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一種小牛血去蛋白提取物的制備方法與流程

文檔序號(hào):11393275閱讀:1094來(lái)源:國(guó)知局

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體是涉及一種小牛血去蛋白提取物的制備方法。

技術(shù)背景

小牛血去蛋白提取物(protein-freecalfbloodextract)是小牛血去蛋白提取物注射液的主要原料。小牛血去蛋白提取物是1-6個(gè)月的幼牛血經(jīng)過(guò)除蛋白后得到的小分子生物活性物質(zhì),其主要成分為氨基酸、小肽、核酸及其它含氮化合物。小牛血去蛋白提取物可顯著提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)活力,提高酶活性,加速細(xì)胞的氧化磷酸化反應(yīng)和atp的合成,激活細(xì)胞呼吸,促進(jìn)新陳代謝,加快組織再生。該藥物對(duì)腦神經(jīng)損傷、腦卒中及腦梗塞等疾病有積極的治療效果,同時(shí)還具有眼角膜修復(fù)、增強(qiáng)記憶力等作用,在臨床上應(yīng)用廣泛。

但小牛血去蛋白提取物溶液其主要成分氨基酸和小肽在自然狀態(tài)下可互相聚合組成大分子量的肽,而肽又可聚合成高分子肽,以聚合物形式析出或以高分子肽形式存在于溶液中,使藥品產(chǎn)生抗原性并降低了藥品的生物活性,這就是小牛血去蛋白提取物溶液引起臨床過(guò)敏反應(yīng)增加的主要原因,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),不良反應(yīng)發(fā)生率也隨即增加,并且在臨床用藥時(shí)是將小牛血去蛋白提取物溶液溶于糖、鹽水中使用,這樣不但增加了藥品被污染的幾率,影響藥品使用的安全性。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

為了解決上述問(wèn)題,本發(fā)明提供了一種小牛血去蛋白提取物的制備方法,該方法包括血液處理、高速離心處理、無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾處理等步驟制備而成,其提取物能更好的除去大分子物質(zhì),富聚小分子活性物質(zhì),且在提取物中添加維生素c,其能增強(qiáng)提取物的穩(wěn)定性,氨基酸和小分子肽不易聚合成高分子肽,制得的小牛血去蛋白提取物質(zhì)量穩(wěn)定,藥效得到了提高。

具體地,一種小牛血去蛋白提取物的制備方法,包括以下步驟:

(1)小牛血液處理液:取小牛血液加入1倍量含1-3%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至80-90℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍10-20min,備用。

(2)離心處理:將步驟(1)處理后的小牛血液,倒入離心機(jī)中進(jìn)行離心,轉(zhuǎn)速為2000r-3000r/min,離心2-6min,待離心結(jié)束后,經(jīng)離心的血液靜置1-2h,取上清液,備用。

(3)無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾:將上述上清液,放入冷凍箱中,進(jìn)行冷凍處理,待溫度降至-1℃后,上無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾器過(guò)濾,濾液,減壓濃縮至1/2濾液,得到小牛血去蛋白提取液。

(4)在步驟(3)中制得的小牛血去蛋白提取液中,加入維生素c,使提取液中維生素c質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1-3%,即得到本發(fā)明所述的小牛血去蛋白提取物。

上述所述的步驟(1)是取小牛血液加入1倍量含2%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至85℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍15min,備用。

上述所述的步驟(2)將步驟(1)處理后的小牛血液,倒入離心機(jī)中進(jìn)行離心,轉(zhuǎn)速為2500r/min,離心4min,待離心結(jié)束后,經(jīng)離心的血液靜置1.5h,取上清液,備用。

上述所述的步驟(3)所述的無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾為孔徑2-50nm的陶瓷膜,優(yōu)選孔徑為20-30nm,更優(yōu)選孔徑為25nm。

上述所述的步驟(4)是在步驟(3)中制得的小牛血去蛋白提取液中,加入維生素c,調(diào)節(jié)提取液中維生素c質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1-3%,即得到本發(fā)明所述的小牛血去蛋白提取物。

本發(fā)明的有益效果:

本發(fā)明提供的小牛血去蛋白提取物的制備方法,其通過(guò)快速升溫再進(jìn)行冷凍處理,其能更好的促使大分子物質(zhì)變性,利于后續(xù)離心處理,除去大分子蛋白,例外本發(fā)明采用了無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾技術(shù),并利用蛋白質(zhì)溶解度低的特性,采用冷液過(guò)濾,其提取的小牛血去蛋白活性高,藥效更為顯著,例外,本發(fā)明在提取液中加入一定量的維生素c,其能提高提取物溶液的穩(wěn)定性,使臨床用藥更為安全。

本發(fā)明為了進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的有益效果進(jìn)行闡述,還列舉了如下的試驗(yàn),旨在說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)效果,但絕不對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍作任何限定。

1、小牛血去蛋白提取物提取工藝篩選:

提取過(guò)程中,影響提取物質(zhì)量的因素主要為:血液前處理、過(guò)濾方式,因此試驗(yàn)以高分子物質(zhì)作為考察指標(biāo),進(jìn)行提取工藝研究,其試驗(yàn)結(jié)果如下1-3:

表1:不同的血液前處理對(duì)提取物質(zhì)量的影響

上述實(shí)驗(yàn)表明:本發(fā)明采用小牛血液加入1倍量含1-3%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至80-90℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍10-20min,的血液前處理方式,得到的提取物大分子物質(zhì)含量最低,其中熱處理溫度為80-90℃最佳。

表2:不同過(guò)濾方式對(duì)小牛血去白蛋提取物質(zhì)量的影響

上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明:本發(fā)明采用冷液上無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾器的方式,其提取物含大分子物質(zhì)量最小,質(zhì)量安全。

表3:不同穩(wěn)定劑對(duì)提取物加速穩(wěn)定性的考察

注:加速穩(wěn)定性試驗(yàn)條件為:溫度為32℃,相對(duì)濕度為86%。

上述試驗(yàn)表明:本發(fā)明采用小牛血去蛋白提取物中添加維生素c,作為穩(wěn)定劑,其經(jīng)3個(gè)月的加速溫度性試驗(yàn),其產(chǎn)品穩(wěn)定性明顯優(yōu)于吐溫組和不添加任何穩(wěn)定劑組。

上述試驗(yàn)表明,本發(fā)明篩選得到的小牛血去蛋白提取物制備方法,其操作簡(jiǎn)單,制得的提取物含大分子物質(zhì)低,質(zhì)量穩(wěn)定性好,能克服現(xiàn)有提取物中氨基酸和小肽在自然狀態(tài)下可互相聚合組成大分子量的肽,使藥品產(chǎn)生抗原性并降低了藥品的生物活性,用藥風(fēng)險(xiǎn)等缺陷。

具體實(shí)施方式:

實(shí)施例1:小牛血去蛋白提取物的制備

(1)取小牛血液加入1倍量含1%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至80℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍10-20min,備用。

(2)將步驟(1)處理后的小牛血液,倒入離心機(jī)中進(jìn)行離心,轉(zhuǎn)速為2000rr/min,離心2-6min,待離心結(jié)束后,經(jīng)離心的血液靜置1h,取上清液,備用。

(3)將上述上清液,放入冷凍箱中,進(jìn)行冷凍處理,待溫度降至-1℃后,上無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾器過(guò)濾,濾液,減壓濃縮至1/2濾液,得到小牛血去蛋白提取液。

(4)在步驟(3)中制得的小牛血去蛋白提取液中,加入維生素c,調(diào)節(jié)提取液中維生素c質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1%,即得到本發(fā)明所述的小牛血去蛋白提取物。

實(shí)施例2:小牛血去蛋白提取物的制備

(1)小牛血液處理液:取小牛血液加入1倍量含2%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至85℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍15min,備用。

(2)離心處理:將步驟(1)處理后的小牛血液,倒入離心機(jī)中進(jìn)行離心,轉(zhuǎn)速為2500r/min,離心4min,待離心結(jié)束后,經(jīng)離心的血液靜置1.5h,取上清液,備用。

(3)無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾:將上述上清液,放入冷凍箱中,進(jìn)行冷凍處理,待溫度降至-1℃后,上無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾器過(guò)濾,濾液,減壓濃縮至1/2濾液,得到小牛血去蛋白提取液。

(4)在步驟(3)中制得的小牛血去蛋白提取液中,加入維生素c,使提取液中維生素c質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2%,即得到本發(fā)明所述的小牛血去蛋白提取物。

實(shí)施例3:小牛血去蛋白提取物的制備

(1)小牛血液處理液:取小牛血液加入1倍量含3%稀氯化鈉水溶液攪拌混合均勻,快速升溫至90℃后,放入冷凍箱中冷凍至-1℃,冷凍20min,備用。

(2)離心處理:將步驟(1)處理后的小牛血液,倒入離心機(jī)中進(jìn)行離心,轉(zhuǎn)速為3000r/min,離心2-6min,待離心結(jié)束后,經(jīng)離心的血液靜置2h,取上清液,備用。

(3)無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾:將上述上清液,放入冷凍箱中,進(jìn)行冷凍處理,待溫度降至-1℃后,上無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾器過(guò)濾,濾液,減壓濃縮至1/2濾液,得到小牛血去蛋白提取液。

(4)在步驟(3)中制得的小牛血去蛋白提取液中,加入維生素c,使提取液中維生素c質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3%,即得到本發(fā)明所述的小牛血去蛋白提取物。

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