本公開涉及組合物和組合物的制造方法，所述組合物包含用作填充物的與膠原蛋白混合的透明質(zhì)酸。其他方法包括治療組織內(nèi)體積不足的方法。

背景技術(shù)：

1、本文所述的實(shí)施方案涉及皮膚填充物組合物，更具體地涉及包含與膠原蛋白物理混合的透明質(zhì)酸的皮膚填充物組合物。

2、皮膚老化隨時間而發(fā)生，并且會因多種因素而加劇，例如陽光暴露(uva和uvb射線)、遺傳和不良的個人習(xí)慣(如吸煙、飲酒和不良飲食習(xí)慣)。隨著皮膚老化，皮膚可能會感覺和看起來更粗糙，皮膚也可能開始變薄并變得缺乏彈性。

3、透明質(zhì)酸(hyaluronan，也稱為hyaluronic?acid，縮寫ha)是一種非硫酸化的糖胺聚糖，其廣泛分布于人體的結(jié)締組織、上皮組織和神經(jīng)組織中。透明質(zhì)酸在皮膚的不同層中含量豐富，它的作用是確保良好的水合作用，協(xié)助細(xì)胞外基質(zhì)的組織，充當(dāng)空間填充物；并參與組織修復(fù)機(jī)制。然而，隨著年齡的增長，皮膚中存在的透明質(zhì)酸、膠原蛋白、彈性蛋白和其他基質(zhì)聚合物的數(shù)量會減少。例如，反復(fù)暴露在來自太陽的紫外線下會導(dǎo)致真皮細(xì)胞減少其透明質(zhì)酸的產(chǎn)生并增加其降解速度。這種透明質(zhì)酸的損失會導(dǎo)致各種皮膚狀況，例如皮膚干燥、皺紋、瑕疵、缺陷和皮膚厚度減少。

4、機(jī)體還具有在肌腱、肌肉、骨骼、皮膚和韌帶中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性膠原蛋白。然而，隨著時間的推移，由于暴露于紫外線、煙草和酒精以及老化過程，體內(nèi)的膠原蛋白成分可能會丟失。皮膚中的膠原蛋白減少會導(dǎo)致皮膚失去彈性、皮膚厚度減少、形成皺紋和下垂。

5、因此，人們對解決衰老問題的外科治療和非外科治療越來越感興趣。非手術(shù)治療包括肉毒桿菌毒素注射和軟組織填充物注射，這是面部年輕化最常進(jìn)行的程序。

6、皮膚填充物已被用于治療體積不足、撫平皺紋的外觀、矯正面部不對稱以及塑造面部和身體其他部位的輪廓。成果可能會持續(xù)幾個月到兩年，具體取決于填充物注射的位置和患者；然而，填充物的效果是暫時的，需要后續(xù)處理才能保持所需的美學(xué)效果。

7、在約20年前開發(fā)了基于透明質(zhì)酸(ha)的填充物，并且用這種填充物進(jìn)行的治療是美容皮膚病學(xué)實(shí)踐中最常進(jìn)行的程序之一。ha填充物的一個主要優(yōu)點(diǎn)是通過生物技術(shù)方法生產(chǎn)的ha在化學(xué)上與人體自然產(chǎn)生的ha相同，因此很少引起過敏反應(yīng)。由于機(jī)體的內(nèi)源性酶和清除作用，ha易于在組織中發(fā)生酶降解，因此，ha可以交聯(lián)或以其他方式改性以延長填充物的停留時間。此外，由于ha易受透明質(zhì)酸酶的酶促降解，因此ha填充物可以迅速降解，并且在發(fā)生不良事件的情況下，通過用外源性透明質(zhì)酸酶進(jìn)行處理可以逆轉(zhuǎn)填充效果。因此，ha填充物對許多患者來說是有吸引力的選擇，因?yàn)閔a治療的矯正效果持久且ha填充物具有良好的安全性。

8、除了許多優(yōu)點(diǎn)之外，ha填充物還具有若干缺點(diǎn)。一個這樣的缺點(diǎn)是丁達(dá)爾效應(yīng)，一種在某些表面ha填充物注射部位可以看到的藍(lán)色調(diào)。由于ha是親水性的并且會吸收水分，因此注射部位也會發(fā)生腫脹。還應(yīng)注意，交聯(lián)度越高，ha可能具有的炎癥和肉芽腫形成的風(fēng)險就越高。

9、在ha填充物出現(xiàn)在市場上之前，膠原蛋白填充物在十九世紀(jì)八十年代被引入市場。膠原蛋白作為填充材料具有若干有利的特性。例如，膠原蛋白填充物是不透明的，因此將這些材料注射到皮膚下不會導(dǎo)致如ha填充物所見的丁達(dá)爾效應(yīng)。此外，膠原蛋白可以充當(dāng)支架并支持組織向內(nèi)生長到填充材料中。然而，膠原蛋白填充物并非沒有缺點(diǎn)。填充物制劑中需要高膠原蛋白濃度才能達(dá)到所需的填充效果，盡管這些膠原蛋白的濃度很高，但材料的豐盈和皺紋填充能力低于ha填充物。此外，皺紋矯正的持續(xù)時間已被證明只有3至6個月，而且這些填充物是不可逆的，因?yàn)椴淮嬖诳捎糜诮到饽z原蛋白材料的酶處理。

10、因此，需要提供具有ha和膠原蛋白填充物兩者的優(yōu)點(diǎn)的皮膚填充物。如本文的實(shí)施方案中所述，本發(fā)明提供了組合物，其在注射時提供提升和體積，同時提供膠原蛋白和ha填充物的益處。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、因此，提供了新的皮膚填充物組合物，以及其制造方法。一些實(shí)施方案包括由透明質(zhì)酸和膠原蛋白制備的均質(zhì)水凝膠組合物。一些實(shí)施方案還包括水凝膠組合物，其含有完全均勻混合的ha和/或膠原蛋白顆粒。一些實(shí)施方案還可以包括部分均質(zhì)或異質(zhì)的產(chǎn)品，其含有ha或膠原蛋白(例如膠原蛋白原纖維)的顆粒。這些組合物可以通過包括交聯(lián)透明質(zhì)酸從而產(chǎn)生交聯(lián)透明質(zhì)酸然后將交聯(lián)透明質(zhì)酸與膠原蛋白混合的方法來制備。

2、在第一個方面，提供了一種制備大分子基質(zhì)的方法。該方法包括提供交聯(lián)透明質(zhì)酸、提供膠原蛋白、以及將膠原蛋白物理混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中，其中膠原蛋白在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中均質(zhì)混合，從而形成大分子基質(zhì)，其中大分子基質(zhì)包含交聯(lián)透明質(zhì)酸且物理混合在膠原蛋白中。

3、在上述或下述實(shí)施方案中的各自中的任何一個或任何一個的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以可溶狀態(tài)作為溶液提供。

4、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何一個的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以溶液形式提供，其中膠原蛋白溶液的ph為約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，并且其中膠原蛋白在酸性ph下是可溶的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何一個的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以酸性ph溶液的形式提供，其中膠原蛋白溶液的ph為約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，并且其中膠原蛋白在酸性ph下是可溶的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以中性ph溶液的形式提供。

5、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白和交聯(lián)透明質(zhì)酸與緩沖液物理混合。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，緩沖液包括pbs。

6、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，方法還包括在將膠原蛋白完全均質(zhì)混合在交聯(lián)透明質(zhì)酸中之后，將大分子基質(zhì)中和至約7的ph。

7、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白與交聯(lián)透明質(zhì)酸物理混合之前將膠原蛋白中和至約7的ph。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，在將膠原蛋白物理混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中之前中和膠原蛋白導(dǎo)致膠原蛋白沉淀成膠原蛋白原纖維或顆粒，其中膠原蛋白原纖維或顆粒進(jìn)一步混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中，其中原纖維或顆粒在交聯(lián)透明質(zhì)酸中完全均質(zhì)混合。

8、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案中一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維的形式提供。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，其中膠原蛋白以原纖維化膠原蛋白的形式提供，并且其中膠原蛋白在中性或堿性ph下制備，從而產(chǎn)生膠原蛋白纖維的原纖維化膠原蛋白。

9、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，用至少一種鹽制備膠原蛋白以獲得原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽的濃度為：約20mm、約50mm、約100mm、約150mm、約200mm、約250mm、約300mm、約350mm、約400mm、約450mm或約500mm、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽包含陰離子，其中陰離子包含h2po4-、so42-、cl-或scn-。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽包括nacl、na2so4或li2so4。

10、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白在整個大分子基質(zhì)中均質(zhì)混合。

11、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)透明質(zhì)酸包含具有如下平均分子量的透明質(zhì)酸組分：約10,000道爾頓、約20,000道爾頓、約30,000道爾頓、約40,000道爾頓、約50,000道爾頓、約60,000道爾頓、約70,000道爾頓、約80,000道爾頓、約90,000道爾頓、約100,000道爾頓、約200,000道爾頓、約300,000道爾頓、約400,000道爾頓、約500,000道爾頓、約600,000道爾頓、約700,000道爾頓、約800,000道爾頓、約900,000道爾頓、約1,000,000道爾頓、約1,100,000道爾頓、約1,200,000道爾頓、約1,300,000道爾頓、約1,400,000道爾頓、約1,500,000道爾頓、約1,600,000道爾頓、約1,700,000道爾頓、約1,800,000道爾頓、約1,900,000道爾頓、約2,000,000道爾頓、約2,100,000道爾頓、約2,200,000道爾頓、約2,300,000道爾頓、約2,400,000道爾頓、約2,500,000道爾頓、約2,600,000道爾頓、約2,700,000道爾頓、約2,800,000道爾頓、約2,900,000道爾頓、約3,000,000道爾頓、約3,100,000道爾頓、約3,200,000道爾頓、約3,300,000道爾頓、約3,400,000道爾頓、約3,500,000道爾頓、約3,600,000道爾頓、約3,700,000道爾頓、約3,800,000道爾頓、約3,900,000道爾頓、約4,000,000道爾頓、約4,100,000道爾頓、約4,200,000道爾頓、約4,300,000道爾頓、約4,400,000道爾頓、約4,500,000道爾頓、約4,600,000道爾頓、約4,700,000道爾頓、約4,800,000道爾頓、約4,900,000道爾頓、約5,000,000道爾頓、約5,100,000道爾頓、約5,200,000道爾頓、約5,300,000道爾頓、約5,400,000道爾頓、約5,500,000道爾頓、約5,600,000道爾頓、約5,700,000道爾頓、約5,800,000道爾頓、約5,900,000道爾頓、約6,000,000道爾頓、約6,100,000道爾頓、約6,200,000道爾頓、約6,300,000道爾頓、約6,400,000道爾頓、約6,500,000道爾頓、約6,600,000道爾頓、約6,700,000道爾頓、約6,800,000道爾頓、約6,900,000道爾頓、約7,000,000道爾頓、約7,100,000道爾頓、約7,200,000道爾頓、約7,300,000道爾頓、約7,400,000道爾頓、約7,500,000道爾頓、約7,600,000道爾頓、約7,700,000道爾頓、約7,800,000道爾頓、約7,900,000道爾頓、約8,000,000道爾頓、約8,100,000道爾頓、約8,200,000道爾頓、約8,300,000道爾頓、約8,400,000道爾頓、約8,500,000道爾頓、約8,600,000道爾頓、約8,700,000道爾頓、約8,800,000道爾頓、約8,900,000道爾頓、約9,000,000道爾頓、約9,100,000道爾頓、約9,200,000道爾頓、約9,300,000道爾頓、約9,400,000道爾頓、約9,500,000道爾頓、約9,600,000道爾頓、約9,700,000道爾頓、約9,800,000道爾頓、約9,900,000道爾頓或約10,000,000道爾頓、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意分子量。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)透明質(zhì)酸包含透明質(zhì)酸組分的混合物，透明質(zhì)酸組分包含至少兩種不同的分子量。

12、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括將利多卡因添加到大分子基質(zhì)中。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在0.15％(w/w)至0.45％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在0.27％(w/w)至0.33％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w)、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.3％(w/w)。

13、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括將未交聯(lián)的ha添加到基質(zhì)中。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)、約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

14、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)具有增強(qiáng)的通過針的可擠出性，其中針包括27g、28g、29g、30g、31g或32g的計(jì)量尺寸。

15、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在至少6個月是穩(wěn)定的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在約6、約9、約12、約15、約18、約21、約24、約27、約30、約33或約36個月、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意時間量是穩(wěn)定的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在約4℃至約25℃之間的溫度下是穩(wěn)定的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在約4℃、約5℃、約10℃、約15℃、約20℃、約25℃、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意溫度下是穩(wěn)定的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在4℃是穩(wěn)定的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在約25℃是穩(wěn)定的。

16、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)在約3、約6、約9、約12、約15、約18、約21、約24、約27、約30、約33、約36個月或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意時間量內(nèi)具有最小的降解。。

17、在第二方面，提供了一種制備大分子基質(zhì)的方法。該方法包括將透明質(zhì)酸溶解在水溶液中以形成預(yù)反應(yīng)水溶液并制備第二溶液，其中第二溶液包含水溶性碳二亞胺；和n-羥基琥珀酰亞胺或n-羥基磺基琥珀酰亞胺；或在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)；將第二溶液加入到預(yù)反應(yīng)水溶液中以形成交聯(lián)反應(yīng)混合物；交聯(lián)透明質(zhì)酸，其中交聯(lián)反應(yīng)混合物通過交聯(lián)透明質(zhì)酸反應(yīng)，從而形成交聯(lián)透明質(zhì)酸；以及提供膠原蛋白，并將膠原蛋白物理混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中，從而產(chǎn)生包含交聯(lián)透明質(zhì)酸和膠原蛋白的大分子基質(zhì)，其中膠原蛋白在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中均質(zhì)混合。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含水溶性碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺或n-羥基磺基琥珀酰亞胺，其中透明質(zhì)酸與天然存在的胺交聯(lián)，從而形成交聯(lián)透明質(zhì)酸。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含水溶性碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺或n-羥基磺基琥珀酰亞胺，并且其中交聯(lián)在mes的存在下進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，并且其中bdde用于使用環(huán)氧化物化學(xué)交聯(lián)透明質(zhì)酸。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，物理混合步驟在緩沖液的存在下進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，緩沖液包括pbs。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以膠原蛋白溶液的形式提供，其中膠原蛋白溶液的ph為：約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5或約7.0、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，并且其中膠原蛋白在酸性ph下是可溶的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以酸性ph溶液的形式提供，其中膠原蛋白溶液的ph為約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，并且其中膠原蛋白在酸性ph下是可溶的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以膠原蛋白溶液的形式提供，其中膠原蛋白溶液的ph為約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5或約7.0或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，并且其中膠原蛋白在酸性ph下是可溶的。

18、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以酸性至中性ph提供。

19、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白均質(zhì)混合在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中之后，將大分子基質(zhì)中和至約7的ph。

20、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白均質(zhì)混合在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中之后，將大分子基質(zhì)中和至約7的ph。

21、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以約ph?5至ph?7的溶液提供用于預(yù)纖維化。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，對于預(yù)纖維化，膠原蛋白以溶液的形式提供，該溶液的ph為約5.0、約5.5、約6.0、約6.5或約7、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph。

22、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白均質(zhì)混合在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中之后，將大分子基質(zhì)中和至約7的ph。

23、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白與交聯(lián)透明質(zhì)酸物理混合之前，將膠原蛋白中和至約7的ph，其中在將膠原蛋白物理混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中之前中和膠原蛋白導(dǎo)致膠原蛋白沉淀成膠原蛋白原纖維或顆粒，其中將膠原蛋白原纖維或顆粒進(jìn)一步混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中，其中將原纖維或顆粒在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中均質(zhì)混合。

24、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白以原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維的形式提供。

25、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白在堿性ph下制備，從而產(chǎn)生原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維。

26、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，用至少一種鹽制備膠原蛋白以獲得原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維。

27、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，用至少一種鹽制備膠原蛋白以獲得原纖維化膠原蛋白或膠原蛋白纖維。

28、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽的濃度為約20mm、約50mm、約100mm、約150mm、約200mm、約250mm、約300mm、約350mm、約400mm、約450mm或約500mm、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。

29、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽包含陰離子，其中陰離子包含h2po4-、so42-、cl-或scn-。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，至少一種鹽包括nacl、na2so4或li2so4。

30、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸包含透明質(zhì)酸組分的混合物，該透明質(zhì)酸組分包含至少兩種不同的分子量。

31、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，溶解步驟還包括將透明質(zhì)酸和膠原蛋白兩者溶解在水溶液中以形成包含透明質(zhì)酸和膠原蛋白的預(yù)反應(yīng)水溶液，其中交聯(lián)反應(yīng)通過將透明質(zhì)酸和膠原蛋白兩者交聯(lián)成ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠而反應(yīng)，并且其中混合步驟包括將ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠與另外的膠原蛋白物理混合，其中膠原蛋白處于可溶狀態(tài)并且其中膠原蛋白在溶液中，其中溶液為酸性ph，從而產(chǎn)生包含物理混合在膠原蛋白中的ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠的大分子基質(zhì)。

32、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白原纖維或膠原蛋白沉淀物在與膠原蛋白的混合步驟之后形成，并且其中膠原蛋白原纖維或膠原蛋白沉淀物在交聯(lián)透明質(zhì)酸中均質(zhì)混合。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白原纖維或膠原蛋白沉淀物在與膠原蛋白的混合步驟期間形成，并且其中膠原蛋白原纖維或膠原蛋白沉淀物在交聯(lián)透明質(zhì)酸內(nèi)均質(zhì)混合.

33、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白混合在整個交聯(lián)透明質(zhì)酸中之后調(diào)節(jié)大分子基質(zhì)的滲透壓。

34、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，混合步驟在室溫下進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，混合步驟在約4℃進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法在約4℃進(jìn)行。

35、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括純化交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠，其中在與膠原蛋白混合的混合步驟之前進(jìn)行純化。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，使用透析純化進(jìn)行純化。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，在交聯(lián)完成后調(diào)節(jié)交聯(lián)反應(yīng)混合物的ph，其中調(diào)節(jié)ph在純化步驟之前進(jìn)行，并且其中將ph調(diào)節(jié)至約7.0、約7.2、約7.4、約7.6或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，純化在約2℃至約8℃之間的范圍之間進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，在約2℃、約4℃、約6℃或約8℃、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意溫度下進(jìn)行純化。

36、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在與膠原蛋白混合之前對交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠進(jìn)行滅菌，其中在純化步驟之后進(jìn)行滅菌步驟。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，滅菌步驟包括將交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠轉(zhuǎn)移到容器中，以進(jìn)行滅菌；以及對交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠進(jìn)行滅菌。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，容器是注射器。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，滅菌是通過熱(干熱、蒸汽熱、濕熱滅菌)、輻射(即非電離，uv)、電離(粒子(例如β射線、γ射線、x射線)、電磁(例如電子束)、過濾)或終端滅菌。

37、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括透析交聯(lián)的大分子基質(zhì)或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠，其中透析是通過具有在約1000道爾頓至約100,000道爾頓之間的范圍內(nèi)的分子量截止值的膜進(jìn)行的，并且其中透析是在滅菌之前進(jìn)行的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透析在緩沖液中進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透析在磷酸鹽緩沖鹽水或磷酸鈉緩沖液中進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，緩沖液還包含nacl和/或kcl。

38、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在交聯(lián)反應(yīng)完成后將交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠的ph升高至中性ph，其中升高ph在滅菌步驟之前進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在交聯(lián)反應(yīng)完成后，將交聯(lián)透明質(zhì)酸或ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠的ph升高至約7.0、約7.2或約7.4、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph，其中在滅菌步驟之前進(jìn)行ph的升高。

39、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含水溶性碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺或n-羥基磺基琥珀酰亞胺，并且其中添加和交聯(lián)步驟是在約2℃和約22℃之間的溫度下進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，添加和交聯(lián)步驟在約2℃、約4℃、約6℃、約8℃、約10℃、約12℃、約14℃、約16℃、約18℃、約20℃、約22℃的溫度、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意溫度下進(jìn)行。

40、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)在約22℃進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)在約4℃進(jìn)行

41、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，并且其中添加和交聯(lián)步驟在約45℃和約75℃之間進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，并且其中添加和交聯(lián)步驟在約45℃、約50℃、約55℃、約60℃、約65℃、約70℃、約75℃的溫度下、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意溫度下進(jìn)行。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，并且其中添加和交聯(lián)步驟在約50℃的溫度下進(jìn)行。

42、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括停止交聯(lián)步驟，其中停止步驟包括向交聯(lián)反應(yīng)混合物中添加堿至ph為約8至約10達(dá)至少約10分鐘，然后向交聯(lián)混合物中添加酸性溶液直至達(dá)到約7的ph。

43、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)反應(yīng)混合物包含約4.0或約10.0之間的ph。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)反應(yīng)混合物的ph在約4.0或約6.0之間。

44、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，第二溶液包含在氫氧化鈉存在下的透明質(zhì)酸鈉溶液中的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(bdde)，并且其中交聯(lián)在堿性條件下進(jìn)行。

45、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，預(yù)反應(yīng)溶液包含鹽，其中該鹽的濃度為約50mm、約75mm、約100mm、約125mm、約150mm、約175mm、約200mm、約225mm、約250mm、約275mm、約300mm、325mm、約350mm、約375mm、約400mm、約425mm、約450mm、約475mm、約500mm或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。

46、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，水溶性碳二亞胺是1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，并且其中在交聯(lián)反應(yīng)混合物中水溶性碳二亞胺的濃度為約20mm至約300mm。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，水溶性碳二亞胺為1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，濃度為約20mm、約40mm、約60mm、約80mm、約100mm、約120mm、約140mm、約160mm、約180mm、約200mm、約220mm、約240mm、約260mm、約280mm、約300mm或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，水溶性碳二亞胺和透明質(zhì)酸的水溶性碳二亞胺:透明質(zhì)酸重復(fù)單元的摩爾比為約0.3至約3.0。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，水溶性碳二亞胺和透明質(zhì)酸的水溶性碳二亞胺:透明質(zhì)酸重復(fù)單元的摩爾比為約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9或約3.0、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意摩爾比。

47、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，賴氨酸和透明質(zhì)酸的摩爾:摩爾(賴氨酸:ha重復(fù)單元)比在約0.01至約0.6之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，賴氨酸和透明質(zhì)酸的摩爾:摩爾(賴氨酸:ha重復(fù)單元)比為約0.01、約0.02、約0.03、約0.04、約0.05、約0.06、約0.07、約0.08、約0.09、約0.10、約0.11、約0.12、約0.13、約0.14、約0.15、約0.16、約0.17、約0.18、約0.19、約0.2、約0.21、約0.22、約0.23、約0.24、約0.25、約0.26、約0.27、約0.28、約0.29、約0.3、約0.31、約0.32、約0.33、約0.34、約0.35、約0.36、約0.37、約0.38、約0.39、約0.4、約0.41、約0.42、約0.43、約0.44、約0.45、約0.46、約0.47、約0.48、約0.49、約0.5、約0.51、約0.52、約0.53、約0.54、約0.55、約0.56、約0.57、約0.58、約0.59、約0.6或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意摩爾比。

48、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，在添加第二溶液之前，預(yù)反應(yīng)溶液中的透明質(zhì)酸水合至少60分鐘。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物的交聯(lián)進(jìn)行約4小時至約24小時。

49、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括將利多卡因添加到大分子基質(zhì)中。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.15％(w/w)至約0.45％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.27％(w/w)至約0.33％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w)、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.3％(w/w)。

50、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括將未交聯(lián)的ha添加到基質(zhì)中。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)、約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

51、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法包括在形成包含交聯(lián)透明質(zhì)酸和膠原蛋白的大分子基質(zhì)之后或在形成具有物理混合的膠原蛋白的ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠之后進(jìn)行的中和步驟，其中中和步驟包括將大分子基質(zhì)調(diào)節(jié)至生理ph和生理鹽濃度。

52、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，中和包括在無菌條件下的混合步驟之后添加堿性溶液或緩沖溶液以調(diào)節(jié)ph。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)ph和生理鹽濃度導(dǎo)致膠原蛋白沉淀成原纖維或顆粒，其中膠原蛋白原纖維或顆粒均質(zhì)分布在大分子基質(zhì)中。

53、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)具有增強(qiáng)的通過針的可擠出性，其中針包括27g、28g、29g、30g、31g或32g的計(jì)量尺寸。

54、在第三方面，提供了一種大分子基質(zhì)，其中大分子基質(zhì)由本文所述的任一項(xiàng)實(shí)施方案制備。

55、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)包含交聯(lián)透明質(zhì)酸，其中膠原蛋白與交聯(lián)透明質(zhì)酸物理混合，并且其中膠原蛋白在整個大分子復(fù)合物中是均質(zhì)的。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白在整個大分子復(fù)合物中均勻混合。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)包含ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠，其中ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠還包括未交聯(lián)到ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠的物理混合的膠原蛋白。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)還包含利多卡因。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.15％(w/w)至約0.45％(w/w)的范圍內(nèi)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.27％(w/w)至約0.33％(w/w)的范圍內(nèi)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w)、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.3％(w/w)。

56、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，基質(zhì)還包含未交聯(lián)的ha。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)、約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

57、在第四方面，提供了一種大分子基質(zhì)，其中通過在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的任何一些實(shí)施方案中所述的方法制備所述大分子基質(zhì)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法還包括在將膠原蛋白添加到交聯(lián)的ha中之前濃縮膠原蛋白。

58、在第五方面，提供了一種大分子基質(zhì)，其中大分子基質(zhì)包含：透明質(zhì)酸，其中透明質(zhì)酸是交聯(lián)的；和膠原蛋白；其中膠原蛋白與交聯(lián)透明質(zhì)酸物理混合。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)還包含利多卡因。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.15％(w/w)至約0.45％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.27％(w/w)至約0.33％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w)、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為0.3％(w/w)。

59、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，基質(zhì)還包含未交聯(lián)的ha。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)、約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

60、在第六方面，提供了一種大分子基質(zhì)，其中該大分子基質(zhì)包括：ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠，其中ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠包括與膠原蛋白交聯(lián)的透明質(zhì)酸；和物理混合的膠原蛋白，其中物理混合的膠原蛋白不交聯(lián)到ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠中，并且其中物理混合的膠原蛋白均勻混合在ha-膠原蛋白偶聯(lián)凝膠中。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)還包含利多卡因。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.15％(w/w)至約0.45％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.27％(w/w)至約0.33％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w))、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.3％(w/w)。

61、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，基質(zhì)還包含未交聯(lián)的ha。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)、約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

62、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸與天然存在的胺交聯(lián)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，天然存在的胺來自賴氨酸。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白來自牛膠原蛋白、海洋膠原蛋白、人膠原蛋白或豬膠原蛋白。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白是重組人膠原蛋白。

63、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的彈性模量(g')為約100pa、約200pa、約300pa、約400pa、約500pa、約600pa、約700pa、約800pa、約900pa、約1000pa、約1100pa、約1200pa、約1300pa、約1400pa、約1500pa、約1600pa、約1700pa、約1800pa、約1900pa、約2000pa、約2100pa、約2200pa、約2300pa、約2400pa、約2500pa、約2600pa、約2700pa、約2800pa、約2900pa或約3000pa、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意值。

64、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的壓縮力值為約10gmf、約20gmf、約30gmf、約40gmf、約50gmf、約60gmf、約70gmf、約80gmf、約90gmf、約100gmf、約110gmf、約120gmf、約130gmf、約140gmf、約150gmf、約160gmf、約170gmf、約180gmf、約190gmf、約200gmf、約210gmf、約220gmf、約230gmf、約240gmf、約250gmf、約260gmf、約270gmf、約280gmf、約290gmf、約300gmf、約310gmf、約320gmf、約330gmf、約340gmf、約350gmf、約360gmf、約370gmf、約380gmf、約390gmf、約400gmf、約410gmf、約420gmf、約430gmf、約440gmf、約450gmf、約460gmf、約470gmf、約480gmf、約490gmf、約500gmf、約510gmf、約520gmf、約530gmf、約540gmf、約550gmf、約560gmf、約570gmf、約580gmf、約590gmf或約600gmf、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意壓縮力值。

65、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸的濃度為約2mg/ml、約4mg/ml、約6mg/ml、約8mg/ml、約10mg/ml、約12mg/ml、約14mg/ml、約16mg/ml、約18mg/ml、約20mg/ml、約22mg/ml、約24mg/ml、約26mg/ml、約28mg/ml、約30mg/ml、32mg/ml、約34mg/ml或約36mg/ml、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。

66、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸與膠原蛋白的重量比為約20:3、約24:2.3、約24:10、約24:12、約24:4、約24:6、約28:6或約28:11。

67、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸包含透明質(zhì)酸的混合物，其中該混合物包含具有兩種不同分子量的ha的50:50共混物。

68、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白包括i型膠原蛋白和/或iii型膠原蛋白。

69、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白的濃度為約1mg/ml、約2mg/ml、約3mg/ml、約4mg/ml、約6mg/ml、約7mg/ml、約8mg/ml、約9mg/ml、約10mg/ml、約11mg/ml、約12mg/ml、約13mg/ml、約14mg/ml或約15mg/ml、約16mg/ml、約17mg/ml、約18mg/ml、約19mg/ml、約20mg/ml、約21mg/ml、約22mg/ml、約23mg/ml、約24mg/ml、約25mg/ml或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。

70、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的滲透壓在250mosm/kg至350mosm/kg之間。

71、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的滲透壓為約250mosm/kg、約275mosm/kg、約300mosm/kg、約325mosm/kg或約350mosm/kg、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意滲透壓。

72、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸是線性的。

73、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的粘性模量(g")為約10pa、約20pa、約30pa、約40pa、約50pa、約60pa、約70pa、約80pa、約90pa、約100pa、約200pa、約300pa、約400pa、約500pa、約600pa、約700pa、約800pa、約900pa或約1000pa、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意粘性模量(g")。

74、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的介質(zhì)損耗角正切值(g"/g')為約0.01、約0.02、約0.03、約0.04、約0.05、約0.06、約0.07、約0.08、約0.09、約0.1、約0.12、約0.14、約0.16、約0.18、約0.20、約0.22、約0.24、約0.26、約0.28、約0.30、約0.32、約0.34、約0.36、約0.38、約0.40、約0.42、約0.44、約0.46、約0.48、約0.50或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意介質(zhì)損耗角正切值(g"/g')。

75、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)的ph為約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4、約7.5、約7.6、約7.7、約7.8、約7.9、約8.0或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意ph。

76、在第七方面，提供了一種改進(jìn)人體解剖特征的美學(xué)質(zhì)量的方法。該方法包括將組合物注射到人體組織中，從而改善解剖特征的美學(xué)質(zhì)量；其中，組合物包含通過本文所述的任一實(shí)施方案的方法制備的大分子基質(zhì)或本文所述的任一實(shí)施方案的大分子基質(zhì)。

77、在第八方面，提供了一種提高人體解剖特征的美學(xué)質(zhì)量的方法，該方法包括：將組合物注射到人體組織中，從而提高解剖特征的美學(xué)質(zhì)量；其中組合物包含大分子基質(zhì)，該大分子基質(zhì)包含：交聯(lián)透明質(zhì)酸；賴氨酸；和膠原蛋白；其中膠原蛋白物理混合到交聯(lián)透明質(zhì)酸中。

78、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白包括i型膠原蛋白和/或iii型膠原蛋白。

79、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，該方法不會在注射部位引起藍(lán)色變色。

80、在第九方面，提供了一種通過將組合物注射到人體組織中以改善人體外觀的方法，由此組合物促進(jìn)從周圍組織到注射的組合物中的細(xì)胞浸潤和膠原蛋白沉積。該方法包括將組合物注射到人體組織中，由此改善解剖特征的美學(xué)質(zhì)量；其中組合物包含交聯(lián)大分子基質(zhì)，該交聯(lián)大分子基質(zhì)包含：透明質(zhì)酸、賴氨酸和膠原蛋白；其中透明質(zhì)酸包括與膠原蛋白物理混合的交聯(lián)透明質(zhì)酸；并且其中注射有組合物的組織顯示出與組合物的組織整合性。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，大分子基質(zhì)還包含利多卡因。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.15％(w/w)至約0.45％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度在約0.27％(w/w)至約0.33％(w/w)的范圍之間。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為約0.15％(w/w)、約0.17％(w/w)、約0.19％(w/w)、約0.21％(w/w)、約0.23％(w/w)、約0.25％(w/w)、約0.27％(w/w)、約0.29％(w/w)、約0.31％(w/w)、約0.33％(w/w)、約0.35％(w/w)、約0.37％(w/w)、約0.39％(w/w)、約0.41％(w/w)、約0.43％(w/w)或約0.45％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，利多卡因在基質(zhì)中的濃度為0.3％(w/w)。

81、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，基質(zhì)還包含未交聯(lián)的ha。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)內(nèi)的濃度高達(dá)約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為0％(w/w)、約1％(w/w)、約2％(w/w)、約3％(w/w)、約4％(w/w)或約5％(w/w)、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意濃度。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約1％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約2％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha在基質(zhì)中的濃度為約5％(w/w)。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，未交聯(lián)的ha改善了基質(zhì)的可擠出性。

82、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸組分具有如下的平均分子量：約10,000道爾頓、約20,000道爾頓、約30,000道爾頓、40,000道爾頓、約50,000道爾頓、約60,000道爾頓、約70,000道爾頓、約80,000道爾頓、約100,000道爾頓、約200,000道爾頓、約300,000道爾頓、約400,000道爾頓、約500,000道爾頓、約600,000道爾頓、約700,000道爾頓、約800,000道爾頓、約900,000道爾頓、約1,000,000道爾頓、約1,100,000道爾頓、約1,200,000道爾頓、約1,300,000道爾頓、約1,400,000道爾頓、約1,500,000道爾頓、約1,600,000道爾頓、約1,700,000道爾頓、約1,800,000道爾頓、約1,900,000道爾頓、約2,000,000道爾頓、約2,100,000道爾頓、約2,200,000道爾頓、約2,300,000道爾頓、約2,400,000道爾頓、約2,500,000道爾頓、約2,600,000道爾頓、約2,700,000道爾頓、約2,800,000道爾頓、約2,900,000道爾頓、約3,000,000道爾頓、約3,100,000道爾頓、約3,200,000道爾頓、約3,300,000道爾頓、約3,400,000道爾頓、約3,500,000道爾頓、約3,600,000道爾頓、約3,700,000道爾頓、約3,800,000道爾頓、約3,900,000道爾頓、約4,000,000道爾頓、約4,100,000道爾頓、約4,200,000道爾頓、約4,300,000道爾頓、約4,400,000道爾頓、約4,500,000道爾頓、約4,600,000道爾頓、約4,700,000道爾頓、約4,800,000道爾頓、約4,900,000道爾頓、約5,000,000道爾頓、約5,100,000道爾頓、約5,200,000道爾頓、約5,300,000道爾頓、約5,400,000道爾頓、約5,500,000道爾頓、約5,600,000道爾頓、約5,700,000道爾頓、約5,800,000道爾頓、約5,900,000道爾頓、約6,000,000道爾頓、約6,100,000道爾頓、約6,200,000道爾頓、約6,300,000道爾頓、約6,400,000道爾頓、約6,500,000道爾頓、約6,600,000道爾頓、約6,700,000道爾頓、約6,800,000道爾頓、約6,900,000道爾頓、約7,000,000道爾頓、約7,100,000道爾頓、約7,200,000道爾頓、約7,300,000道爾頓、約7,400,000道爾頓、約7,500,000道爾頓、約7,600,000道爾頓、約7,700,000道爾頓、約7,800,000道爾頓、約7,900,000道爾頓、約8,000,000道爾頓、約8,100,000道爾頓、約8,200,000道爾頓、約8,300,000道爾頓、約8,400,000道爾頓、約8,500,000道爾頓、約8,600,000道爾頓、約8,700,000道爾頓、約8,800,000道爾頓、約8,900,000道爾頓、約9,000,000道爾頓、約9,100,000道爾頓、約9,200,000道爾頓、約9,300,000道爾頓、約9,400,000道爾頓、約9,500,000道爾頓、約9,600,000道爾頓、約9,700,000道爾頓、約9,800,000道爾頓、約9,900,000道爾頓或約10,000,000道爾頓、或在由任意兩個上述值限定的范圍之間的任意重量。在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，交聯(lián)透明質(zhì)酸的透明質(zhì)酸包含透明質(zhì)酸組分的混合物，透明質(zhì)酸組分包含至少兩種不同的分子量。

83、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，膠原蛋白包括i型膠原蛋白和/或iii型膠原蛋白。

84、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，其中注射有組合物的組織顯示出與組合物的整合性，其中通過來自周圍組織的細(xì)胞浸潤而在組合物中沉積膠原蛋白。

85、在上述或下述實(shí)施方案各自中的任何一個或任何實(shí)施方案的一些實(shí)施方案中，其中注射有組合物的組織顯示出與組合物的整合性，并且在注射組合物后，在注射后的組合物中具有膠原蛋白沉積。