背景技術(shù)：

1、國際睡眠障礙分類將失眠定義為：在有足夠睡眠機(jī)會(huì)的情況下，但是仍然主觀感受到入睡困難、睡眠持續(xù)時(shí)間、睡眠鞏固或睡眠質(zhì)量的問題，導(dǎo)致某種形式的日間紊亂(例如疲勞、精力下降、日間嗜睡和情緒障礙)。

2、失眠障礙可為原發(fā)性和繼發(fā)性的。原發(fā)性失眠涉及的病因可以具有內(nèi)在和外在因素，但不被認(rèn)為是其他疾病的繼發(fā)癥狀。當(dāng)失眠為醫(yī)學(xué)或精神疾病、其他睡眠障礙或藥物濫用的結(jié)果時(shí)發(fā)生繼發(fā)性失眠。

3、術(shù)語“原發(fā)性失眠”(在國際疾病分類(icd-10)和心理障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)，第4版(dsm-iv))中使用，是指持續(xù)至少三個(gè)月、每周至少發(fā)生三次的慢性障礙。當(dāng)疾病符合癥狀標(biāo)準(zhǔn)但持續(xù)時(shí)間少于三個(gè)月時(shí)，稱為急性短期失眠。

4、失眠的不同表現(xiàn)可在睡眠期間的不同時(shí)間出現(xiàn)。

5、例如：

6、·入睡困難型失眠(sleep?onset?insomnia)(或起始期失眠)涉及睡前入睡困難；

7、·睡眠維持型失眠(或中期失眠)涉及夜間頻繁或持續(xù)醒來；

8、·后期失眠涉及清晨醒來后無法再次入睡；

9、·非恢復(fù)性睡眠，睡眠質(zhì)量差的疾病，其是盡管睡眠時(shí)間充足，但是醒來后個(gè)體無法恢復(fù)精神，是一種常見的睡眠障礙，其通常與起始入睡或維持睡眠困難相關(guān)；這種障礙也可以與其他睡眠障礙(例如與呼吸相關(guān)的睡眠障礙)同時(shí)發(fā)生。

10、認(rèn)知功能受損可以包括注意力、集中力和記憶力的困難，可以甚至影響簡單手工技能的表現(xiàn)。相關(guān)的情緒障礙通常被描述為易怒或情緒不穩(wěn)定，較少出現(xiàn)抑郁或焦慮癥。并非所有夜間睡眠障礙的人都會(huì)感到焦慮或功能受損。例如，健康的老年人常常睡眠連續(xù)性中斷，但他們?nèi)宰哉J(rèn)為是良好睡眠者。失眠障礙的診斷應(yīng)僅適用于那些因夜間睡眠困難而導(dǎo)致白天出現(xiàn)嚴(yán)重不適或者或功能受損的人。

11、如果失眠障礙表現(xiàn)為獨(dú)立病癥，或與其他精神障礙(例如重度抑郁癥)、病癥(例如疼痛)或其他睡眠障礙(例如與呼吸相關(guān)的睡眠障礙)并發(fā)，則可診斷為失眠障礙。

12、失眠癥狀的發(fā)作可在生命的任何階段出現(xiàn)，但是首次發(fā)作最常見于青年時(shí)期。較少情況下，失眠始于兒童或青少年時(shí)期。失眠癥是在女性中比在男性中更為常見的病癥，首次發(fā)作通常與新生兒出生或更年期相關(guān)。盡管老年女性患病率較高，但多導(dǎo)睡眠圖研究表明，與老年男性相比，老年女性能夠更好地保持睡眠連續(xù)性和慢波睡眠。

13、短期失眠影響30重量％至50重量％的人口。

14、據(jù)估計(jì)，工業(yè)化國家的慢性失眠障礙患病率至少為5重量％至10重量％。慢性失眠與功能、健康和生活質(zhì)量的許多不良影響相關(guān)。據(jù)廣泛報(bào)道，工作缺勤率、工作和機(jī)動(dòng)車事故率均有所上升。眾多研究已將持續(xù)性失眠確定為精神障礙(特別是情緒失調(diào))發(fā)展的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。這種病癥還與抑郁癥和酗酒的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加，以及對(duì)慢性疼痛人群產(chǎn)生不利影響相關(guān)。最近的研究表明，慢性失眠與心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。特別地，客觀上睡眠時(shí)間短的失眠是高血壓發(fā)展的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。法規(guī)(eu)432/2012建立了根據(jù)法規(guī)(ec)1924/2006第13.1條授權(quán)的維生素、礦物質(zhì)和其他物質(zhì)的健康聲明清單。獲得授權(quán)聲明的物質(zhì)包括褪黑素。

15、上述列表包括每種物質(zhì)的“使用條件”，表明了聲明所需的定量攝入量，以及任何“使用限制”和/或附加警告。

16、也就是說，應(yīng)考慮到授權(quán)健康聲明的物質(zhì)的定量攝入量具有“生理”價(jià)值，因?yàn)槠渲荚诖龠M(jìn)身體功能的正常發(fā)揮。關(guān)于褪黑素，法規(guī)(eu)432/2012允許兩種類型的聲明：

17、-通過在標(biāo)簽上向消費(fèi)者標(biāo)明，在旅行的第一天和到達(dá)目的地后的幾天內(nèi)，即將就寢前服用至少0.5mg該物質(zhì)即可達(dá)到有益效果，從而有助于緩解“時(shí)差”的影響；

18、-通過在標(biāo)簽上向消費(fèi)者標(biāo)明，即將就寢前服用1mg該物質(zhì)即可達(dá)到有益效果，從而有助于減少入睡所需時(shí)間。

19、因此，如今，基于efsa的科學(xué)評(píng)估，現(xiàn)已確定了對(duì)生理效應(yīng)有用的褪黑素水平，同時(shí)，歐盟市場上有基于相同物質(zhì)的產(chǎn)品被授權(quán)作為每日劑量為2mg的藥品。

20、褪黑素是一種參與晝夜節(jié)律管理的激素，哺乳動(dòng)物的褪黑素水平在夜間較高，白天較低。出于該理由，褪黑素通常被用于治療睡眠障礙，特別是失眠，其施用特別適用于誘導(dǎo)經(jīng)歷嚴(yán)重入睡困難的個(gè)體。然而由于褪黑素分子的半衰期較短，常規(guī)褪黑素制劑大多具有快速釋放的特點(diǎn)，因而，活性成分也被迅速代謝。因此，這些制劑在施用后1至2小時(shí)內(nèi)提供了高于生理水平的褪黑素釋放峰值，隨后逐漸回歸正常水平。這種速釋制劑無法重現(xiàn)內(nèi)源性褪黑素的時(shí)間進(jìn)行。

21、文獻(xiàn)wo2018/106280a1和wo2012/103411a2描述了包含褪黑素和賦形劑的顆粒，但未描述除褪黑素外還含有海藻酸鈉和乳酸鈣的顆粒。

22、文獻(xiàn)cn?114259490?a描述了一種褪黑素制劑，其包含速釋部分和腸溶緩釋部分；其中，按重量份計(jì)，速釋部分包含：0.04重量份至0.12重量份褪黑素，20重量份至140重量份稀釋劑。腸溶緩釋部分包括：0.001重量份至0.01重量份褪黑素、0.4重量份至20重量份緩釋材料、12重量份至90重量份稀釋劑和0.6重量份至24重量份包衣劑。稀釋劑由以下至少一種組成：微晶纖維素、乳糖、甘露糖醇、白糖、糊精、糖醇、低聚糖、淀粉和預(yù)膠化淀粉。遲釋(extended-release)材料是以下至少一種：羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉和丙烯酸樹脂。包衣劑是腸溶膜包衣劑。緩釋腸溶部分的外層用腸溶膜包衣劑包衣。除了褪黑素之外，還包含海藻酸鈉和乳酸鈣的顆粒尚未被描述。

23、因此，應(yīng)當(dāng)理解仍需要提供新型原創(chuàng)的褪黑素組合物，其能夠提供適當(dāng)?shù)淖饔贸掷m(xù)時(shí)間，因此能夠在睡眠期間產(chǎn)生更持久的效果，從而更好地治療睡眠障礙。

24、發(fā)明目的

25、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種顆粒，其為治療的受試者提供有用、可接受和有效量的褪黑素的受控、延長釋放時(shí)間。

26、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備本發(fā)明顆粒的方法。

27、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種包含本發(fā)明顆粒的藥物組合物和/或膳食補(bǔ)充劑，以及其在治療睡眠障礙和用于減少入睡所需時(shí)間中的用途。

28、本發(fā)明還參考圖1-2(a和b)進(jìn)行報(bào)告和描述，圖中展示了所進(jìn)行的測試的結(jié)果照片：

29、圖1示出了剛將兩種顆粒倒入0.1n的hcl中的表現(xiàn)。

30、圖2a和2b示出了剛將兩種顆粒倒入0.1n的hcl中的表現(xiàn)(俯視圖)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、申請(qǐng)人經(jīng)過長期深入的研究和開發(fā)活動(dòng)，開發(fā)了一種基于褪黑素的顆粒，其易于施用且無副作用，在服用后隨時(shí)間可持續(xù)釋放褪黑素，這對(duì)于治療睡眠障礙和保持入睡狀態(tài)時(shí)最佳的。

2、因此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是提供一種緩慢、逐漸釋放的顆粒，其包含褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣或由褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣組成。

3、藻類中的海藻酸鹽是不溶的。需要將其轉(zhuǎn)化為例如海藻酸鈉或其他可溶性海藻酸鹽。

4、申請(qǐng)人在所有可溶性海藻酸鹽中選擇了海藻酸鈉，在多次嘗試后，發(fā)現(xiàn)將海藻酸鈉與可溶性二價(jià)陽離子鹽結(jié)合起來是有用的。

5、申請(qǐng)人在所有可能的二價(jià)陽離子中選擇了ca2+，既考慮了親和力又考慮了安全性。在所有可溶性的二價(jià)陽離子鹽中，選擇了乳酸鈣，這是經(jīng)過仔細(xì)篩選后得出的結(jié)果，考慮了乳酸鈣的物理化學(xué)性質(zhì)以及共同存在于作為本發(fā)明的目的的顆粒組合物的其他成分(海藻酸鈉和褪黑素)。在所有可能的鈣鹽中，選擇乳酸鈣的原因是因?yàn)槿樗徕}具有許多特性，這些特性使乳酸鈣成為制備本發(fā)明的目的的褪黑素顆粒的首選鹽，所述目的為：i)良好的水溶性；ii)5％乳酸鈣水溶液的ph值范圍為6至8；iii)ca2+滴度為12％至18％，優(yōu)選范圍為13.4％至14.5％。

6、本發(fā)明顆粒的所有成分都是技術(shù)上已知并且是市售的。

7、優(yōu)選地，褪黑素的滴度為95％以上，更優(yōu)選為98％以上，甚至更優(yōu)選為99％以上，例如99.5％。

8、根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，相對(duì)于顆粒總重量，本發(fā)明的顆粒中褪黑素的含量為1重量％至20重量％，優(yōu)選為1.5重量％至15重量％，更優(yōu)選為2重量％至10重量％，例如2.5重量％；3重量％；3.5重量％；4重量％；4.5重量％或5重量％。

9、根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，相對(duì)于顆粒總重量，本發(fā)明的顆粒中海藻酸鈉的含量為20重量％至60重量％，優(yōu)選為40重量％至55重量％，更優(yōu)選為45重量％至50重量％，例如約46重量％；47重量％；48重量％；或49重量％。

10、根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，相對(duì)于顆?？傊亓?，本發(fā)明的顆粒中乳酸鈣的含量為30重量％至60重量％，優(yōu)選為40重量％至55重量％，更優(yōu)選為45重量％至50重量％，例如約46重量％；47重量％；48重量％；49重量％。

11、優(yōu)選地，本發(fā)明的顆粒包含：

12、-相對(duì)于顆?？傊亓?，1重量％至20重量％，優(yōu)選為1.5重量％至15重量％，更優(yōu)選為2重量％至10重量％的褪黑素；

13、-相對(duì)于顆?？傊亓?，20重量％至60重量％，優(yōu)選為40重量％至55重量％，更優(yōu)選為45重量％至50重量％，例如約49重量％的海藻酸鈉；

14、-相對(duì)于顆?？傊亓?，30重量％至60重量％，優(yōu)選為40重量％至55重量％，更優(yōu)選為45重量％至55重量％，例如約49重量％至50重量％的乳酸鈣。

15、根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是提供一種制備本發(fā)明顆粒的方法，其包括以下步驟或由以下步驟組成：

16、a.對(duì)混合物進(jìn)行濕法制粒，所述混合物為：(i)褪黑素，相對(duì)于顆?？傊亓浚繛?重量％至20重量％，例如約2重量％或10重量％，(ii)海藻酸鈉，相對(duì)于顆?？傊亓浚繛?0重量％至60重量％，例如約45重量％或49重量％，(iii)乳酸鈣，相對(duì)于顆粒總重量，量為30重量％至60重量％，例如45重量％或49重量％，以形成將要得到包衣顆粒的顆粒；

17、b.通過兩個(gè)連續(xù)步驟對(duì)由步驟(a)獲得的顆粒進(jìn)行包衣，得到包衣顆粒：

18、b'用乳酸鈣對(duì)步驟(a)中的顆粒進(jìn)行制粒；以及

19、b"用海藻酸鈉對(duì)步驟(b')中的顆粒進(jìn)行制粒。

20、在步驟(a)中，按照已知技術(shù)，將1重量％至20重量％％的褪黑素與20重量％至60重量％％的海藻酸鈉和30重量％至60重量％％的乳酸鈣以及水混合，進(jìn)行濕法制粒。

21、將步驟(a)獲得的顆粒干燥，例如在烘箱中，優(yōu)選溫度為40℃至80℃，更優(yōu)選為50℃至70℃，例如在60℃，持續(xù)時(shí)間優(yōu)選為2小時(shí)至12小時(shí)，更優(yōu)選為4小時(shí)至10小時(shí)，例如8小時(shí)。優(yōu)選地，將干燥的顆粒經(jīng)過校正步驟，例如使用篩目尺寸為0.5mm至2.5mm，優(yōu)選為1mm至2mm，例如1.2mm，1.4mm或1.6mm的篩網(wǎng)或篩子。

22、然后，通過步驟(b)經(jīng)由兩個(gè)連續(xù)的制粒步驟(b')和(b")對(duì)來自步驟(a)的的所述干燥顆粒進(jìn)行包衣；首先在步驟(b')中用乳酸鈣處理顆粒，得到乳酸鈣包衣的顆粒，然后在步驟(b")中進(jìn)一步用海藻酸鈉包衣。根據(jù)已知技術(shù)對(duì)步驟(a)、(b')和(b")中各步驟制粒后得到的顆粒進(jìn)行干燥。

23、根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，步驟(b)的制粒可以是流化床制?；驖{料制粒。

24、或者，本發(fā)明的顆粒的制備方法可以通過對(duì)褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣的混合物進(jìn)行單步制粒，隨后進(jìn)行單次包衣步驟來完成。

25、根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是提供一種制備本發(fā)明顆粒的方法，其包括以下步驟或由以下步驟組成：

26、a.對(duì)混合物進(jìn)行濕法制粒，該混合物具有(i)褪黑素，相對(duì)于顆粒總重量，量為1重量％至20重量％，例如約2重量％或10重量％，(ii)海藻酸鈉，相對(duì)于顆?？傊亓?，量為20重量％至60重量％，例如約45重量％或49重量％，(iii)乳酸鈣，相對(duì)于顆?？傊亓?，量為30重量％至60重量％，例如45重量％或49重量％，形成將要得到包衣顆粒的顆粒；

27、b.使用海藻酸鈉和乳酸鈣的混合物對(duì)從步驟(a)獲得的顆粒通過一步包衣步驟進(jìn)行包衣，得到包衣顆粒。

28、根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，顆粒的尺寸范圍為0.8mm至1.5mm，優(yōu)選為1mm至1.4mm。

29、以下實(shí)驗(yàn)部分提供了本發(fā)明方法的一些細(xì)節(jié)，僅用于說明目的。

30、本發(fā)明的顆粒在被需要褪黑素的個(gè)體服用后允許延長褪黑素的釋放時(shí)間。所述顆?？芍苯邮褂茫缈裳b入明膠膠囊中施用，以用于治療睡眠障礙和用于減少入睡所需時(shí)間。

31、優(yōu)選地，本發(fā)明的顆?？捎糜谥苽淇蒯屚屎谒氐乃幬锝M合物和膳食補(bǔ)充劑。

32、根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的還在于提供一種口服藥物組合物和/或膳食補(bǔ)充劑，其包含本發(fā)明的顆粒，以及一種或多種常規(guī)賦形劑和/或載劑。

33、根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的組合物為軟糖(gummy?candy)、咀嚼片、膠囊或口香糖形式。

34、為了制備本發(fā)明的優(yōu)選組合物，可將本發(fā)明的顆粒與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的賦形劑混合，用于制造軟糖、咀嚼片、膠囊或口香糖。例如，可使用糖類，包括葡萄糖漿、改性淀粉、明膠、果膠、水、植物油來制備軟糖，并且可添加例如調(diào)味劑、著色劑和常規(guī)包衣劑。

35、或者，本發(fā)明的組合物可為適合口服施用的片劑、硬膠囊、軟膠囊、顆粒、細(xì)顆粒、粉末、片劑、糖漿、乳劑、懸浮液和溶液的形式。也可使用其他適合的藥物形式。

36、這類組合物可以單獨(dú)服用，例如，當(dāng)以軟糖、咀嚼片或口香糖形式時(shí)；或當(dāng)為膠囊形式時(shí)與水一起服用；或者，特別是當(dāng)以粉末或顆粒形式時(shí)，可以與其他食物混合，例如酸奶、奶油、凝膠等。

37、或者，本發(fā)明的組合物可以以即用型飲料形式，例如飲用小袋(drinkingsachets)的形式，“條狀包裝”形式，在這種情況下，優(yōu)選為乳霜或凝膠形式。

38、除了已經(jīng)提到的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適當(dāng)選擇用于制備本發(fā)明的組合物的藥物和食品添加劑的種類、添加劑與活性成分的含量比以及制備藥物組合物或食品補(bǔ)充劑的方法。

39、對(duì)于常規(guī)的載劑和賦形劑，可以使用有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)，或固體或液體物質(zhì)，只要其是可食用的、生理上可接受的，并且與組合物的所有其他成分相容。

40、如前所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員完全能夠選擇最合適的載劑和賦形劑來制備組合物。

41、例如，可以使用有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)，或固體或液體物質(zhì)作為賦形劑和載劑，只要它們是可食用且藥學(xué)上可接受的。用于制備固體藥物組合物的賦形劑的實(shí)例包括：例如，乳糖、蔗糖、淀粉、滑石、纖維素、糊精、高嶺土、碳酸鈣、硬脂酸或硬脂酸鎂、乳糖、聚乙二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、螯合劑、抗結(jié)塊劑、甜味劑、防腐劑和調(diào)味劑。

42、為了制備口服施用的液體組合物，可以使用常規(guī)的惰性稀釋劑，例如水或油，例如植物油。液體組合物除了惰性稀釋劑外，還可含有諸如潤濕劑、助懸劑、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑等助劑。液體組合物可包含在可吸收的材料(例如明膠)膠囊中。

43、甜味劑可以是一種或多種天然糖，可選還原糖，例如蔗糖、葡萄糖、木糖醇、甘露糖醇或山梨糖醇，或合成產(chǎn)品，例如糖精鈉、阿斯巴甜、安賽蜜k或三氯蔗糖。也可添加酸味劑。

44、調(diào)味劑是藥學(xué)上可接受的香味和口味，可來自合成油或天然油，后者是從植物、花朵、水果中及其組合提取的，例如肉桂、薄荷、茴香和柑橘葉、苦杏仁、柑橘類水果(尤其是橙子和/或檸檬)、椴樹、香草、巧克力和葡萄柚油。巧克力、香草或桉樹香精以及水果香精，尤其是蘋果、梨、桃、草莓、杏、橙、檸檬和葡萄，也可以有利地使用。

45、下文的實(shí)驗(yàn)部分提供了本發(fā)明組合物的實(shí)施例，僅用于說明目的。

46、本發(fā)明的組合物可含有0.5mg至10mg的褪黑素，優(yōu)選1mg至3mg的褪黑素，例如1mg或2mg。

47、如將在實(shí)驗(yàn)部分中示出的，包含本發(fā)明顆粒的組合物，特別是軟糖形式的組合物，顯示出特別適合用于治療睡眠障礙、減少入睡所需時(shí)間和用于維持入睡狀態(tài)的溶解曲線。

48、此處的表述“睡眠障礙”旨在包括任何與睡眠相關(guān)的病理，例如入睡困難、睡眠持續(xù)時(shí)間、睡眠鞏固或質(zhì)量的問題，優(yōu)選地，該術(shù)語是指原發(fā)性失眠。

49、本發(fā)明的顆粒或組合物無毒，旨在施用于哺乳動(dòng)物，優(yōu)選為人類，適用于任何年齡段：從青少年到老年人。

50、本發(fā)明的顆?；蚪M合物應(yīng)在就寢前不久施用，例如提前15至60分鐘，優(yōu)選提前30至40分鐘。通常，1mg至3mg的褪黑素劑量(例如1mg或2mg)足以達(dá)到預(yù)期效果。然而，這些劑量可以根據(jù)被治療者的年齡、性別、健康狀況以及疾病的嚴(yán)重程度而變化。

51、根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是將本發(fā)明的顆粒和組合物用于上述定義的睡眠障礙的治療中。

52、根據(jù)其另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是提供一種治療上述睡眠障礙的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的本發(fā)明的顆?；蚪M合物。

53、根據(jù)其另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是提供一種由褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣組成的組合。

54、根據(jù)其另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是由褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣組成的組合，用于治療上述定義的睡眠障礙的方法中。

55、根據(jù)其另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是將由褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣組成的組合，作為優(yōu)選的緩釋藥物組合物的活性成分，用于治療上述定義的睡眠障礙的方法中。

56、根據(jù)其另一個(gè)方面，本發(fā)明的目的是由褪黑素、海藻酸鈉和乳酸鈣組成的組合，作為緩釋顆粒的活性成分，用于治療上述定義的睡眠障礙的方法中。

57、現(xiàn)在將在下文的實(shí)驗(yàn)部分中更詳細(xì)地描述本發(fā)明，僅用于說明目的，絕不限制本發(fā)明。

58、實(shí)驗(yàn)部分

59、實(shí)施例1

60、制粒工藝

61、步驟(a)

62、 成分 重量％ 滴度99％的褪黑素 2.0％ 海藻酸鈉 49％ 乳酸鈣 49％

63、表1-diosna?mod.p1/6實(shí)驗(yàn)室的制粒

64、按順序加入海藻酸鈉(例如約49重量％)、褪黑素(例如約2重量％)和五水乳酸鈣(例如約49重量％)。將葉輪設(shè)定為200rpm，倒入適量沖洗純化水。添加完成后，將切碎機(jī)設(shè)定為1000rpm，葉輪設(shè)定為200rpm，持續(xù)5分鐘。將濕顆粒通過3mm的篩網(wǎng)。

65、干燥階段

66、在60℃的烘箱中干燥顆粒8小時(shí)。lod控制＝6.3％

67、校正階段

68、通過1.2mm的篩網(wǎng)進(jìn)行校正

69、步驟(b)

70、 成分 重量％ 來自步驟(a)的顆粒 98.12％ 海藻酸鈉 0.44％ 乳酸鈣 1.44％

71、表2

72、步驟(b')

73、在glatt?fluid?bed?mod.uniglatt進(jìn)行制粒

74、包衣溶液的制備

75、將乳酸鈣溶解在適量的純化水中。

76、包衣階段

77、將從步驟1獲得的顆粒裝入流化床籃中。通過設(shè)置以下參數(shù)噴涂包衣溶液：入口空氣溫度＝40℃至45℃

78、產(chǎn)品溫度＝27℃至30℃

79、噴涂壓力＝1.5巴

80、液體流速＝15g/min至20g/min

81、氣流量＝擋板位置15

82、噴灑完包衣溶液后，通過設(shè)置以下參數(shù)進(jìn)行干燥＝

83、入口空氣溫度＝60℃至65℃

84、產(chǎn)品溫度＝50℃至55℃

85、氣流量＝擋板位置15

86、lod控制＝6.5％至7.5％

87、步驟(b")

88、在glatt?fluid?bed?mod.uniglatt進(jìn)行制粒

89、包衣溶液的制備

90、將海藻酸鈉溶解在水中

91、包衣階段

92、將從步驟(b')獲得的顆粒裝入流化床籃。通過設(shè)置以下參數(shù)噴灑包衣溶液：入口空氣溫度＝40℃至45℃

93、產(chǎn)品溫度＝27℃至30℃

94、噴涂壓力＝1.5巴

95、液體流速＝15g/min至20g/min

96、氣流量＝擋板位置15

97、噴灑完包衣溶液后，通過設(shè)置以下參數(shù)進(jìn)行干燥：

98、入口空氣溫度＝60℃至65℃

99、產(chǎn)品溫度＝50℃至55℃

100、氣流量＝擋板位置15

101、lod控制＝6.5％至7.5％

102、校正階段

103、通過1.2mm的篩網(wǎng)對(duì)顆粒進(jìn)行校正

104、實(shí)施例2

105、制粒工藝

106、步驟(a)

107、 成分 重量％ 滴度99％的褪黑素 10.0％ 海藻酸鈉 45％ 乳酸鈣 45％

108、表3-在glatt?fluid?bed?mod.uniglatt進(jìn)行制粒

109、在這種情況下，在glatt流化床中使用所有成分和40％的純化水進(jìn)行單步制粒步驟。

110、包衣階段

111、將褪黑素(例如約10重量％)、海藻酸鈉(例如約45重量％)和乳酸鈣(例如約45重量％)裝入流化床籃中。通過設(shè)置以下參數(shù)噴灑純化水：

112、入口空氣溫度＝40℃至45℃

113、產(chǎn)品溫度＝27℃至30℃

114、噴涂壓力＝1.5巴

115、液體流速＝15g/min至20g/min

116、氣流量＝擋板位置15

117、噴灑完純化水后，通過設(shè)置以下參數(shù)進(jìn)行干燥：

118、入口空氣溫度＝60℃至65℃

119、產(chǎn)品溫度＝50℃至55℃

120、氣流量＝擋板位置15

121、lod控制＝6.5％至7.5％

122、校正階段

123、通過1.2mm的篩網(wǎng)對(duì)顆粒進(jìn)行校正

124、所得顆粒具有以下規(guī)格：

125、顆粒度：

126、不超過10％：≥710μm

127、80％在125μm至710μm之間

128、不超過10％：<125μm

129、lod(70℃)：6.0％至8.0％

130、密度：0.4g/ml至0.6g/ml

131、流動(dòng)性(100克)：≤25秒

132、實(shí)施例3

133、本發(fā)明的組合物以軟糖的形式制備

134、模具形式：“薄荷丸”(menthol?boluses)

135、單個(gè)糖果重量：約2g

136、成分：

137、從實(shí)施例1獲得的顆粒、葡萄糖漿、糖、改性淀粉、水、植物油(椰子油、菜籽油)、調(diào)味劑、著色劑：e133、包衣劑：巴西棕櫚蠟。

138、實(shí)施例4

139、溶出測試

140、實(shí)施例4.1

141、根據(jù)usp的溶出測試(500ml?0.1n?hcl，37℃，100rpm)

142、 時(shí)間 將實(shí)施例3的糖果分成兩份 將實(shí)施例3的糖果切成小塊 30分鐘 19.3％ 29.6％ 2小時(shí) 40.0％ 71.6％ 4小時(shí) 54.7％ 76.2％

143、表4

144、實(shí)施例4.2

145、溶出測試(900ml?ph?7的緩沖液，37℃，100rpm)

146、 時(shí)間 將實(shí)施例3的糖果分成兩份 將實(shí)施例3的糖果切成小塊 30分鐘 29.8％ 41.3％ 2小時(shí) 57.0％ 55.6％ 4小時(shí) 63.2％ 71.1％

147、表5

148、實(shí)驗(yàn)部分

149、海藻酸鹽是從褐藻海帶屬(laminaria)和泡葉藻屬(ascophillum)的細(xì)胞壁中提取的天然存在的線性共聚物。藻類中的海藻酸鹽必須經(jīng)過一系列處理，然后它們才能實(shí)際用于需要高度純化的應(yīng)用。由于藻類中的海藻酸鹽是不溶的，需要將其轉(zhuǎn)化為可溶的海藻酸鈉。

150、海藻酸鹽在用途上受到廣泛關(guān)注，主要是因?yàn)槠淠軌蛟诙r(jià)陽離子(例如ca2+)存在下形成聚合凝膠。對(duì)海藻酸鹽的應(yīng)用興趣主要源于其形成凝膠的能力，而凝膠化過程的研究至關(guān)重要。

151、凝膠是一種由三維分子網(wǎng)絡(luò)組成的固體，所述分子通過連接區(qū)(物理或化學(xué)性質(zhì))連接形成固相，其中嵌入有分散的液體介質(zhì)。網(wǎng)絡(luò)賦予凝膠固體的特性，而液相控制其密度。這些聚合物在二價(jià)陽離子存在的溶液中，會(huì)誘導(dǎo)不同聚合物鏈之間建立離子鍵，促進(jìn)溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變。

152、ca2+陽離子首先與g基團(tuán)結(jié)合，直到可用的結(jié)合位點(diǎn)飽和。接下來，它們繼續(xù)與m基團(tuán)結(jié)合，這些基團(tuán)由甘露糖醛酸的單體單元組成(至少在宏觀水平上，尤其是當(dāng)相鄰單元由g殘基組成時(shí))，直到鏈的結(jié)合受到網(wǎng)絡(luò)的限制。這一觀察的解釋在于m和g嵌段與ca2+陽離子形成連接區(qū)能力不同。后者都是多聚陰離子的，將與二價(jià)陽離子形成分子間陰離子鍵。然而，由于g嵌段的空間組織，也能夠螯合ca2+，從而其在兩個(gè)相鄰g嵌段之間形成結(jié)合位點(diǎn)，從而產(chǎn)生更強(qiáng)的相互作用。因此，形成了二聚連接而非聚集體。因此，出現(xiàn)了“蛋盒(egg-box)”模型，其名稱來源于所創(chuàng)建的分子結(jié)構(gòu)的特征形狀。

153、此外，還針對(duì)幾種感興趣的二價(jià)陽離子建立了相對(duì)的海藻酸鹽親和力等級(jí)：

154、pb2+>cu2+>cd2+>ba2+>sr2+>ca2+>co2+＝ni2+＝zn2+>mn2+>mg2+

155、在所有可能的二價(jià)陽離子中，考慮到親和力和安全性，選擇了ca2+。

156、當(dāng)使用海藻酸鹽凝膠時(shí)，主要問題之一是化學(xué)穩(wěn)定性低。

157、與它們具有高親和力的物質(zhì)(例如磷酸鹽或檸檬酸鹽)可螯合鈣離子，使初始凝膠不穩(wěn)定。凝膠也可能因其他非膠凝陽離子的存在而不穩(wěn)定。

158、因此，選擇乳酸鈣似乎并非顯而易見，而是經(jīng)過仔細(xì)選擇后得出的結(jié)果，考慮了乳酸鈣本身的化學(xué)和物理性質(zhì)以及顆粒組合物中存在的其他成分(海藻酸鈉和褪黑素)。

159、在所有可能的鈣鹽中，之所以選擇乳酸鈣，是因?yàn)槭谷樗徕}成為制備褪黑素顆粒的首選鹽的以下一些特性：

160、-水溶性良好；

161、-5％乳酸鈣水溶液的ph值：6-8；

162、-鈣滴度：13.4％至14.5％。

163、排除了其他可能的鈣鹽的原因在于它們不溶于水(例如碳酸鈣)或它們?nèi)芙庑圆?例如檸檬酸鈣)，或者盡管可溶，但是一旦溶解在水中，其ph值與顆粒組合物中的其他兩種成分(褪黑素和海藻酸鈉)不相容。

164、也可以選擇乳酸和安全與ca2+相當(dāng)?shù)亩r(jià)陽離子(即mg2+)形成的鹽。乳酸與二價(jià)陽離子mg2+結(jié)合形成的鹽為乳酸鎂。乳酸鎂在化學(xué)和物理特性上與乳酸鈣非常相似：

165、-水溶性良好；

166、-5％乳酸鎂水溶液的ph值：6.5至8.5；

167、-mg滴度：10.0％至10.5％。

168、然而，盡管乳酸鎂在化學(xué)和物理特性上與乳酸鈣相似，但并不被認(rèn)為是可行的候選方案，乳酸鎂在緩釋顆粒(包括褪黑素和海藻酸鈉的存在)中的功效并不被認(rèn)為等同于乳酸鈣，因?yàn)閙g2+離子不具有膠凝特性，而ca2+離子具有。

169、為提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)，制備了用乳酸鎂1:1替代乳酸鈣的顆粒。下文給出了測試的組合物、使用的制粒工藝和測試結(jié)果：

170、

171、使用所有成分和40重量％的純化水進(jìn)行單步制粒。

172、包衣階段

173、將褪黑素(例如約10重量％)、海藻酸鈉(例如45重量％)和乳酸鎂(例如45重量％)裝入流化床籃。

174、通過設(shè)置以下參數(shù)噴灑純化水：

175、入口空氣溫度＝40℃至45℃

176、產(chǎn)品溫度＝27℃至30℃

177、噴涂壓力＝1.5巴

178、液體流速＝15g/min至20g/min

179、氣流量＝擋板位置15

180、完成純化水的濕潤階段后，通過設(shè)置以下參數(shù)進(jìn)行干燥：

181、入口空氣溫度＝60℃至65℃

182、產(chǎn)品溫度＝50℃至55℃

183、氣流量＝擋板位置15

184、lod控制＝6.5％至7.5％

185、校正階段

186、通過1.2mm的篩網(wǎng)對(duì)顆粒進(jìn)行校正

187、所得顆粒具有以下規(guī)格：

188、顆粒度：

189、不超過10％：≥710μm

190、80％在125μm至710μm之間

191、不超過10％：<125μm

192、lod(70℃)：6.0％至8.0％

193、密度：0.45g/ml至0.65g/ml

194、流動(dòng)性(100克)：≤25秒

195、使用乳酸鎂獲得的顆粒在化學(xué)和物理特性上與使用乳酸鈣獲得的顆粒相重疊。

196、為了測試含乳酸鎂的顆粒的膠凝特性，這是褪黑素顆粒功能的原因，取1克含乳酸鈣的顆粒和1克含乳酸鎂的顆粒，倒入150ml?0.1n的hcl溶液中，以模擬胃環(huán)境。

197、圖1和圖2a、2b示出了測試結(jié)果的照片：

198、圖1(左側(cè)為含乳酸鎂的顆粒，右側(cè)為含乳酸鈣的顆粒)顯示了剛將兩種顆粒倒入0.1n?hcl中的行為。

199、圖2a和2b示出了剛將兩種顆粒倒入0.1n?hcl中的行為(俯視圖)。左側(cè)為含乳酸鎂的顆粒，右側(cè)為含乳酸鈣的顆粒。

200、從照片中可以看出，含乳酸鈣的褪黑素顆粒在接觸0.1n?hcl溶液時(shí)，均勻水合，粉末顆粒平滑且均勻地膠凝，不形成聚集體。另一方面，含乳酸鎂的顆粒則難以水合，時(shí)間較長，且傾向于形成大塊聚集體，其水合部分形成的凝膠具有不規(guī)則特性，因此不適合在粉末顆粒周圍形成凝膠層。