本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體說是涉及一種含橄欖油和中/長鏈脂肪乳組合物注射液及其制備方法。

背景技術(shù)：

腸外營養(yǎng)(parenteralnutrition，pn)是指通過中心靜脈或周圍靜脈插管的途徑，輸入包括葡萄糖、氨基酸、脂肪乳、電解質(zhì)、微量元素、水溶性及脂溶性維生素等靜脈營養(yǎng)液的一種方法。pn能為危重患者和胃腸道功能不全的患者提供有效的營養(yǎng)支持，在改善圍手術(shù)期患者的營養(yǎng)，提高手術(shù)成功率等方面都起著積極的作用。

脂肪乳是腸外營養(yǎng)中的主要成分之一。靜脈輸注脂肪乳主要有兩方面的作用：提供必需脂肪酸和作為機體能量來源。目前在臨床上應(yīng)用的主要為大豆油長鏈(lct)和中長鏈(mct/lct)脂肪乳，大豆油lct和mct/lct脂肪乳對免疫功能的抑制及其對肝功能的影響也越來越被人們所認識。

脂肪酸按照碳鏈長短分為短鏈脂肪酸、中鏈脂肪酸和長鏈脂肪酸。所說的中鏈油就是指碳鏈長度為6～12的脂肪酸甘油酯，臨床上常用的有辛葵酸甘油酯等；長鏈油是指碳鏈長度為14～20的脂肪酸甘油酯，臨床上目前常用的有大豆油。中鏈油與長鏈油的生理功能不同，中鏈油在人體內(nèi)能迅速代謝，提供能量，不在體內(nèi)積蓄，基本無免疫抑制作用。有研究表明中鏈油還有一定的保肝作用。長鏈油能提供人體必需的脂肪酸，但是長鏈油在體內(nèi)代謝較慢，長時間使用會有積蓄現(xiàn)象，有一定的肝臟損傷和免疫抑制作用。臨床目前使用較多的中/長鏈脂肪乳注射液將中鏈油與長鏈油混合，充分發(fā)揮中鏈油與長鏈油的優(yōu)點。

橄欖油脂肪乳較之大豆油脂肪乳含有更多具生物活性的α-生育酚(維生素e的活性形式，一種主要的抗氧化劑)，能夠抑制有毒的脂類過氧化物的生成，使不飽和酸穩(wěn)定，提高刺激性泛醌的免疫性反應(yīng)。同時橄欖油脂肪乳中富含的油酸是mufa，多項研究表明mufa對人的免疫功能的影響更小，從而橄欖油脂肪乳能夠避免普通大豆油脂肪乳中富含的ω-6pufa帶來的對免疫功能的損害。

另一方面，在臨床使用中，注射脂肪乳中的大顆粒(大于5μm乳粒)的存在會直接影響脂肪乳產(chǎn)品的質(zhì)量與安全性。大顆粒會伴隨著注射過程進入人體肺部，造成肺部形成肉芽腫；進入血管可以引起血管肉芽腫、靜脈炎及血栓；伴隨血液循環(huán)可進入到身體的其他器官，對肝、腎等都有損害；并且大顆粒的存在會影響注射液本身的穩(wěn)定性。美國曾發(fā)生過注射脂肪乳大粒子引起的醫(yī)療事故，因此促成美國藥典委員會對大粒子的關(guān)注，并增至美國藥典中，美國藥典規(guī)定脂肪乳中“光阻法測定大于5μm的乳粒(pfat5)體積占比不得過0.05％”。我國國家藥典委員會也分別于2015年7月8日發(fā)布《中/長鏈脂肪乳注射液質(zhì)量標準(征求意見稿)》，《脂肪乳注射液(c14～24)質(zhì)量標準(征求意見稿)》，2015年6月14日發(fā)布《丙泊酚乳狀注射液(征求意見稿)》，其中對“大于5μm的乳粒(pfat5)”也進行了特別規(guī)定,規(guī)定其體積占比不得過0.05％。

對于危重及圍手術(shù)期患者補充脂肪乳來說，目前市售中/長鏈脂肪乳注射液組方中，長鏈油大多為大豆油，不能滿足其降低炎癥反應(yīng)的需求；現(xiàn)有的橄欖油脂肪乳注射液組方中只含橄欖油及大豆油兩種長鏈油，不能滿足其需要迅速供能的需求。

并且，目前市售長鏈脂肪乳注射液的穩(wěn)定性欠佳，在工藝及貯存過程中易受溫度的影響，出現(xiàn)大于5μm乳粒(pfat5)不合格的情況。另一方面，臨床常用的“全合一”營養(yǎng)制劑，將橄欖油脂肪乳注射液與其他注射液如電解質(zhì)注射液、氨基酸注射液混合后也容易發(fā)生乳劑體系破壞、油脂顆粒變大、相分離等各種問題。因此，對現(xiàn)有長鏈脂肪乳注射液的穩(wěn)定性進行改善以降低大顆粒的不良反應(yīng)已成為臨床需要迫切解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

鑒于上述情況，本發(fā)明提供一種可滿足危重及圍手術(shù)期患者迅速供能，降低炎癥反應(yīng)需求、質(zhì)量穩(wěn)定的橄欖油中/長鏈脂肪乳組合物及其制備方法。

為了實現(xiàn)上述技術(shù)目的，主要是通過以下技術(shù)方案加以實現(xiàn)。

一種含橄欖油中和長鏈脂肪乳注射液包含以下重量份的組分：

每1000ml注射液中含有橄欖油120～180g、大豆油10～40g、中鏈甘油三酸酯10～40g、復合乳化劑6～18g、甘油15～35g、氫氧化鈉適量，其余為注射用水。

具體地，上述的復合乳化劑為精制蛋黃磷脂、油酸鈉、泊洛沙姆188按照重量份比例為40:1:1組成的復合乳化劑。

具體地，上述氫氧化鈉的添加量為1m濃度氫氧化鈉每1l注射液中加入0.5ml～1ml。

本發(fā)明的含橄欖油的中/長鏈脂肪乳注射液，注射液中鏈油由橄欖油和大豆油組成，這樣的組成既能滿足人體必需脂肪酸，又同時降低大豆油比例以減少了炎癥反應(yīng)。中鏈油部分由中鏈甘油三酸酯提供，可滿足危重及圍手術(shù)期患者需迅速供能的需求。

本發(fā)明還提供了橄欖油中/長鏈脂肪乳注射液的制備方法，具體步驟如下：

(1)油相制備：在氮氣保護下，容器中加入配比量的橄欖油、大豆油、中鏈甘油三酸酯、水浴加熱至60～70℃，然后在6000～10000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下加入乳化劑使其分散，制備成油相；

(2)水相制備：將適量60～70℃注射用水置于另一容器內(nèi)，加入配比量的中鏈甘油三酸酯攪拌混勻并經(jīng)0.45μm濾膜過濾，制備成水相。

(3)初乳制備：在氮氣保護下、將油相倒入水相中以6000～20000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌5～30分鐘，制成初乳，然后加注射用水至全量再攪勻，迅速降溫至30～50℃左右后進行均質(zhì)；

(4)均質(zhì)：在密閉容器和氮氣保護下，將制得的初乳移入二步勻質(zhì)機低壓勻質(zhì)(160/80bar)10～30分鐘，再經(jīng)高壓勻質(zhì)(700/80bar)2～5次；

(5)精濾及灌裝：將均質(zhì)后的乳液冷卻至20～40℃左右，并用ph調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)ph為8.0～9.0，經(jīng)2.5μm微孔濾膜過濾后，灌裝入非pvc輸液袋中，通氮、加塞、封口、密閉，制成內(nèi)袋；

(6)外包：將內(nèi)袋套入外袋中，加入吸氧劑，抽真空封口；

(7)滅菌：旋轉(zhuǎn)滅菌柜充氮氣水浴滅菌在110～123℃滅菌5～40分，其中進柜溫度控制為50～80℃，升溫至滅菌升溫時間10～15分鐘，出柜溫度為40～60℃，然后在10～15min迅速冷卻至室溫。

其中步驟(1)制備得到的油相與步驟(2)制備得到的水相溫度差不超過5℃，優(yōu)選溫差1～3℃。

上述步驟(6)中吸氧劑是高密度聚乙烯袋裝鐵基吸氧劑，吸氧劑位于內(nèi)袋與外袋之間，置于輸液袋中間位置。鐵基吸氧劑添加量為100ml均質(zhì)后的乳液加入50cc，鐵基吸氧劑中鐵基質(zhì)量百分比大于60％。

通過在組方中加入泊洛沙姆188、卵磷脂、油酸鈉所組成混合乳化劑，提高產(chǎn)品乳劑體系穩(wěn)定性。最終獲得均一粒徑，乳液粒徑超過5μm的乳粒(pfat5)體積比小于0.05％，提高了橄欖油脂肪乳臨床使用的安全性。

有益效果：

在本組合物工藝研究過程中，發(fā)現(xiàn)當精制蛋黃磷脂、油酸鈉、泊洛沙姆188按照比例為40:1:1組成復合乳化劑時，可獲得較小且穩(wěn)定的平均粒徑(230±10nm)，大于5μm乳粒(pfat5)體積比例控制在0.004％～0.007％范圍內(nèi)，這遠遠小于國標、降低安全隱患。

初乳制備溫度與產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性有密切的關(guān)系，而且油相水相混合后溫度變化不宜過大。本發(fā)明通過將油相、水相制備溫度控制在60～70℃，且兩相之間溫度差不得過5℃，以確?；旌虾蟪跞闇囟瓤刂圃?0～70℃，在此條件下，產(chǎn)品的平均粒徑、pfat5、溶血磷脂及溶血磷脂酰乙醇胺、甲氧基苯胺值、zeta電位影響最小。且產(chǎn)品經(jīng)光照與60℃放置10天后，各項指標均符合質(zhì)量標準。

滅菌前乳液的ph值對產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性有較大的影響，研究發(fā)現(xiàn)若在水相中預先調(diào)整ph值，會造成滅菌后產(chǎn)品溶血磷脂含量的升高，而在乳液均質(zhì)之后調(diào)整ph值則基本無影響。因此本發(fā)明采用均質(zhì)后調(diào)整ph至8.0～9.0的方式，在此條件下，產(chǎn)品的平均粒徑、pfat5、溶血磷脂及溶血磷脂酰乙醇胺、甲氧基苯胺值、zeta電位影響最小。產(chǎn)品經(jīng)光照與60℃放置10天后，各項指標均符合質(zhì)量標準。

本發(fā)明在制備橄欖油中長鏈脂肪乳注射用藥物組合物過程中通過采用復合乳化劑并優(yōu)化制備工藝，增強了體系的乳化能力，減小了乳粒粒徑且粒徑穩(wěn)定，控制大于5μm乳粒(pfat5)至較低水平。從而克服乳液出現(xiàn)漂油、乳粒變大等現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提高了組合物的穩(wěn)定性和用藥安全性。

具體實施方式

以下通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步闡述，其中所涉及的具體工藝參數(shù)和條件不作為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員在理解上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所做的任何改變都屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。

實施例1：

油相制備：在氮氣保護下，容器中加入精制橄欖油120g、注射用大豆油40g、中鏈甘油三酸酯40g。水浴加熱至65℃，6000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下加入精制蛋黃磷脂9g、使其分散，制備成油相。

水相制備：另將751.6g67℃注射用水置于容器內(nèi)，加入注射用甘油25g，油酸鈉0.225g、泊洛沙姆1880.225g攪拌混勻并經(jīng)0.45μm濾膜過濾，制備成水相。

初乳制備：在氮氣保護，6000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下將油相倒入水相中攪拌15分鐘，制成初乳。迅速降溫至30℃左右后進行高壓勻質(zhì)。

均質(zhì)：在密閉容器和氮氣保護下，將制得的初乳移入二步勻質(zhì)機低壓勻質(zhì)(160/80bar)20分鐘，再經(jīng)高壓勻質(zhì)(700/80bar)3次。

精濾及灌裝：將乳液冷卻至20～40℃左右，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為8.7，經(jīng)2.5μm微孔濾膜過濾后，灌裝入100ml非pvc輸液袋中，通氮、加塞、封口、密閉，制成內(nèi)袋，共制得10袋。

外包：將內(nèi)袋套入外袋中，置入1包吸氧劑(50cc鐵基吸氧劑、鐵基質(zhì)量百分比60％)，抽真空封口。

滅菌：旋轉(zhuǎn)滅菌柜充氮氣水浴滅菌115℃滅菌40分，進柜溫度52℃，升溫至115℃11分鐘，出柜溫度55℃，之后迅速冷卻至室溫。

然后將制備得到的含橄欖油中長鏈脂肪乳組合物進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)條件下分別處理10天后，觀脂肪乳組合物的性能變化情況。高溫組實驗和光照組實驗的脂肪乳組合物為1000ml。具體試驗結(jié)果表1所示。

表1實施例1產(chǎn)品進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)影響因素試驗檢驗結(jié)果

由表1中實驗數(shù)據(jù)可知，性狀穩(wěn)定、平均粒徑小于標準值，ph符合標準要求、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、zeta電位(mv)以及無菌參數(shù)等符合標準。并且經(jīng)高溫以及光照的外界條件影響，各種性能參數(shù)變化甚小。

實施例2：

油相制備：在氮氣保護下，容器中加入精制橄欖油160g、注射用大豆油20g、中鏈甘油三酸酯20g。水浴加熱至70℃，8000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下加入精制蛋黃磷脂12g、使其分散，制備成油相。

水相制備：另將750.9g67℃注射用水置于容器內(nèi)，加入注射用甘油22.5g，油酸鈉0.3g、泊洛沙姆1880.3g攪拌混勻并經(jīng)0.45μm濾膜過濾，制備成水相。

初乳制備：在氮氣保護，15000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下將油相倒入水相中攪拌15分鐘,制成初乳，迅速降溫至40℃左右后進行高壓勻質(zhì)。

均質(zhì)：在密閉容器和氮氣保護下，將制得的初乳移入二步勻質(zhì)機低壓勻質(zhì)(160/80bar)20分鐘，再經(jīng)高壓勻質(zhì)(700/80bar)4次。

精濾及灌裝：將乳液冷卻至35℃,并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為8.5。經(jīng)2.5μm微孔濾膜過濾后，灌裝入100ml非pvc輸液袋中，通氮、加塞、封口、密閉，制成內(nèi)袋，共制得10袋。

外包：將內(nèi)袋套入外袋中，置入1包吸氧劑(50cc鐵基吸氧劑、鐵基質(zhì)量百分比60％)，抽真空封口。

滅菌：旋轉(zhuǎn)滅菌柜充氮氣水浴滅菌121℃滅菌15分，進柜溫度50℃，升溫至121℃15分鐘，出柜溫度50℃，之后迅速冷卻至室溫。

然后將制備得到的含橄欖油中長鏈脂肪乳組合物進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)條件下分別處理10天后，觀脂肪乳組合物的性能變化情況。高溫組實驗和光照組實驗的脂肪乳組合物為1000ml。具體試驗結(jié)果表2所示。

表2實施例2產(chǎn)品進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)試驗檢驗結(jié)果

由表2中實驗數(shù)據(jù)可知，性狀穩(wěn)定、平均粒徑小于標準值，ph符合標準要求、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、zeta電位(mv)以及無菌參數(shù)等符合標準。并且經(jīng)高溫以及光照的外界條件影響，各種性能參數(shù)變化甚小。

實施例3：

油相制備：在氮氣保護下，容器中加入精制橄欖油180g、注射用大豆油10g、中鏈甘油三酸酯10g。水浴加熱至68℃，10000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下加入精制蛋黃磷脂15g、使其分散，制備成油相。

水相制備：另將742.1g69℃注射用水置于容器內(nèi)，加入注射用甘油28.1g，油酸鈉0.375g、泊洛沙姆1880.375g攪拌混勻并經(jīng)0.45μm濾膜過濾，制備成水相。

初乳制備：在氮氣保護，20000轉(zhuǎn)/分鐘高速攪拌下將油相倒入水相中攪拌15分鐘，制成初乳，迅速降溫至45℃左右后進行高壓勻質(zhì)。

均質(zhì)：在密閉容器和氮氣保護下，將制得的初乳移入二步勻質(zhì)機低壓勻質(zhì)(160/80bar)20分鐘，再經(jīng)高壓勻質(zhì)(700/80bar)6次。

精濾及灌裝：將乳液冷卻至40℃，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為9.0。經(jīng)2.5μm微孔濾膜過濾后，灌裝入100ml非pvc輸液袋中，通氮、加塞、封口、密閉，制成內(nèi)袋，共制得10袋。

外包：將內(nèi)袋套入外袋中，置入1包吸氧劑(50cc鐵基吸氧劑、鐵基質(zhì)量百分比60％)，抽真空封口。

滅菌：旋轉(zhuǎn)滅菌柜充氮氣水浴滅菌121℃滅菌20分,進柜溫度滅菌：旋轉(zhuǎn)滅菌柜充氮氣水浴滅菌121℃滅菌20分，進柜溫度50℃，升溫至121℃15分鐘，出柜溫度50℃，之后迅速冷卻至室溫。

然后將制備得到的含橄欖油中長鏈脂肪乳組合物進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)條件下分別處理10天后，觀脂肪乳組合物的性能變化情況。高溫組實驗和光照組實驗的脂肪乳組合物為1000ml。具體試驗結(jié)果表3所示。

表3實施例3產(chǎn)品進行高溫(60℃)、光照(5500±500lx)影響因素試驗檢驗結(jié)果

上三組配制而得的橄欖油中/長鏈脂肪乳組合物經(jīng)高溫10天、光照10天觀察。由表3中實驗數(shù)據(jù)可知，性狀穩(wěn)定、平均粒徑小于標準值，ph符合標準要求、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、zeta電位(mv)以及無菌參數(shù)等符合標準。并且經(jīng)高溫以及光照的外界條件影響，各種性能參數(shù)變化甚小。

實施例4：

臨床配制“全合一”營養(yǎng)液，分別考察本發(fā)明含橄欖油的中長鏈脂肪乳組合物與市售長鏈脂肪乳在混合營養(yǎng)液中乳粒的穩(wěn)定性情況，具體配置方法及實驗結(jié)果如下。

樣品：采用實施例1產(chǎn)品，實施例2產(chǎn)品，實施例3產(chǎn)品，市售長鏈脂肪乳注射液1批。方法：按照下表4處方制備“全合一“營養(yǎng)液。

表4“全合一”營養(yǎng)液各組分含量

配制“全合一”營養(yǎng)液研究組1、研究組2、研究組3以及對照組的具體步驟如下。將安達美、水樂維他加入到氨基酸注射液中混合得到混合液①，將磷注射液、氯化鈉注射液、氯化鉀注射液加入到葡萄糖注射液中混合得到混合液②，將混合液①，②加入至營養(yǎng)輸液袋中混合。將維他利匹特加入到脂肪乳注射液中混合得到混合液③，將混合液③加入至營養(yǎng)輸液袋中混合，輕搖混合充分，密封輸液袋，至0～4℃條件下保存。

按照混合放置時間0、2、4、6、8、12、24小時取樣檢驗大于5μm乳粒，具體試驗結(jié)果如表5所示。

本實施例中乳粒檢測方法及質(zhì)控標準為：“乳粒取本品，照動態(tài)光散射法檢查，光強平均粒徑不得過0.40μm，90％的粒徑應(yīng)在0.7μm以下。另取本品，照基于單粒子光學傳感技術(shù)的光阻法測定，大于5μm的乳粒加權(quán)總體積不得過油相(精制橄欖油與大豆油)體積的0.05％”。

表5研究組產(chǎn)品與對照組產(chǎn)品大于5μm乳粒含量對比表

由表所公開的實驗數(shù)據(jù)分析可知：研究組1、研究組2、研究組3以及對照組的脂肪乳在全合一營養(yǎng)液中隨著放置時間的增加，大于5μm乳粒呈上升趨勢，在全合一營養(yǎng)液使用時限24小時內(nèi)，本發(fā)明三批產(chǎn)品大于5μm乳粒在0.022％～0.026％，而市售產(chǎn)品大于5μm乳粒已經(jīng)超出了標準范圍0.05％。說明本發(fā)明組合物及其工藝制備的產(chǎn)品，在臨床使用中乳劑體系依然保持穩(wěn)定，能更大程度降低患者不良反應(yīng)的風險。