)物給予相同的溶液，但不含受試物質(zhì)。所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雄性或雌性Sprague-Dawley或Wistar大鼠。
用激光誘發(fā)血栓形成模型研究己酮可可堿，其它黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸的作用。試驗(yàn)用體重200克的雌性Sprague-Dawley大鼠進(jìn)行，事先皮下給予試驗(yàn)動(dòng)物0.1毫克硫酸阿托品(溶液)，再腹腔給予100毫克鹽酸氯胺酮和4毫克甲苯噻嗪/公斤體重進(jìn)行麻醉。研究利用腸系膜直徑約為13微米的小動(dòng)脈和小靜脈進(jìn)行。腸系膜涂以除氣的液體石蠟，將4瓦氬激光器(Spectra Phpsics，Darmstadt制造)同軸地導(dǎo)入顯微鏡(ICM 405，LD-Epipland 40/0.60;Zeiss.Oberkochen制造)的逆轉(zhuǎn)光徑內(nèi)，所用的波長為514.5毫微米，靶物上的能量約30.5毫瓦。一次照射的暴露時(shí)間為1/15秒。全部測定操作用電視攝像機(jī)(Tricon tube.Sony，Cologne)拍攝并記錄入記錄器(Song，U-matic 3/4″)內(nèi)。在試驗(yàn)開始前1小時(shí)(口服給藥)和10分鐘(靜注給藥)將各種劑量的受試物質(zhì)給予試驗(yàn)動(dòng)物。對(duì)照組給予相同數(shù)量的安慰劑，受試物質(zhì)的給藥方式如下1)作為單味藥，2)作為復(fù)方或 3)先給予乙酰水楊酸，1小時(shí)后給予己酮可可堿，或另一個(gè)黃嘌呤衍生物和4)先給予己酮可可堿，1小時(shí)后給予乙酰水楊酸(表Ⅰa)。表Ⅰb表示不同時(shí)間間隔的影響，表Ⅰc綜合了其它黃嘌呤的作用。
評(píng)價(jià)
計(jì)算出誘發(fā)一個(gè)明顯的血栓所需的照射次數(shù)，照射頻率相當(dāng)于每兩分鐘造成一個(gè)損害，計(jì)算并測定在觀察期間所形成的最小尺寸為血管直徑1/4的所有血栓。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果用X2試驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(L，Cavalli-Sforza，Biometric (Biostatistics)，Stuttgart，1969，P 49)。
結(jié)果
結(jié)果列于表Ⅰa～c?？诜?毫克單次量乙酰水楊酸或己酮可可堿作用不明顯。但己酮可可堿對(duì)血栓形成的抑制率為20%。在口服10毫克/公斤劑量時(shí)，兩種物質(zhì)的作用均較明顯。同時(shí)給予己酮可可堿和乙酰水楊酸對(duì)激光誘發(fā)血栓形成模型無作用，先給予乙酸水楊酸，1小時(shí)后給己酮可可堿其結(jié)果也和同時(shí)給藥一樣。相反，先給予己酮可可堿，1小時(shí)后給乙酰水楊酸對(duì)激光誘發(fā)大鼠腸系膜小動(dòng)脈和小靜脈血栓形成有顯著作用，其作用程度與劑量有關(guān)。與單次量比較，這種序貫給藥的超加作用可以從變化的百分?jǐn)?shù)(與對(duì)照組比較)明顯地得到證明。
表Ⅰb列出的結(jié)果表示在兩個(gè)單次劑量之間有一個(gè)可供選擇的較寬的時(shí)間范圍，最佳選擇是在15～180分鐘之間。根據(jù)本發(fā)明，其它黃嘌呤衍生物(見專利權(quán)利要求
書)當(dāng)與乙酰水楊酸一起給藥時(shí)也可達(dá)到同樣的作用，但時(shí)間間隔不同。這些黃嘌呤衍生物的抗血栓形成作用列于表Ⅰc。
序貫給藥可以用帶有兩個(gè)分隔的可控制室結(jié)構(gòu)的市售輸注裝置進(jìn)行(例如Braun，Melsungen制造的通過時(shí)間開關(guān)分隔的馬達(dá)驅(qū)動(dòng)裝置)。輸注裝置的兩個(gè)室分別裝入己酮可可堿溶液(相當(dāng)于10毫克己酮可可堿/公斤大鼠)和乙酰水楊酸溶液(相當(dāng)于1毫克/公斤)(溶劑見上述)。時(shí)間開關(guān)控制己酮可可堿溶液注入尾靜脈20分鐘后再注入乙酰水楊酸溶液。在對(duì)比試驗(yàn)中，兩室同時(shí)注入。結(jié)果與口服給藥相同，即序貫給藥產(chǎn)生的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于同時(shí)給藥。
體外試驗(yàn)研究
用已知的方法測定血小板凝集。靜脈(耳靜脈)給予雄性兔子(自家培養(yǎng)，BASK SPF Wiga約2.5～3.5公斤)己酮可可堿和/或DL-賴氨酸單乙酰水楊酸的生理鹽水溶液。從耳靜脈取血樣，按9∶1的比例加入3.8%強(qiáng)度的檸檬酸三鈉溶液。混合物于室溫下培育45分鐘，隨后離心(1，000轉(zhuǎn)/分)分離10分鐘，分出富含血小板的上層血漿，下層再離心(28，000轉(zhuǎn)/分)分離10分鐘，同樣分出含血小板少的上層。將富含血小板的血漿用含血小板少的血漿稀釋至6～7×108血小板/毫升(Coulter計(jì)數(shù)器，Coulter Electrons，Krefeld)，然后用Born凝集計(jì)(Labor GmbH，Hamburg制造)通過測定光透射的光學(xué)方法測出血小板凝集情況。試驗(yàn)混合物的體積為0.25毫升，溫度為37℃。用經(jīng)制備高壓液相色譜(HPLC，反相C-18柱)在氣體(氬氣)保護(hù)下純化的花生四烯酸(Serva，Heidelburg，2×10-4M)誘發(fā)凝集，血小板凝集的增加可以通過光透射情況判定，在這個(gè)系統(tǒng)中所測定的變數(shù)是最大凝集幅度E。結(jié)果列于表2。
經(jīng)口給予雌性大鼠(Hoe Liskf.約180克)下述藥物(分散于聚乙二醇(PEG，其分子量為400)內(nèi)，相當(dāng)于1毫升/公斤)
實(shí)驗(yàn)1)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后給3毫克/公斤乙酰水楊酸。
實(shí)驗(yàn)2)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后給10毫克/公斤乙酰水楊酸。
實(shí)驗(yàn)3)30毫克/公斤乙酰水楊酸，30分鐘后給30毫克/公斤己酮可可堿。
實(shí)驗(yàn)4)10毫克/公斤乙酰水楊酸，30分鐘后給30毫克/公斤己酮可可堿。
實(shí)驗(yàn)5)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后只給溶劑。
對(duì)照實(shí)驗(yàn)6)1毫克/公斤PEG 400，不加任何藥物。
這些給藥程序在18小時(shí)后重復(fù)一次，在最后一次給藥后1小時(shí)，用乙醚將大鼠麻醉后殺死，取出胸主動(dòng)脈。將切下的胸主動(dòng)脈立即放入3毫升PH7.5的0.09MNaCl緩沖液內(nèi)，于24℃下培育30分鐘。然后將上清液按下述程序用作為二磷酸腺甙誘發(fā)人血小板凝集的抑制劑。在前十天內(nèi)未用過藥物的健康男、女性志愿人員的肘前靜脈內(nèi)，小心插入導(dǎo)管取血樣，并立即用檸檬酸鈉(加0.38%)穩(wěn)化。經(jīng)140×克離心分離15分鐘后。得到富含血小板的血漿(PRP)，其血小板含量在2.5～3.5×108/毫升范圍內(nèi)(Coulter計(jì)數(shù)器)。血小板凝集情況用Born凝集計(jì)(Labor Gmbh，Hamburg制造)測定光透過的方法進(jìn)行光學(xué)測量。試驗(yàn)混合物的總體積為0.25毫升。此血漿與上述主動(dòng)脈上清液一起于37℃下培育5分鐘，然后用2×10-6M的二磷酸腺甙誘發(fā)凝集，根據(jù)每次實(shí)驗(yàn)得到的最大凝集幅度作劑量-作用曲線(作為主動(dòng)脈重量的函數(shù))。根據(jù)這些曲線圖可以確定0.1毫克主動(dòng)脈上清液的抗凝集活性。主動(dòng)脈的重量是將主動(dòng)脈于60℃下干燥20小時(shí)后測得的。在取血樣后1～2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行凝集測定。
毒性試驗(yàn)方法
按上述程序經(jīng)口給予大鼠藥物，但逐漸增大劑量。一組接受己酮可可堿，第二組接受己酮可可堿加乙酰水楊酸，其比例為10∶1，根據(jù)常用的標(biāo)準(zhǔn)方法(Litchfield和Wilcoxon，1949)計(jì)算出致死劑量(LD50)。
LD50(己酮可可堿)＝1，400毫克/公斤
LD50(己酮可可堿/乙酰水楊酸)＝1.400毫克/公斤
結(jié)果
兩組動(dòng)物的毒理學(xué)耐受性相同。這意味著本發(fā)明的己酮可可堿和乙酰水楊酸復(fù)方其治療劑量與致死劑量之比相當(dāng)小，因而比單味己酮可可堿或乙酰水楊酸要安全得多。
胃耐受性試驗(yàn)
方法
按上述程序經(jīng)口給予禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠(體重200～300克)己酮可可堿，1小時(shí)后再給乙酰水楊酸或只給乙酰水楊酸，在最后一次給藥24小時(shí)后，將鼠胃沿彎曲較少的部分切開，用自來水沖洗干凈，檢查胃粘膜損傷情況，在胃粘膜上能用顯微鏡觀察到的所有損傷均認(rèn)為是潰瘍。
結(jié)果
先給予己酮可可堿對(duì)乙酰水楊酸的致胃潰瘍性無影響(表4)。這表明根據(jù)本發(fā)明(在給予乙酰水楊酸之前給予己酮可可堿)，此復(fù)方的治療劑量與胃不耐受劑量的比值明顯小于單獨(dú)給予乙酰水楊酸時(shí)的比值，因?yàn)楦鶕?jù)表1，要達(dá)到相同的抗血栓形成作用，所需的乙酰水楊酸量要大得多。
慢性炎癥模型試驗(yàn)
根據(jù)臨床血液學(xué)雜誌(Clinical Haemorheology 3(1983)，469～480)報(bào)道的方法用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(用乳酪分支桿菌誘發(fā))病理模型，研究了本發(fā)明復(fù)方的血液學(xué)、抗血栓形成、抗凝集和抗炎作用，并與一些單味藥作比較。在最后一次給藥后1小時(shí)從胸主動(dòng)脈取血樣。有關(guān)血液學(xué)作用的確定詳見Clinical Haemorheology 4(1984)263～273。紅血球的變形性可用過濾計(jì)(Myrenne MF 4，Roetgen，Germany)通過估計(jì)流動(dòng)曲線的起始斜率來定量確定，表5a表示紅血球的濾過率，關(guān)節(jié)炎大鼠的這個(gè)數(shù)值比對(duì)照組健康大鼠小，但在給予乙酰水楊酸和己酮可可堿后能復(fù)增，即使是同時(shí)給予這兩種藥物也可見有超加作用，但序貫給藥時(shí)(先給己酮可可堿，1小時(shí)后再給予乙酰水楊酸)這種作用尤為明顯。
抗血栓形成作用采用如上所述的激光誘發(fā)血栓形成模型進(jìn)行測定。表5b表示試驗(yàn)結(jié)果，使對(duì)照組健康動(dòng)物產(chǎn)生血栓的平均激光照射次數(shù)為2.7(＝100%)，而對(duì)關(guān)節(jié)炎動(dòng)物0.99(＝46%)即已足夠，亦即患病動(dòng)物的血栓形成趨勢較強(qiáng)，表5b表示經(jīng)給藥后，這種血栓形成的趨勢減弱了，尤其是給予本發(fā)明復(fù)方后，其數(shù)值近似于健康動(dòng)物的數(shù)字。
血小板凝集的測定是按上面敘述的方法進(jìn)行。然而，用0.4毫克膠原代替花生四烯酸在1毫升富含血小板的血漿內(nèi)(Myrenne制造的PAⅡ凝集計(jì)，Roetgen)誘發(fā)血小板凝集。未經(jīng)處理的關(guān)節(jié)炎大鼠其凝集幅度值(凝集趨勢)最大(＝100%)，而健康大鼠用0.04毫克膠原誘發(fā)未見出現(xiàn)凝集現(xiàn)象(表5c)。所列的結(jié)果表明，關(guān)節(jié)炎大鼠病理學(xué)上增強(qiáng)的凝集趨勢，在給藥后能減弱。序貫給藥(己酮可可堿1小時(shí)后再給乙酰水楊酸)再次表明有超加作用。
如上所述，抗炎作用的定量測定采用腳爪水腫的體積和標(biāo)準(zhǔn)的壞死指數(shù)進(jìn)行。用藥組動(dòng)物的壞死形成和水腫體積明顯減少。表6表示治療組動(dòng)物與未治療關(guān)節(jié)炎大鼠癥狀改善情況的比較。本發(fā)明提出的序貫給藥(己酮可可堿，1小時(shí)后再給乙酰水楊酸)再次表明有超加作用。
藥物配方
也有可能用如上所述的輸注裝置代替靜脈注射，也可用混懸液或固體劑型，后者適于口服和直腸給藥以達(dá)到超加作用。
這種類型的人用藥配方含x毫克己酮可可堿或其它黃嘌呤衍生物(見例1～17)作為純物質(zhì)和/或配成市售成藥(如Trental
，Albert Roussel Pharma GmbH，Wiesbaden生產(chǎn)或Rentylin
，Dr Rentschler Arzeimittel GmbH Co，Laupheim生產(chǎn))(分別以縮寫T和R表示))或部分這些成藥與y毫克乙酰水楊酸配合，后者也可以與堿性離子交換樹脂(Dowex
1×8和QAE-Sephadex
(Serva，Heidelberg))或樹脂吸附劑(Amberite
XAD 2)結(jié)合或制成市售微囊劑型(Colfarit
，Bayer AG，Leverkusen(縮號(hào)為C))或結(jié)晶(R 95D和M 80D，Rohm Pharma GmbH，Weiterstadt，Germany生產(chǎn))。在這些復(fù)方中所用的藥物賦形劑是經(jīng)加熱可固化的膠(a)20(重量)%的明膠和1(重量)%的甘油水溶液，(b)1(重量)%的瓊脂糖水溶液和(c)10(重量)%的乙基纖維素T50(Hercules GmbH，Hamburg)的丙酮/水〔80∶20%(重量)〕溶液，在每種賦形劑中可不加或攪拌加入8%(重量)的己酮可可堿或另一種黃嘌呤衍生物或裝入市售明膠膠囊內(nèi)(對(duì)人或大動(dòng)物給藥用0號(hào)膠囊(Kapsugel，Basle生產(chǎn)))。
將這些藥物配方(見例1～17)加入到10毫升犬的胃液或10毫升0.1NHCl內(nèi)于37℃下(體外)緩緩攪拌。在規(guī)定的時(shí)間間隔內(nèi)分出上層清液，并用高壓液體色譜分離(柱Rad Pak C-18(Waters GmbH，Eschborn，Germamy)100×8毫米。10微米，移動(dòng)相300毫升甲醇/1毫升醋酸，700毫升水，流速1.5毫升/分)，并用UV在280毫微米下對(duì)組分定量。按類似的方法將藥物配方放入十二指腸液(狗)或碳酸氫鈉溶液(PH＝7.4)內(nèi)。
若對(duì)小動(dòng)物給藥(見表1，大鼠)時(shí)，在例1～17提到的各配方組分各減至為其重量的1/200或采用4和5號(hào)膠囊。
表Ⅰ
x)M80D乙酰水楊酸結(jié)晶(它不溶于胃酸)于PH7.4下能定量溶解。
表1b己酮可可堿和乙酰水楊酸對(duì)激光誘發(fā)的血栓形成的影響。
給藥時(shí)間間隔的影響。
每個(gè)試驗(yàn)的劑量為10毫克/公斤己酮可可堿(口服)，然后在所述的時(shí)間間隔后給1毫克/公斤乙酰水楊酸
物質(zhì) 動(dòng)物數(shù) 損傷數(shù)XSEM 對(duì)對(duì)照組 x2試驗(yàn)
的變化%
對(duì)照(安慰
劑) 8 32 2.19 0.02 - -
己酮可可堿
無乙酰水楊酸 9 36 3.27 0.32 +19 P＜0.05
乙酰水楊酸
無己酮可可堿 9 36 1.90 0.34 -13
0分鐘 9 36 2.18 0.13 0 -
15分鐘 5 20 3.42 0.21 +56 P＜0.05
30分鐘 5 20 3.59 0.17 +64 P＜0.01
45分鐘 5 20 3.68 0.19 +69 P＜0.01
60分鐘 7 28 3.71 0.18 +76 P＜0.01
90分鐘 4 16 3.33 0.23 +52 P＜0.01
120分鐘 4 16 2.91 0.21 +33 P＜0.01
180分鐘 8 32 2.63 0.21 +20 P＜0.05
300分鐘 8 32 2.25 0.17 +3 -
表 表1c黃嘌呤衍生物(每實(shí)驗(yàn)例為口服10毫克/公斤，n＝3)(a行)或根據(jù)本發(fā)明的序貫給藥(10毫克/公斤黃嘌呤衍生物，1小時(shí)后給1毫克/公斤乙酰水楊酸，口服，n＝3)(b行)對(duì)激光誘發(fā)大鼠血栓形成模型的抗血栓形成作用。表列出與對(duì)照組(安慰劑)比較的改善百分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)詳見本文。
物質(zhì) a b
對(duì)照(僅乙酰水楊酸) - -10%
1-(5-氧代己基)-3-甲基
-7-丙基黃嘌呤 42% 56%
1-(5-羥己基)-3-甲基
-7-丙基黃嘌呤 40% 53%
1-(5-羥己基)-3，7-
二甲基黃嘌呤 52% 68%
1-丙基-3-甲基-7-
(5-羥己基)-黃嘌呤 35% 42%
1-己基-3，7-二甲基
黃嘌呤 39% 46%
1-乙基-3-乙基-7-
(5-氧代己基)-黃嘌呤 41% 48%
1-n-丁基-3-n-丁基
-7-(2-氧代丙基)-黃嘌呤 33% 50%
1-(5-羥己基)-3-甲基-
7-(2-甲基丙基)-黃嘌呤 23% 34%
1-(2-甲基丙基)-3-甲基
-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤 28% 39%
1-(5-氧代己基)-3-甲基
-7-(2-甲基丙基)-黃嘌呤 28% 39%
1-(2-甲基丙基)-3-甲基
-7-(5-羥己基)-黃嘌呤 29% 39%
1-(異丙基)-3-甲基-7-
(5-羥己基)-黃嘌呤 31% 36%
1-(3-甲基丁基)-3-甲基
-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤 26% 35%
1-(3-甲基丁基)-3-甲基
-7-(5-羥己基)-黃嘌呤 28% 37%
1-(3-氧代丁基)-3-甲基
-7-丙基-黃嘌呤 40% 49%
表2 己酮可可堿和/或DL-賴氨酸單乙酰水楊酸對(duì)血小板凝集的作用的時(shí)間變化。
物質(zhì) 時(shí)間過程 靜注劑量 凝集幅度E
(分) (毫克/公斤) (體外)
Ⅰ 無對(duì)照 0 - 27.5
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 15 1.5
30 23.5
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 35 0.5
45 19.5
己酮可可堿 90 20
150 20
Ⅱ無對(duì)照 0 - 26
己酮可可堿 15 20
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 45 1.5
110 0.5
Ⅲ 無對(duì)照 0 - 23
己酮可可堿 15 10
45 22
60 10
120 20
表3 表示經(jīng)口給予己酮可可堿和不同數(shù)量的乙酰水楊酸后從大鼠主動(dòng)脈釋放抗凝集活性物質(zhì)的分析
表3
實(shí)驗(yàn) 1 2 3 4 5 6
凝集幅度E
(×102) 0.15 0.6 0.15 0.6 0.15 0.45
與對(duì)照實(shí)驗(yàn)
的差異 -0.3 +0.15 -0.3 +0.15 -0.3 -
表4 藥物的致潰瘍作用
物質(zhì) 乙酰水楊酸 動(dòng)物數(shù) 出現(xiàn)潰瘍
毫克/公斤 的動(dòng)物數(shù)
口服 n n
1.25 10 1
乙酰水楊酸 12.50 10 2
25 10 5
50 10 7
100 10 9
序貫給藥。
即在每個(gè) 1.25 10 1
實(shí)驗(yàn)例中先
給予100 12.5 10 2
毫克/公斤
己酮可可堿 25 10 5
1小時(shí)后給乙酰
水楊酸 50 10 7
100 10 8
表5 各種藥物對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠(n＝8/組)血液參數(shù)的影響(詳見本文)
關(guān)節(jié)炎大鼠 紅細(xì)胞濾 血栓形成趨勢 誘發(fā)的血
過性 (照射次數(shù)) 小板凝集
未處理 59% 46% 100%
10毫克乙酰水
楊酸 63% 47% 62%
180毫克乙酰
水楊酸 68% 91% 35%
30毫克己酮
可可堿 79% 87% 94%
30毫克己酮可
可堿同時(shí)給予
10毫克乙酰水楊酸 84% 57% 93%
30毫克己酮可可堿
同時(shí)給予180毫克
乙酰水楊酸 86% 91% 43%
30毫克己酮可可堿
1小時(shí)后給10毫克
乙酰水楊酸 90% 109% 22%
30毫克己酮可可堿
1小時(shí)后給180毫
克乙酰水楊酸 96% 104% 30.5%
(對(duì)照組健康大
鼠 100% 100% 0%)
表6 與未給藥的關(guān)節(jié)炎大鼠比較給予關(guān)節(jié)炎大鼠各種藥物后(每組8只)癥狀改善的百分?jǐn)?shù)(詳見本文)
腳爪水腫體積
左 右 壞死指數(shù)
10毫克乙酰水楊酸 2 3 8
180毫克乙酰水楊酸 28 26 28
30毫克己酮可可堿 3 0 7
30毫克己酮可可堿/
10毫克乙酰水楊酸 3 0 4
30毫克己酮可可堿/
180毫克乙酰水楊酸 10 13 28
30毫克己酮可可堿/
1小時(shí)后10毫克乙酰
水楊酸 9 12 19
30毫克己酮可可堿/
1小時(shí)后180毫克
乙酰水楊酸 34 32 3權(quán)利要求
1、一種藥物制劑的制造過程，制劑含A)式如(Ⅰ)的黃嘌呤衍生物，
其中R1和R3中有一個(gè)為3～8C的直鏈烷基，(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個(gè)基團(tuán)R2和R3或R1和R2分別為1～8C(R1和R3)和1～4C(R2)直鏈或支鏈烷基，這兩個(gè)烷基取代基碳原子的總數(shù)不超過10；或含一個(gè)式如(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物，
其中R為1～4C烷基；或含一個(gè)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的氧代烷基黃嘌呤或一個(gè)式如(Ⅰ)的羥烷基黃嘌呤的前藥；或含一個(gè)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的任何黃嘌呤衍生物的代謝物和B)0-乙?；畻钏峄蚱淇晒┧幱玫柠}，也可含C)一個(gè)藥物載體以制造各種制劑單位，如首先制造含組分B)的制劑單位(每單位含10～2，000毫克)，然后將這些制劑單位與100～600毫克黃嘌呤衍生物壓成疊層片或多層片或栓劑。其中黃嘌呤衍生物在外層，組分B)在核心或?qū)⑸鲜鼋M分制成膠囊，黃嘌呤衍生物的重量比(以1份重量乙酰水楊酸為基準(zhǔn))為0.1～50。
2、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中式(Ⅰ)的黃嘌呤衍生物其條件是R1或R3為5～6C的烷基，(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個(gè)烷基取代基R2和R3或R1和R2的碳原子總數(shù)為2～6。
3、根據(jù)權(quán)利要求
2所述的過程，其中黃嘌呤衍生物的R1或R3代表己基、5-氧代己基或5-羥己基，并且最好是1-己基-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-氧代己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-羥己基)-黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤或1-(5-氧代己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤。
4、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中黃嘌呤衍生物可制成前藥制劑，如一個(gè)縮醛化的氧代烷基黃嘌呤。其中至少有一個(gè)羰基為式如(Ⅲ)的結(jié)構(gòu)單元所取代
或?yàn)橐粋€(gè)具有式如(Ⅳ)R6-CO-O-結(jié)構(gòu)單元的O-乙?；牧u烷基黃嘌呤。其中式(Ⅲ)的R4和R5均為一個(gè)不超過4C的烷基或R4和R5一起構(gòu)成一個(gè)亞乙基，亞丙基或四亞甲基;在式(Ⅳ)中，R6代表一個(gè)不超過4C的烷基或苯基，取代苯基，吡啶基或取代吡啶基。
5、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可為口服、經(jīng)口或直腸給藥的制劑單位，它含100～600毫克最好為200～400毫克己酮可可堿和10～2，000毫克乙酰水楊酸或其等當(dāng)量數(shù)的鹽。
6、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中黃嘌呤衍生物的重量比(以1份重量乙酰水楊酸為基準(zhǔn))為0.5～50，最好是2～10。
7、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中用作組分B)乙酰水楊酸的載體含有能起延遲作用的物質(zhì)。
8、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可制成微囊劑型。包含乙酰水楊酸的微囊材料應(yīng)有抗胃液作用或延遲釋放作用。
9、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可制成疊層片或多層片，其中黃嘌呤衍生物是在首先被吸收的外層。
專利摘要
本復(fù)方產(chǎn)品用于人、獸序貫給藥，先釋放組分A，治療血液組分損壞引起的疾病。本品含A)式Ⅰ黃嘌呤衍生物，式中R1、R3之一為C3-8直鏈烷基、(ω-1)一烷氧或(ω-1)羥烷基、另一基團(tuán)及R2為C1-4直鏈或支鏈烷基，上述兩取代基碳原子總數(shù)為10；或式Ⅱ黃嘌呤衍生物，式中R為C1-4烷基；或式Ⅰ、或Ⅱ氧烷基黃嘌呤或式Ⅰ羥烷基黃嘌呤前藥；或其代謝物。B)0-乙酰水楊酸或其供藥用的鹽。C)含或不含藥物賦形劑。
文檔編號(hào)A61K31/60GK85106465SQ85106465
公開日1986年10月29日 申請(qǐng)日期1985年8月28日
發(fā)明者克勞斯·尤爾里克·威思曼, 迪克·塞福格 申請(qǐng)人:赫徹斯特股份公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan