本發(fā)明涉及治理風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及了三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途。

背景技術(shù)：

風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種常見的急性或慢性結(jié)締組織炎癥，可反復(fù)發(fā)作并累及心臟。臨床以關(guān)節(jié)和肌肉游走性酸楚、重著、疼痛為特征，屬變態(tài)反應(yīng)性疾病，是風(fēng)濕熱的主要表現(xiàn)之一，多以急性發(fā)熱及關(guān)節(jié)疼痛起病。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎可侵犯心臟，引起風(fēng)濕性心臟病，并有發(fā)熱、皮下結(jié)節(jié)和皮疹等表現(xiàn)。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種復(fù)雜的疾病，且病因多種多樣而又易發(fā)作。西醫(yī)認(rèn)為該病的病因是一種以關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性疾病，很多學(xué)者認(rèn)為與遺傳因素、自身免疫反應(yīng)有關(guān)，但確切的病因病理至今尚未明確。中醫(yī)認(rèn)為該病屬中醫(yī)“痹證”“痿癥”等病范疇。多因感受風(fēng)寒濕邪，氣血痹阻，或體虛失養(yǎng)，邪氣痹阻，筋骨勞傷，氣滯血瘀而致。目前西醫(yī)上對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)病的治療主要采用非甾體類抗炎藥及免疫抑制劑進(jìn)行治療，嚴(yán)重者需加用激素類藥物進(jìn)行治療，但這些藥物的副作用較大，價(jià)格昂貴且治療效果也不顯著，治愈后容易反復(fù)發(fā)作，使患者長期反復(fù)遭受病痛的折磨。中醫(yī)以其特有的成本低廉，安全無副作用等優(yōu)點(diǎn)而成為治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的研究熱點(diǎn)。目前市場上治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中藥也比較多，但普遍存在療效不顯著，治療周期長，治療后易反復(fù)發(fā)作等缺點(diǎn)。因而市場上現(xiàn)在急需一種能標(biāo)本兼治、療效好、安全無副作用的治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供了一種三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得以解決：

三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，藥物是治理風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，三葉青總黃酮的制備工藝：取10-30kg三葉青塊莖粗粉，加入體積百分比為65-75％的乙醇回流提取3次，合并提取液減壓回收乙醇，靜置過夜后過濾，濾液用石油醚萃取3次脫脂后，過聚酰胺柱，依次用水、體積百分比為90-95％乙醇洗脫，將體積百分比為90-95％的乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干，即得三葉青總黃酮。

作為優(yōu)選，取20kg三葉青塊莖粗粉。

作為優(yōu)選，加入體積百分比為70％的乙醇回流提取3次。

作為優(yōu)選，過聚酰胺柱，依次用水、95％乙醇洗脫，將體積百分比為95％的乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干。

作為優(yōu)選，包括以下步驟，

a.大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型建立：建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎動物模型：先將l0mg牛ii型膠原完全溶于濃度為0.05mol/l的乙酸中，配制成2mg/ml的牛ii型膠原溶液，再將2mg/ml的牛ii型膠原溶液與完全弗氏佐劑充分混勻，配制成濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，體積為0.1-0.4ml；

7天后用濃度為2mg/ml的牛ii型膠原溶液與不完全弗氏佐劑用同樣方法配制成1mg/ml牛ii型膠原溶液，以每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的1mg/ml牛ii型膠原溶液，1mg/ml牛ii型膠原溶液的體積為0.05-0.3ml，再次免疫；

b.一周后，選取造摸成功的大鼠，給予三葉青總黃酮。

作為優(yōu)選，步驟a中大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型建立：建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎動物模型：先將l0mg牛ii型膠原完全溶于5ml濃度為0.05mol/l的乙酸中，配制成2mg/ml的牛ii型膠原溶液，再將5ml的2mg/ml的牛ii型膠原溶液與5ml完全弗氏佐劑充分混勻，配制成1mg/ml的牛ii型膠原溶液，每只大鼠尾根部皮下注射0.2ml的濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液；

7天后用5ml濃度為2mg/ml的牛ii型膠原溶液與5ml不完全弗氏佐劑用同樣方法配制成1mg/ml牛ii型膠原溶液，以每只大鼠尾根部皮下注射0.1ml的1mg/ml牛ii型膠原溶液，再次免疫。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：現(xiàn)有治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎較好的中藥有雷公藤多苷，但雷公藤多苷治具有很多毒副作用，如對女性卵巢和男性精子損傷較大，限制了臨床的應(yīng)用。本發(fā)明中治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的三葉青總黃酮，治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎效果好，無毒副作用。

附圖說明

圖1是三葉青總黃酮對大鼠關(guān)節(jié)炎評分的影響結(jié)果圖。

圖2是關(guān)節(jié)病理he染色圖譜。其中，a為正常組，b為cia組，c為米氟米特組，d為三葉青總黃酮低劑量組，e為三葉青總黃酮高劑量組。

圖3是關(guān)鍵蛋白表達(dá)圖譜。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，藥物是治理風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，三葉青總黃酮的制備工藝：取20kg三葉青塊莖粗粉，加入體積百分比為70％的乙醇回流提取3次，合并提取液減壓回收乙醇，靜置過夜后過濾，濾液用石油醚萃取3次脫脂后，過聚酰胺柱，依次用水、體積百分比為95％乙醇洗脫，將體積百分比為95％的乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干，即得三葉青總黃酮。

以上提到的三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，包括以下步驟，

a.大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型建立：建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎動物模型：先將l0mg牛ii型膠原完全溶于濃度為0.05mol/l的乙酸中，配制成2mg/ml的牛ii型膠原溶液，再將2mg/ml的牛ii型膠原溶液與完全弗氏佐劑充分混勻，配制成濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，體積為0.1-0.4ml；

7天后用濃度為2mg/ml的牛ii型膠原溶液與不完全弗氏佐劑用同樣方法配制成1mg/ml牛ii型膠原溶液，以每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的1mg/ml牛ii型膠原溶液，1mg/ml牛ii型膠原溶液的體積為0.05-0.3ml，再次免疫；

b.一周后，選取造摸成功的大鼠，給予三葉青總黃酮，根據(jù)給予三葉青總黃酮的量分成三個組：低劑量組(60mg/kg)、中劑量組(120mg/kg)、高劑量組(240mg/kg)。

1.三葉青總黃酮對cia大鼠關(guān)節(jié)炎癥評分的影響：

如圖1所示中比較了模型組與來氟米特及三葉青總黃酮處理組大鼠關(guān)節(jié)炎情況，可得在飼養(yǎng)30天時(shí)，藥物處理組大鼠關(guān)節(jié)炎癥狀明顯緩解，且三葉青總黃酮組大鼠的關(guān)節(jié)炎評分明顯低于來氟米特組大鼠。說明三葉青總黃酮對關(guān)節(jié)炎的緩解作用要好于來氟米特。

2.三葉青總黃酮對cia大鼠cia大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理變化的影響(如圖2所示)：

he染色顯示，對照組大鼠后足踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，各關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，軟骨基質(zhì)和軟骨細(xì)胞無進(jìn)行性變，未見血管翳和關(guān)節(jié)周圍軟骨異常；與正常組比較，模型組可見關(guān)節(jié)腔內(nèi)明顯的炎性細(xì)胞浸潤，滑膜組織內(nèi)伴有淋巴細(xì)胞浸潤，骨中伴有炎性細(xì)胞的浸潤侵蝕，踝關(guān)節(jié)各關(guān)節(jié)軟骨的基質(zhì)及軟骨細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的退行性病變，嚴(yán)重處軟骨剝脫，關(guān)節(jié)軟骨表面不平整，出現(xiàn)血管翳；三葉青總黃酮高劑量處理組及來氟米特組大鼠關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)較模型組有所改善，炎癥細(xì)胞侵潤及血管翳等均少于模型組大鼠。

3.三葉青總黃酮對cia大鼠血清細(xì)胞因子的影響

表1三葉青總黃酮對大鼠血清細(xì)胞因子表達(dá)的影響

注：^##p<0.01vs.control；^*p<0.05,^**p<0.01vs.cia.

由表1中結(jié)果可知，與正常對照組相比，模型組大鼠血清細(xì)胞因子(tnf-α、il-1β、il-6、il-17a)表達(dá)量顯著增加，與模型組大鼠細(xì)胞相比，來氟米特及三葉青總黃酮處理組明顯抑制血清細(xì)胞因子(tnf-α、il-1β、il-6、il-17a)的表達(dá)，且三葉青總黃酮的劑量越大對血清細(xì)胞因子表達(dá)的抑制越明顯。

4.三葉青總黃酮對大鼠滑膜中jak2、p-jak2、stat3、p-stat3蛋白的影響

表2三葉青總黃酮對大鼠滑膜組織中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

注：^##p<0.01vs.control；^*p<0.05,^**p<0.01vs.cia.

由圖3和表2中數(shù)據(jù)可得，與正常對照組相比，模型組顯著增加了jak2、p-jak2、stat3、p-stat3蛋白的表達(dá)，與模型組相比較，三葉青總黃酮處理組抑制了jak2、p-jak2、stat3、p-stat3的表達(dá)，且隨著劑量的增加，抑制作用越明顯。說明三葉青總黃酮高劑量對大鼠脾臟細(xì)胞中jak2、p-jak2、stat3表達(dá)的抑制作用十分顯著。

實(shí)施例2

三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，藥物是治理風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，三葉青總黃酮的制備工藝：取10kg三葉青塊莖粗粉，加入體積百分比為65％的乙醇回流提取3次，合并提取液減壓回收乙醇，靜置過夜后過濾，濾液用石油醚萃取3次脫脂后，過聚酰胺柱，依次用水、體積百分比為90％乙醇洗脫，將體積百分比為90％的乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干，即得三葉青總黃酮。

以上提到的三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，包括以下步驟，

a.大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型建立：建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎動物模型：先將l0mg牛ii型膠原完全溶于濃度為0.05mol/l的乙酸中，配制成2mg/ml的牛ii型膠原溶液，再將2mg/ml的牛ii型膠原溶液與完全弗氏佐劑充分混勻，配制成濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液，體積為0.1-0.4ml；

7天后用濃度為2mg/ml的牛ii型膠原溶液與不完全弗氏佐劑用同樣方法配制成1mg/ml牛ii型膠原溶液，以每只大鼠尾根部皮下注射相同體積的1mg/ml牛ii型膠原溶液，1mg/ml牛ii型膠原溶液的體積為0.05-0.3ml，再次免疫；

b.一周后，選取造摸成功的大鼠，給予三葉青總黃酮。

實(shí)施例3

三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，藥物是治理風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物，三葉青總黃酮的制備工藝：取30kg三葉青塊莖粗粉，加入體積百分比為75％的乙醇回流提取3次，合并提取液減壓回收乙醇，靜置過夜后過濾，濾液用石油醚萃取3次脫脂后，過聚酰胺柱，依次用水、體積百分比為92％乙醇洗脫，將體積百分比為92％的乙醇洗脫液減壓回收乙醇至干，即得三葉青總黃酮。

以上提到的三葉青總黃酮在治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的用途，包括以下步驟，

a.大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型建立：建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎動物模型：先將l0mg牛ii型膠原完全溶于5ml濃度為0.05mol/l的乙酸中，配制成2mg/ml的牛ii型膠原溶液，再將5ml的2mg/ml的牛ii型膠原溶液與5ml完全弗氏佐劑充分混勻，配制成1mg/ml的牛ii型膠原溶液，每只大鼠尾根部皮下注射0.2ml的濃度為1mg/ml的牛ii型膠原溶液；

7天后用5ml濃度為2mg/ml的牛ii型膠原溶液與5ml不完全弗氏佐劑用同樣方法配制成1mg/ml牛ii型膠原溶液，以每只大鼠尾根部皮下注射0.1ml的1mg/ml牛ii型膠原溶液，再次免疫；

b.一周后，選取造摸成功的大鼠，給予三葉青總黃酮，根據(jù)給予三葉青總黃酮的量分成三個組：低劑量組(60mg/kg)、中劑量組(120mg/kg)、高劑量組(240mg/kg)。

總之，以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明專利的涵蓋范圍。