本發(fā)明涉及中藥制劑及制法，具體涉及一種以中草藥為原料制成的防治慢性心力衰竭(中醫(yī)心衰病)的中藥制劑及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
心力衰竭簡(jiǎn)稱心衰，是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙，不能將靜脈回心血量充分排出心臟，導(dǎo)致靜脈系統(tǒng)血液淤積，動(dòng)脈系統(tǒng)血液灌注不足，從而引起心臟循環(huán)障礙癥候群。而慢性心力衰竭(chf)則是持續(xù)存在的心力衰竭狀態(tài)，可以穩(wěn)定、惡化或失代償，是一種自行進(jìn)展(self-perpetuating)、不斷惡化的疾病。慢性心力衰竭(慢性心衰)并不是一個(gè)獨(dú)立的疾病，而是各種心血管疾病發(fā)展的終末階段。歐洲心臟病協(xié)會(huì)(esc)《急、慢性心力衰竭診斷和治療指南》指出，心力衰竭是一種臨床綜合征，其特征是存在由于心臟結(jié)構(gòu)和/或功能異常，引起靜息或負(fù)荷時(shí)心輸出量減少和/或心內(nèi)壓力增高，從而導(dǎo)致的典型癥狀(如呼吸困難、踝部水腫和疲乏)，也可伴有體征(如頸靜脈壓升高、肺部啰音和外周水腫)。其作為一種進(jìn)展性的臨床綜合征，病情復(fù)雜、預(yù)后不良，有著極高的病死率。
慢性心力衰竭是由于神經(jīng)體液激素和心臟重構(gòu)造成的惡性循環(huán)的病理生理過程,最終導(dǎo)致死亡。而心肌重塑是則心臟應(yīng)對(duì)壓力負(fù)荷、維持心臟正常輸出的所做出的適應(yīng)性反應(yīng)，其涉及心肌細(xì)胞的凋亡和肥大、血管新生及細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)改變的多個(gè)病理生理過程。在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的代償機(jī)制啟動(dòng)后，短期內(nèi)病理性心肌肥厚為代償性反應(yīng),可以維持心輸出量,平衡室壁壓力,消除初始刺激的影響，同時(shí)心肌的成纖維細(xì)胞在損傷區(qū)域合成分泌大量以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)，取代損傷的心肌組織，使心功能維持在相對(duì)正常范圍；然而在系統(tǒng)長(zhǎng)期被激活后，心肌肥厚使心功能失代償，已受損的心肌細(xì)胞再次受到了損傷，同時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積引起了心肌纖維化，心室基本組成成份受損，使得心室順應(yīng)性降低，導(dǎo)致心臟的收縮舒張功能遭到嚴(yán)重的破壞，致使心肌細(xì)胞凋亡、心肌擴(kuò)張，最終造成心力衰竭。
在治療慢性心衰方面，西醫(yī)將使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(acei)、β受體阻斷劑及醛固酮拮抗劑作為基本治療手段，即所謂的“金三角”。目前的治療方法可控制心力衰竭的癥狀，但患者出院后發(fā)生猝死的可能仍未得到有效的解決，猝死的發(fā)生難以預(yù)測(cè)。故而，西醫(yī)在治療慢性心力衰竭雖有一定的優(yōu)勢(shì)和效果，但同時(shí)也存在一定的局限性。如左室射血分?jǐn)?shù)正常的老年心衰患者，β受體阻滯劑無法降低其死亡率和(或)再住院率；血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定的患者,靜脈使用β受體阻滯劑會(huì)增加心源性休克風(fēng)險(xiǎn)，增加病死率。acei可引起刺激性的干咳和致命性喉頭水腫。醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯的使用會(huì)導(dǎo)致高血鉀，男性乳腺增生，性功能減退等。
祖國(guó)醫(yī)學(xué)雖無與慢性心力衰竭相應(yīng)的病名，但根據(jù)慢性心衰的臨床表現(xiàn)，可將其歸屬于肺脹、心悸、水腫等范疇，并與痰飲、血瘀等內(nèi)生之邪壅積心肺脈絡(luò)相關(guān)，正如張仲景所說“咳逆倚息短氣不得臥，其形為腫”。中醫(yī)在治療慢性心衰方面，遵循古理，順其藥性，吸取西醫(yī)之治療方法。二十世紀(jì)五十年代到八十年代末，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療所有類型心力衰竭均采用三大法寶“強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管”。而中醫(yī)界多數(shù)采用的“溫陽(yáng)、利水、活血”等治療方法可謂是異途同歸，與這三大法寶為一對(duì)孿生姐妹。益氣溫陽(yáng)藥有強(qiáng)心作用、利水滲濕法也有利尿作用、活血化瘀藥多數(shù)具有擴(kuò)張血管作用。可見中西醫(yī)治療心衰，雖然方法，藥物不同，但歸根結(jié)底是有著某種共性的。中醫(yī)界在那個(gè)時(shí)期也有過研發(fā)萬年青、北五加皮、附子等強(qiáng)心藥的經(jīng)歷。對(duì)衰竭心臟要求加大其作功、能象正常心臟一樣；現(xiàn)在看來，這種療法猶如“累馬加鞭”，可加快奔跑但不能持久。此類藥物雖可迅速提高心臟輸出量，但從慢性心衰的病理發(fā)展角度而言，對(duì)于慢性心衰患者的長(zhǎng)期預(yù)后及心臟重塑的改善方面的效果并不是十分理想。西醫(yī)的“強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管”與中醫(yī)的“(益氣)溫陽(yáng)、利水、活血”更適合用于急性心衰或失代償?shù)穆孕乃サ闹委?。這與慢性心力衰竭強(qiáng)調(diào)以修復(fù)病損心肌為治療目的的新的治療策略格格不入。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種療效顯著，副作用小的預(yù)防慢性心力衰竭的中藥及其制備方法，解決現(xiàn)有西藥的毒副作用大，成本高昂等技術(shù)問題。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種預(yù)防慢性心力衰竭的中藥，其特征在于：由以下重量份數(shù)的原料藥制成：淫羊藿15-25份、黃芪15-25份、玉竹5-15份、麥冬5-15份、蘇木5-15份、澤蘭5-15份、葶藶子5-15份、澤瀉5-15份。根據(jù)以上所述的預(yù)防心力衰竭的中藥，其特征在于：由以下重量份數(shù)的原料藥制成：淫羊藿20份、黃芪20份、玉竹10份、麥冬10份、蘇木10份、澤蘭10份、葶藶子10份、澤瀉10份。
根據(jù)以上所述的預(yù)防慢性心力衰竭的中藥，其特征在于：所述黃芪為生黃芪、玉竹為炒玉竹、葶藶子為炒葶藶子。
如以上所述的預(yù)防慢性心力衰竭的中藥，其特征在于制備方法包括以下步驟：
a：按所述組份的質(zhì)量份數(shù)比稱取淫羊藿、黃芪、蘇木、澤蘭、澤瀉，經(jīng)乙醇回流提取，過濾，回收乙醇，濃縮得醇提濃縮液；
b：按所述組份的質(zhì)量份數(shù)比稱取玉竹、麥冬、葶藶子，與步驟a中經(jīng)體積濃度為60％的乙醇回流提取后的藥渣合并，經(jīng)水煎煮，過濾，濃縮，冷卻，加乙醇，醇沉得水提醇沉濃縮液，將水提醇沉濃縮液與步驟a的醇提濃縮液合并，濃縮、烘干后制成浸膏干粉；
c：將步驟b中的浸膏干粉進(jìn)行濕法制粒，干燥，加輔料制備成片劑、膠囊劑或顆粒劑。
如制備方法中所述的所述的預(yù)防心力衰竭的中藥，其特征在于：制備方法步驟a中所加乙醇量是原料藥重量的12倍量，乙醇的體積濃度為60％，分2次回流提取，每次加乙醇量是原料藥重量的6倍量，每次回流2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，得醇提濃縮液。
如制備方法中所述的預(yù)防慢性心力衰竭的中藥，其特征在于：制備方法步驟b中加水的總量是原料藥重量的20倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水量是原料藥重量的10倍，合并兩次水煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至60℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度為1g/ml，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50％，攪拌均勻，放置48小時(shí)后離心，棄去沉淀，離心速度為4800轉(zhuǎn)/分，回收離心液，與步驟b中醇提濃縮液合并，減壓濃縮后在70℃條件下進(jìn)行真空干燥，得浸膏干粉。
技術(shù)方案所述預(yù)防心力衰竭的中藥在制備預(yù)防慢性心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
如技術(shù)方案所述預(yù)防心力衰竭的中藥在制備預(yù)防慢性心力衰竭的藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述心力衰竭為陰陽(yáng)兩虛、心脈瘀滯型心力衰竭。
有益效果：申請(qǐng)者通過長(zhǎng)期臨床實(shí)踐認(rèn)為，慢性心力衰竭的病程較長(zhǎng)，在疾病發(fā)展過程中必然存在陰損及陽(yáng)、陽(yáng)損及陰的病理機(jī)制?！瓣?yáng)氣根于陰，陰氣根于陽(yáng)；無陰則陽(yáng)無以生，無陽(yáng)則陰無以化；全陰則陽(yáng)氣不極，全陽(yáng)則陰氣不窮”(《瘍醫(yī)大全·卷一·四氣調(diào)神大論篇》)，心陰心陽(yáng)互根互用，密不可分。因此，在心力衰竭的病程中，心陽(yáng)虧虛必始終伴隨著心陰(體)的虧損，只是隨虛損程度而表現(xiàn)各異。故而，在研究慢性心衰病機(jī)時(shí)，應(yīng)以“陰陽(yáng)兩虛”立論。陰陽(yáng)兼顧之法，臨床見效看似稍慢，實(shí)是更有利于患者心之陽(yáng)氣的緩緩恢復(fù)，對(duì)慢性心衰的遠(yuǎn)期愈后大有裨益。申請(qǐng)者認(rèn)為慢性心力衰竭的核心病機(jī)為“陰陽(yáng)兩虛、心脈瘀滯”，益陰助陽(yáng)活血是其根本治療大法，在此基礎(chǔ)上申請(qǐng)者組方擇藥立本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲(本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲)，該方藥緊緊圍繞“阻斷心肌重塑”這一心衰治療的靶目標(biāo)，通過修復(fù)病損心肌，逆轉(zhuǎn)心肌重塑，糾正心臟耗竭不支狀態(tài)，達(dá)到改善患者的生活質(zhì)量，降低心衰病死率的和再住院率的要求。
“陰中求陽(yáng)”理論始于《黃帝內(nèi)經(jīng)》。《素問·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》云：“陽(yáng)化氣，陰成形”。陽(yáng)化之氣概為有形之陰精所化無形之氣，陰成之形皆為無形之陽(yáng)氣凝聚所成之有形之精，前者維持推動(dòng)臟腑生理功能，后者溫潤(rùn)濡養(yǎng)五臟六腑之根本。明代張景岳提出“善補(bǔ)陽(yáng)者,必于陰中求陽(yáng),則陽(yáng)得陰助而生化無窮”。其理論對(duì)后世影響頗深，對(duì)近現(xiàn)代一些重大疾病的治療亦有切實(shí)的指導(dǎo)意義。如慢性心力衰竭，其治療及預(yù)后難度頗大，治療方式也難有突破性進(jìn)展。但近年來，有多位學(xué)者在探索從中醫(yī)論治慢性心力衰竭修復(fù)性治療策略時(shí)，將“陰中求陽(yáng)”理論應(yīng)用于慢性心力衰竭的防治，值得關(guān)注及推廣。如中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院史大卓主張?jiān)谘a(bǔ)陽(yáng)基礎(chǔ)上也應(yīng)稍佐天冬、麥冬、生地黃等養(yǎng)陰藥物，使陽(yáng)氣內(nèi)守以貫血脈。江蘇省中醫(yī)院李七一治療心力衰竭時(shí)主張補(bǔ)陰配陽(yáng)，宜少火不宜壯火，務(wù)使陰陽(yáng)二氣能夠互根互濟(jì)、互生互化。遼寧中醫(yī)藥大學(xué)張艷在治療心力衰竭的基礎(chǔ)方強(qiáng)心通脈湯中加入麥冬、生地黃養(yǎng)陰清熱，以奏益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)氣救脫、清熱安神之功。這些都是“陰中求陽(yáng)”理論在臨證中的具體運(yùn)用。“陰中求陽(yáng)”之法，更有利于心力衰竭患者心之陽(yáng)氣的緩緩恢復(fù)，這種徐徐圖之的方法，切合中醫(yī)治療的整體觀及陰陽(yáng)觀，“孤陰不生，獨(dú)陽(yáng)不長(zhǎng)”，“陰陽(yáng)平秘，精神乃治”。
本產(chǎn)品方劑配伍圍繞“益陰助陽(yáng)活血”治則，補(bǔ)陽(yáng)配陰、陰陽(yáng)兼顧，使溫陽(yáng)藥更持久有效地發(fā)揮改善心功能的作用，旨在對(duì)受損心體進(jìn)行修復(fù)，使肥大病損的心肌細(xì)胞得到修復(fù)，陽(yáng)氣得復(fù)，從而更好地發(fā)揮心主血脈功能，達(dá)到改善患者的生活質(zhì)量，降低慢性心衰病死率的和再住院率的目的。使得慢性心衰在臨床治療中除了“金三角”方案外又多了一種中藥的防治手段。
本發(fā)明的中藥制劑經(jīng)臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明，其在逆轉(zhuǎn)心室重塑，降低左室壓力，改善心室功能等方面具有良好的療效，可進(jìn)一步改善患者的心功能，提高左室射血分?jǐn)?shù)，降低患者nt-probnp水平，從而提高慢性心力衰竭患者的生活質(zhì)量。采用天然植物，在研究中并沒有發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用，安全性高，本品做成可以做成藥學(xué)上的片劑、膠囊劑或顆粒劑。
本發(fā)明中淫羊藿，《本草綱目》中稱其有“益精氣、堅(jiān)筋骨、補(bǔ)腰膝、強(qiáng)心力”之功效。淫羊藿藥性辛溫平和，實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)其“助陽(yáng)而不傷陰，溫柔而不剛燥”，作為補(bǔ)腎壯陽(yáng)藥的一種取其“補(bǔ)腎以強(qiáng)心”之功用，補(bǔ)腎則腎氣有根自然上通于心；黃芪，性微溫、補(bǔ)上焦元?dú)猓a(bǔ)而不膩，與淫羊藿相合，益氣助陽(yáng)，共為君藥。麥冬，養(yǎng)陰生津，潤(rùn)肺清心；玉竹，滋陰寧心。麥冬、玉竹相伍滋補(bǔ)心陰，共為臣藥。方中以滋陰之玉竹、麥冬與溫陽(yáng)益氣藥淫羊藿、黃芪相配伍，一來“陰中求陽(yáng)”，使所顧之陽(yáng)氣得陰液之助而生化無窮，又可防心火過亢；而淫羊藿、黃芪得玉竹、麥冬之助，可使回歸之陽(yáng)氣得所依附以防其耗散；心陰與心陽(yáng)，互根互用，協(xié)調(diào)平衡，則心氣沖和暢達(dá)。澤蘭，活血化瘀，行水消腫。蘇木，“補(bǔ)心散瘀”(《醫(yī)林纂要》)。蘇木、澤蘭活血通脈，尤為心衰血瘀而設(shè)，共為佐藥。葶藶子，苦降辛散，“故能破滯開結(jié)，定逆止喘，利水消腫”(《本草正義》)。澤瀉，性能瀉水，與葶藶相配利水消腫之功尤強(qiáng)，二者相合為使。由此可見，方中諸藥，補(bǔ)瀉同施、寒溫并用、攻守有序，體現(xiàn)出陰陽(yáng)并補(bǔ)、氣血并調(diào)、標(biāo)本并治的特點(diǎn)，與心衰陰陽(yáng)兩虛、心脈瘀滯之病機(jī)絲絲相扣。也符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于慢性心衰的修復(fù)性治療策略。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：
取淫羊藿15g、黃芪25g、玉竹5g、麥冬15g、蘇木5g、澤蘭15g、葶藶子5g、澤瀉15g，黃芪為生黃芪、玉竹為炒玉竹、葶藶子為炒葶藶子。
a：稱取淫羊藿、黃芪、蘇木、澤蘭、澤瀉，經(jīng)乙醇回流提取，所加乙醇量是原料藥重量的12倍量，乙醇的體積濃度為60％，分2次回流提取，每次加乙醇量是原料藥重量的6倍量，每次回流2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，得醇提濃縮液；
b：稱取玉竹、麥冬、葶藶子，與步驟a中經(jīng)體積濃度為60％的乙醇回流提取后的藥渣合并，經(jīng)水煎煮，加水的總量是原料藥重量的20倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水量是原料藥重量的10倍，合并兩次水煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至60℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度為1g/ml，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50％，攪拌均勻，放置48小時(shí)后離心，棄去沉淀，離心速度為4800轉(zhuǎn)/分，回收離心液，與步驟b中醇提濃縮液合并，減壓濃縮后在70℃條件下進(jìn)行真空干燥，得浸膏干粉；
c：將步驟b中的浸膏干粉進(jìn)行濕法制粒，干燥，加淀粉制備成片劑。
實(shí)施例2：
取淫羊藿25g、黃芪15g、玉竹15g、麥冬5g、蘇木15g、澤蘭5g、葶藶子15g、澤瀉5g，黃芪為生黃芪、玉竹為炒玉竹、葶藶子為炒葶藶子。
a：稱取淫羊藿、黃芪、蘇木、澤蘭、澤瀉，經(jīng)乙醇回流提取，所加乙醇量是原料藥重量的12倍量，乙醇的體積濃度為60％，分2次回流提取，每次加乙醇量是原料藥重量的6倍量，每次回流2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，得醇提濃縮液；
b：稱取玉竹、麥冬、葶藶子，與步驟a中經(jīng)體積濃度為60％的乙醇回流提取后的藥渣合并，經(jīng)水煎煮，加水的總量是原料藥重量的20倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水量是原料藥重量的10倍，合并兩次水煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至60℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度為1g/ml，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50％，攪拌均勻，放置48小時(shí)后離心，棄去沉淀，離心速度為4800轉(zhuǎn)/分，回收離心液，與步驟b中醇提濃縮液合并，減壓濃縮后在70℃條件下進(jìn)行真空干燥，得浸膏干粉；
c：將步驟b中的浸膏干粉進(jìn)行濕法制粒，干燥，加糊精制備成顆粒劑。
實(shí)施例3：
取淫羊藿20g、黃芪20g、玉竹10g、麥冬10g、蘇木10g、澤蘭10g、葶藶子10g、澤瀉10g，黃芪為生黃芪、玉竹為炒玉竹、葶藶子為炒葶藶子。
a：稱取淫羊藿、黃芪、蘇木、澤蘭、澤瀉，經(jīng)乙醇回流提取，所加乙醇量是原料藥重量的12倍量，乙醇的體積濃度為60％，分2次回流提取，每次加乙醇量是原料藥重量的6倍量，每次回流2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，得醇提濃縮液；
b：稱取玉竹、麥冬、葶藶子，與步驟a中經(jīng)體積濃度為60％的乙醇回流提取后的藥渣合并，經(jīng)水煎煮，加水的總量是原料藥重量的20倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水量是原料藥重量的10倍，合并兩次水煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至60℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度為1g/ml，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50％，攪拌均勻，放置48小時(shí)后離心，棄去沉淀，離心速度為4800轉(zhuǎn)/分，回收離心液，與步驟b中醇提濃縮液合并，減壓濃縮后在70℃條件下進(jìn)行真空干燥，得浸膏干粉；
c：將步驟b中的浸膏干粉進(jìn)行濕法制粒，干燥，加淀粉制備成膠囊劑。
實(shí)施例4：
取淫羊藿20g、黃芪20g、玉竹10g、麥冬10g、蘇木10g、澤蘭10g、葶藶子10g、澤瀉10g，黃芪為生黃芪、玉竹為炒玉竹、葶藶子為炒葶藶子。
a：稱取淫羊藿、黃芪、蘇木、澤蘭、澤瀉，經(jīng)乙醇回流提取，所加乙醇量是原料藥重量的12倍量，乙醇的體積濃度為60％，分2次回流提取，每次加乙醇量是原料藥重量的6倍量，每次回流2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇，得醇提濃縮液；
b：稱取玉竹、麥冬、葶藶子，與步驟a中經(jīng)體積濃度為60％的乙醇回流提取后的藥渣合并，經(jīng)水煎煮，加水的總量是原料藥重量的20倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，每次加水量是原料藥重量的10倍，合并兩次水煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至60℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度為1g/ml，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50％，攪拌均勻，放置48小時(shí)后離心，棄去沉淀，離心速度為4800轉(zhuǎn)/分，回收離心液，與步驟b中醇提濃縮液合并，加蔗糖制備成口服液，命名為黃羊健心飲。
實(shí)施例5：臨床研究
黃羊健心飲采用益陰助陽(yáng)活血法，系我們?cè)谂R床上治療心衰病人的基本法則，關(guān)于本發(fā)明治療臨床上慢性心衰病人，我們已進(jìn)行了反復(fù)多年的驗(yàn)證。同時(shí)，已具體完成的臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證了本方防治慢性心衰的科學(xué)內(nèi)涵。
5.1診斷標(biāo)準(zhǔn)：
5.1.1心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)陳灝珠主譯《臨床心臟病學(xué)》第233頁(yè)診斷標(biāo)準(zhǔn)制定。主要標(biāo)準(zhǔn)：夜間陣發(fā)性呼吸困難或端坐呼吸；勞累時(shí)呼吸困難和咳嗽；頸靜脈擴(kuò)張；濕哆音；心臟肥大；急性肺水腫；第三心音奔馬律；靜脈壓升高(>16cmh20)(2.1kpa)；胸水。次要標(biāo)準(zhǔn):踝部水腫；夜間咳嗽；肝腫大；肺活量比最大值降低1/3；心動(dòng)過速(心率)12obpm)。主要或次要標(biāo)準(zhǔn):治療5天內(nèi)體重下降)4.5kg；確診必須同時(shí)具有以上2項(xiàng)主要標(biāo)準(zhǔn)或者具有1項(xiàng)主要和2項(xiàng)次要標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.2中醫(yī)陰陽(yáng)兩虛、心脈瘀滯證的辨證標(biāo)準(zhǔn)
主癥：①心悸②氣喘；次癥：①倦怠乏力、畏寒肢冷、口唇青紫、舌質(zhì)淡、舌體胖大或有齒痕、脈沉細(xì)、沉遲；②胸部悶痛、面晦、兩顴黯紅、汗出膚粘、舌質(zhì)暗紅或紫暗或有瘀斑、脈細(xì)數(shù)無力或結(jié)代；③面浮肢腫、小便短少、頸脈怒張、咳吐泡沫白痰或帶血、舌苔白滑；④胸部憋氣、夜間不能平臥、口干、煩燥不安。＊需具備主癥并同時(shí)具備次癥兩項(xiàng)以上者(包括兩項(xiàng))，符合中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.3、排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性心功能不全。②心功能ⅰ級(jí)或ⅳ級(jí)者。③伴有心源性休克，或致命性心律失常、ⅱ度ⅱ型以上房室傳導(dǎo)阻滯、心肌梗塞的患者，心力衰竭合并未控制的感染及有其它影響心衰療效判定的。④合并有肝、腎和造血系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)疾病，精神病者等。⑤妊娠或哺乳期婦女，對(duì)本藥過敏者。⑥一個(gè)月內(nèi)曾應(yīng)用其他試驗(yàn)藥品者。
5.2實(shí)驗(yàn)分組：選擇80例慢性心力衰竭(陰陽(yáng)兩虛、心脈瘀滯證)患者，隨機(jī)分為治療組40例與對(duì)照組40例。兩組均予西醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)治療，治療組加服本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲。治療四周后，系統(tǒng)觀察并比較兩組患者治療前后及兩組之間心功能的臨床療效；中醫(yī)證候積分及心衰總積分(lee氏心衰計(jì)分)；血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)(lvedd、lvesd、lvef)；6min步行距離(6mwd)；nt-probnp；明尼蘇達(dá)心衰生活質(zhì)量評(píng)分等。
5.3結(jié)果：
5.3.1心功能療效比較
表1顯示治療組患者心功能改善的總有效率為87.5％，對(duì)照組總有效率為60.0％，兩組經(jīng)卡方檢驗(yàn)比較(p<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明治療組心功能療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。
表1兩組患者心功能療效比較(例)
△與對(duì)照組比較x2＝9.074，p＝0.028。
5.3.2心衰總積分(lee氏心衰計(jì)分)比較
表2顯示治療前，兩組患者心衰總積分無顯著差異(p>0.05)。治療后，兩組心衰總積分顯著降低(p<0.01)，且治療組低于對(duì)照組(p<0.05)
表2兩組患者心衰總積分(lee氏心衰計(jì)分)總積分比較
與本組治療前比較#p＜0.01△與對(duì)照組治療后比較p＜0.05
5.3.3中醫(yī)證候總積分比較。
表3顯示兩組治療前中醫(yī)證候總積分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，具有可比性；治療組治療前后自身對(duì)比，對(duì)照組治療前后自身對(duì)比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；兩組治療后中醫(yī)證候總積分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療組優(yōu)于對(duì)照組(p<0.05)。
表3兩組患者中醫(yī)證候總積分比較
與本組治療前比較#p<0.01△與對(duì)照組治療后比較p<0.05
5.3.4心臟超聲結(jié)果比較
兩組患者療前l(fā)vedd、lvesd、lvef值相近，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。組內(nèi)比較，治療組經(jīng)治療后lvedd值較治療前下降(p<0.01)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組治療前后lvedd值無顯著性差異(p>0.05)；組內(nèi)比較，治療組經(jīng)治療后lvesd值較治療前下降(p<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組治療前后lvesd值無顯著性差異(p>0.05)；組內(nèi)比較，兩組患者經(jīng)治療后lvef值均較本組治療前增加(p<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間比較，治療組治療前后lvef值改善幅度優(yōu)于對(duì)照組，差別有著性(p<0.05)。具體見表4。
表4兩組患者治療前后心臟超聲結(jié)果比較
*與本組治療前比較，p<0.05；#與本組治療前比較，p＜0.01；△與對(duì)照組治療后比較p<0.05
5.3.5兩組患者6分鐘步行距離(6mwd)比較
表5顯示，兩組患者療前6分鐘步行距離(6mwd)相近，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。組內(nèi)比較，治療組經(jīng)治療后6mwd值較治療前增加(p<0.01)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組治療后6mwd值較治療前增加，有顯著性差異(p<0.05)；組間比較，治療組治療前后6mwd值改善幅度優(yōu)于對(duì)照組，差別有著性(p<0.05)。
表5兩組患者6分鐘步行距離(m)比較
*與本組治療前比較，p<0.05；#與本組治療前比較，p＜0.01；△與對(duì)照組治療后比較p<0.05
5.3.6血漿腦鈉肽前體(nt-probnp)比較
表6顯示，兩組患者療前血漿腦鈉肽前體(nt-probnp)相近，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。組內(nèi)比較，兩組患者經(jīng)治療后血漿nt-probnp值較治療前下降(p<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后組間比較，治療組治療后血漿nt-probnp水平下降幅度明顯優(yōu)于對(duì)照組(p<0.05)，差別有顯著性。
表6兩組患者治療前后血漿nt-probnp水平比較
*與本組治療前比較，p<0.05；△與對(duì)照組治療后比較p<0.05
5.3.7兩組患者生活質(zhì)量評(píng)分比較
表7顯示兩組患者分別進(jìn)行治療前與治療后生活質(zhì)量比較,兩組治療后較治療前生活質(zhì)量評(píng)分均減低(p<0.01)，表明兩組的治療對(duì)生活質(zhì)量的影響有顯著差異；治療組生活質(zhì)量評(píng)分的降低幅度優(yōu)于對(duì)照組(p<0.05)，差異有顯著性。
表7兩組患者生活質(zhì)量評(píng)分比較
*與本組治療前比較，p<0.05；#與本組治療前比較，p＜0.01；△與對(duì)照組治療后比較p<0.05
研究表明標(biāo)準(zhǔn)和優(yōu)化抗心力衰竭治療的基礎(chǔ)之上聯(lián)合使用本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲口服，可進(jìn)一步改善慢性心力衰竭患者的心功能，降低心衰總積分及中醫(yī)證候總積分，提高左室射血分?jǐn)?shù)，改善患者6min步行距離，提高患者的生活質(zhì)量，降低患者血漿nt-probnp水平。本研究揭示，本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲可能是通過修復(fù)受損衰竭的心肌細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)心室重塑，降低左室壓力，改善心室功能，從而使血漿nt-probnp水平下降，使患者生活質(zhì)量和活動(dòng)能力得到提高。
實(shí)施例6：本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究
通過建立慢性心力衰竭的動(dòng)物模型，進(jìn)行在體及體外實(shí)驗(yàn)，從整體-細(xì)胞-分子多個(gè)水平上闡明本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲改善心衰的作用機(jī)理。
6.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：
實(shí)驗(yàn)用成年雄性sd大鼠，spf級(jí)，均為雄性，體質(zhì)量(270±20)g,共計(jì)80只。由上海思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)碼：scxk(滬)2013-0006
6.2實(shí)驗(yàn)器械：
千分之一電子天平(ar2202cn，奧豪斯儀器上海有限公司制造)；
萬分之一電子天平(cpa225d，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；
超聲波清洗器(kq-500型，昆山市超聲儀器有限公司)；
電熱鼓風(fēng)干燥箱(gzx-9240mbe，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；
臺(tái)式冷凍離心機(jī)(microcl21r)；
tanon5500全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)；
ts-3d脫色搖床；bio-radpowerpacbasicpowersupply；
microcl21r微量臺(tái)式冷凍離心機(jī)(thermofisherscientific)。
彩色超聲監(jiān)測(cè)儀(型號(hào)：vevo2100)
bl-420s生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)
6.3實(shí)驗(yàn)過程：
6.3.1慢性心力衰竭的模型建立
采用改良的異丙腎上腺素(iso)皮下注射建立sd大鼠心力衰竭模型，取體質(zhì)量(270±20)g的雄性sd大鼠80只，將大鼠按體重順序編號(hào)，隨機(jī)分為2組：正常組(ns)10只，模型組(iso)組70只。ns組皮下注射生理鹽水0.25ml，iso組皮下注射iso(170mg/kg，共兩次，間隔24h)。
6.3.2分組及給藥
造模完成后，同室常規(guī)飼養(yǎng)4周后，行心臟彩超檢測(cè)，剔除左室射血分?jǐn)?shù)(lvef)＞50％的iso組大鼠，lvef＜50％的大鼠即為造模成功的心衰大鼠。在造模期間，死亡8只sd大鼠，2只sd大鼠lvef＞50％，被剔除。最后余60只造模成功的sd大鼠，將合格的心衰大鼠隨機(jī)均分到5組，每組12只：心衰模型組(ns10ml·kg-1·d-1)、美托洛爾組(琥珀酸美托洛爾7.6mg·kg-1·d-1)、益陰助陽(yáng)低劑量組(生藥4.17g·kg-1·d-1)、益陰助陽(yáng)中劑量組(生藥8.33g·kg-1·d-1)和益陰助陽(yáng)高劑量組(生藥16.6g·kg-1·d-1)；分別灌胃給藥8周。在給藥治療的第一、二周，心衰模型組死亡3只，低劑量治療組及中劑量治療組各死亡2只，從第三周開始，sd大鼠生命體征趨于穩(wěn)定，無死亡。故而，在8周治療結(jié)束時(shí)，各組sd大鼠存活情況：正常組n＝10，心衰模型組n＝9、美托洛爾組n＝12、益陰助陽(yáng)低劑量組n＝10、益陰助陽(yáng)中劑量組n＝10、益陰助陽(yáng)高劑量組n＝12。再次行心臟彩超檢測(cè)，觀察各項(xiàng)指標(biāo)。
6.3.3心臟彩超檢測(cè)
將大鼠氣體麻醉(氧氣+異氟烷麻醉)，4％誘導(dǎo)，1-1.5％維持；固定于仰臥位，剔除胸毛，采用visualsonicsvevo2100超聲心動(dòng)圖檢測(cè)設(shè)備(探頭頻率：21mhz)，以二維成像模式在左室短軸切面位于乳頭肌水平測(cè)量相關(guān)指標(biāo)，測(cè)定值均為5個(gè)心動(dòng)周期測(cè)定的均值。
6.3.4血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)
各組大鼠按設(shè)定藥物劑量灌胃給藥8周后，腹腔注射麻醉，仰臥位固定四肢，切開頸部，分離右頸總動(dòng)脈約1.5cm，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，再經(jīng)頸總動(dòng)脈插入充滿肝素生理鹽水的導(dǎo)管，導(dǎo)管上連接壓力換能器，將導(dǎo)管插入左室腔。測(cè)量各組大鼠左心室收縮壓(lvsp)、左心室舒張末期壓(lvedp)、左心室內(nèi)壓最大上升和下降速率(+dp/dtmax和-dp/dtmax)，所有信息由bl-420s生物機(jī)能檢測(cè)系統(tǒng)記錄并采用bl-newcentury軟件進(jìn)行分析。檢測(cè)結(jié)束頸動(dòng)脈放血處死所有動(dòng)物，所取血液37℃水浴靜置2小時(shí)后，離心(3000rpm15min)，取上清，用于神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)檢測(cè)。取大鼠心臟，冰生理鹽水沖洗，濾紙吸干，沉重。在剪去右心室游離壁，保留左心室及室間隔，稱取左心室重量(lvm)，并計(jì)算左心室重量指數(shù)lvm(lvm/bw)。剪取的心臟左室部分凍存與-80℃冰箱，待提取蛋白及rna以檢測(cè)其他指標(biāo)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的相關(guān)規(guī)程嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用和操作指南(中國(guó)科學(xué)技術(shù)部2006年頒布)以及本院制定的相關(guān)倫理規(guī)則，旨在減輕動(dòng)物所受痛苦并減少動(dòng)物的使用數(shù)量。
6.3.5病理分析
心臟標(biāo)本于10％的福爾馬林中固定24h(4℃)常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋，沿左室長(zhǎng)軸線每隔1mm橫斷面切取數(shù)張4μm厚的切片，做he和masson染色。
(1)固定：4％多聚甲醛固定心臟。
(2)脫水和包埋：石蠟包埋切片部分實(shí)驗(yàn)送南京醫(yī)科大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室具體操作。
(3)he染色：將空白片于60℃烘箱烘烤30分鐘，后放在50℃二甲苯ⅰ中浸泡30分鐘，再于二甲苯ⅱ中浸泡10分鐘，充分脫蠟。逐級(jí)經(jīng)無水乙醇，95％乙醇溶液，85％乙醇溶液，75％乙醇溶液，50％乙醇溶液，直至蒸餾水以及pbs浸泡，每次浸泡3分鐘。取各組樣本各一片，浸泡于蘇木精(hematoxylin)中3分鐘，流水沖洗未結(jié)合的染料。再浸泡于伊紅(eosin)中3分鐘，流水沖洗未結(jié)合的染料。在標(biāo)本上滴加中性樹脂封片，封片鏡檢，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(4)masson染色：石蠟切片脫蠟至水；依次自來水和蒸餾水洗；用regaud蘇木精染液或weigert蘇木精液染核5-10min；充分水洗；蒸餾水洗；用masson麗春紅酸性復(fù)紅液5-10min；以2％冰醋酸水溶液浸洗片刻；1％磷鉬酸水溶液分化3-5min；不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍(lán)或光綠液染5min；以0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻；95％酒精、無水酒精、二甲苯透明、中性樹膠封固。
光學(xué)顯微鏡下觀察心臟的下列病變：①心肌纖維有無肥大、變性、壞死，間質(zhì)有無充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、結(jié)締組織增生；②心內(nèi)膜、心外膜有無充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
6.3.6神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子檢測(cè)
取大鼠血清，進(jìn)行羥脯氨酸、肌酸激酶(ck)、去甲腎上腺素(ne)、醛固酮(ald)、大鼠腦鈉素(bnp)、大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(camk2)、大鼠內(nèi)皮素1(et-1)、大鼠血管緊張素ⅱ(angⅱ)水平的測(cè)定，具體操作按試劑盒說明進(jìn)行。
6.3.7rt-pcr法檢測(cè)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子mrna水平的變化
6.3.7.1心肌組織總rna的提?。合蚋鞑煌M的心臟中加入trizol(500-100mg組織加入1mltrizol)，渦旋混勻，室溫靜置5min后，離心(12000rpm5min)，棄沉淀；按300μl氯仿/mltrizol加入氯仿，用力振蕩試管15s后，室溫靜置10min，離心(12000g15min)，吸取上層水相，移至離心管中后，按0.5ml異丙醇/mltrizol加入異丙醇，混勻，室溫靜置10min，離心(14800g10min)后，棄上清；按1ml75％乙醇/mltrizol加入75％乙醇，渦旋振蕩充分混勻樣品、懸浮沉淀后，離心(14800g5min)后，盡量棄上清，室溫干燥10min；用適量(50μl)的depc處理水溶解rna樣品后，分裝，凍存。
6.3.7.2rna濃度的計(jì)算：各組吸取1μlrna,thermo公司的rna濃度測(cè)定軟件。于260nm，280nm讀相取應(yīng)的吸光度值od值。od260，280分別代表核酸，蛋白質(zhì)的吸光度值。od260/280的值用來顯示rna的質(zhì)量，一般1.8-2.0之間質(zhì)量較好，小于1.8說明有蛋白質(zhì)等有機(jī)物污染，大于2.2的說明rna被水解成了單核苷酸。rna的濃度值＝1μl/(od260)×稀釋倍數(shù)計(jì)算。
6.3.7.3配置逆轉(zhuǎn)錄體系
6.3.7.4配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
6.3.7.5結(jié)果分析：real-timepcr定量分析軟件自動(dòng)生成擴(kuò)增動(dòng)力曲線和融解曲線。在擴(kuò)增動(dòng)力曲線中,ct值代表擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù),模板dna量越多,熒光達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)越少,即ct值越??；δδct＝(ct目的-ct內(nèi)參)處理組-(ct目的-ct內(nèi)參)對(duì)照組
6.3.8“本發(fā)明”含藥血清制備
sd大鼠50只，分5組，每組10只，分別口服美托洛爾、“本發(fā)明”低劑量、“本發(fā)明”中劑量、“本發(fā)明”高劑量及生理鹽水。給藥3天后，腹主動(dòng)脈取血，離心，制備含藥血清。
6.3.9sd大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞提取
出生1天的sd大鼠的乳鼠，放入75％的乙醇中醉死，取心臟后，將心臟放入d-hanks中清洗，剪去上1/3，放入15ml的離心管中，加入2ml的d-hank清洗后棄上清，將心臟剪碎為1mm3的小塊；向離心管中加入6ml消化液，37℃水浴箱消化5min，棄上清；再向離心管中加入5ml消化液，37℃水浴箱消化10min,每隔2min振蕩、吹打；將上清吸出移至新的離心管中，并加入2mlimdm終止消化；再次向余下的沉淀中再次加入5ml消化液，37℃水浴箱消化10min，如此重復(fù)兩邊。將三次收集的上清過濾至新的離心管中離心(1500rpm10min)，棄上清。向沉淀中加入8mld-hanks后吹打均勻，再次離心(1500rpm10min)，棄上清。加入10mlimdm吹打均勻，移至培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24h后給藥培養(yǎng)。
6.3.10異丙腎上腺素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組
從正常大鼠乳鼠心肌利用酶消化和差速貼壁方法分離得到原代心肌細(xì)胞，體外培養(yǎng)后，用對(duì)心肌細(xì)胞有害的異丙腎上腺素(iso)，造成體外心衰模型，正常組心肌細(xì)胞不加異丙腎上腺素(iso)。
實(shí)驗(yàn)共分六組：①正常組②模型組③美托洛爾組④“本發(fā)明”低劑量組⑤“本發(fā)明”中劑量組⑥“本發(fā)明”高劑量組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),收集心肌細(xì)胞及培養(yǎng)上清液用于指標(biāo)測(cè)定。各組設(shè)8孔,重復(fù)3次。
6.3.11免疫印跡法(westernblot)分析不同處理組心肌細(xì)胞抗凋亡蛋白的表達(dá)變化
免疫印跡法(westernblot)檢測(cè)分析β1受體mrna表達(dá)的變化。
利用westernblotting方法，分析本發(fā)明對(duì)損傷模型原代心肌細(xì)胞pka及磷酸化的pka變化
利用westernblotting方法，分析本發(fā)明對(duì)損傷模型原代心肌細(xì)胞creb的磷酸化程度、creb、pka的rsubunit和pka的csubunit的表達(dá)的影響
考察“本發(fā)明”對(duì)心肌細(xì)胞非經(jīng)典的β1ar-ca2+-camkⅱ信號(hào)通路的影響
考察“本發(fā)明”在bcl-2及bax凋亡抗體的表達(dá)
6.3.12本發(fā)明在抗凋亡方面作用的表達(dá)
hochest-pi雙染考察凋亡作業(yè)
應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞群凋亡情況
6.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
6.4.1考察異丙腎上腺素致心衰大鼠的超聲心動(dòng)圖形態(tài)參數(shù)、血流動(dòng)力學(xué)、組織形態(tài)
學(xué)及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子的相關(guān)指標(biāo)
在建立sd大鼠心衰模型后，各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)、組織形態(tài)學(xué)及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子相關(guān)指標(biāo)受到了不同程度的損傷，在給予對(duì)癥治療后，各指標(biāo)都得到了不同程度的改善。
對(duì)異丙腎上腺素致心衰大鼠的超聲心動(dòng)圖形態(tài)參數(shù)的影響
表8.各組大鼠超聲心動(dòng)圖形態(tài)參數(shù)比較a
#與正常組比較，p＜0.05；##與正常組比較，p＜0.01；*與模型組比較，p＜0.05；**與模型組比較，p＜0.01
如表8所示，在第8周治療末，各組大鼠行超聲心動(dòng)圖檢查，模型組大鼠在注射異丙腎上腺素造模后出現(xiàn)明顯的心衰表現(xiàn)，左室舒張末期內(nèi)徑(lvdd)、左室收縮末期內(nèi)徑(lvds)水平顯著上升，在給予“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”治療后，lvdd及l(fā)vds得到不同程度的改善；左室舒張末期室間隔厚度(lvsd)、左室收縮末期室間隔厚度(lvss)水平顯著下降，在給予“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”治療后，lvsd及l(fā)vss得到不同程度的改善。
表9.各組大鼠超聲心動(dòng)圖形態(tài)參數(shù)比較b
#與正常組比較，p＜0.05；##與正常組比較，p＜0.01；*與模型組比較，p＜0.05；**與模型組比較，p＜0.01
如表9所示，在第8周治療末，各組大鼠行超聲心動(dòng)圖檢查，模型組大鼠在注射異丙腎上腺素造模后出現(xiàn)明顯的心衰表現(xiàn)，左室舒張末期后壁厚度(lvpwd)、左室收縮末期后壁厚度(lvpws)、左心室射血分?jǐn)?shù)(ef)及左室短軸縮短率(fs)的水平顯著下降，在給予“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”治療后，lvpwd、lvpws、ef及fs得到不同程度的改善。
6.4.2對(duì)異丙腎上腺素致心衰大鼠的血流動(dòng)力學(xué)的影響
如表10-1、10-2所示，在第8周治療末，模型組大鼠在注射異丙腎上腺素造模后出現(xiàn)明顯的心衰表現(xiàn)，左心室末期舒張壓(lvedp)的水平顯著上升；左心室末期收縮壓(lvsp)、左心室壓力最大上升速率(+dp/dtmax)及左心室壓力最大下降速率(-dp/dtmax)的水平明顯下降；心率(hr)與正常組相比，模型組心率變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著性差異(p＞0.05)。給予“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”治療后，上述指標(biāo)得到了不同程度的改善。lvsp從模型組的93.33±15.85恢復(fù)到“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”高劑量的118.63±22.94；lvedp從模型組的25.82±7.14恢復(fù)到了“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”高劑量的15.76±7.00；-dp/dtmax從模型組的-2400.34±526.14恢復(fù)到了“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”高劑量的-3495.13±553.87；+dp/dtmax從模型組的2664.83±571.65恢復(fù)到了“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”高劑量的3462.74±463.01
表10-1.六組大鼠心臟功能指標(biāo)數(shù)據(jù)1
表10-2.六組大鼠心臟功能指標(biāo)數(shù)據(jù)2
#與正常組比較，p＜0.05；##與正常組比較，p＜0.01；*與模型組比較，p＜0.05；**與模型組比較，p＜0.01
6.4.3對(duì)心衰大鼠的心肌組織病理變化的影響
masson染色結(jié)果顯示，正常組未見膠原組織明顯增生。模型組心肌細(xì)胞周圍膠原組織明顯增多，部分心肌組織被膠原組織取代，出現(xiàn)心肌纖維化，左心室心肌間質(zhì)纖維膠原明顯增多、增粗。各治療組心肌細(xì)胞周圍膠原組織含量和纖維化程度較模型組明顯減弱。
he染色結(jié)果顯示，正常組心肌細(xì)胞排列整齊，心肌纖維呈短柱狀，可見橫紋。心肌細(xì)胞核呈卵圓形、較大，著色較淺，位于肌纖維中央，未見心肌細(xì)胞肥大現(xiàn)象。模型組可見肌纖維及間質(zhì)發(fā)生凋亡或壞死，心肌纖維增粗、拉長(zhǎng)，胞核著色深，細(xì)胞排列疏松，橫紋不清楚或消失，局部組織纖維化，間質(zhì)內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等。在予以“本發(fā)明”不同劑量給藥治療后，其心肌細(xì)胞肥大、細(xì)胞變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等癥狀較模型組得到了不同程度的改善，并呈一定劑量依賴關(guān)系。
6.4.4對(duì)異丙腎上腺素致心衰大鼠的彩超結(jié)果的影響
各組大鼠給藥8周后，超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示，模型組大鼠左心腔擴(kuò)大，射血分?jǐn)?shù)降低，而本發(fā)明組對(duì)心臟擴(kuò)大及功能下降均有保護(hù)作用。
6.4.5本發(fā)明對(duì)異丙腎上腺素致心衰大鼠血清中神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響
如表11-1、11-2所示，與正常組相比，模型組的ne、ald、bnp、et-1、angⅱ、camk2、ck、羥脯氨酸水平均顯著升高。與模型組相比，給予“本發(fā)明”治療組的大鼠，其血清中的na/ne、ald、bnp、et-1、angⅱ、camk2、ck、羥脯氨酸水平均顯著下降。
表11-1.各組大鼠血清中各指標(biāo)的含量1
#與正常組比較，p＜0.05；##與正常組比較，p＜0.01；*與模型組比較，p＜0.05；**與模型組比較，p＜0.01
表11-2.各組大鼠血清中各指標(biāo)的含量2
#與正常組比較，p＜0.05；##與正常組比較，p＜0.01；*與模型組比較，p＜0.05；**與模型組比較，p＜0.01
6.4.6考察異丙腎上腺素致心衰大鼠的mmp-2&mmp-9及對(duì)心肌β1受體mrna水平的變化
通過pcr技術(shù)，驗(yàn)證了本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲(本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲)的療效。與正常組相比，模型組心肌組織mmp-2及mmp-9的mrna表達(dá)水平現(xiàn)明顯升高(p<0.01)、心肌組織β1受體的mrna表達(dá)水平明顯降低(p<0.05)；通過給藥治療，心肌損傷后的mmp-2及mmp-9的mrna表達(dá)水平、心肌損傷后的β1受體的mrna表達(dá)水平得到了不同程度的改善。
6.4.7考察對(duì)異丙腎上腺素致心衰大鼠心肌細(xì)胞凋亡及心肌細(xì)胞經(jīng)典的β1ar-camp-pka-creb信號(hào)通路以及非經(jīng)典的β1ar-ca2+-camkⅱ信號(hào)通路的影響
通過應(yīng)用免疫印跡法(westernblot)檢測(cè)β1ar、心肌細(xì)胞內(nèi)的pka、creb的磷酸化程度、creb、pka的rsubunit和pka的csubunit、camkii及相關(guān)凋亡蛋白bcl-2、bak及bax的蛋白表達(dá)。
異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠原代心肌細(xì)胞損傷后，與正常組相比，模型組心肌細(xì)胞表面心肌表面β1受體的mrna表達(dá)水平、心肌細(xì)胞內(nèi)的pka磷酸化活性及心肌細(xì)胞的bcl-2的表達(dá)降低，心肌細(xì)胞內(nèi)的creb磷酸化程度、心肌細(xì)胞內(nèi)的camkii表達(dá)、心肌細(xì)胞的bak表達(dá)及心肌細(xì)胞的bax的表達(dá)顯著增高。在給藥治療后，各項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)都得到了不同程度的改善。而對(duì)creb、pka的rsubunit和pka的csubunit的表達(dá)無影響。
經(jīng)異丙腎上腺素誘導(dǎo)，大鼠原代心肌細(xì)胞損傷后，與正常組相比，模型組心肌細(xì)胞內(nèi)的creb磷酸化程度顯著增強(qiáng)，而美托洛爾組及本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲含藥血清高劑量組均可顯著降低心肌細(xì)胞損傷后creb的磷酸化程度，而對(duì)creb、pka的rsubunit和pka的csubunit的表達(dá)無影響。
治療結(jié)束后，各組大鼠原代心肌細(xì)胞總蛋白提取后，與正常組相比，模型組心肌細(xì)胞的bcl-2表達(dá)顯著降低；與模型組比較，美托洛爾組及“本發(fā)明”低中高劑量組均可增強(qiáng)bcl-2的表達(dá)，并呈劑量依賴性。與正常組相比，模型組心肌細(xì)胞的bak表達(dá)顯著增高；與模型組比較，美托洛爾組及“本發(fā)明”中高劑量組均可降低bak的表達(dá)。與正常組相比，模型組心肌細(xì)胞的bax表達(dá)顯著增高；與模型組比較，美托洛爾組及“本發(fā)明”中高劑量組均可降低bax的表達(dá)。
6.4.8考察“本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲”及方中四種主要活性成分對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響
應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，annexin-v/pi雙染法、westernblot法及hochest-pi雙染法考察凋亡相關(guān)指標(biāo)。所有結(jié)果表明，經(jīng)異丙腎上腺素誘導(dǎo)損傷的原代心肌細(xì)胞，在給予藥物治療后，抗凋亡的表達(dá)增強(qiáng)。
正常組未見凋亡細(xì)胞，模型組凋亡細(xì)胞為20.2％。與模型組比較，美托洛爾陽(yáng)性藥對(duì)照組及本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲含藥血清組凋亡率都有不同程度的下降。
綜上所述，臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致，雙雙印證了本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃羊健心飲在治療慢性心衰中的療效。同時(shí)，全方標(biāo)本兼治，從多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)治療心功能不全，體現(xiàn)了中藥在治療慢性心衰方面的綜合優(yōu)勢(shì)，與現(xiàn)代心力衰竭的修復(fù)性治療理念相吻合。