本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種糞菌移植的實驗小鼠模型及構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

近來，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)院已經(jīng)越來越認(rèn)識到腸道細(xì)菌在人體內(nèi)的重要作用，將維持或重建人體腸道正常菌群作為多種疾病的重要治療手段。作為腸道及腸道外疾病的治療手段，糞菌移植(fecalmicrobiotatransplantation，fmt)是將人健康糞便中的功能菌群移植到患者胃腸道內(nèi)，重建新的腸道菌群。糞菌移植逐漸得到重視，然而其存在一些不足，有必要構(gòu)建實驗小鼠模型進行深入研究和分析。

目前，糞菌移植實驗的無菌小鼠模型不僅構(gòu)建繁瑣，而且模型效果差：難以真實反應(yīng)情況。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供了一種糞菌移植的實驗小鼠模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明實驗小鼠模型的構(gòu)建方法簡單，且能真實可靠反應(yīng)情況。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種糞菌移植的實驗小鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：采用抗生素和瀉藥對小鼠處理后，對小鼠進行糞菌移植，得到糞菌移植的實驗小鼠模型。

對小鼠進行灌胃注射抗生素溶液，能清除一部分自身腸道菌群；接著，小鼠飲用瀉藥溶液，可以進一步清除自身腸道菌群；之后進行同種或異種糞菌供體菌的移植，供體菌可顯著改變自生菌群的結(jié)構(gòu)，并在受體腸道內(nèi)部分定植，構(gòu)建出糞菌移植的實驗小鼠模型。

作為上述技術(shù)方案的改進，所述的構(gòu)建方法包括以下步驟：

1)對小鼠進行灌胃注射抗生素溶液，每日灌胃注射的次數(shù)至少為1次，灌胃注射的天數(shù)至少為1日；

2)小鼠灌胃注射抗生素溶液后，以瀉藥溶液為水源進行飲用，飲用瀉藥溶液的天數(shù)至少為1日；

3)小鼠飲用瀉藥溶液后，對小鼠進行糞菌移植，即構(gòu)建出糞菌移植的實驗小鼠模型。

作為上述技術(shù)方案的改進，所述小鼠為spf(specificpathogenefree，無特定病原菌)小鼠。

糞菌移植的動物模型常采用無菌小鼠，無菌小鼠在構(gòu)建模型時存在以下不足：1)環(huán)境條件要求高，成本高；2)繁育率低，某些基因缺陷型甚至無法飼養(yǎng)與繁殖；3)生命力差，疾病建模后死亡率高；4)存在先天免疫與神經(jīng)缺陷，導(dǎo)致相關(guān)疾病研究結(jié)果不可靠。用腸道清潔的spf小鼠代替無菌小鼠構(gòu)建糞菌移植的模型，可以簡化實驗，少用實驗動物，降低成本；spf級小鼠近似健康小鼠，比無菌小鼠更真實反映實驗結(jié)果。

作為上述技術(shù)方案的改進，所述抗生素溶液為萬古霉素生理鹽水溶液，所述瀉藥溶液為復(fù)方聚乙二醇生理鹽水溶液。

作為上述技術(shù)方案進一步地改進，所述萬古霉素生理鹽水溶液中萬古霉素濃度為20mg/ml，復(fù)方聚乙二醇生理鹽水溶液中復(fù)方聚乙二醇濃度為200mg/ml。

作為上述技術(shù)方案更進一步地改進，小鼠每日灌胃注射2次萬古霉素生理鹽水溶液，每次灌胃注射的萬古霉素生理鹽水溶液為0.25ml，小鼠連續(xù)3天灌胃注射灌萬古霉素生理鹽水溶液；小鼠連續(xù)3天飲用復(fù)方聚乙二醇生理鹽水溶液。

另外，本發(fā)明還提一種采用所述的構(gòu)建方法構(gòu)建的糞菌移植的實驗小鼠模型。

另外，本發(fā)明還提供spf小鼠在在構(gòu)建糞菌移植的實驗小鼠模型中的用途。

另外，本發(fā)明還提供抗生素和瀉藥的聯(lián)合使用在構(gòu)建糞菌移植的實驗小鼠模型中的用途。

本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供一種糞菌移植的實驗小鼠模型及構(gòu)建方法，本發(fā)明實驗小鼠模型的構(gòu)建方法為：先對小鼠灌胃注射抗生素溶液，再讓小鼠以瀉藥溶液為水源進行飲用，最后進行糞菌移植，構(gòu)建方法相對簡單化；用spf小鼠代替無菌小鼠，不僅降低成本，而且構(gòu)建出的實驗小鼠模型相對穩(wěn)定、效果良好：能真實可靠反應(yīng)情況。

附圖說明

圖1為糞菌移植的實驗小鼠模型的結(jié)直腸病理檢測圖；

圖2為糞菌移植的實驗小鼠模型的盲腸大便中腸道菌群的基因測序圖；

圖1和圖2中，fmt為糞菌移植的實驗小鼠模型。

具體實施方式

為更好的說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點，下面將結(jié)合具體實施例和附圖對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1糞菌移植的實驗小鼠模型的構(gòu)建

1)小鼠每日灌胃注射2次萬古霉素生理鹽水溶液，連續(xù)3天灌胃注射；每次灌胃注射的萬古霉素生理鹽水溶液為0.25ml，萬古霉素生理鹽水溶液中萬古霉素濃度為20mg/ml；

2)小鼠灌胃注射萬古霉素生理鹽水溶液后，以復(fù)方聚乙二醇生理鹽水溶液為水源進行飲用，小鼠連續(xù)3天飲用；

3)小鼠飲用復(fù)方聚乙二醇生理鹽水溶液后，用中風(fēng)病人的腸道菌群對小鼠進行糞菌移植，即構(gòu)建出糞菌移植的實驗小鼠模型。

實施例2

以實施例1中糞菌移植的實驗小鼠模型為對象(設(shè)一組空白對照)，對結(jié)直腸中段組織進行病理檢測，病理檢測包括以下步驟：

1)標(biāo)本取材：標(biāo)本采集前小鼠禁食12h，自由飲水。取小鼠頸椎脫白處死，75％乙醇浸泡3min，取出小鼠置于無菌紗布上，仰臥位。經(jīng)小鼠腹正中切口，剪開皮膚，暴露腹壁，提起腹膜并將其剪開。暴露腹腔組織，小心分從回盲部到肚門的全部腸管，用冰生理鹽水沖洗腸腔，洗去腸內(nèi)容物，留取結(jié)腸組織以10％福爾馬林固定；

2)組織蠟塊制作

脫水：70％乙醇過夜，80％乙醇60min，90％乙醇60min，95％乙醇30min，95％乙醇30min，100％乙醇15min，100％乙醇15min；透明：二甲苯15min，二甲苯15min；浸醋：石蠟30min，石蠟90min；包埋；

3)蘇木素伊紅(he)染色步驟

石蠟包埋的組織塊切片，切片厚度為5μm；42℃水箱展片，待組織切片展平后用防脫載玻片攜片，置于65℃恒溫箱烘烤，以減少脫片；石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化：二甲苯10min，二甲苯5min，100％乙醇5min，100％乙醇5min，95％乙醇3min，80％乙醇3min，70％乙醇3min，流動水沖洗5min，蘇木素染色1～3min，流水沖洗5min，1％鹽酸酒精分化5s，流水沖洗5s，0.5％淡氨水反藍(lán)30～45s，流水沖洗5min，伊紅染色1min，流水蘸洗3～5下；梯度乙醇脫水：70％乙醇蘸洗3-5下，80％乙醇蘸洗3-5下，95％乙醇蘸洗3-5下，100％乙醇10min，100％乙醇10min；透明：二甲苯ⅰ10min，二甲苯ⅱ10min，中性樹膠封片，鏡檢。

實驗結(jié)果如如圖1所示，發(fā)現(xiàn)糞菌移植的實驗小鼠的腸道發(fā)生病理改變：吸收細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，并伴隨部分脫落；黏膜層及黏膜下層可見淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及漿細(xì)胞增多、浸潤；黏膜下層部分增厚并伴隨淋巴細(xì)胞浸潤。由此，可見，本發(fā)明的糞菌移植的實驗小鼠模型是構(gòu)建成功的。

實施例3

以實施例1中糞菌移植的實驗小鼠模型為對象(設(shè)一組空白對照)，對盲腸大便中腸道菌群進行16srrna基因測序檢測。實驗結(jié)果如如圖2所示，發(fā)現(xiàn)糞菌移植的實驗小鼠的腸道菌群發(fā)生明顯改變。由此可見，本發(fā)明的糞菌移植的實驗小鼠模型是構(gòu)建成功的。

最后所應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對本發(fā)明保護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。