本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及吉西他濱的醫(yī)藥新用途，具體涉及吉西他濱在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用，以及吉西他濱或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分與藥用載體制成的藥物組合物。

背景技術(shù)：

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，ra)習(xí)慣稱類風(fēng)濕。我國以前的教科書和文獻上曾稱為僂麻質(zhì)斯、慢性風(fēng)濕病、畸形性關(guān)節(jié)炎、增殖性關(guān)節(jié)炎和萎縮性關(guān)節(jié)炎，以后多稱偽風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，二十世紀(jì)六十年代以后的文獻統(tǒng)一采用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的名稱。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種病因不明的慢性、消耗性、反復(fù)發(fā)作、以關(guān)節(jié)癥狀為主的自身免疫性疾病。該病多發(fā)于女性，其發(fā)病率國內(nèi)尚無精確的統(tǒng)計，估計在1.08％左右，歐美國家的發(fā)病率較高，約為0.5～3％。其典型的臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的對稱的多發(fā)性小關(guān)節(jié)炎，以手、腕、足、膝等關(guān)節(jié)最常受累。早期可有紅、腫、熱、痛和關(guān)節(jié)功能障礙。晚期關(guān)節(jié)可出現(xiàn)不同程度的強直和畸形，并有骨腐蝕和骨骼肌的萎縮，嚴(yán)重影響日常生活和工作，是一種致殘率較高的疾病。

吉西他濱是一種破壞細胞復(fù)制的二氟核苷類抗代謝物抗癌藥，被用于治療不能手術(shù)的晚期或轉(zhuǎn)移性胰腺癌及治療局部進展性或轉(zhuǎn)移性非小細胞肺癌，治療中、晚期非小細胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌及其他實體腫瘤等。

吉西他濱通過破壞細胞的dna復(fù)制，導(dǎo)致dna斷裂，細胞死亡，研究表明，其作用對機體免疫細胞同樣有效，通過作用于免疫活性淋巴細胞，從而改善t，b細胞及巨噬細胞和自然殺傷細胞功能，對由自身抗體引起的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有明顯的調(diào)節(jié)和治療作用，其作用相當(dāng)于生物制劑，能在難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療中發(fā)揮了重要作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究設(shè)計吉西他濱在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

吉西他濱的結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的目的是提供一種吉西他濱在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

通過體內(nèi)外ra相關(guān)因子(類風(fēng)濕因子(rf-igm)、抗環(huán)狀瓜氨酸(ccp)抗體、類風(fēng)濕因子igg及iga、抗核周因子、抗角蛋白抗體，以及抗核抗體、抗ena抗體)用藥前后測定，結(jié)果顯示，吉西他濱有較好的體內(nèi)外治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性。因此，可用于制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物，有較大的臨床應(yīng)用價值。

本發(fā)明的另一目的是提供以吉西他濱或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分，用于制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，尤其用于制備治療難治性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物組合物。

本發(fā)明的吉西他濱可按照常規(guī)方法制備為其藥學(xué)接受的鹽的形式。包括其無機酸鹽和有機酸鹽：無機酸包括(但不限于)鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸、硝酸等；有機酸包括(但不限于)乙酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、對甲苯磺酸、水楊酸、草酸等。

本發(fā)明所述吉西他濱或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分在藥物組合物中的重量配比為5-95％。

本發(fā)明藥物組合物可通過口服和注射給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其職稱常規(guī)的固體制劑如片劑、顆粒劑、膠囊等或制成液體制劑如水或油懸浮劑、糖漿等；用于注射給藥時，可將其制成針劑和經(jīng)皮給藥的劑型等。

本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使吉西他濱進行合成，然后將其制成所需的劑型。

附圖說明

圖1是lps刺激的raw264.7細胞生成no的影響圖。

圖1中，1為空白對照組，2為模型組，3為陽性藥物對照組，4、5、6、7、8為吉西他濱組(濃度分別為10、3、1、0.3、0.1μm/l)*p<0.05**p<0.01。

圖2是吉西他濱對lps刺激的raw264.7炎癥細胞tnf-α的影響圖。

圖2中，1為空白對照組，2為模型組，3為陽性藥物對照組，4為1μm/l吉西他濱組，*p<0.05**p<0.01。

圖3是吉西他濱對lps刺激的raw264.7炎癥細胞il-1β的影響圖。

圖3中，1為空白對照組，2為模型組，3為陽性藥物對照組，4為1μm/l吉西他濱組，*p<0.05**p<0.01。

圖4是吉西他濱體外抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用(大鼠后足關(guān)節(jié)病變程度)。

圖4中，1為模型組，2為甲氨蝶呤組，3為吉西他濱低劑量組，4為吉西他濱高劑量組，*p<0.05**p<0.01。

具體實施方式

本發(fā)明公開了一種吉西他濱在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用，下文將以具體實施方式的形式闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些具體實施例僅僅是闡述性的，而非限制性的。在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可對本發(fā)明做出適當(dāng)?shù)男薷暮妥儎?。這些修改和變動都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。實驗中使用的各種試劑都可從市場上購得，其用量除非另有說明否則按照常規(guī)的量使用。

實施例1：基于剌激的炎癥細胞模型的吉西他濱的篩選

raw264.7細胞(購自中科院生科院細胞庫)輕輕吹打下來后，加入dmem培養(yǎng)基(gibco)調(diào)整細胞濃度至5*10^5細胞/ml，以200μl每孔的量接種至96孔板中，于5％co2和37℃條件下培養(yǎng)過夜后，去除100μl培養(yǎng)上清后，加入50μl含不同濃度(10μm/l、3μm/l、1μm/l、0.3μm/l、0.1μm/l)吉西他濱的磷酸鹽緩沖液，反應(yīng)1小時后，再加入50μl含1μg/ml的lps(sigma)的磷酸鹽緩沖液，于co2培養(yǎng)箱(thermo)培養(yǎng)24小時。吸取100μl培養(yǎng)上清液于1.5ml離心管保存，放至冰箱中保存?zhèn)溆?。各孔加?0μlmtt(5mg/ml)(sigma)，37℃孵育4小后，小心去除上清，每孔加入150μldmso(sigma)，酶標(biāo)儀(perkinelmer)570nm檢測各孔的吸光值。

結(jié)果說明：mtt結(jié)果表明，當(dāng)濃度為10μm/l時，吉西他濱對lps刺激的raw264.7細胞增殖無明顯抑制作用，所以本專利選取吉西他濱的實驗濃度為10、3、1、0.3、0.1μm/l。

實施例2：對lps刺激的raw264.7細胞生成no的影響

取出收集好的培養(yǎng)上清，梯度解凍，加入樣品50μl到96孔板，然后再加入格里斯試劑150μl，再加入格里斯試劑250μl，渦旋震蕩均勻后，于540nm處檢測各孔吸光值。

結(jié)果說明：lps刺激后，raw264.7細胞no濃度明顯升高，藥物處理后結(jié)果顯示，吉西他濱在濃度為10、3、1、0.3、0.1μm/l時可明顯降低raw264.7細胞上清液no水平，且成劑量效應(yīng)關(guān)系。

實施例3：吉西他濱對lps刺激的raw264.7炎癥細胞il-1β和tnf-α水平的影響

raw264.7細胞輕輕吹打下來后，加入dmem培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度至5*10^5細胞/ml，以200μl每孔的量接種至96孔板中，于5％co2和37℃條件下培養(yǎng)過夜后，去除100μl培養(yǎng)上清后，加入50μl含1μm/l吉西他濱的磷酸鹽緩沖液，反應(yīng)1小時后，再加入50μl含1μg/ml的lps的磷酸鹽緩沖液，于co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。吸取培養(yǎng)上清液，稀釋后，根據(jù)試劑盒(碧云天)說明書進行操作，終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀檢測450nm下各孔的吸光度。

結(jié)果說明：正常raw264.7細胞上清tnf-α和il-1β含量低，經(jīng)過lps刺激后，tnf-α和il-1β的含量明顯增加。1μm/l吉西他濱對raw264.7細胞分泌tnf-α和il-1β有明顯的抑制作用。

實施例4：吉西他濱體外抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用

將30只實驗大鼠(廣東省實驗動物中心)按隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組、陽性藥組(甲氨蝶呤)、吉西他濱高劑量組(42mg/kg)、吉西他濱低劑量組(10mg/kg)，每組6只。將所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，在大鼠(正常組除外)左后足跖部皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑0.1ml/只致炎，并于第二天進行預(yù)防性給藥，吉西他濱高低劑量組分別為42mg/kg，10mg/kg，陽性對照組為3mg/kg。模型組、正常組給予等劑量蒸餾水。給藥途徑為灌胃法，灌胃體積每只1ml，每日1次，給藥28天。致炎后第二天開始觀察并記錄各組大鼠后足關(guān)節(jié)病變程度，每3天1次。每只足爪的關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)：0＝正常，無腫脹；1＝踝關(guān)節(jié)輕微腫脹并出現(xiàn)紅斑；2＝踝關(guān)節(jié)到跖關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)輕微腫脹并出現(xiàn)紅斑；3＝踝關(guān)節(jié)到跖趾關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)中毒腫脹并出現(xiàn)紅斑；4＝踝關(guān)節(jié)到跖關(guān)節(jié)重度腫脹并出現(xiàn)紅斑。致炎后7天開始，沒隔一周用游標(biāo)卡尺測量出足趾踝關(guān)節(jié)寬度，直到處死動物。

結(jié)果說明：實驗前各組大鼠之間足爪踝關(guān)節(jié)歡度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組、各劑量吉西他濱組及甲氨蝶呤組大鼠足爪踝關(guān)節(jié)寬度均于造模后7天開始增高，與正常組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義，于造模后14、21天，各劑量吉西他濱及甲氨蝶呤組與模型組比較，均能顯著性將降低大鼠的足腫脹程度，且呈劑量依賴性。

由上可知，通過實施例1-4的實驗結(jié)果表明，吉西他濱具有較好的體內(nèi)外抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物活性，因此可以證實吉西他濱可用于制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物。