本發(fā)明屬于中藥發(fā)酵制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種提高蛋雞生產(chǎn)性能的中藥發(fā)酵制劑、其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：中醫(yī)講，腎主藏精，首先是先天之精，胚胎的形成、發(fā)育均以腎精作為物質(zhì)基礎(chǔ)，于雌性動物則是促使卵子發(fā)育、具有生殖能力，當(dāng)病邪侵入腎臟時(shí)，會造成腎虛精虧，精虧則不孕，蛋雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量、蛋重下降及蛋殼薄、軟殼蛋等現(xiàn)象，種雞則除上述現(xiàn)象外還會出現(xiàn)種蛋受精率下降；另一方面，腎也藏后天之精，即水谷(營養(yǎng))之精，以維持機(jī)體生命活動，促進(jìn)生長發(fā)育。腎精不足，則毛羽無光澤、蓬亂，抗病力差，體重下降等。中藥不僅對激素的分泌具有調(diào)節(jié)作用，而且一些中藥還含有與激素的結(jié)構(gòu)相似的生物活性物質(zhì)，具有某些激素樣作用，從而可以調(diào)節(jié)動物的生長性能，繁殖機(jī)能及免疫機(jī)制。目前市場上在售的傳統(tǒng)中藥制劑雖能恢復(fù)蛋雞產(chǎn)蛋率，但要在短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)其產(chǎn)蛋性能有一定的難度。中藥在發(fā)酵過程中，會產(chǎn)生一些具有非常強(qiáng)大的分解轉(zhuǎn)化物質(zhì)能力的微生物，并能在生長代謝過程中產(chǎn)生纖維素酶、木質(zhì)素酶、淀粉酶、蛋白酶等多種次生代謝產(chǎn)物，使復(fù)雜的生物化學(xué)反應(yīng)在常溫常壓下迅速完成，比一般物理或化學(xué)的炮制手段更大幅度地增強(qiáng)和調(diào)整藥性，提高療效，降低毒副作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種天然安全、快速有效的中藥發(fā)酵制劑以及制備該發(fā)酵制劑的方法，同時(shí)，提供一種含有該中藥發(fā)酵制劑的具有提高蛋雞生產(chǎn)性能的飼料。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種提高蛋雞生產(chǎn)性能的中藥組合物，由以下組分按照重量份數(shù)制備而成：黨參15～25份、補(bǔ)骨脂10～20份、益母草10～20份、白術(shù)5～15份、茯苓5～10份、羅勒5～15份、炙甘草5～10份、半夏5～10份、陳皮5～10份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的中藥組合物，由以下組分按照重量份數(shù)制備而成：黨參20份、補(bǔ)骨脂15份、益母草15份、白術(shù)10份、茯苓6份、羅勒10份、炙甘草6份、半夏6份、陳皮6份。一種中藥發(fā)酵制劑，它由中藥成分與植物乳桿菌菌液混合后經(jīng)發(fā)酵制成，所述中藥成分按照重量份數(shù)組成為：黨參15～25份、補(bǔ)骨脂10～20份、益母草10～20份、白術(shù)5～15份、茯苓5～10份、羅勒5～15份、炙甘草5～10份、半夏5～10份、陳皮5～10份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥成分按照重量份數(shù)組成為：黨參20份、補(bǔ)骨脂15份、益母草15份、白術(shù)10份、茯苓6份、羅勒10份、炙甘草6份、半夏6份、陳皮6份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液中植物乳桿菌含量≥108cfu/ml。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥發(fā)酵制劑的制備方法，步驟如下：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入菌液，菌液用量占加入后總量的10～15％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。上述的單向排氣塑料袋為專利號為：200920100585.9的厭氧發(fā)酵飼料、中藥及添加劑的單向排氣袋。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液由以下方法制得：將植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時(shí)間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時(shí)間24h～36h。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述活化培養(yǎng)基和所述發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分為(g/l)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)ph6.2-6.4。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥發(fā)酵制劑應(yīng)用于提高蛋雞的生產(chǎn)性能。一種具有提高蛋雞生產(chǎn)性能的飼料，是在飼料中添加上述方法制備的中藥發(fā)酵制劑，添加量為2kg/噸。本發(fā)明的提高蛋雞生產(chǎn)性能中藥組合物，各中藥的藥性藥效如下：黨參：主要成分為生物堿、皂甙、蛋白質(zhì)、淀粉、維生素b1、維生素b2等，具有補(bǔ)中益氣、補(bǔ)血、降壓、祛痰鎮(zhèn)咳等功效。補(bǔ)骨脂：為豆科一年生草本植物補(bǔ)骨脂的成熟干燥種子。栽培，亦有野生。含補(bǔ)骨脂乙素，為天然查耳酮；又含多種香豆精類物質(zhì)，主要為補(bǔ)骨脂內(nèi)酯和異補(bǔ)骨脂內(nèi)酯。具有溫脾止瀉，補(bǔ)腎壯陽，固精縮尿之功效。益母草：為唇形科植物益母草或大花益母草的干燥地上全草。均為野生。含益母草鹼甲、益母草鹼乙，另含水蘇鹼、氯化鉀、月桂酸、油酸等成分。具有活血調(diào)經(jīng)、行血散瘀等功效。白術(shù)：為菊科多年生草本植物白術(shù)的干燥根莖。多為栽培，亦有野生。主要成分為揮發(fā)油，其中主要為蒼術(shù)醇，另含白術(shù)酮、維生素a類等物質(zhì)。具有補(bǔ)脾益氣、燥濕利水等功效。茯苓：為寄菌多孔菌科茯苓的干燥菌核。野生者多寄生于赤松或生真馬尾松的根部，大量商品均為人工栽培。主要含茯苓糖、茯苓酸、蛋白質(zhì)、脂肪、卵磷脂、組胺酸、膽鹼、麥角甾醇和鉀鹽等成分，主要功效為利水滲濕，益脾寧心。羅勒：為一年生直立草本。為栽培植物，也有野生，多生于山坡路旁，灌木叢中。含揮發(fā)油0.02～0.04％，主要成分為羅勒烯、α-蒎烯、1，8-桉葉素、芳樟醇、牻牛兒醇、檸檬烯，蒈烯-3、甲基胡椒酚、丁香油酚、丁香油酚甲醚、茴香醚、桂皮酸甲酯、己烯-8-醇-1、辛酮-3及糠醛等。具有止痛、消腫、散瘀、解毒等功效。甘草：別名甜甘草，為豆科多年生草本植物甘草和光果甘草等的干燥根和根狀莖(蘆頭)，多為野生。含甘草甜素、甘草黃素、葡萄糖、甘露醇、蘋果酸、天門冬酰胺等主要成分，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、潤肺止咳等功效。炙甘草是用蜜烘制的甘草，俗稱炮制，就是將蜂蜜置鍋中煉成中蜜，改用文火加生甘草片拌炒均勻，3～5min出鍋，置烤房或烘箱60℃烘至不粘手時(shí)取出，放涼即可。半夏：為天南星科多年生小草本植物，半夏搓去外皮的干燥塊莖。栽培或野生。含b-谷甾醇及其葡萄糖甙固甾醇、微量揮發(fā)油、植物甾醇、皂甙、辛辣性物質(zhì)、生物鹼等成分。具有和胃止嘔、燥濕祛痰、散結(jié)消腫之功效。陳皮：主要含橙皮甙、中肌醇、揮發(fā)油(主要成分為右旋檸檬烯)和維生素b1等成分。具有健胃、驅(qū)風(fēng)、止嘔、止呃、祛痰等功效。其中所述植物乳桿菌菌種為植物乳桿菌植物亞種(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，編號as1.557，來源于中國科學(xué)院微生物研究所。本發(fā)明的技術(shù)原理：方中黨參補(bǔ)中益氣兼能養(yǎng)血為君，補(bǔ)骨脂、益母草、白術(shù)助君藥溫腎補(bǔ)陽、以培腎陽之本，活血祛瘀、燥濕健脾為臣，茯苓淡滲利濕、羅勒通經(jīng)活血、化濕消食，使脾不為濕邪所困為佐藥，又加入陳皮為加強(qiáng)健脾理氣之效，加半夏理氣和胃，化痰降逆為佐藥，炙甘草甘溫益氣并可調(diào)和諸藥為使藥。全方具有益氣和胃，行氣溫中之功，性味平和，諸藥合用，標(biāo)本兼治。本發(fā)明中藥發(fā)酵制劑具有以下特點(diǎn)：(1)該中藥組方補(bǔ)氣血、健脾胃、益肝腎，通過對神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控等途徑來提高產(chǎn)蛋質(zhì)量等，可有效提高蛋雞生產(chǎn)性能。(2)本發(fā)明選用的植物乳桿菌在代謝過程中可分泌蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、淀粉酶等幾十種胞外酶進(jìn)入培養(yǎng)基，這些酶有的可以將藥物成分分解轉(zhuǎn)化，形成新的化合物，有的可以分解植物細(xì)胞壁中纖維素、半纖維素、果膠質(zhì)、木質(zhì)素等致密結(jié)構(gòu)，促使藥物活性成分最大限度的釋放；(2)本發(fā)明選用的植物乳桿菌及其代謝產(chǎn)物有效的補(bǔ)充或增強(qiáng)原有藥物的功能；(3)中藥經(jīng)植物乳桿菌轉(zhuǎn)化后產(chǎn)生了新的活性物質(zhì)，并帶來新的保健、預(yù)防或治療功能。產(chǎn)蛋是禽類在體內(nèi)激素和營養(yǎng)因素共同作用下，通過下丘腦-垂體-卵巢軸調(diào)控的復(fù)雜生理過程。中藥補(bǔ)骨脂具有促進(jìn)卵巢功能的作用，中藥羅勒所含雌激素可通過受體及反饋機(jī)制促使卵巢內(nèi)卵泡發(fā)育及生殖激素的分泌，以促使排卵和健全黃體功能，中藥益母草補(bǔ)血，興奮子宮，促進(jìn)排卵。使用本發(fā)明的中藥發(fā)酵制劑能夠顯著降低睪酮的分泌，提高孕酮和雌二醇的分泌，從而提高了蛋雞的產(chǎn)蛋率、降低了料蛋比并提高了雞蛋的品質(zhì)；此外，本發(fā)明中藥發(fā)酵制劑的加入還可以降低蛋黃膽固醇的含量。本發(fā)明方法選取的中藥組分結(jié)構(gòu)合理、比例適當(dāng)，選用的植物乳桿菌具有活性高、抗逆性強(qiáng)、可調(diào)節(jié)腸道菌群等優(yōu)勢，在本發(fā)明所選取的植物乳桿菌的作用下，顯著地提高了原有藥物的藥效，提高了腸道內(nèi)有益菌比例，使用本發(fā)明的中藥發(fā)酵制劑可以提高蛋雞的生產(chǎn)性能。具體實(shí)施方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳述如下：實(shí)施例1菌液的制備：將本發(fā)明的植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時(shí)間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時(shí)間24h～36h，制備發(fā)酵液。其中所述植物乳桿菌菌種為植物乳桿菌植物亞種(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，編號as1.557，來源于中國科學(xué)院微生物研究所。所述活化培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分為(g/l)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)ph6.2-6.4。發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：mrs培養(yǎng)基，成分同上。發(fā)酵完成后，菌液中菌的含量≥108cfu/ml。實(shí)施例2一種提高蛋雞生產(chǎn)性能的中藥發(fā)酵制劑，其各組分的重量份數(shù)為：黨參20份、補(bǔ)骨脂15份、益母草15份、白術(shù)10份、茯苓6份、羅勒10份、炙甘草6份、半夏6份、陳皮6份。具體制備方法如下：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入菌液，菌液用量占加入后總量的10～15％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。上述的單向排氣塑料袋為專利號為：200920100585.9的厭氧發(fā)酵飼料、中藥及添加劑的單向排氣袋。實(shí)施例3一種提高蛋雞生產(chǎn)性能的中藥發(fā)酵制劑，其各組分的重量份數(shù)為：黨參15份、補(bǔ)骨脂10份、益母草10份、白術(shù)5份、茯苓5份、羅勒5份、炙甘草5份、半夏5份、陳皮5份。制備方法與實(shí)施例2相同。實(shí)施例4一種提高蛋雞生產(chǎn)性能的中藥發(fā)酵制劑，其各組分的重量份數(shù)為：黨參25份、補(bǔ)骨脂20份、益母草20份、白術(shù)15份、茯苓10份、羅勒15份、炙甘草10份、半夏10份、陳皮10份。制備方法與實(shí)施例2相同。一、藥效試驗(yàn)：1.1試驗(yàn)組方1.1.1傳統(tǒng)工藝制備的非發(fā)酵中藥制劑組(將本發(fā)明實(shí)施例2所選取的藥物進(jìn)行超微粉碎，粉碎至700目，混合均勻)1.1.2實(shí)施例2組1.1.3實(shí)施例3組1.1.4實(shí)施例4組1.1.5空白對照組1.2動物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，將48周體重和產(chǎn)蛋率相近的健康海蘭褐產(chǎn)蛋雞600只，隨機(jī)分為5個(gè)處理，在飼料中分別添加超微粉、實(shí)施例2的中藥發(fā)酵制劑、實(shí)施例3的中藥發(fā)酵制劑和實(shí)施例4的中藥發(fā)酵制劑，添加量為2kg/噸，另設(shè)一組空白對照組，其他試驗(yàn)條件完全一致。每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。每個(gè)處理分別采食1種飼料，預(yù)試期1周，正試期30天。1.3試驗(yàn)飼糧參照nrc(1994)蛋雞營養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)飼糧，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。表1基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))注：1)每千克飼糧含有：va12000iu，vd33000iu，ve20iu，vk2mg，vb120.015mg，vb11.5mg，核黃素riboflavin4.5mg，vb63.0mg，生物素biotin0.1mg，葉酸folicacid0.5mg，煙酸niacin20mg，泛酸pantothenicacid10.0mg。2)每千克飼糧含有：mn60.0mg，zn50.0mg，fe25.0mg，cu5.0mg，i0.5mg。3)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測值。1.4飼養(yǎng)管理采用半開放式雞舍3層立體籠養(yǎng)，每排相連的5個(gè)雞籠(45cm×30cm×30cm)作為1個(gè)重復(fù)，每籠4只雞，各重復(fù)平均分布于上、中、下籠養(yǎng)架上。采用自然加人工補(bǔ)光，每天恒定光照16h(自動照明控制系統(tǒng))，強(qiáng)度為14lx。飼喂干粉料，自由采食，每天08:00和14:30各喂料1次，勻料4次；乳頭式飲水器，自由飲水。按正常程序防疫，專人管理，每日撿蛋2次；每周進(jìn)行消毒和清理雞糞1次，常規(guī)免疫。1.5測定指標(biāo)及方法1.5.1產(chǎn)蛋性能測定以重復(fù)為單位記錄每天產(chǎn)蛋數(shù)(包括軟殼蛋、破殼蛋)、日產(chǎn)蛋量、死亡雞數(shù)，每周記錄產(chǎn)蛋雞的耗料量。最后計(jì)算產(chǎn)蛋率、日采食量、平均蛋重、料蛋比。1.5.2蛋品質(zhì)測定蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位采用以色列orka公司生產(chǎn)的系列雞蛋品質(zhì)測定儀進(jìn)行測定，蛋形指數(shù)采用日本富士坪公司生產(chǎn)的蛋形指數(shù)測定儀測定，每2周1次，共4次。1.5.3腸道微生物分析于試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)日清晨喂料前，每重復(fù)屠宰2只(共60只)雞，5％的新潔爾滅溶液浸泡5min，全身消毒；無菌條件下，將盲腸中段10cm剪斷，結(jié)扎兩端帶回實(shí)驗(yàn)室檢測其中食糜雙歧桿菌、大腸桿菌和乳酸桿菌含量。菌群的數(shù)量用lgcfu/g盲腸內(nèi)容物表示。1.5.4生殖激素含量測定分別在試驗(yàn)的第15d和30d，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取5只雞，翅下靜脈采血3ml，靜置后3000r/min離心10min，分離后血清放置在－20℃冰箱備用。用全自動生化分析儀(日立7600－020)測定血清中睪酮(t)、孕酮(p)和雌二醇(e2)含量。1.5.5全蛋及蛋黃膽固醇含量的測定分別在試驗(yàn)的第15d和30d，每組隨機(jī)抽取10枚雞蛋，標(biāo)記組別、日期，置于4℃冰箱保存，用于測定全蛋及蛋黃膽固醇含量。測定之前對每枚雞蛋稱重，蛋清蛋黃分離方法參考王成章等(不同苜蓿草粉水平對產(chǎn)蛋雞蛋黃膽固醇含量影響的研究，王成章、楊雨鑫、胡喜峰等，草業(yè)學(xué)報(bào)，2005，14(2)：76-83)的方法。對蛋黃準(zhǔn)確稱重，并計(jì)算蛋黃相對重量。蛋黃相對重量(％)＝(蛋黃重/蛋重)×100％雞蛋膽固醇含量用蛋黃膽固醇含量和全蛋膽固醇含量2個(gè)指標(biāo)來表示。其中，蛋黃膽固醇含量是指每克蛋黃中膽固醇的含量，全蛋膽固醇含量是指每枚雞蛋中膽固醇的含量。采用gbt22220-2008《食品中膽固醇的測定高效液相色譜法》規(guī)定方法進(jìn)行測定。1.5.6數(shù)據(jù)分析所有采集數(shù)據(jù)采用excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用spss19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，lsd進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。二、結(jié)果與分析2.1試驗(yàn)期各試驗(yàn)組分對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響，見表2。表2試驗(yàn)期各試驗(yàn)組分對蛋雞生產(chǎn)性能的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。試驗(yàn)期間各處理試驗(yàn)雞狀態(tài)良好，排便正常，無死亡。由表2可知，試驗(yàn)期平均蛋重和日采食量，各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。產(chǎn)蛋率超微粉組高于對照組但無顯著性差異(p>0.05)，比對照組提高了2.46％；實(shí)施例2、3和4組分別比對照組顯著提高了6.32％、6.26％和6.23％(p<0.05)，分別比超微粉組顯著提高了3.77％、3.71％和3.68％(p<0.05)。日產(chǎn)蛋量超微粉組比對照組提高了1.86％(p>0.05)；實(shí)施例2、3和4組分別比對照組顯著提高了6.38％、5.91％和5.83％(p<0.05)；分別比超微粉組顯著提高了4.44％、3.98％和3.90％(p<0.05)。日采食量各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。料蛋比實(shí)施例2、4組分別比對照組極顯著降低了4.87％和4.87％(p<0.01)。2.2試驗(yàn)期各試驗(yàn)組分對蛋雞產(chǎn)蛋品質(zhì)的影響，見表3。表3試驗(yàn)期各試驗(yàn)組分對蛋雞產(chǎn)蛋品質(zhì)的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表3可知，試驗(yàn)期蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。蛋形指數(shù)實(shí)施例2組顯著高于對照組(p<0.05)，其它試驗(yàn)組與對照組無顯著性差異(p>0.05)。蛋白高度，實(shí)施例2、3和4組極顯著高于對照組(p<0.01)，與超微粉組無顯著性差異(p>0.05)，超微粉組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。哈夫單位各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。2.3各試驗(yàn)組分對產(chǎn)蛋雞盲腸微生物的影響，見表4。表4各試驗(yàn)組分對產(chǎn)蛋雞盲腸微生物的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表4可知，大腸桿菌數(shù)量實(shí)施例2、3和4組極顯著低于對照組(p<0.01)；超微粉組與對照組無顯著性差異(p>0.05)。乳酸桿菌數(shù)量實(shí)施例2、3和4組顯著高于對照組(p<0.05)，超微粉組與對照組無顯著性差異(p>0.05)。雙歧桿菌數(shù)量實(shí)施例2、4組極顯著高于對照組(p<0.01)，超微粉組和實(shí)施例3組與對照組無顯著性差異(p>0.05)。2.4中藥發(fā)酵制劑對產(chǎn)蛋高峰后期蛋雞血清生殖激素含量的影響，見表5。表5中藥發(fā)酵制劑對產(chǎn)蛋高峰后期蛋雞血清生殖激素含量的影響注：同列肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表5可知，試驗(yàn)第15天，睪酮含量各試驗(yàn)組均低于對照組，其中實(shí)施例2、4組極顯著低于對照組(p<0.01)，分別比對照組降低9.36％和8.36％；與第15天相比，第30天睪酮含量均有所降低，實(shí)施例2、3和4組比對照組分別極顯著降低了29.46％、12.45％和29.04％。試驗(yàn)第15天，各試驗(yàn)組孕酮含量與對照組相比均極顯著提高(p<0.01)，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組分別顯著提高了21.07％、39.46％、21.34％和33.82％；試驗(yàn)第30天，各試驗(yàn)組孕酮含量無顯著性差異(p>0.05)。試驗(yàn)第15、30天，各試驗(yàn)組雌二醇含量均極顯著高于對照組(p<0.01)，第15天，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組分別極顯著提高了13.79％、52.05％、34.42％和35.83％；第30天，分別極顯著提高了4.49％、6.28％、4.90％和5.46％。2.5中藥發(fā)酵制劑對全蛋及蛋黃膽固醇含量的影響，見表6。表6中藥發(fā)酵制劑對全蛋及蛋黃膽固醇含量的影響注：同行肩標(biāo)字母相同表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)。由表6可知，試驗(yàn)第15、30天，蛋黃相對重量各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異。試驗(yàn)第15天，各試驗(yàn)組蛋黃膽固醇含量均極顯著低于對照組(p<0.01)，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組分別比對照組降低8.44％、14.66％、13.18％和13.35％；試驗(yàn)第30天，蛋黃膽固醇含量實(shí)施例2、3和4組分別比對照組極顯著降低了15.40％、11.51％和14.98％(p<0.01)；超微粉組比對照組降低了8.69％(p>0.05)。試驗(yàn)第15、30天，實(shí)施例2、3和4組全蛋膽固醇含量分別比對照組極顯著降低了15.24％、10.41％、11.31％和14.74％、14.56％、11.80％(p<0.01)；超微粉組比對照組分別降低了2.30％(p>0.05)和8.18％(p<0.01)。三、藥理學(xué)毒性試驗(yàn)3.1急性毒性試驗(yàn)資料檢測試劑：血清ast、alt檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。檢測設(shè)備micro-200半自動生化檢測儀，分析天平，解剖器械，注射器，試管等。3.2試驗(yàn)方法選取體重為18～22g的icr鼠100只，經(jīng)3天適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)均分為5組(雌雄各半)，超微粉組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組和空白對照組，每組各20只；空白對照組灌胃生理鹽水，超微粉組所用超微粉選用本發(fā)明實(shí)施例2中的中藥組合物進(jìn)行超微粉碎得到的超微粉；超微粉組將超微粉溶于水中灌服，實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組分別將各實(shí)施例制備的發(fā)酵制劑溶于水中灌服，超微粉組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組的藥物添加量為0.1g/ml，0.4ml/次，一天3次，連續(xù)7天。3.3測定指標(biāo)及方法(1)臨床癥狀觀察：每日觀察試驗(yàn)鼠的精神狀態(tài)、飲食情況，每日記錄發(fā)病死亡情況。(2)病理學(xué)觀察：對于死亡鼠進(jìn)行剖檢觀察內(nèi)臟變化。(3)生長指標(biāo)觀察：對試驗(yàn)鼠進(jìn)行定期稱重；試驗(yàn)結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重，臟器指數(shù)測定：剖檢大鼠，取心臟、脾臟、肝臟、腎臟、睪丸、卵巢，稱重，按照下式計(jì)算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)＝臟器重/體重×100。(4)肝臟功能變化觀察：試驗(yàn)結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定ast、alt。3.4數(shù)據(jù)處理與分析所有采集數(shù)據(jù)采用excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用spss19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，lsd進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。3.5臨床癥狀觀察對照組和試驗(yàn)組鼠，精神狀態(tài)和飲食欲、對外界反應(yīng)能力未見明顯的異常。各組鼠發(fā)病和死亡情況如下表7。表7鼠發(fā)病和死亡情況分組總數(shù)死亡(只)死亡率(％)超微粉2000實(shí)施例2組2000實(shí)施例3組2000實(shí)施例4組2000對照組2000病理學(xué)觀察：對照組和試驗(yàn)組，鼠撲殺后進(jìn)行剖檢眼觀未見內(nèi)臟器官明顯的病理變化。生長指標(biāo)觀察：試驗(yàn)結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重分析見表8。表8鼠臟器重分析分組肝臟指數(shù)心臟指數(shù)腎臟指數(shù)肺臟指數(shù)脾臟指數(shù)超微粉54.05±1.30a4.36±0.12a13.44±0.22a6.69±0.43a4.61±0.55a實(shí)施例2組54.21±1.14a4.71±0.20a13.49±0.18a6.81±0.35a4.96±0.45a實(shí)施例3組54.18±1.32a4.66±0.25a13.50±0.23a6.74±0.38a5.01±0.40a實(shí)施例4組54.09±1.24a4.72±0.19a13.47±0.22a6.75±0.33a4.92±0.42a對照組53.92±1.43a4.30±0.18a13.36±0.19a6.61±0.36a4.52±0.51a注：同列肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。由表8可知，各臟器指數(shù)分析，各試驗(yàn)組與對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。肝臟功能變化觀察試驗(yàn)結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定ast(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、alt(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)見表9。結(jié)果顯示各組數(shù)據(jù)與空白對照組相比差異不顯著，都處于正常范圍內(nèi)。表9ast、alt的測定結(jié)果分組總數(shù)altast超微粉2039.04±2.55a105.46±4.62a實(shí)施例2組2039.22±2.07a105.74±4.19a實(shí)施例3組2039.18±1.99a105.57±3.36a實(shí)施例4組2039.23±2.11a105.69±4.03a對照組2039.08±2.25a105.41±5.05a注：同列肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(p>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。3.6長期毒性試驗(yàn)資料根據(jù)實(shí)施例2制備的本發(fā)明發(fā)酵制劑，20g/kg、100g/kg給1月齡icr鼠連續(xù)灌胃給藥1個(gè)月，動物的皮毛、膚色、攝食、活動、尿、便等均無異常；動物的血常規(guī)、肝、腎功能等血液生化指標(biāo)和動物的主要臟器指數(shù)均在正常范圍，且正常動力無差異；病理組織學(xué)檢查表明，心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、氣管、睪丸、卵巢等重要臟器無病理改變。停藥兩周后檢查以上各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯毒性反應(yīng)，表明無蓄積毒性。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12