本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：膿毒癥腎功能障礙(septicrenaldysfunction)在危重病患者中發(fā)病率高，是膿毒癥造成進行性腎實質(zhì)損害，導(dǎo)致代謝廢物儲留體內(nèi)，水、電解質(zhì)及酸堿失衡，是膿毒癥患者最嚴重的并發(fā)癥之一。流行病學(xué)資料顯示，30～50％的膿毒癥患者發(fā)生腎功能障礙。由于膿毒癥發(fā)病率以每年8～13％的比例增長，預(yù)計到2030年，世界范圍的嚴重膿毒癥病例數(shù)將達到1100萬，這也意味著屆時膿毒癥致腎功能障礙患者預(yù)計達到450萬左右。同時腎功能障礙的發(fā)生與感染的嚴重程度呈正比，腎功能障礙在全身性感染患者中的患病率為21％，在嚴重感染患者中的患病率約為37％，在感染性休克患者中患病率可高達52％。膿毒癥腎功能障礙發(fā)生后，又會促進和加重其它臟器的損傷，導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征、增加死亡率。中醫(yī)基礎(chǔ)理論認為：虛、毒、瘀是導(dǎo)致膿毒癥腎功能障礙發(fā)生、發(fā)展的主要病因。氣虛是病機之本，毒邪是是發(fā)病基礎(chǔ)，血瘀是機體的病理產(chǎn)物。一方面，“氣為血之帥，氣行則血行”，氣虛致營血運行不暢，瘀阻脈絡(luò)；另一方面，正氣虛弱，以致毒邪入侵，正邪相爭，入里化熱，熱灼津液，煉津成瘀，毒損絡(luò)脈，迫血妄行成瘀，導(dǎo)致瘀滯脈絡(luò)、閉阻腎脈；絡(luò)脈瘀滯，氣化不及，升清降濁功能失常，導(dǎo)致無法疏導(dǎo)、轉(zhuǎn)輸、運化水液及毒物，又進一步加重毒熱、瘀血內(nèi)阻，致腎經(jīng)失養(yǎng)、機能失調(diào)，導(dǎo)致腎功能障礙的發(fā)生；氣虛、血瘀、毒邪三者相互從化，互為因果，形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致病情危重難治。雖然近年來，隨著早期診斷水平的不斷提高，膿毒癥腎功能障礙患者預(yù)后較以前有所改善。但值得關(guān)注的是，與非膿毒癥致腎功能障礙及單純膿毒癥患者相比，膿毒癥腎功能障礙患者死亡率顯著增加，維持在55～75％。臨床上，對膿毒癥腎功能障礙缺乏有效的治療手段，目前主要依賴于腎臟替代治療(renalreplacementtherapy)，但遺憾的是，這不僅不能有效降低患者病死率，相反地卻加重了患者的經(jīng)濟負擔(dān)。cn201410754727.9公開一種用于治療膿毒癥的中藥及其制備方法，由以下重量配比的藥材制備而成：升麻10份、赤芍15份、丹皮10份、銀花30份、連翹15份、赤石脂10份、生大黃6份、黃芩10份、黃連5份、穆庫沒藥8份、敗醬草5份、麥冬10份、細毒蒜5份、牛膝6份、喜馬拉雅紫茉莉5份、水雞油3份。該配方主要用于預(yù)防和治療膿毒癥，對膿毒癥腎功能障礙作用不顯著，具有一定的局限性。cn201510677722.5公開一種治療膿毒癥心功能障礙的中藥組合物，該藥物由活性成份和藥學(xué)上可接受的賦形劑組成，其中所述的活性成份是由下述原料制成：桂枝、丹參、太子參、蘇合香酯、人工牛黃、生大黃；該專利的中藥組合物有效組分和賦形劑共同制備成，可以有效改善膿毒癥心功能障礙患者的心功能，但對于膿毒癥腎功能障礙沒有相關(guān)的作用，具有一定的局限性。cn201610850155.3公開一種預(yù)防膿毒癥急性胃腸損傷的中藥組合物，其包括：黃連、黃芩、黃柏、梔子、牡丹皮、生地黃、赤芍、和枳殼。該中藥組合物能夠使膿毒癥患者急性胃腸損傷的發(fā)生率顯著降低，但對于膿毒癥腎功能障礙沒有相關(guān)的作用，具有一定的局限性。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物及其制備方法，該中藥組合物配方無毒副作用，具有安全性和實用性，能有效治療膿毒癥腎功能障礙，進一步提供操作簡單、成本低的制備方法。為解決上述問題，采用的技術(shù)方案如下：一方面，本發(fā)明提供的一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物，其有效成分的原料藥為車前子、丹參、蘇合香酯、黃芪、人工牛黃、全蝎、生大黃、白茅根。進一步地，本發(fā)明提供的一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物，其有效成分的原料藥的重量份為：車前子12～18份、丹參12～18份、蘇合香酯0.9～1.3份、黃芪30～50份、人工牛黃0.8～1.2份、全蝎0.9～1.3份、生大黃12～18份、白茅根30～45份。進一步地，本發(fā)明提供的一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物，其有效成分的原料藥的重量份為：車前子12～15份、丹參12～15份、蘇合香酯0.9～1.1份、黃芪30～45份、人工牛黃0.9～1.1份、全蝎0.9～1.1份、生大黃12～15份、白茅根30～45份。更進一步地，本發(fā)明提供的一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物，其有效成分的原料藥的重量份為：車前子15份、丹參15份、蘇合香酯1份、黃芪45份、人工牛黃1份、全蝎1份、生大黃12份、白茅根45份。另一方面，本發(fā)明提供一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥制劑，其包括本發(fā)明所述的中藥組合物和藥學(xué)上可接受的載體。進一步地，所述載體包括水、填料、矯味劑、甘油、其他合適的添加劑或其組合。本發(fā)明的上述中藥組合物中可以加入制備不同的劑型時所需的各種常規(guī)輔料，例如崩解劑、潤滑劑、黏合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用的膏劑、貼劑或口服制劑，例如可以是：貼劑、膏劑、丸劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑或口服液等。另一方面，本發(fā)明提供一種治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物或中藥制劑的用途，其可用于治療、預(yù)防或處理膿毒癥腎功能障礙。另一方面，本發(fā)明提供一種本發(fā)明所述的治療膿毒癥腎功能障礙的中藥組合物的制備方法，包括如下步驟：1)取車前子、丹參、黃芪、生大黃和白茅根加水煎煮，過濾后合并濾液，濃縮得濃縮液；2)在濃縮液中加入乙醇，冷藏靜置后濃縮，濃縮得浸膏；3)取蘇合香脂、人工牛黃和全蝎，粉碎，得藥粉；4)將浸膏和藥粉混勻，干燥制得中藥組合物。進一步地，將步驟4)所得中藥組合物粉碎過120目篩后，加入藥學(xué)上可接受的載體，制備得到中藥制劑。進一步地，步驟2)中所述乙醇的濃度為55％～75％。所述乙醇的用量為濃縮液體積的2～3倍。進一步地，所述步驟1)中煎煮的水的用量為所用藥材的體積2～3倍量。進一步地，所述步驟2)中冷藏靜置是指冷藏在4℃以下靜置至少12h。優(yōu)選靜置的時間為12～24h。進一步地，所述浸膏的相對密度為1.10～1.20。進一步地，所述步驟3)中粉碎至120目以下。進一步地，所述步驟4)中干燥的溫度為60～80℃。進一步地，所述中藥組合物和載體的重量配比為1:1～5。本發(fā)明的中藥組合物具有益氣活血、解毒利水、通腑滲瀉的功效，用于膿毒癥腎功能障礙，可以顯著降低血清肌酐、尿素氮、胱抑素等，增加尿量，改善腎血流動力學(xué)參數(shù)，抑制炎癥因子，保護內(nèi)皮等，臨床療效顯著。本發(fā)明的中藥組合物能夠有效降低膿毒癥造成的腎臟損傷血清標記物、保護腎功能、抑制炎癥反應(yīng)，改善腎臟血流動力學(xué)等作用，對于膿毒癥腎功能障礙患者具有多靶點、多層次的保護作用，填補了該治療領(lǐng)域的空白。本發(fā)明提供的制備方法簡單，操作方便，整個反應(yīng)過程條件溫和，市場前景廣闊。方解：本方治證膿毒癥腎功能障礙由正氣虛弱、瘀毒互結(jié)腎經(jīng)所致。由于臟腑功能失調(diào)，氣化不及，升清降濁功能失常，導(dǎo)致無法疏導(dǎo)、通調(diào)水液及毒物，而造成血瘀、濕濁和毒邪儲留，形成虛中夾實的復(fù)雜局面。治宜益氣活血、解毒利水、通腑滲瀉。方中黃芪甘溫，益氣、升陽利水，為君藥。白茅根甘涼，解毒、涼血、利尿；全蝎甘辛，通絡(luò)、解毒，與黃芪相配，加強扶正祛邪之功，為臣藥。蘇合香甘辛，辟穢、開郁；丹參苦微寒，祛瘀、活血、通絡(luò)；大黃苦寒，通腑瀉濁；牛黃苦涼，清熱解毒，皆為佐藥。車前子甘寒，入腎、膀胱經(jīng)，利水清熱，為使藥。諸藥相合，共奏益氣活血、解毒利水、通腑滲瀉的功效。具體實施方式下面以具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明不受下述實施例的限定。實施例1原料藥組成：車前子15份、丹參15份、蘇合香酯1份、黃芪45份、人工牛黃1份、全蝎1份、生大黃12份、白茅根45份。制備方法：1)按配比稱取車前子、丹參、黃芪、生大黃和白茅根，加藥材體積2倍量的蒸餾水，煎煮2次，每次45分鐘，過濾后合并濾液并濃縮，得到濃縮液；2)在濃縮液加入體積2倍量的濃度為65％的乙醇，攪拌均勻，4℃以下靜置12小時過濾，回收乙醇，濃縮至相對密度1.10～1.20，得浸膏；3)將配比稱取蘇合香脂、人工牛黃和全蝎，粉碎至120目以下，得藥粉；將浸膏和藥粉混勻，80℃烘干，粉碎，過120目篩，加入藥學(xué)上可接受的載體造成顆粒劑，顆粒劑規(guī)格為每袋裝30克，3.5g生藥/1g顆粒劑。實施例2原料藥組成：車前子12份、丹參12份、蘇合香酯1.1份、黃芪30份、人工牛黃1.2份、全蝎1.3份、生大黃15份、白茅根45份。制備方法：1)按配比稱取車前子、丹參、黃芪、生大黃和白茅根，加藥材體積2倍量的蒸餾水，煎煮3次，每次30分鐘，過濾后合并濾液并濃縮，得到濃縮液；2)在濃縮液加入體積2倍量的濃度為75％的乙醇，攪拌均勻，4℃以下靜置18小時過濾，回收乙醇，濃縮至相對密度1.10～1.20，得浸膏；3)將配比稱取蘇合香脂、人工牛黃和全蝎，粉碎至120目以下，得藥粉；將浸膏和藥粉混勻，60℃烘干，粉碎，過120目篩，加入藥學(xué)上可接受的載體混合均勻，制粒，整粒，壓片制成片劑，片劑規(guī)格為每片可以裝0.2、0.4或0.5克。實施例3原料藥組成：車前子15份、丹參15份、蘇合香酯0.9份、黃芪45份、人工牛黃0.8份、全蝎1.1份、生大黃12份、白茅根30份。制備方法：1)按配比稱取車前子、丹參、黃芪、生大黃和白茅根，加藥材體積2倍量的蒸餾水，煎煮4次，每次25分鐘，過濾后合并濾液并濃縮，得到濃縮液；2)在濃縮液加入體積2倍量的濃度為55％的乙醇，攪拌均勻，4℃以下靜置24小時過濾，回收乙醇，濃縮至相對密度1.10～1.20，得浸膏；3)將配比稱取蘇合香脂、人工牛黃和全蝎，粉碎至120目以下，得藥粉；將浸膏和藥粉混勻，70℃烘干，粉碎，過120目篩，加入藥學(xué)上可接受的載體混合均勻，粉碎成粉狀制成散劑，散劑規(guī)格為每袋可以裝3、5、8或10克。實施例4原料藥組成：車前子18份、丹參18份、蘇合香酯1.3份、黃芪50份、人工牛黃1.1份、全蝎0.9份、生大黃18份、白茅根40份。制備方法：1)按配比稱取車前子、丹參、黃芪、生大黃和白茅根，加藥材體積3倍量的蒸餾水，煎煮2次，每次35分鐘，過濾后合并濾液并濃縮，得到濃縮液；2)在濃縮液加入體積3倍量的濃度為65％的乙醇，攪拌均勻，4℃以下靜置20小時過濾，回收乙醇，濃縮至相對密度1.10～1.20，得浸膏；3)將配比稱取蘇合香脂、人工牛黃和全蝎，粉碎至120目以下，得藥粉；將浸膏和藥粉混勻，80℃烘干，粉碎，過120目篩，加入藥學(xué)上可接受的載體混合均勻，裝入膠囊制成膠囊劑，膠囊劑規(guī)格為每?？梢匝b0.1、0.2、0.3、0.4或0.5克。以下實驗中使用的“本發(fā)明藥物”，如無特別說明，均指實施例1制備得到的顆粒劑。實驗一：臨床試驗為了進一步表明本發(fā)明藥物對膿毒癥腎功能障礙的治療效果，將本發(fā)明藥物對56例膿毒癥腎功能障礙患者進行系統(tǒng)臨床觀察，并選擇病史、病情、年齡、性別及原治療方法相當(dāng)?shù)哪摱景Y腎功能障礙患者52例為對照組。從廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科選擇病例，參照2001年sccm、esicm、accp、ats、sis等組織國際膿毒癥會議的定義以及國際改善全球腎臟病預(yù)后組織(kdigo)2012指南，確診的膿毒癥腎功能障礙患者，年齡在18～70歲。膿毒癥腎功能障礙即：膿毒癥患者合并48h內(nèi)血肌酐升高≥26.5μmol/l；或較基礎(chǔ)值升高≥50％；或尿量＜0.5ml/kg/h，持續(xù)6h以上。排除由以下原因引起的腎功能障礙：①原有慢性腎功能障礙需透析者或血鉀大于6.5mmol/l不能糾正者；②嚴重免疫功能低下患者或近期化療或免疫抑制劑患者；③使用造影劑或腎毒性藥物引起aki患者；④中藥過敏患者等。對照組患者：根據(jù)國際膿毒癥治療指南進行綜合治療，包括積極抗感染、氧療或機械通氣、液體復(fù)蘇、營養(yǎng)支持、血糖控制、預(yù)防深靜脈血栓形成等治療；停用其他的任何中藥(包括中成藥)；試驗組患者：在上述綜合治療的基礎(chǔ)上，服用本發(fā)明的藥物；對試驗組和對照組采用相同的方法定期檢查，觀察期治療前、治療第3天和第7天清晨三個時間點的腎損傷標記物和炎癥介質(zhì)水平，同時評價尿量(ml·kg-1·h-1)。并采用腎動脈彩超血液成像(cdfi)對腎血流進行測定。詳細記錄患者病情變化，并根據(jù)相關(guān)檢查對患者的病情進行急性病生理學(xué)和長期健康評價(acutephysiologyandchronichealthevaluation-ii，apache-ii)和序貫器官衰竭評分(sequentialorganfailureassessment，sofa)。檢測腎損傷標記物包括：血清肌酐(serumcreatinine，scr)、尿素氮(bloodureanitrogen，bun)、血清胱抑素c(cystatinc，cysc)使用olympusau5400全自動生化儀檢測。其中scr和bun是使用beckman公司生產(chǎn)的肌酐試劑盒(苦味酸法)和尿素氮試劑盒(乳酸脫氫酶法)；β2微球蛋白使用散射比濁法測定(美國beckman公司提供試劑盒)；cysc使用的是olympus公司生產(chǎn)的半胱氨酸蛋白酶抑制劑c透射比濁檢測試劑盒(液相透射比濁法)。檢測炎癥介質(zhì)包括c反應(yīng)蛋白(creactiveprotein，crp)采用第二代quickread快速crp分析儀(芬蘭oriondiagnostica公司生產(chǎn))；采用放免液相競爭法測定il-6和tnf-α血清濃度，試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。測定腎動脈血流參數(shù)應(yīng)用gevivid7彩色多普勒超聲顯像儀，3.5～6.0mhz的探頭測量。在腹主動脈旁找到腎動脈，在距起點1～2cm處測量其內(nèi)徑，脈沖多普勒取樣容積置于腎動脈管腔內(nèi)，測量收縮期峰血流速度(vsmax，cm/s)、舒張末最低血流速度(vdmin，cm/s)、腎血流量(q，ml/min)，計算出阻力指數(shù)(ri)。安全性檢測包括：一般體檢項目；血、尿、糞便常規(guī)化驗，于試驗前后各檢查1次；肝功能化驗，試驗前后各檢查1次；心肌酶學(xué)檢查。對試驗期間出現(xiàn)的不良反應(yīng)，應(yīng)將其癥狀、程度、出現(xiàn)時間、持續(xù)時間、處理措施、經(jīng)過等記錄于觀察表，并且在綜合考慮合并癥的基礎(chǔ)上，評價其與試驗藥物的相關(guān)性，并由醫(yī)師詳細記錄。數(shù)據(jù)用spss12.0軟件處理，數(shù)據(jù)結(jié)果以表示，計數(shù)資料用卡方檢驗；符合正態(tài)分布的計量資料采用t檢驗，p<0.05則認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。臨床試驗結(jié)果如表1～表5所示。治療前，兩組患者在年齡、性別、入院apache-ii評分、sofa評分、感染程度、感染部位等無差異。1、對膿毒癥腎功能障礙患者腎功能影響表1為試驗組與對照組治療前后，膿毒癥腎功能障礙患者的腎功能情況的對比，從表中可以看出：治療前兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。治療后第7天試驗組患者的肌酐、尿素氮、胱抑素c和β2微球蛋白水平較對照組均明顯降低(p<0.05)，由此可見，本發(fā)明藥物在改善膿毒癥腎功能等方面有顯著的療效。表1：兩組膿毒癥腎功能障礙患者腎功能情況比較注：*與對照組相應(yīng)時間點比較p<0.05。2、對膿毒癥腎功能障礙患者尿量的影響由表2可知，兩組患者治療前尿量比較無差異(p<0.05)，治療7天后檢測時間點，治療組尿量明顯增加，與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。表2兩組膿毒癥腎功能障礙患者尿量變化注：*與對照組相應(yīng)時間點比較p<0.05。3、對膿毒癥腎功能障礙患者炎癥介質(zhì)影響的對比研究表3試驗組與對照組治療前后炎癥介質(zhì)水平的對比，試驗組crp、il-6和tnf-α水平較對照組在各檢測時間點均降低(p<0.05)。由此可見，本發(fā)明藥物可有效抑制炎癥反應(yīng)。表3：膿毒癥腎功能障礙患者炎癥介質(zhì)變化情況注：*與對照組相應(yīng)時間點比較p<0.05。4、對膿毒癥腎功能障礙患者腎血流參數(shù)的影響兩組治療前腎血流收縮期峰血流速度、舒張末最低血流速度、腎血流量、阻力指數(shù)等比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。由表4可知，治療7天后，兩組指標均好轉(zhuǎn)；試驗組各項腎血流參數(shù)均優(yōu)于對照組(p<0.05)。提示本發(fā)明藥物治療腎功能障礙的可能與改善腎臟血流動力學(xué)、增加腎血流量相關(guān)。表4：兩組膿毒癥腎功能障礙患者腎血流參數(shù)的比較注：*與對照組相應(yīng)時間點比較p<0.05。5、對膿毒癥腎功能障礙患者危重程度評分的影響由表5可知，兩組患者治療前apache-ii評分、sofa評分等比較未見統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；治療7天后，試驗組apache-ii評分、sofa評分比對照組顯著降低(p<0.05)。表5：兩組膿毒癥腎功能障礙患者腎血流參數(shù)的比較注：*與對照組相應(yīng)時間點比較p<0.05。6、對膿毒癥腎功能障礙患者的不良反應(yīng)臨床使用過程中，本發(fā)明藥物不良反應(yīng)，安全性良好。試驗組1例患者用藥3天后出現(xiàn)輕度腹瀉，無皮疹等其他不適，心電圖未見明顯異常；肝功能、凝血功能未見異常。實驗二：動物試驗為了表明本發(fā)明藥物對膿毒癥腎功能障礙的藥效，將本發(fā)明藥物對不同重量、年齡、性別的鼠進行動物試驗。1、毒性藥理試驗清潔級nih健康小鼠20只，(30±2)g，隨機分為試驗組和對照組，雌雄各半。試驗組：選用本發(fā)明藥物，充分溶于100ml蒸餾水中，按照最大耐受量法，每次給藥0.5ml/10g(含生藥50mg)，每日3次。對照組：給予試驗組同等劑量的蒸餾水。給藥后2小時恢復(fù)正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察10天，每天觀察有無死亡及其飲食、活動、毛色、排泄等情況；于10天后隨機解剖小鼠12只，灌藥組8只(雌雄各半)，對照組4只(雌雄各半)，觀察其主要器官有無異常。10天內(nèi)未見小鼠死亡；其飲食、活動、毛色、排泄均未見明顯異常；解剖小鼠，肉眼觀察灌藥組各主要器官形態(tài)未見異常，與對照組無差別。實驗得到動物口服最大耐受量(mtd)為50g/kg；而正常臨床用量為0.050g/kg；實驗所得最大耐受量(mtd)是正常臨床用量的1000倍。結(jié)果表明：本發(fā)明藥物的毒性低，具有良好的安全性。2、藥效驗證sd大鼠90只，隨機分為對照組(n＝30)、膿毒癥組(n＝30)、試驗組(n＝30)。試驗組灌予本發(fā)明的藥物1ml(30mg顆粒劑/ml)，其余2組均灌予生理鹽水1ml，各組灌藥持續(xù)2周后造模。膿毒癥模型通過大鼠盲腸結(jié)扎穿孔法獲得，即：大鼠術(shù)前禁食12h，腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(0.3mg/100g)實施麻醉，于腹前正中作長約2cm切口，游離腸系膜和盲腸，以30號絲線環(huán)形結(jié)扎盲腸根部，結(jié)扎完畢應(yīng)仔細檢查，保持腸道通路正常。在與腸系膜相對的盲腸腸壁膜面用18號針頭穿刺2處。針孔之間相距約1cm。輕輕擠壓腸管使糞便自穿刺點溢出，還納腸管，逐層縫合關(guān)腹。術(shù)中密切觀察大鼠生命體征，術(shù)畢腹壁皮下注射生理鹽水5ml/100g，進行液體復(fù)蘇，注意暖箱保暖。術(shù)后自由進食食水。對照組不結(jié)扎、穿孔盲腸，余同上述。觀察評價在造模后12h、24h、48h、72h四個時間點各組死亡率。采集血清標本：沿腹正中線剪開腹腔，腹主動脈取血2ml，置肝素管中，離心取血清，于-20℃冰箱保存。采集腎臟標本：打開腹腔，取出腎臟，沿冠狀面直徑最大處剪取2mm厚度腎臟置于10％甲醛固定、保存。血清肌酐、血清尿素氮和腎臟損傷標記物尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin，ngal)的檢測：取備用血清用放射免疫法測定，具體由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中心實驗室負責(zé)。采用elisa法測定血清一氧化氮(nitricoxide，no)、內(nèi)皮素-1(endothelin-1，et-1)含量。所有計量資料均采用t檢驗，均由spss13.0軟件包處理，以p<0.05表示有顯著統(tǒng)計意義。動物試驗結(jié)果如表6～表13所示。2.1、膿毒癥腎功能影響的比較腎功能的變化如表6、表7和表8所示：膿毒癥組大鼠血清肌酐、尿素氮和尿ngal較對照組明顯升高(p<0.05)；而中藥組上述指標均下降，具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。提示本發(fā)明藥物可以改善膿毒癥大鼠腎功能障礙。表6：膿毒癥大鼠血清肌酐(μmol/l)變化情況組別6h12h24h對照組71.52±8.2371.34±7.4370.61±7.21膿毒癥組88.20±12.61*116.14±11.49*171.59±9.43*試驗組76.43±10.53#73.65±10.40#75.17±11.43#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。表7：膿毒癥大鼠血清尿素氮(mmol/l)變化情況組別6h12h24h對照組7.34±1.027.31±1.037.32±1.02膿毒癥組9.29±1.21*14.16±1.19*19.91±2.31*試驗組8.03±1.03#7.99±1.34#7.57±1.13#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。表8：膿毒癥大鼠尿ngal(ng/ml)變化情況組別6h12h24h對照組33.78±5.2333.31±4.0333.39±5.02膿毒癥組139.20±19.29*174.18±23.68*199.93±32.31*試驗組88.56±11.08#117.57±17.57#141.02±16.34#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。2.2、膿毒癥大鼠腎臟形態(tài)觀察和組織病理變化對照組腎臟形態(tài)無明顯異常，小鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小管、腎小球正常，腎小管上皮細胞未見變性、萎縮、腫脹壞死或炎性浸潤，管腔無擴張。膿毒癥組腎小球毛細血管擴張、充血，腎小管上皮細胞水腫、顆粒樣變性或空泡變性，管腔縮小，以術(shù)后1天和3天為損傷最明顯。中藥組腎小球毛細血管充血、腎小管上皮細胞水腫明顯減輕，可見少許炎性浸潤，管腔輕度擴張。2.3、膿毒癥大鼠腎臟組織損傷病理評分比較由表9看出，膿毒癥組大鼠腎臟組織損傷病理評分在術(shù)后各時間點均顯著升高，與對照組相比有顯著差異(p<0.05)；中藥組各時間點腎臟組織損傷病理評分與膿毒癥組相比，顯著性減輕(p<0.05)。表9：膿毒癥大鼠腎臟組織損傷病理評分變化情況組別24h72h對照組0.89±0.130.91±0.12膿毒癥組1.78±0.24*1.97±0.21*試驗組1.15±0.15#1.22±0.30#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。2.4、對膿毒癥死亡率影響的對比研究由表10看出，對照組大鼠沒有出現(xiàn)死亡；膿毒癥組四個時間點死亡率分別是10％、13.33％、20％、30％；中藥組大鼠死亡率較膿毒癥組降低，在造模后第12h、48h和72h三個時間點死亡率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。表10膿毒癥大鼠死亡率比較組別例數(shù)12h(％)24h(％)48h(％)72h(％)對照組300(0)0(0)0(0)0(0)膿毒癥組303(10)*4(13.33)*6(20)*9(30)*試驗組300(0)3(10)3(10)#4(13.33)#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。2.5、對膿毒癥炎癥介質(zhì)影響的對比研究由表11可知，膿毒癥組大鼠血清il-1β、il-6、tnf-α和sirt1濃度較對照組均有明顯升高(p<0.05)，中藥組大鼠血清il-1β、il-6、tnf-α和sirt1濃度在同一時間點較模型組顯著降低(p<0.05)。表11：膿毒癥大鼠炎癥介質(zhì)變化情況注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。2.6、對膿毒癥腎臟細胞凋亡影響的比較由表12可知，對照組大鼠腎臟組織凋亡較少，caspase3主要表達于腎小管上皮細胞胞質(zhì)中；膿毒癥組大鼠caspase3表達明顯增多，在腎小管上皮細胞、腎小球血管內(nèi)皮細胞胞質(zhì)和胞核均有表達，凋亡增多(p<0.05)。中藥組大鼠與膿毒癥組比較，caspase3表達顯著減少(p<0.05)。提示本發(fā)明藥物可以抑制膿毒癥大鼠腎臟細胞凋亡。表12：膿毒癥大鼠腎臟細胞凋亡的影響組別凋亡率(％)caspase3表達對照組1.87±0.122.05±0.25膿毒癥組11.8±2.29*9.98±2.11*試驗組2.55±0.95#4.18±1.31#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。2.7、對膿毒癥內(nèi)皮功能影響的比較由表13可知，膿毒癥組大鼠血管收縮活性物質(zhì)et-1水平顯著增加，而血管擴張因子enos，水平顯著減少，說明膿毒癥大鼠內(nèi)皮功能嚴重失衡，與對照組大鼠比較有顯著性差異(p<0.05)。與膿毒癥組比較，中藥組大鼠血清et-1含量降低，enos水平增加，有顯著性差異(p<0.05)。表13：膿毒癥大鼠內(nèi)皮功能的影響組別enos(u/l)et-1(pg/ml)對照組44.28±3.5651.8±2.26膿毒癥組15.21±2.14*97.7±4.81*試驗組29.15±2.41#61.6±3.18#注：*與對照組比較p<0.05；#與膿毒癥組比較p<0.05。綜合上述結(jié)果可以知道，本發(fā)明藥物能改善膿毒癥引起的腎臟功能的改變，減輕腎臟病理損傷，抑制炎癥反應(yīng)和細胞凋亡，改善內(nèi)皮功能。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12