本發(fā)明涉及抗氧化成分提取技術領域，尤其涉及油茶籽皮中抗氧化成分提取物及其提取方法和應用。

背景技術：

油茶(camelliaoleiferaabel.)，別名茶子樹、茶油樹、白花茶，山茶科山茶屬常青小喬木，是我國特有的木本油料樹種。油茶與油橄欖、油棕、椰子并稱為世界四大木本油料植物，與烏桕、油桐和核桃并稱為我國四大木本油料植物。油茶具有種植成活率高，不與糧棉爭地的優(yōu)勢，在經(jīng)濟、社會、生態(tài)等各方面效益顯著，對維護國家糧油安全、發(fā)展南方山區(qū)經(jīng)濟、改善國民食用油結構等均具有重大意義，受到國家的高度重視，發(fā)展前景廣闊。

現(xiàn)階段，對油茶資源的利用絕大部分集中在茶籽榨取食用油上，茶油富含不飽和脂肪酸，是媲美橄欖油的優(yōu)質油料，在中醫(yī)上對燒燙傷也有很好的療效。茶籽皮是指茶籽榨油前除去的內外種皮，一般將其用作動植物飼料或食用菌的培養(yǎng)基，也可用于提取茶皂素及制備活性炭等化工原料。但總體來說，目前為止油茶籽皮的利用程度低，所產(chǎn)生的經(jīng)濟價值不高。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物及其提取方法和應用，采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度；將所述抗氧化成分應用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟價值。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，包括以下步驟：

(1)將油茶籽皮與第一提取劑混合，進行第一提取，將所得第一提取物料進行固液分離，得到第一提取固體物料；

所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷；

(2)將所述步驟(1)中第一提取固體物料與第二提取劑混合，進行第二提取，將所得第二提取物料進行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

所述第二提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(3)將所述步驟(2)中第二提取固體物料與第三提取劑混合，進行第三提取，將所得第三提取物料進行固液分離，得到第三提取液體物料；

所述第三提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(4)將所述步驟(2)中第二提取液體物料與所述步驟(3)中第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；

(5)將所述步驟(4)中純化物料進行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中油茶籽皮與第一提取劑的質量比為1：(1.5～2.5)。

優(yōu)選的，所述步驟(1)中第一提取的溫度為45～55℃；第一提取的時間為3～5h。

優(yōu)選的，所述步驟(2)中第一提取固體物料與第二提取劑的質量比為1：(5～10)。

優(yōu)選的，所述步驟(3)中第二提取固體物料與第三提取劑的質量比為1：(3～5)。

優(yōu)選的，所述步驟(4)中大孔樹脂的孔徑為0.3～1.25mm。

優(yōu)選的，所述步驟(4)中純化采用梯度洗脫，所述梯度洗脫所采用的洗脫劑的體積為9～11bv。

優(yōu)選的，所述步驟(5)中濃縮是將純化物料濃縮至所述純化物料原體積的6～8％。

本發(fā)明提供了上述技術方案所述提取方法提取得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明提供了上述技術方案所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物在化妝品中的應用。

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，將油茶籽皮與第一提取劑混合，進行第一提取，將所得第一提取物料進行固液分離，得到第一提取固體物料；將所述第一提取固體物料與第二提取劑混合，進行第二提取，將所得第二提取物料進行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；將所述第二提取固體物料進行與第三提取劑混合，進行第三提取，將所得第三提取物料進行固液分離，得到第三提取液體物料；將所述第二提取液體物料與所述第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；將所述純化物料進行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度。實施例中實驗結果表明，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較高的總酚含量，達251.84mggae/g；具有較好的抗氧化性，自由基半數(shù)抑制率(ic50)為135.81～181.21μg/ml；與維生素c相比，具有較好的穩(wěn)定性。

采用本發(fā)明提供的方法得到的抗氧化成分提取物能夠直接應用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟價值。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例4中沒食子酸濃度-吸光度標準曲線；

圖2為本發(fā)明實施例4中待測樣品溶液的自由基清除率-濃度關系曲線圖；

圖3為本發(fā)明實施例4中vc水溶液的自由基清除率-濃度關系曲線圖；

圖4為本發(fā)明實施例4中待測樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率-時間關系曲線圖。

具體實施方式

本發(fā)明提供了一種油茶籽皮中抗氧化成分提取物的提取方法，包括以下步驟：

(1)將油茶籽皮與第一提取劑混合，進行第一提取，將所得第一提取物料進行固液分離，得到第一提取固體物料；

所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷；

(2)將所述步驟(1)中第一提取固體物料與第二提取劑混合，進行第二提取，將所得第二提取物料進行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

所述第二提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(3)將所述步驟(2)中第二提取固體物料與第三提取劑混合，進行第三提取，將所得第三提取物料進行固液分離，得到第三提取液體物料；

所述第三提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液；

(4)將所述步驟(2)中第二提取液體物料與所述步驟(3)中第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；

(5)將所述步驟(4)中純化物料進行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明將油茶籽皮與第一提取劑混合，進行第一提取，將所得第一提取物料進行固液分離，得到第一提取固體物料；所述第一提取劑包括正己烷、石油醚或環(huán)己烷。在本發(fā)明中，采用第一提取劑對所述油茶籽皮進行第一提取是為了去除油茶籽皮中的油脂類成分，如甘油三酯和油酸。

本發(fā)明對于所述油茶籽皮的來源沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的油茶籽榨油前除去的種皮即可。在本發(fā)明中，所述油茶籽皮的粒度優(yōu)選為30～50目。本發(fā)明優(yōu)選通過粉碎使所述油茶籽皮的粒度為30～50目。本發(fā)明對于所述粉粹的方法及所采用的設備沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的粉碎的技術方案即可。在對所述油茶籽皮進行粉粹前，本發(fā)明優(yōu)選對所述油茶籽皮進行篩選。本發(fā)明對于所述篩選沒有特殊的限定，能夠除去有病蟲害的油茶籽皮即可。

在本發(fā)明中，所述油茶籽皮與第一提取劑的質量比優(yōu)選為1：(1.5～2.5)，更優(yōu)選為1：(1.8～2.2)，最優(yōu)選為1：2。

在本發(fā)明中，所述第一提取的溫度優(yōu)選為45～55℃，更優(yōu)選為47～53℃，最優(yōu)選為50℃；所述第一提取的時間優(yōu)選為3～5h，更優(yōu)選為3.5～4.5h，最優(yōu)選為4h。在本發(fā)明中，所述第一提取優(yōu)選在攪拌條件下進行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對于將所述第一提取物料進行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的能夠實現(xiàn)固液分離的技術方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第一提取物料進行過濾，得到第一提取固體物料。

完成所述過濾后，本發(fā)明優(yōu)選將所得濾渣進行干燥，得到第一提取固體物料。本發(fā)明對于所述干燥沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的干燥的技術方案即可，如自然晾干。

得到第一提取固體物料后，本發(fā)明將所述第一提取固體物料與第二提取劑混合，進行第二提取，將所得第二提取物料進行固液分離，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；所述第二提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液。在本發(fā)明中，采用第二提取劑對所述第一提取固體物料進行第二提取是為了提取茶籽皮中的酚類化合物等抗氧化成分。

在本發(fā)明中，作為第二提取劑，所述乙醇水溶液的質量百分含量優(yōu)選為65～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，作為第二提取劑，所述甲醇水溶液的質量百分含量優(yōu)選為60～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，所述第一提取固體物料與第二提取劑的質量比優(yōu)選為1：(5～10)，更優(yōu)選為1：(6～9)，最優(yōu)選為1：(7～8)。

在本發(fā)明中，所述第二提取的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～57℃，最優(yōu)選為45；所述第二提取的時間優(yōu)選為4～6h，更優(yōu)選為4.5～5.5h，最優(yōu)選為5h。在本發(fā)明中，所述第二提取優(yōu)選在攪拌條件下進行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對于將所述第二提取物料進行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的能夠實現(xiàn)固液分離的技術方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第二提取物料進行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料。

得到第二提取液體物料和第二提取固體物料后，本發(fā)明將所述第二提取固體物料與第三提取劑混合，進行第三提取，將所得第三提取物料進行固液分離，得到第三提取液體物料；所述第三提取劑包括乙醇、質量百分含量為60％以上的乙醇水溶液或質量百分含量為55％以上甲醇水溶液。在本發(fā)明中，采用第三提取劑對所述第二提取固體物料進行第三提取是為了進一步提取茶籽皮中的酚類化合物等抗氧化成分。

在本發(fā)明中，作為第三提取劑，所述乙醇水溶液的質量百分含量優(yōu)選為65～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，作為第三提取劑，所述甲醇水溶液的質量百分含量優(yōu)選為60～95％，更優(yōu)選為70～90％，最優(yōu)選為75～85％。

在本發(fā)明中，所述第二提取固體物料與第三提取劑的質量比優(yōu)選為1：(3～5)，更優(yōu)選為1：(3.5～4.5)，最優(yōu)選為1：4。

在本發(fā)明中，所述第三提取的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～47℃，最優(yōu)選為45℃；所述第三提取的時間優(yōu)選為4～6h，更優(yōu)選為4.5～5.5h，最優(yōu)選為5h。在本發(fā)明中，所述第三提取優(yōu)選在攪拌條件下進行；所述攪拌的速率優(yōu)選為30～60rpm，更優(yōu)選為40～50rpm，最優(yōu)選為45rpm。

本發(fā)明對于將所述第三提取物料進行固液分離所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的能夠實現(xiàn)固液分離的技術方案即可。本發(fā)明優(yōu)選將第三提取物料進行過濾，得到第三提取液體物料。

得到第三提取液體物料后，本發(fā)明將所述第二提取液體物料與所述第三提取液體物料合并，采用大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料。在本發(fā)明中，采用大孔樹脂對所述合并物料進行純化，是為了去除所述合并物料中蛋白成分以及其他大分子糖苷類物質。

在本發(fā)明中，所述大孔樹脂的孔徑優(yōu)選為0.3～1.25mm，更優(yōu)選為0.5～1.1mm，最優(yōu)選為0.7～0.9mm。在本發(fā)明中，所述大孔樹脂優(yōu)選為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。本發(fā)明對于所述非極性大孔樹脂的種類沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的非極性大孔樹脂即可，具體如da201、dm301或dm130型非極性大孔樹脂。本發(fā)明對于所述弱極性大孔樹脂的種類沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的弱極性大孔樹脂即可，具體如ab-8或lsa-10型弱極性大孔樹脂。

在本發(fā)明中，所述純化優(yōu)選采用梯度洗脫，所述梯度洗脫所采用的洗脫劑的體積優(yōu)選為9～11bv，更優(yōu)選為10bv。在本發(fā)明中，所述梯度洗脫優(yōu)選依次采用第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑進行洗脫。在本發(fā)明中，所述第一洗脫劑優(yōu)選為質量百分含量為25～35％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為28～32％，最優(yōu)選為30％；所述第二洗脫劑優(yōu)選為質量百分含量為45～55％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為48～52％，最優(yōu)選為50％；所述第三洗脫劑優(yōu)選為質量百分含量為65～75％的乙醇水溶液，更優(yōu)選為68～72％，最優(yōu)選為70％；所述第四洗脫劑優(yōu)選為質量百分含量為100％的乙醇。本發(fā)明在進行所述梯度洗脫時，所述第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑的總體積優(yōu)選為9～11bv；所述第一洗脫劑、第二洗脫劑、第三洗脫劑和第四洗脫劑的體積優(yōu)選相等。

得到純化物料后，本發(fā)明將所述純化物料進行濃縮，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。在本發(fā)明中，所述濃縮優(yōu)選是將純化物料濃縮至所述純化物料原體積的6～8％，更優(yōu)選為7％。在本發(fā)明中，所述濃縮優(yōu)選為減壓濃縮；所述減壓濃縮的溫度優(yōu)選為40～50℃，更優(yōu)選為43～47℃，最優(yōu)選為45℃。

本發(fā)明提供了上述技術方案所述提取方法提取得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

本發(fā)明提供了上述技術方案所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物在化妝品中的應用。在本發(fā)明中，所述油茶籽皮中抗氧化成分提取物無需進行其它后處理，可直接作為化妝品原料，根據(jù)實際需要，通過加入其它助劑進行稀釋復配包裝，即得市售化妝品產(chǎn)品。

下面將結合本發(fā)明中的實施例，對本發(fā)明中的技術方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與12l正己烷混合，在45rpm攪拌速率下，于45℃進行第一提取5h，將所得第一提取物料進行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與25l質量百分含量為90％的乙醇水溶液混合，在45rpm攪拌速率下，于40℃進行第二提取6h，將所得第二提取物料進行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與20l質量百分含量為90％的乙醇水溶液混合，在45rpm攪拌速率下，于50℃進行第三提取4h，將所得第三提取物料進行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質量百分含量為30％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為50％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為70％的乙醇水溶液2.5bv和質量百分含量為100％的乙醇2.5bv進行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于40℃進行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的7％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實施例2

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與18l石油醚混合，在40rpm攪拌速率下，于55℃進行第一提取3h，將所得第一提取物料進行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與35l質量百分含量為80％的乙醇水溶液混合，在40rpm攪拌速率下，于50℃進行第二提取4h，將所得第二提取物料進行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與15l質量百分含量為80％的乙醇水溶液混合，在40rpm攪拌速率下，于40℃進行第三提取6h，將所得第三提取物料進行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質量百分含量為28％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為52％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為70％的乙醇水溶液2.5bv和質量百分含量為100％的乙醇2.5bv進行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于50℃進行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的6％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實施例3

(1)選取無病蟲害的油茶籽皮，粉粹，得到粒度為30～50目的油茶籽皮粉末；

(2)取5kg所述步驟(1)中油茶籽皮粉末與15l正己烷混合，在50rpm攪拌速率下，于50℃進行第一提取4h，將所得第一提取物料進行過濾，將所得濾渣自然晾干，得到第一提取固體物料；

(3)將所述步驟(2)中第一提取固體物料與30l質量百分含量為70％的甲醇水溶液混合，在50rpm攪拌速率下，于45℃進行第二提取5h，將所得第二提取物料進行過濾，得到第二提取液體物料和第二提取固體物料；

(4)將所述步驟(3)中第二提取固體物料與18l質量百分含量為70％的甲醇水溶液混合，在50rpm攪拌速率下，于55℃進行第三提取5h，將所得第三提取物料進行過濾，得到第三提取液體物料；

(5)將所述步驟(3)中第二提取液體物料與所述步驟(4)中第三提取液體物料合并，采用da201型非極性大孔樹脂對得到的合并物料進行純化，得到純化物料；其中，所述純化采用梯度洗脫，具體是依次采用質量百分含量為32％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為48％的乙醇水溶液2.5bv、質量百分含量為68％的乙醇水溶液2.5bv和質量百分含量為100％的乙醇2.5bv進行洗脫。

(6)將所述步驟(5)中純化物料于45℃進行減壓濃縮，濃縮至所述純化物料原體積的8％，得到油茶籽皮中抗氧化成分提取物。

實施例4

將本發(fā)明實施例1～3得到的油茶籽皮中抗氧化成分提取物作為待測樣品，進行總酚含量及抗氧化性測定。

1、總酚含量測定

以待測樣品中沒食子酸當量代表總酚含量，利用福林酚法測定待測樣品中沒食子酸的含量，包括以下步驟：

(1)建立沒食子酸標準曲線

分別配置濃度為0.25、0.50、0.75、1.05、1.5mg/ml的沒食子酸標準溶液，在試管中分別加入各濃度沒食子酸標準液1ml，福林酚試劑1ml，再用質量百分含量為10％的碳酸鈉水溶液補足至10ml，搖勻，室溫放置1h后，于760nm處測量吸光度，空白對照為1ml去離子水；

以沒食子酸的濃度為橫坐標，以對應的吸光度之為縱坐標，建立沒食子酸濃度-吸光度標準曲線，如圖1所示。

(2)待測樣品中總酚含量的測定

分別取實例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物干燥至恒重，各稱量1.0g，用質量百分含量為80％的乙醇水溶液定容于100ml容量瓶中，搖勻，得到待測樣品溶液；

在與建立沒食子酸標準曲線相同的操作步驟下，測量待測樣品溶液的吸光度；

根據(jù)沒食子酸標準曲線，計算得到待測樣品中總酚含量(若待測樣品溶液的吸光度值超出沒食子酸標準曲線的范圍，則在測量吸光度前對所述待測樣品溶液進行適當稀釋)，總酚含量以沒食子酸總酚當量(gae)表示，單位為mggae/g，表示每g油茶籽皮中抗氧化成分提取物中沒食子酸的質量(mg)，結果如表1所示。

表1實施例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物中總酚含量

由表1可知，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較高的總酚含量，達251.84mggae/g。

2、抗氧化性測定

dpph自由基清除法適合化妝品行業(yè)中原料抗氧化性的檢測，因此采用dpph自由基清除法來測定待測樣品的抗氧化性，包括以下步驟：

(1)配置dpph測試液

準確稱量1mgdpph，用質量百分含量為95％的乙醇水溶液定容于50ml容量瓶中，超聲3min使之完全溶解，得到dpph測試液；

量取1mldpph測試液，于519nm處測量吸光度，吸光度值a在0.6～0.8之間可用。

(2)待測樣品測定

分別取實例1～3中制備的油茶籽皮中抗氧化成分提取物干燥至恒重，各稱量1.0g，用質量百分含量為80％的乙醇水溶液定容于100ml容量瓶中，搖勻，得到待測樣品溶液；

移取3mldpph測試液，向所述dpph測試液中緩慢滴加待測樣品溶液，至dpph測試液基本褪色，根據(jù)滴加待測樣品溶液的體積初步擬定實驗中待測樣品溶液的濃度范圍，最終，本實驗中待測樣品溶液的濃度范圍確定為40、60、80、120、160、200μg/ml；

將待測樣品溶液分別稀釋至以上濃度，準確移取各濃度的待測樣品溶液0.5ml，分別加入3ml的dpph測試液，混合均勻，作為實驗組溶液，靜置2min后于519nm處測量吸光度，為避免溶液顏色影響，設置不加dpph測試液的陰性對照組，計算待測樣品溶液的吸光度值(ax)為實驗組溶液的吸光度值減去對陰性照組吸光度值；

空白對照為1ml去離子水(吸光度值為a0)；

每個待測樣品、每種濃度的待測樣品溶液的吸光度需要測定三個平行數(shù)據(jù)，而且在測定三個平行數(shù)據(jù)后，都要重新測一次a0；

按照自由基清除率＝100％*(a0-ax)/a0，計算待測樣品溶液的自由基清除率，以待測樣品溶液的濃度為橫坐標，以待測樣品溶液的自由基清除率為縱坐標，做待測樣品溶液的自由基清除率-濃度關系曲線圖，如圖2所示；并確定待測樣品溶液的自由基半數(shù)抑制率(ic50)，結果見表2。

(3)標準品維生素c(vc)的測定

將vc用去離子水配置成8、20、40、60、80、100μg/ml的vc水溶液，作為實驗組溶液，按照步驟(2)中的方法，得到vc水溶液的自由基清除率-濃度關系曲線圖，如圖3所示；并確定vc水溶液的自由基半數(shù)抑制率(ic50)，結果見表2。

表2待測樣品溶液和vc水溶液的自由基半數(shù)抑制率

由表2可知，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的抗氧化性，自由基半數(shù)抑制率(ic50)為135.81～181.21μg/ml。

3、穩(wěn)定性測定

抗氧化劑的穩(wěn)定性是確定其品質的一個重要指標，本實驗主要檢測待測樣品溶液的抗氧化性隨時間的變化情況，以此驗證所述待測樣品溶液的穩(wěn)定性，包括以下步驟：

分別移取濃度為200μg/ml的待測樣品溶液和濃度為100μg/ml的vc水溶液10ml，各均勻分為4等份，置于避光陰涼處保存，分別在2星期、4星期、6星期和8星期時各取其中一份，按照實驗2中抗氧化性測定方法，分別測出待測樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率，以自由基清除率為縱坐標，時間為橫坐標，做待測樣品溶液和vc水溶液的自由基清除率-時間關系曲線圖，如圖4所示。由圖4可知，與維生素c相比，本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的穩(wěn)定性。

由以上實施例可知，采用本發(fā)明提供的方法能夠成功的從油茶籽皮中提取出抗氧化成分，提高了油茶籽皮的利用程度；本發(fā)明提供的油茶籽皮中抗氧化成分提取物具有較好的抗氧化性和穩(wěn)定性，作為原料應用于化妝品中，提高了油茶籽皮的經(jīng)濟價值。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。