本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種黃體酮的新劑型，特別涉及黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑及其制備方法，以及黃體酮混懸注射粉針。

背景技術(shù)：

黃體酮(progesterone)，又名孕酮，為白色或微黃色結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)127～131℃，無臭，在空氣中穩(wěn)定，有右旋光性，不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、丙酮、二氧六環(huán)和濃硫酸。黃體酮的化學(xué)名稱為：孕甾-4-烯-3,20-二酮，分子式：c21h30o2，分子量：314.47，結(jié)構(gòu)式如下：

黃體酮是由卵巢黃體分泌的一種天然孕激素，是維持妊娠的重要激素。黃體酮在懷孕期間有許多功能，其功能包括：通過誘導(dǎo)分泌的變化促進(jìn)和幫助子宮內(nèi)膜更容易接受早期胚胎，這是受精卵成功著床和維持正常妊娠所必需的，并通過一氧化氮合酶的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控抑制子宮肌層的收縮引起子宮平靜。黃體酮能顯著增加血中孕激素濃度，改善因缺乏孕激素或黃體功能不足所導(dǎo)致的各種癥狀和疾病，包括：(1)主治黃體功能不全造成的經(jīng)前綜合征與流產(chǎn)；(2)由于無排卵所致的功能性子宮出血或閉經(jīng)等進(jìn)行撤退出血；(3)補(bǔ)充黃體不足造成的各種疾??；(4)與雌激素周期使用對(duì)抗單純雌激素對(duì)內(nèi)膜的作用。

目前國(guó)內(nèi)已有的黃體酮制劑主要包括：膠囊，膠丸，凝膠，緩釋凝膠，軟膠囊，透皮吸收霜，注射液等。按照給藥途徑分類，黃體酮主要有口服和注射兩種劑型等。

其中，口服制劑給藥方便快捷，患者易于接受，但是口服黃體酮會(huì)在胃腸道及肝臟迅速破壞，難以起到補(bǔ)充和治療作用。由于黃體酮溶解度極低，且首過效應(yīng)嚴(yán)重，口服生物利用度僅為10％?？诜苿┩ㄟ^增加表面活性劑濃度來提高黃體酮溶解度，不能從根本上解決黃體酮首過效應(yīng)強(qiáng)、生物利用度低的問題；每天的給藥劑量仍需很大才能達(dá)到療效，因此未能從根本上解決黃體酮體內(nèi)代謝快，生物利用度低的問題。

由于上述種種原因，注射給藥途徑在中國(guó)仍是黃體酮的主要給藥方式。輔助生殖過程中，用于提供黃體支持的現(xiàn)有制劑主要為黃體酮油溶液注射劑。由于該制劑為肌肉注射油溶液，且需每天注射，長(zhǎng)期注射(約12周)。油溶液注射時(shí)極易引起患者不適，如疼痛、局部紅腫、過敏等癥狀，個(gè)別病理報(bào)道甚至指出肌肉注射黃體酮可誘發(fā)急性嗜酸性粒細(xì)胞肺炎。且油劑黃體酮半衰期長(zhǎng)，通常要數(shù)周時(shí)間才能恢復(fù)。長(zhǎng)期高頻次注射也會(huì)導(dǎo)致注射部位產(chǎn)生硬結(jié)等其他癥狀，不利于注射部位組織健康。患者均為孕婦，每天注射黃體酮極為不便，且黃體酮注射存在油溶劑易引起肌肉板結(jié)、疼痛等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑及其制備方法，本發(fā)明通過肌肉注射該混懸劑，能夠達(dá)到為期一周或更久的緩釋效果，使藥物平穩(wěn)釋放，提高生物利用度，且生物相容性好，刺激性小，同時(shí)提高患者順應(yīng)性。

本發(fā)明提供一種黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑，包含以下重量百分比的組分：

2.5％～15％的黃體酮；

0.1％～2％的初級(jí)穩(wěn)定劑，所述初級(jí)穩(wěn)定劑選自聚乙二醇、聚維酮、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素鈉和卵磷脂中的一種或多種；

0.01％～1％的次級(jí)穩(wěn)定劑，所述次級(jí)穩(wěn)定劑選自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯、聚氧乙烯蓖麻油和脫氧膽酸鈉中的一種或多種；

0～1％的ph調(diào)節(jié)劑；

0～2％的滲透壓調(diào)節(jié)劑；

余量的注射用水。

本發(fā)明還提供一種黃體酮混懸注射凍干粉針，由黃體酮混懸液經(jīng)冷凍干燥制得，所述黃體酮混懸液包含以下重量百分比的組分：

2.5％～15％的黃體酮；

0.1％～2％的初級(jí)穩(wěn)定劑，所述初級(jí)穩(wěn)定劑選自聚乙二醇、聚維酮、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素鈉和卵磷脂中的一種或多種；

0.01％～1％的次級(jí)穩(wěn)定劑，所述次級(jí)穩(wěn)定劑選自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯、聚氧乙烯蓖麻油和脫氧膽酸鈉中的一種或多種；

0～1％的ph調(diào)節(jié)劑；

0～2％的滲透壓調(diào)節(jié)劑；

余量的注射用水。

混懸型長(zhǎng)效注射劑，是指將不溶性或難溶性固體藥物分散于液體分散介質(zhì)中制成的一類供肌肉或靜脈注射用的制劑。藥物注射后，在注射部位形成貯庫(kù)結(jié)構(gòu)，使藥物緩慢釋放，從而達(dá)到長(zhǎng)效作用的目的。目前常用制備方法分為以下兩大類：top-down(自上而下)法和bottom-up(自下而上)法，top-down法包括研磨法、高壓均質(zhì)法等，bottom-up法包括反溶劑法。粉針劑是將藥物與試劑混合后，經(jīng)消毒干燥形成的粉狀物品，便于運(yùn)輸保存。

本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定的黃體酮長(zhǎng)效注射劑，制劑通過微米化及納米化，并加入穩(wěn)定劑，可制成混懸劑或者凍干粉針或者普通粉針，可用于肌肉或皮下注射給藥。該混懸劑能解決難溶藥物給藥的問題，所用輔料少，載藥量大，可以顯著改善生物利用度，減少給藥次數(shù)。

本發(fā)明公開了一種用于先兆性流產(chǎn)及輔助生殖黃體支持的黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑，以及制備該混懸劑的方法。所述制劑，包括一般意義上的混懸液和凍干粉針等，可以用于皮下或肌肉注射。本發(fā)明通過肌肉注射混懸劑能夠達(dá)到為期一周或更久的緩釋效果，使藥物平穩(wěn)釋放，提高生物利用度，同時(shí)提高患者順應(yīng)性。并且，本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單可控，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，肌肉注射后，本發(fā)明所述黃體酮制劑可達(dá)到為期至少一周的緩釋效果。

本發(fā)明實(shí)施例提供的其中一種黃體酮混懸劑，為普通意義上的混懸液，可制備為預(yù)充式注射劑，由以下成分按重量百分比組成：

本發(fā)明實(shí)施例提供的另一種黃體酮混懸凍干粉針，臨用時(shí)加水振搖，即可分散成混懸液，由以下成分按重量百分比組成：

本發(fā)明所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針中，所述的初級(jí)穩(wěn)定劑選自聚乙二醇、聚維酮、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素鈉和卵磷脂中的一種或多種。其中，所述聚乙二醇可采用聚乙二醇4000等市售產(chǎn)品。

本發(fā)明所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針中，所述的次級(jí)穩(wěn)定劑選自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯、聚氧乙烯蓖麻油和脫氧膽酸鈉中的一種或多種。其中，所述聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯如吐溫80等市售產(chǎn)品。

在本發(fā)明中，所述初級(jí)穩(wěn)定劑與次級(jí)穩(wěn)定劑配合使用才可獲得良好效果。在本發(fā)明的實(shí)施例中，羥丙甲纖維素、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯、羧甲基纖維素鈉的穩(wěn)定效果相對(duì)較好；聚維酮、聚乙烯醇、卵磷脂等效果不佳。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述初級(jí)穩(wěn)定劑選自聚乙二醇、羥丙甲纖維素或羧甲基纖維素鈉；所述次級(jí)穩(wěn)定劑選自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯或維生素e聚乙二醇琥珀酸酯。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑包含2.5％～15％的黃體酮，優(yōu)選為3～10％。本發(fā)明所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針中，黃體酮選自黃體酮晶型1、黃體酮晶型2或它們的混合物。在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑包含0.1～2％的初級(jí)穩(wěn)定劑，優(yōu)選包含0.3～1.5％，如用量方面，羥丙甲纖維素使用0.3％即可達(dá)到穩(wěn)定效果。所述黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑包含0.01～1％的次級(jí)穩(wěn)定劑，優(yōu)選為0.02～0.5％。

本發(fā)明實(shí)施例所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針中，所述的ph調(diào)節(jié)劑選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉、鹽酸、乳酸、氫氧化鈉、枸櫞酸鹽和酒石酸鹽中的一種或幾種。所述滲透壓調(diào)節(jié)劑優(yōu)選選自氯化鈉、葡萄糖和甘油中的一種或多種，更優(yōu)選為氯化鈉。所述黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑包含0～1％的ph調(diào)節(jié)劑；本發(fā)明實(shí)施例可以不使用ph調(diào)節(jié)劑，也可以使用0.1～0.5％。所述黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑包含0～2％的滲透壓調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選包含0.05％～1％。

本發(fā)明實(shí)施例所述的黃體酮混懸注射凍干粉針中，所述的凍干保護(hù)劑可選自乳糖、麥芽糖、葡萄糖、海藻糖、丙三醇、甘露醇、山梨醇、氯化鈉、磷酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、羧甲基纖維素鈉(cmc-na)、聚乙二醇和白蛋白中的一種或幾種，優(yōu)選為甘露醇。

本發(fā)明實(shí)施例所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針中，黃體酮微粒的平均粒徑選自小于20微米、小于10微米、小于5微米以及小于1微米；具體可為1微米～3微米、2微米左右。

本發(fā)明所述的黃體酮混懸注射劑及凍干粉針，通過肌肉或者皮下注射后，混懸劑能夠達(dá)到為期一周或更久的緩釋效果，可明顯改善生物利用度且提高患者順應(yīng)性。

上文所述的黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑的制備方法，包括：

采用濕法研磨法、反溶劑-高壓均質(zhì)法或微射流法，將黃體酮制成黃體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑。

本發(fā)明所述的第一種黃體酮混懸注射劑可以采用以下方法制備，包括：濕法研磨法、反溶劑-高壓均質(zhì)法、微射流法或它們的組合。

其中，濕法研磨法的步驟具體為：將黃體酮與水以及輔料按照一定比例混合，攪拌使分散均勻，用濕法研磨機(jī)進(jìn)行研磨，得到黃體酮混懸劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，采用濕法研磨法時(shí)，所采用的研磨珠為氧化鋯珠和聚苯乙烯珠。具體地，可以1500rpm的轉(zhuǎn)速循環(huán)研磨10min，得到黃體酮混懸液。

反溶劑-高壓均質(zhì)法的步驟具體為：將黃體酮分散在有機(jī)溶劑如甲醇中，可加熱超聲，至黃體酮完全溶解，將該溶液加入一定量含有穩(wěn)定劑的水中或?qū)⑺尤胗袡C(jī)溶液中，使黃體酮析出，得到黃體酮混懸液初液，然后用高壓均質(zhì)進(jìn)行均質(zhì)，得到小于220nm的黃體酮混懸劑，還可過膜過濾除菌。高壓均質(zhì)可包括：在低壓300bar循環(huán)6次后，高壓900bar循環(huán)10次。在反溶劑-高壓均質(zhì)法中，可通過過膜除菌解決無菌問題，不必全程無菌操作，降低了生產(chǎn)成本；同時(shí)加入某些穩(wěn)定劑可獲得適當(dāng)粒徑和形狀的制劑。

微射流法的步驟具體為：將黃體酮分散在水中，并添加輔料，加入微射流機(jī)中，在10000psi壓力下循環(huán)1次，在20000psi壓力下循環(huán)3次，完成超微化處理，得到黃體酮混懸劑。

本發(fā)明所述的第二種黃體酮混懸注射凍干粉針，可通過在第一種混懸劑中加入一定量的凍干保護(hù)劑，分裝，進(jìn)行冷凍干燥，制得黃體酮混懸凍干粉針。制備所述黃體酮混懸注射凍干粉針的方法可包括：在黃體酮混懸液中加入1％～20％的凍干保護(hù)劑，進(jìn)行冷凍干燥，獲得黃體酮混懸注射凍干粉針。在本發(fā)明實(shí)施例的凍干過程中，在適宜凍干保護(hù)劑和凍干工藝條件下，晶體聚集長(zhǎng)大，制備得到適宜粒徑的黃體酮凍干粉針。具體的，凍干工藝可包括：-40℃預(yù)凍四小時(shí)，抽真空，-40℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至-20℃維持三個(gè)小時(shí)，一個(gè)小時(shí)升至-10℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至0℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至20℃維持兩個(gè)小時(shí)。

或者，本發(fā)明實(shí)施例將混懸液噴霧干燥，制得普通的黃體酮混懸注射粉針劑。

在本發(fā)明中，上述的黃體酮混懸注射劑可以用于先兆性流產(chǎn)及輔助生殖中提供黃體支持等。本發(fā)明所述混懸劑通過微米化及納米化，并加入一些穩(wěn)定劑，可制成混懸劑或者凍干粉針等，可用于肌肉或皮下注射給藥。本發(fā)明混懸劑解決了難溶藥物給藥的問題，所用輔料少，載藥量大，可以顯著改善生物利用度，達(dá)到為期一周或更久的緩釋效果，減少給藥次數(shù)。并且，本發(fā)明制劑的制備工藝簡(jiǎn)單可控，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液的粒度分布圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液中黃體酮微粒顯微成像圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液與市售制劑sd大鼠肌肉注射病理切片；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液與市售制劑sd大鼠肌肉注射血漿藥時(shí)曲線。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

為了進(jìn)一步理解本申請(qǐng)，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本申請(qǐng)?zhí)峁┑狞S體酮混懸型長(zhǎng)效注射劑及其制備方法和黃體酮混懸注射粉針進(jìn)行具體地描述。

以下實(shí)施例中，所用的黃體酮晶型為晶型1，黃體酮原料藥粒徑為60μm，所得到的混懸液平均粒徑為2μm；所用的cmc-na和聚維酮均為藥用級(jí)。

實(shí)施例1

黃體酮混懸注射劑的制備(濕法研磨法)

處方(100支)：

制備工藝：

(1)制備研磨介質(zhì)，將3g聚乙二醇4000、0.3g吐溫80和2.7g氯化鈉溶于300ml注射用水中，攪拌直到完全溶解，作為研磨介質(zhì)。

(2)將200ml氧化鋯研磨珠倒入研磨腔體，將15g黃體酮分散于150ml研磨介質(zhì)中，倒入腔體，用剩余介質(zhì)轉(zhuǎn)移殘留藥物。

(3)以1500rpm轉(zhuǎn)速循環(huán)研磨10min，得到黃體酮混懸液，在無菌條件下分裝入預(yù)充式注射器中，制得100支預(yù)充式注射液。

實(shí)施例2

黃體酮混懸注射劑的制備(濕法研磨法)

處方(100支)：

制備工藝：

(1)制備研磨介質(zhì)，將1.35g羧甲基纖維素鈉、0.15g吐溫80和2.7g氯化鈉溶于300ml注射用水中，攪拌直到完全溶解，作為研磨介質(zhì)。

(2)將200ml氧化鋯研磨珠倒入研磨腔體，將7.5g黃體酮分散于150ml研磨介質(zhì)中，倒入腔體，用剩余介質(zhì)轉(zhuǎn)移殘留藥物。

(3)以1500rpm轉(zhuǎn)速循環(huán)研磨10min，得到黃體酮混懸液在無菌條件下分裝入預(yù)充式注射器中，制得100支預(yù)充式注射液。

實(shí)施例3

黃體酮混懸注射劑的制備(微射流法)

處方(100支)：

制備工藝：

(1)稱取黃體酮15g，加入聚維酮3g、吐溫800.3g，加入300ml注射用水，攪拌均勻，得到初混懸液。

(2)將初混懸液加入微射流機(jī)中，在10000psi壓力下循環(huán)1次，在20000psi壓力下循環(huán)3次，進(jìn)行微粉化處理，得到粒徑均勻的黃體酮混懸液。

(3)將得到的黃體酮混懸液在無菌條件下分裝入預(yù)充式注射器中，制得100支預(yù)充式注射液。

實(shí)施例4

黃體酮混懸注射凍干粉針的制備(反溶劑-高壓均質(zhì)法)

處方(100支)：

制備工藝：

(1)稱取黃體酮10g，加入甲醇100ml，加熱溶解，緩慢加入到含有0.3g吐溫80的5000ml蒸餾水中，在轉(zhuǎn)速為500rpm攪拌下加入，加入完成后繼續(xù)攪拌30min，得到初混懸液。

(2)將初混懸液加入高壓均質(zhì)機(jī)中，在低壓300bar循環(huán)6次后，高壓900bar循環(huán)10次，得到粒徑小于220nm的均勻黃體酮混懸液，過220nm濾膜除菌。

(3)向混懸液中加入甘露醇15g作為凍干保護(hù)劑，攪拌均勻，分裝入西林瓶中，每瓶3ml，共100瓶，進(jìn)行冷凍干燥，其工藝包括：-40℃預(yù)凍四小時(shí)，抽真空，-40℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至-20℃維持三個(gè)小時(shí)，一個(gè)小時(shí)升至-10℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至0℃維持兩個(gè)小時(shí)，兩個(gè)小時(shí)升至20℃維持兩個(gè)小時(shí)，制得黃體酮混懸注射凍干粉針。

實(shí)施例5

黃體酮混懸注射凍干粉針的制備

處方(100支)：

制備工藝：

(1)制備研磨介質(zhì)，將3g聚乙二醇4000、0.3g吐溫80和2.7g氯化鈉溶于300ml注射用水中，攪拌直到完全溶解，作為研磨介質(zhì)。

(2)將200ml氧化鋯研磨珠倒入研磨腔體，將15g黃體酮分散于150ml研磨介質(zhì)中，倒入腔體，用剩余介質(zhì)轉(zhuǎn)移殘留藥物，以1500rpm轉(zhuǎn)速循環(huán)研磨10min，得到黃體酮混懸液。

(3)向混懸液中加入甘露醇15g作為凍干保護(hù)劑，攪拌均勻，分裝入西林瓶中，每瓶3ml，進(jìn)行冷凍干燥，工藝同實(shí)施例5，制得黃體酮混懸注射凍干粉針。

實(shí)施例6

試驗(yàn)1粒徑大小和粒度分布

將本發(fā)明實(shí)施例2所得混懸液用注射用水稀釋，用激光粒度分析儀測(cè)定粒徑大小和粒度分布，結(jié)果見圖1，圖1為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液的粒度分布圖。由圖1可知，本發(fā)明實(shí)施例2采用羧甲基纖維素鈉和吐溫80相配合，該混懸液樣品粒徑約為2μm，且粒度分布較為均勻。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，羥丙甲纖維素、維生素e聚乙二醇琥珀酸酯、羧甲基纖維素鈉的穩(wěn)定效果相對(duì)較好；聚維酮、聚乙烯醇、卵磷脂等效果相對(duì)不佳。相對(duì)較好的穩(wěn)定劑，粒度分布較窄，跨度控制在2以內(nèi)；效果差的穩(wěn)定劑，研磨過程中沉降嚴(yán)重且粒度分布寬，跨度均大于3。

試驗(yàn)2微粒顯微成像圖

將本發(fā)明實(shí)施例2所得混懸液用注射用水稀釋，用顯微鏡觀察其形態(tài)及聚集情況，結(jié)果見圖2，圖2為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液中黃體酮微粒顯微成像圖。由圖2可知，該混懸液樣品粒徑約為2μm，與激光粒度測(cè)定結(jié)果一致，說明混懸液較為穩(wěn)定，粒度均勻。

實(shí)施例7

sd大鼠肌肉注射黃體酮混懸劑、黃體酮油溶液舐足試驗(yàn)

試驗(yàn)動(dòng)物：sd雄性大鼠，體重190g～210g，24只，隨機(jī)分為四組，每組6只。

黃體酮混懸劑a，按照實(shí)施例2制得，稀釋至濃度為20mg/ml；

黃體酮注射液b，市售(浙江仙琚制藥股份有限公司，黃體酮油溶液)，1ml：20mg；

陽性對(duì)照：50％葡萄糖；

陰性對(duì)照：生理鹽水。

試驗(yàn)方法與結(jié)果：

向每只大鼠右后爪的足墊皮下注射0.1ml；注射后，記錄第一次舐足的時(shí)間，同時(shí)記錄在3、6、9、12、15和30分鐘內(nèi)累積舐足時(shí)間，結(jié)果見表1。

表1sd大鼠給藥30min內(nèi)舐足試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)表1可得出以下結(jié)論：本發(fā)明黃體酮混懸劑和油溶液與陽性對(duì)照組有顯著性差異(p1<0.05)，而與陰性對(duì)照組無顯著性差異(p2>0.05)。說明二者對(duì)大鼠皮下注射后，對(duì)足下組織的刺激性較小。然而，比較舐足發(fā)生率、開始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間以及抬足行為，黃體酮油溶液會(huì)導(dǎo)致較為明顯的刺激性；而黃體酮混懸劑舐足時(shí)間更短，且與陰性對(duì)照組(生理鹽水)相近，說明本發(fā)明黃體酮混懸劑局部刺激性非常微弱，有明顯優(yōu)勢(shì)。

實(shí)施例8

sd大鼠肌肉注射黃體酮混懸劑、黃體酮油溶液刺激性評(píng)價(jià)

試驗(yàn)動(dòng)物：sd雄性大鼠，體重190g～210g，6只，隨機(jī)分為兩組，每組3只。

黃體酮混懸劑，按照實(shí)施例2制得，稀釋至濃度為20mg/ml；

黃體酮注射液，市售(浙江仙琚制藥股份有限公司，黃體酮油溶液)，1ml：20mg。

試驗(yàn)方法與結(jié)果：

對(duì)大鼠肌內(nèi)給藥，并分別于給藥1d、7d、14d處死，制作病理切片，觀察炎癥反應(yīng)。

結(jié)果參見圖3，圖3為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液與市售制劑sd大鼠肌肉注射病理切片。圖3中，上排“a-”為本發(fā)明黃體酮混懸液給藥后1天、7天和14天后的肌肉組織切片結(jié)果；下排“b-”為油溶液給藥后1天、7天和14天后的肌肉組織切片結(jié)果。

從圖3可以看出，在顯微鏡下，黃體酮油溶液注射7d和14d的后肌肉細(xì)胞均被大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，即產(chǎn)生急性炎癥反應(yīng)；而對(duì)于本發(fā)明黃體酮混懸劑，給藥7d后，肌肉細(xì)胞周圍有少量炎性細(xì)胞。而在14d后，肌肉組織無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，說明本發(fā)明黃體酮混懸劑注入肌肉組織后引起了輕微的炎癥反應(yīng)，兩周后肌肉細(xì)胞恢復(fù)到正常狀態(tài)。

舐足試驗(yàn)和病理性研究結(jié)果一致，與黃體酮油溶液相比，本發(fā)明黃體酮混懸液生物相容性好，且肌肉刺激性低。

實(shí)施例9

sd大鼠肌肉注射黃體酮混懸劑、黃體酮油溶液的血漿藥動(dòng)學(xué)比較試驗(yàn)

黃體酮混懸劑，按照實(shí)施例2制得；

黃體酮注射液，市售(浙江仙琚制藥股份有限公司，黃體酮油溶液)，1ml：20mg。

試驗(yàn)動(dòng)物：sd雄性大鼠，體重190g～210g，12只，隨機(jī)分為兩組，每組6只。

給藥劑量：黃體酮混懸劑：44.1mg/kg，一周注射一次；

黃體酮注射液(油溶液)：6.3mg/kg，每天注射；

給藥方式：肌肉注射。

試驗(yàn)儀器：waters液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，電噴霧離子化接口，三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器，waters系統(tǒng)色譜工作站，acquitytmultraperformancelc超高相液相系統(tǒng)為美國(guó)waters公司產(chǎn)品。

試驗(yàn)方法與結(jié)果：

黃體酮混懸液組：3只大鼠，分別肌肉注射黃體酮混懸液，劑量為44.1mg/kg，并于給藥后0.5h，1h，2h，3h，4h，6h，8h，12h，1d，1n(night)，2d，2n，3d，3n，4d，4n，5d，5n，6d，6n，7d，7n，由大鼠眼內(nèi)眥取血，置經(jīng)肝素處理的離心管中，離心分離血漿，-20℃冰箱保存。檢測(cè)血漿中黃體酮的血藥濃度，所得黃體酮的血漿藥物濃度經(jīng)時(shí)變化曲線見圖4，圖4為本發(fā)明實(shí)施例2所得黃體酮混懸液與市售制劑sd大鼠肌肉注射血漿藥時(shí)曲線。

黃體酮注射液組：3只大鼠，分別肌肉注射黃體酮注射液，用注射用油稀釋至適當(dāng)濃度，劑量為6.3mg/kg，于首次給藥后0.5h，1h，2h，3h，4h，6h，8h，12h，取血；后每日給藥一次，在每天給藥前和給藥12h后取血，測(cè)定血漿藥物濃度，持續(xù)7天；第八天達(dá)到血藥濃度穩(wěn)定后再于給藥后0.5h，1h，1.5h，2h，3h，4h，6h，8h，12h取血置經(jīng)肝素處理的離心管中，離心分離血漿，-20℃冰箱保存。檢測(cè)血漿中黃體酮的血藥濃度，所得黃體酮的血漿藥物濃度經(jīng)時(shí)變化曲線見圖4，具體數(shù)據(jù)分別見表2和表3。黃體酮混懸液組和油溶液組auc計(jì)算結(jié)果見表4。

表2黃體酮混懸液sd大鼠肌肉注射時(shí)間-血藥濃度表

表3黃體酮注射液組多次給藥時(shí)間-血藥濃度表

表4黃體酮混懸液組和油溶液組auc計(jì)算結(jié)果

從以上結(jié)果可以得出結(jié)論：本發(fā)明黃體酮混懸液?jiǎn)未渭∪庾⑸浜?，與普通市售制劑每日給藥一次藥時(shí)曲線趨勢(shì)基本一致，黃體酮混懸液組相對(duì)生物利用度能夠達(dá)到94.20％，且混懸劑肌肉注射后釋放平緩，血藥濃度在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于一種穩(wěn)定釋放的狀態(tài)。因此，本發(fā)明黃體酮混懸液注射液能夠達(dá)到緩釋效果，大大減少給藥次數(shù)，提高患者順應(yīng)性，具有開發(fā)價(jià)值。