本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其用途，具體來說涉及含有葉綠素提取物和去鐵酮的藥物組合物及其用于預(yù)防和/或治療鐵過載的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：鐵過載，又稱鐵負(fù)荷過多，是指機(jī)體鐵供給超過鐵需求。鐵過載形成的原因有很多，例如，機(jī)體因?yàn)榭诜F劑、注射鐵劑、輸血等導(dǎo)致鐵攝入過多；又如，基因突變、飲酒、病毒感染等導(dǎo)致肝臟調(diào)節(jié)鐵平衡紊亂；再如，遺傳性或獲得性鐵代謝異常等；另外，某些疾病亦能影響鐵在微環(huán)境中的代謝從而導(dǎo)致鐵選擇性地沉積在特定細(xì)胞，如病毒性肝炎導(dǎo)致鐵沉積在肝細(xì)胞中從而導(dǎo)致鐵過載等等。鐵過載會(huì)導(dǎo)致鐵在某些組織器官貯存增加，例如心臟、肝臟、胰腺、腦等，從而影響心、肝、胰腺、腦等臟器的功能和結(jié)構(gòu)，而且鐵過載與血液系統(tǒng)造血紊亂密切相關(guān)，對機(jī)體造成十分嚴(yán)重的危害。目前一般通過祛鐵治療，延緩鐵過載的發(fā)生，減輕鐵過載的危害，并改善預(yù)后。一種有效的祛鐵治療方法是放血治療，但其明顯不適合于貧血患者，尤其是輸血依賴性鐵過載患者。另一種祛鐵治療方法是鐵螯合劑，鐵螯合劑是目前治療鐵過載的唯一有效藥物，通過與體內(nèi)鐵離子定向結(jié)合有效地提高鐵的排泄，降低體內(nèi)鐵的含量及其在各器官的病理性沉積。目前臨床上應(yīng)用的鐵螯合劑主要有三種：去鐵胺(dfo)、去鐵酮(dfp)和地拉羅司(dfx)。其中，去鐵酮是一種二齒狀突起的口服鐵螯合劑，口服給藥后于上消化道快速吸收，藥物代謝半衰期為2-3h，空腹服藥24h可達(dá)血藥峰濃度，經(jīng)葡萄糖醛酸化代謝失活，最終主要經(jīng)尿液排出，常見的不良反應(yīng)是大關(guān)節(jié)痛，一過性的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高，胃腸道反應(yīng)及鋅缺乏等，嚴(yán)重不良反應(yīng)是粒細(xì)胞減少癥和粒細(xì)胞缺乏癥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)葉綠素提取物，特別是蠶砂提取物，能夠預(yù)防和/或治療鐵過載，在降低體內(nèi)鐵含量的同時(shí)，還能夠改善和修復(fù)鐵過載所致肝、腎損傷，并且沒有明顯的副作用。將其與去鐵酮聯(lián)合用藥能夠提高去鐵酮的療效，從而可以縮短單獨(dú)使用去鐵酮的治療周期，避免祛鐵治療過度，提高患者的順應(yīng)性，減少其因長期用藥產(chǎn)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，并大幅減輕了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，葉綠素提取物，特別是蠶砂提取物，對人體內(nèi)的鐵有雙向調(diào)節(jié)作用，既可改善缺鐵性貧血，也能降低體內(nèi)鐵含量，從而完成了本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和/或治療鐵過載的藥物組合物，其含有葉綠素提取物、去鐵酮和可藥用載體。優(yōu)選，所述葉綠素提取物為蠶砂提取物。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和/或治療鐵過載的藥物組合，其含有彼此分開的第一藥物組合物和第二藥物組合物，其中，第一藥物組合物含有葉綠素提取物和可藥用載體；第二藥物組合物中含有去鐵酮和可藥用載體。優(yōu)選，所述葉綠素提取物為蠶砂提取物。根據(jù)本發(fā)明，在藥物組合物和藥物組合中，葉綠素提取物和去鐵酮的重量比為3:1-20，更優(yōu)選為3:5-15，最優(yōu)選為1:3。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明的藥物組合物、第一藥物組合物和第二藥物組合物，均可以制成本領(lǐng)域各種常規(guī)劑型。在優(yōu)選的技術(shù)方案中，本發(fā)明的藥物組合物、第一藥物組合物和第二藥物組合物為口服劑型或注射劑型。在本發(fā)明中，口服劑型包括但不限于片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、錠劑、滴丸劑、口服液、糖漿劑、混懸劑等等；注射劑型包括但不限于注射液、注射用粉針劑等等。第一藥物組合物和第二藥物組合物的劑型可以相同或不同。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及上述藥物組合物或藥物組合在制備用于預(yù)防和/或治療鐵過載的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及葉綠素提取物在制備用于和去鐵酮聯(lián)合預(yù)防和/或治療鐵過載的藥物中的用途。優(yōu)選，所述葉綠素提取物為蠶砂提取物。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及去鐵酮在制備用于和葉綠素提取物聯(lián)合預(yù)防和/或治療鐵過載的藥物中的用途。優(yōu)選，所述葉綠素提取物為蠶砂提取物。根據(jù)本發(fā)明，鐵過載可以是各種原因引起的鐵過載。在一個(gè)方面，所述鐵過載由鐵攝入過多、鐵平衡紊亂、和/或鐵代謝異常導(dǎo)致。所述鐵攝入過多由口服鐵劑、注射鐵劑、和/或輸血導(dǎo)致。所述鐵平衡紊亂由基因突變、飲酒、和/或病毒感染導(dǎo)致；優(yōu)選，所述病毒感染選自乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染和/或幽門螺桿菌感染。所述鐵代謝異常為遺傳性鐵代謝異常和/或獲得性鐵代謝異常；優(yōu)選，所述遺傳性鐵代謝異常選自遺傳性血色病、遺傳性血色素沉著病、遺傳性高鐵血紅蛋白血癥、和/或地中海貧血；優(yōu)選，所述獲得性鐵代謝異常由環(huán)境因素、膳食因素和/或疾病導(dǎo)致，進(jìn)一步優(yōu)選，所述疾病為動(dòng)脈粥樣硬化。在另一個(gè)方面，所述鐵過載為疾病導(dǎo)致鐵在細(xì)胞內(nèi)沉積。優(yōu)選，所述疾病選自病毒性肝炎、動(dòng)脈粥樣硬化、遺傳性血色病、遺傳性血色素沉著病、遺傳性高鐵血紅蛋白血癥和/或地中海貧血；進(jìn)一步優(yōu)選，所述病毒性肝炎為乙型肝炎和/或丙型肝炎。根據(jù)本發(fā)明，葉綠素提取物可以商購獲得或者提取自含有葉綠素和/或其衍生物的各種生物材料，包括但不限于蠶砂、竹葉、杜仲、雛菊、大麥苗、菠菜、空心菜、芹菜、萵筍、甘藍(lán)、油菜、豆芽菜苗、西蘭花葉、三葉草、雪松、綠藻、青草、仙人掌、蘆薈、甘蔗葉、獼猴桃葉、桃葉、大葉黃楊、絞股藍(lán)葉、牡丹葉、紫丁香葉、喬木葉片(女貞)、海桐葉片、石楠、冬青葉片、寧箭荷花葉片、桑葉等，優(yōu)選蠶砂。葉綠素提取物(優(yōu)選蠶砂提取物)的主要成分為鐵葉綠酸鈉和葉綠素衍生物。根據(jù)本發(fā)明，葉綠素提取物(優(yōu)選蠶砂提取物)中鐵葉綠酸鈉不少于5％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)(c34h30o6n4fe)計(jì)不少于15％；優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于10％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于30％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于15％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于50％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于22.5％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于60％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于25％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于63％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于28％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于65％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于30％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于68％；進(jìn)一步優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于35％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于63％；最優(yōu)選，鐵葉綠酸鈉不少于40.5％，葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于58％。其中，在本發(fā)明中葉綠素衍生物不包含鐵葉綠酸鈉，其包括但不限于葉綠酸鈉、鐵葉綠酸b、脫鎂葉綠素酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e6、二氫卟吩e4、二氫卟吩p6、二氫卟吩f、紫紅素-18、葉綠卟啉等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以通過本領(lǐng)域已知的各種方法提取得到本發(fā)明的葉綠素提取物，優(yōu)選蠶砂提取物。例如，葉綠素提取物(優(yōu)選蠶砂提取物)的提取方法包括如下步驟：(1)提取葉綠素；優(yōu)選，進(jìn)一步對提取得到的提取物進(jìn)行精制；(2)皂化；優(yōu)選，進(jìn)一步用有機(jī)溶劑洗滌皂化液；(3)鐵化；(4)堿化。在上述步驟(1)中，優(yōu)選取含有葉綠素和/或其衍生物的各種生物材料(優(yōu)選蠶砂)，用有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑與水的混合物提取，回收有機(jī)溶劑后得葉綠素；其中，有機(jī)溶劑優(yōu)選為丙酮、乙醇、石油醚、正己烷、汽油、甲苯或其中兩種或多種的混合物，汽油優(yōu)選為120號汽油，進(jìn)一步優(yōu)選，有機(jī)溶劑為丙酮、乙醇或其混合物。進(jìn)一步優(yōu)選，提取方法為回流、萃取、滲濾、微波或使用超微震動(dòng)磨等。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過用去離子水洗滌或者通過用大孔吸附樹脂吸附進(jìn)行精制。精制用于去除非葉綠素類物質(zhì)。在上述步驟(2)中，優(yōu)選將葉綠素用有機(jī)溶劑溶解，加入堿溶液使其皂化；其中，有機(jī)溶劑優(yōu)選為汽油、丙酮或其混合物，汽油優(yōu)選為120號汽油；堿溶液優(yōu)選為naoh水溶液或koh水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選，堿溶液的濃度為25-35％。皂化是為了去除類胡蘿卜素。在上述步驟(3)中，優(yōu)選調(diào)節(jié)皂化液的ph值至2-4，析出沉淀，加入有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑與水的混合物使其溶解，再加入亞鐵鹽，加熱至溶液呈深綠色為止，回收有機(jī)溶劑后得鐵代產(chǎn)物；其中，有機(jī)溶劑優(yōu)選為丙酮、乙醇或其混合物；亞鐵鹽優(yōu)選為硫酸亞鐵、氯化亞鐵或其混合物；優(yōu)選加熱使溶液保持微沸。鐵化是為了獲得鐵葉綠酸。在上述步驟(4)中，優(yōu)選取鐵代產(chǎn)物用去離子水洗至無游離鐵離子，加入有機(jī)溶劑使其溶解，再加入naoh水溶液或naoh乙醇溶液至不再有沉淀產(chǎn)生為止，得葉綠素提取物(優(yōu)選蠶砂提取物)；其中，有機(jī)溶劑優(yōu)選為丙酮、乙醇或其混合物；naoh水溶液或naoh乙醇溶液的濃度為25-35％。堿化是為了獲得鐵葉綠酸鈉。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明的藥物組合物、第一藥物組合物、第二藥物組合物、以及口服劑型、注射劑型均可以使用本領(lǐng)域已知的方法制備得到。本發(fā)明的藥物組合物、第一藥物組合物、第二藥物組合物、口服劑型或注射劑型中含有的可藥用載體，包括但不限于常規(guī)的各種有機(jī)或無機(jī)藥物載體，例如潤滑劑、粘合劑、崩解劑、水溶性聚合物、無機(jī)鹽、溶劑、溶解助劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖液、防腐劑、抗氧劑、著色劑、甜味劑、酸味劑、起泡劑、芳香劑、穩(wěn)定劑、包衣材料和調(diào)味劑等等。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：①對祛鐵治療有顯著的療效；②可避免祛鐵治療過度，葉綠素提取物對人體內(nèi)的鐵有雙向調(diào)節(jié)作用，既可改善缺鐵性貧血，也能降低體內(nèi)鐵含量，是一種鐵穩(wěn)態(tài)劑；③能同時(shí)改善和修復(fù)鐵過載所致肝、腎組織損傷，改善預(yù)后；④可制作成口服制劑，患者的順應(yīng)性強(qiáng)；⑤為天然中藥提取物，無明顯毒副作用，可較長時(shí)間服用；⑥能夠提高去鐵酮的療效，從而可以縮短單獨(dú)使用去鐵酮的治療周期，減少其因長期用藥產(chǎn)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；⑦大幅減輕了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。附圖說明圖1為鐵過載小鼠肝臟病理切片，其中：a為正常對照組，b為陽性對照組，c為蠶砂提取物高劑量組，d為蠶砂提取物低劑量組；圖2為鐵過載小鼠腎臟病理切片，其中：a為正常對照組，b為陽性對照組，c為蠶砂提取物高劑量組，d為蠶砂提取物低劑量組；圖3為鐵過載小鼠腎臟ho-1蛋白表達(dá)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外，應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明所記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本發(fā)明所限定的范圍。在下述實(shí)施例中，如無特別說明，蠶砂提取物商購自武漢聯(lián)合藥業(yè)有限責(zé)任公司，其中含鐵葉綠酸鈉不少于22.5％，含葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于60.0％。蠶砂提取物片劑即瑞克牌生血寧片劑，0.25g/片，其中含50mg蠶砂提取物，其他為醫(yī)用常規(guī)輔料，每片含鐵葉綠酸鈉不少于11.00mg，含葉綠素衍生物以鐵葉綠酸(b)計(jì)不少于30.0mg，商購自武漢聯(lián)合藥業(yè)有限責(zé)任公司。去鐵酮為奧貝安可牌去鐵酮片，0.5g*30片。實(shí)施例1.蠶砂提取物的祛鐵作用取昆明種小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對照組、陽性對照組、蠶砂提取物高劑量組和蠶砂提取物低劑量組，每組20只，雌雄各半。除正常組外，其他各組小鼠均按100mg/kg每周腹腔注射1次右旋糖酐鐵造模，連續(xù)注射10周，建立鐵過載小鼠模型。自造模之日起，各組均每天給予1次灌胃，其中：正常對照組給予1ml生理鹽水，陽性對照組給予1ml生理鹽水，蠶砂提取物高劑量組按80mg/kg給予蠶砂提取物水溶液1ml，蠶砂提取物低劑量組按40mg/kg給予蠶砂提取物水溶液1ml，治療結(jié)束后尾靜脈取血用動(dòng)物血常規(guī)檢測儀檢測小鼠血清鐵(si)和血清鐵蛋白(sf)水平，結(jié)果見下表1。表1.蠶砂提取物對鐵過載小鼠si和sf水平的影響注：與陽性對照組相比，*p<0.05，**p<0.01。表1顯示，與正常對照組小鼠比較，鐵過載陽性對照組小鼠si和sf水平明顯升高。蠶砂提取物低劑量組和高劑量組與陽性對照組相比，si和sf水平具有顯著性差異(p＜0.01)，說明蠶砂提取物低劑量組和高劑量組均能顯著降低鐵過載小鼠si和sf水平，并具有劑量相關(guān)性。實(shí)施例2.蠶砂提取物的臨床祛鐵作用為證明蠶砂提取物的治療效果，給鐵過載患者服用蠶砂提取物進(jìn)行觀察。⑴一般資料選取因各類貧血需要長期輸血而導(dǎo)致鐵過載的患者30例，其中男19例，女11例，年齡18～69歲，其中重型再生障礙性貧血(saa)16例，重型地中海貧血9例，骨質(zhì)增生異常綜合征(mds)5例，治療前肝及腎功能均正常。當(dāng)患者sf水平超過1000μg/l時(shí)開始給予蠶砂提取物進(jìn)行祛鐵治療。⑵治療方法每次口服蠶砂提取物片劑4片，餐后1h服藥，忌茶，3次/天，4周為一個(gè)療程，治療3個(gè)療程。⑶觀察指標(biāo)整個(gè)研究期間，患者需要進(jìn)行常規(guī)輸血治療以維持血紅蛋白(hb)水平≥70g/l。每4周檢測1次sf、si、血常規(guī)、血生化、尿蛋白等；定期觀察心電圖、超聲心電圖、橈骨x線等；密切觀察患者用藥情況，了解有無不良反應(yīng)。⑷統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析使用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸治療結(jié)果所有患者在治療過程中均未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，均無惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)，無關(guān)節(jié)疼痛、腫脹，未出現(xiàn)視力及聽力異常，用藥期間肝腎功能、電解質(zhì)未見明顯改變，未發(fā)現(xiàn)與治療相關(guān)性血象異常，表明蠶砂提取物具有良好的安全性、耐用性和依從性?；颊咧委熐昂髎f和si的平均水平見下表2。表2.患者治療前后sf和si的平均水平時(shí)間例數(shù)sf(μg/l)si(μmol/l)治療前302865.21±1121.43142.84±41.21治療后4周302561.33±985.45138.87±40.15治療后8周302169.23±851.46**118.52±38.44**治療后12周301979.41±326.73**89.32±34.38**注：與治療前相比，*p<0.05，**p<0.01。表2顯示，與治療前相比，患者在接受蠶砂提取物治療后4周sf和si平均值均有下降趨勢，8周和12周的sf和si平均值均明顯下降，與治療前相比具有顯著性差異(p＜0.01)，表明蠶砂提取物對鐵過載具有顯著的臨床治療效果，并具有劑量相關(guān)性。實(shí)施例3.蠶砂提取物保護(hù)鐵過載所致肝、腎損傷取昆明種小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對照組、陽性對照組、蠶砂提取物高劑量組和蠶砂提取物低劑量組，每組20只，雌雄各半。除正常組外，其他各組小鼠均按100mg/kg每周腹腔注射1次右旋糖酐鐵造模，連續(xù)注射10周，建立鐵過載小鼠模型。自造模之日起，各組均每天給予1次灌胃，其中：正常對照組給予1ml生理鹽水，陽性對照組給予1ml生理鹽水，蠶砂提取物高劑量組按80mg/kg給予蠶砂提取物水溶液1ml，蠶砂提取物低劑量組按40mg/kg給予蠶砂提取物水溶液1ml，治療結(jié)束后尾靜脈取血檢測小鼠血液生化指標(biāo)，包括：用動(dòng)物生化分析儀檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶(got)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(gpt)、用動(dòng)物血常規(guī)檢測儀檢測si、用試劑盒檢測總膽紅素、總抗氧化能力(t-aoc)、脂質(zhì)過氧化物(mda)、活性氧(ros)、腫瘤壞死因子(tnfα)、白細(xì)胞介素6(il-6)、超敏c反應(yīng)蛋白；并進(jìn)行尿常規(guī)檢測；取小鼠肝臟和腎臟組織進(jìn)行病理切片；取小鼠腎臟組織，檢測其中8-ohdg含量并利用western檢測其中ho-1蛋白表達(dá)水平。檢測結(jié)果：⑴血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果和腎組織8-ohdg含量檢測結(jié)果鐵過載肝損傷指標(biāo)，包括got和gpt的檢測結(jié)果見下表3。表3.蠶砂提取物對鐵過載小鼠肝損傷指標(biāo)注：與陽性對照組相比，*p<005，**p<001。表3顯示，與正常對照組小鼠比較，鐵過載陽性對照組小鼠got和gpt升高。蠶砂提取物低劑量組和高劑量組與陽性對照組相比，got和gpt均明顯降低，具有顯著性差異(p＜0.01)，說明蠶砂提取物低劑量組和高劑量組均能明顯阻止鐵過載所致肝損傷，并具有劑量相關(guān)性。鐵過載腎損傷指標(biāo)，包括si、總膽紅素、t-aoc、mda、ros的檢測結(jié)果見下表4。表4.蠶砂提取物對鐵過載小鼠腎損傷指標(biāo)注：與陽性對照組相比，*p<0.05，**p<0.01。鐵過載腎損傷指標(biāo)，包括tnfα、il-6、超敏c反應(yīng)蛋白、8-ohdg含量的檢測結(jié)果見下表5。表5.蠶砂提取物對鐵過載小鼠腎損傷指標(biāo)注：與陽性對照組相比，*p<0.05，**p<0.01。表4和表5顯示，與正常對照組小鼠比較，鐵過載陽性對照組小鼠si、總膽紅素、mda、ros、tnfα、il-6、超敏c反應(yīng)蛋白、腎組織8-ohdg含量明顯升高，而t-aoc降低。蠶砂提取物低劑量組和高劑量組與陽性對照組相比，si、總膽紅素、mda、ros、tnfα、il-6、超敏c反應(yīng)蛋白、腎組織8-ohdg含量明顯降低，t-aoc明顯升高，具有顯著性差異(p＜0.01或p＜0.05)，說明蠶砂提取物低劑量組和高劑量組均能明顯阻止鐵過載所致腎損傷，并具有劑量相關(guān)性。⑵病理檢測結(jié)果圖1顯示，與正常小鼠比較，陽性對照組小鼠肝臟出現(xiàn)明顯炎癥滲出和壞死，而蠶砂提取物高劑量組和低劑量組均有明顯的阻止鐵過載所致肝損傷作用。圖2顯示，與正常小鼠比較，陽性對照組小鼠腎臟出現(xiàn)明顯炎癥滲出和壞死，而蠶砂提取物高劑量組和低劑量組均有明顯的阻止鐵過載所致腎損傷作用。⑶尿液指標(biāo)檢測結(jié)果尿常規(guī)檢測的檢測結(jié)果見下表6。表6.小鼠尿常規(guī)檢測結(jié)果表6顯示，與正常對照組小鼠比較，鐵過載陽性對照組小鼠尿液中蛋白質(zhì)含量和潛血升高。蠶砂提取物低劑量組和高劑量組與陽性對照組相比，尿液中蛋白質(zhì)含量和潛血明顯降低，均為陰性，說明蠶砂提取物低劑量組和高劑量組均能明顯阻止鐵過載所致腎損傷。⑷western檢測腎組織ho-1蛋白表達(dá)結(jié)果western檢測腎組織ho-1蛋白表達(dá)結(jié)果見圖3，其中，β-actin為對照。圖3顯示，與正常對照組小鼠比較，鐵過載陽性對照組小鼠應(yīng)激性腎臟ho-1蛋白表達(dá)水平升高。蠶砂提取物低劑量組和高劑量組與陽性對照組相比，腎臟ho-1蛋白表達(dá)水平均進(jìn)一步提高作用，并具有劑量相關(guān)性。試驗(yàn)結(jié)論：蠶砂提取物能降低鐵過載小鼠got、gpt、si、總膽紅素、mda、ros、tnfα、il-6、超敏c反應(yīng)蛋白和腎組織8-ohdg含量，提高總抗氧化能力，降低尿蛋白含量和潛血，能夠阻止鐵過載所致肝、腎損傷。肝臟和腎臟病理切片進(jìn)一步證明蠶砂提取物有明顯阻止鐵過載所致肝、腎損傷作用。western檢測ho-1蛋白表達(dá)表明，蠶砂提取物明顯上調(diào)腎組織ho-1蛋白表達(dá)水平，從而能夠保護(hù)腎臟，促進(jìn)腎功能恢復(fù)。實(shí)施例4.蠶砂提取物和去鐵酮聯(lián)用的臨床祛鐵作用為證明蠶砂提取物和去鐵酮聯(lián)用的治療效果，給鐵過載的患者服用蠶砂提取物和去鐵酮進(jìn)行觀察。⑴一般資料選取因各類貧血需要長期輸血而導(dǎo)致鐵過載的患者32例，其中男17例，女15例，年齡18～69歲，其中重型再生障礙性貧血(saa)19例，重型地中海貧血8例，骨質(zhì)增生異常綜合征(mds)5例，治療前肝及腎功能均正常。隨機(jī)分為對照組(16例)和治療組(16例)當(dāng)患者sf水平超過1000μg/l時(shí)開始給予祛鐵治療，其中對照組口服去鐵酮片，治療組口服蠶砂提取物和去鐵酮片。⑵治療方法每次口服蠶砂提取物片劑4片，餐后1h服藥，忌茶，3次/天；每次口服去鐵酮片，75mg/kg·d，3次/d，兩組口服去鐵酮片用法相同。4周為一個(gè)療程，治療4個(gè)療程。⑶觀察指標(biāo)整個(gè)研究期間，患者需要進(jìn)行常規(guī)輸血治療以維持血紅蛋白(hb)水平≥70g/l。每4周檢測1次sf、si、血常規(guī)、血生化、尿蛋白等；定期觀察心電圖、超聲心電圖、橈骨x線等；密切觀察患者用藥情況，了解有無不良反應(yīng)。⑷統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析使用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸治療結(jié)果所有患者在治療過程中均未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，均無惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)，無關(guān)節(jié)疼痛、腫脹，未出現(xiàn)視力及聽力異常，用藥期間肝腎功能、電解質(zhì)未見明顯改變，未發(fā)現(xiàn)與治療相關(guān)性血象異常，表明蠶砂提取物和去鐵酮聯(lián)合用藥是安全的?；颊咧委熐昂髎f和si平均水平見下表7。表7.兩組患者治療前后sf和si平均水平注：與治療前相比，*p<0.05，**p<0.01；與對照組相比，#p<0.05。表7顯示，對照組和治療組患者治療前sf和si大致相同，治療4周后兩組sf和si平均值有下降趨勢，治療8周、12周和16周后的sf和si平均值均下降明顯，與治療前相比具有顯著性差異(與治療前相比p＜0.01)，表明蠶砂提取物以及蠶砂提取物和去鐵酮聯(lián)合對鐵過載具有顯著的臨床治療效果，并具有劑量相關(guān)性。并且，治療組與對照組相比，sf和si下降幅度更大，治療16周后與對照組相比具有顯著性差異(與對照組相比p＜0.05)，表明蠶砂提取物和去鐵酮聯(lián)合的治療效果優(yōu)于單用去鐵酮的治療效果。實(shí)施例5.制劑的制備稱取蠶砂提取物原料藥60g、去鐵酮原料藥180g、淀粉25g、糊精85g、羥丙纖維素27g，微晶纖維素27g、硬脂酸鎂2.5g，混勻，過100目篩。稱取羧甲基纖維素鈉1.2g和適量純化水，配制濃度為3％的溶液，稱取蔗糖95g和適量純化水配制成糖漿。將上述原料混勻，制成顆粒，干燥，壓制成片，包薄膜衣，即得。以上，對本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行了說明。但是，本發(fā)明不限定于上述實(shí)施方式。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12