本發(fā)明涉及一種多肽類脂質(zhì)微氣泡及其制備方法，具體涉及一種西那普肽微泡制劑及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
西那普肽是一種含有21個氨基酸的合成多肽，其化學(xué)表述為:L-lysyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-lysyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-lysyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-lysyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucy l-L-lysine；分子式:C126H238N26O22。西那普肽是美國FDA批準(zhǔn)藥物(商品名Surfaxin)的活性成分之一。西那普肽(Lucinaetant)是由美國Discovery Laboratories公司開發(fā)的一種肺部表面活性劑，主要用于高危早產(chǎn)嬰兒呼吸窘迫綜合征(RDS)的預(yù)防與治療。
微氣泡是由膜殼層與內(nèi)部空腔組成的一種物質(zhì)，直徑一般為1～10μm，膜材成份一般為磷脂類、白蛋白類、聚合物類、表面活性劑類等，內(nèi)部填充氣體常采用空氣、氮氣、六氟化硫、全氟丙烷、全氟丁烷等的一種或幾種。由于微氣泡在超聲作用下具有較強的回波反射性能，能夠使超聲信號顯著增強，從而提高組織顯影的清晰度，具有良好的超聲顯像增強作用，以上功能使得微氣泡作為超聲造影劑被廣泛運用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。在醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，微氣泡常作為超聲對比增強劑和/或藥物(包括蛋白、基因等活性成分)的輸運載體，并且已有商業(yè)化的微氣泡造影劑上市，例如SonoVue(聲諾維)、Levovist(利聲顯)、Optison(國內(nèi)未上市)、Echogen(國內(nèi)未上市)等。
通過制備脂質(zhì)微泡制劑可以有效增加西那普肽與肺泡細(xì)胞的接觸并提高其生物利用度，同時肺部表面活性物質(zhì)微泡與傳統(tǒng)脂質(zhì)微泡相比具有更好的穩(wěn)定性。本發(fā)明制備的西那普肽微泡制劑既可直接被用于呼吸窘迫綜合癥的治療，同時也可作為超聲造影劑或藥物載體。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
技術(shù)問題：本發(fā)明的目的是提供一種西那普肽微泡制劑，該微泡制劑可以有效的改善傳統(tǒng)西那普肽制劑的生物利用度，采用肺部給藥為呼吸窘迫類疾病治療提供新的選擇；此外，該制劑還可以作為超聲造影劑及藥物載體應(yīng)用于生命醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
本發(fā)明的另一目的是提供一種西那普肽微泡制劑的制備方法，該方法制備簡單，所制備成品批次均一性好，易于實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
技術(shù)內(nèi)容：本發(fā)明提供了一種西那普肽微泡制劑，該微泡制劑由微泡和緩沖液組成，其中微泡由膜殼層與內(nèi)部空腔組成，所述內(nèi)部空腔充填有氣體，所述膜殼層由以下材料組成：
西那普肽 1-10重量份
磷脂 30-100重量份
棕櫚酸 3-20重量份。
其中：
所述的氣體為二氧化碳、氧氣、氮氣、氫氣、一氧化氮、硫化氫、六氟化硫或全氟烷烴中的一種或多種。
所述的磷脂為二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油鈉鹽、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油或二油酰磷脂酰甘油的一種或多種。
所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、含有甘油的磷酸鹽緩沖液、含有甘油的醋酸鹽緩沖液或含有甘油的檸檬酸鹽緩沖液中的一種或多種，其中所述含有甘油的磷酸鹽緩沖液、含有甘油的醋酸鹽緩沖液或含有甘油的檸檬酸鹽緩沖液中的甘油含量范圍均為0.05-0.2g/mL。
所述的緩沖液pH值范圍為7.2-7.4。
本發(fā)明還提供了一種制備西那普肽微泡制劑的制備方法，該方法包括以下步驟：
1)分別將1-10重量份的西那普肽、30-100重量份的磷脂、3-20重量份的棕櫚酸溶解或分散于1500-45000重量份的有機溶劑中，得到混合溶液；
2)采用減壓蒸發(fā)除去步驟1)混合溶液中的有機溶劑，之后加入5000-100000重量份的緩沖溶液，并恒溫超聲分散形成混懸液；
3)在步驟2)得到的混懸液中填充氣體，之后機械震蕩，即得西那普肽微泡制劑。
其中：
所述的有機溶劑為氯仿、乙腈、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚或石油醚中的一種或多種。
所述的減壓蒸發(fā)的水浴溫度為20-30℃。
所述的機械震蕩時間為1-10分鐘。
所述恒溫超聲分散的溫度范圍為40-70℃，超聲頻率為30-120kHz，超聲時長為10-60分鐘。
有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
研究發(fā)現(xiàn)，西那普肽能夠很好的模擬肺表面活性物質(zhì)疏水性蛋白B的功能，與磷脂相結(jié)合的處方應(yīng)用于受損肺泡上皮細(xì)胞，能夠有效的促進其肺表面活性蛋白分泌功能的恢復(fù)，同時肺部表面活性物質(zhì)微泡相比較于一般的脂質(zhì)微泡具有更好的穩(wěn)定性及載藥能力。本發(fā)明制備的西那普肽微泡制劑可以有效的改善傳統(tǒng)西那普肽制劑的生物利用度，采用肺部給藥為呼吸窘迫類疾病治療提供新的選擇，此外，該制劑還可以作為超聲造影劑及藥物載體應(yīng)用于生命醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
該方法制備西那普肽微泡制劑過程簡單，所制備成品批次均一性好，易于實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施方式
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
實施例1：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽0.1mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿2.74mg，磷脂酰甘油鈉鹽0.26mg，棕櫚酸2.0mg溶于0.1mL氯仿中，混合均勻，置于20℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.05g/mL甘油的pH值為7.2磷酸酸鹽緩沖溶液0.5mL，40℃條件下超聲水浴10分鐘，超聲頻率為30kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例2：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽0.1mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿2.74mg，磷脂酰甘油鈉鹽0.26mg，棕櫚酸0.3mg溶于0.1mL氯仿中，混合均勻，置于20℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.05g/mL甘油的pH值為7.4磷酸鹽緩沖溶液0.5mL，40℃條件下超聲水浴10分鐘，超聲頻率為30kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例3：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽0.1mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿77.4mg，磷脂酰甘油鈉鹽22.6mg，棕櫚酸0.3mg溶于0.5mL氯仿中，混合均勻，置于25℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.1g/mL甘油的pH值為7.4磷酸鹽緩沖溶液1mL，50℃條件下超聲水浴15分鐘，超聲頻率為60kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例4：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽0.1mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿77.4mg，磷脂酰甘油鈉鹽22.6mg，棕櫚酸2.0mg溶于1.0mL氯仿中，混合均勻，置于25℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.2g/mL甘油的pH值為7.4醋酸鹽緩沖溶液1mL，70℃條件下超聲水浴10分鐘，超聲頻率為60kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩10分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例5：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽1.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿2.3mg，磷脂酰甘油鈉鹽0.7mg，棕櫚酸0.3mg溶于3.0mL氯仿中，混合均勻，置于30℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.1g/mL甘油的pH值為7.4醋酸鹽緩沖溶液5mL，60℃條件下超聲水浴15分鐘，超聲頻率為120kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例6：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽1.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿2.3mg，磷脂酰甘油鈉鹽0.7mg，棕櫚酸2.0mg溶于1.0mL氯仿中，混合均勻，置于25℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.05g/mL甘油的pH值為7.4醋酸鹽緩沖溶液10mL，60℃條件下超聲水浴10分鐘，超聲頻率為120kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例7：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽1.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿7.5mg，磷脂酰甘油鈉鹽2.5mg，棕櫚酸0.3mg溶于3.0mL氯仿中，混合均勻，置于25℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.2g/mL甘油的pH值為7.4磷酸鹽緩沖溶液10mL，60℃條件下超聲水浴60分鐘，超聲頻率為30kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩5分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例8：制備含SF6西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽1.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿7.5mg，磷脂酰甘油鈉鹽2.5mg，棕櫚酸2.0mg溶于3.0mL氯仿中，混合均勻，置于30℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.05g/mL甘油的pH值為7.4醋酸鹽緩沖溶液10mL，70℃條件下超聲水浴10分鐘，超聲頻率為60kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充SF6氣體，機械震蕩1分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例9：制備含N2的西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽2.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿56.4mg，磷脂酰甘油鈉鹽43.6mg，棕櫚酸8.4mg溶于1.0mL氯仿中，混合均勻，置于30℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.2g/mL的pH值為7.4磷酸鹽緩沖溶液10mL，50℃條件下超聲水浴60分鐘，超聲頻率為120kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充N2氣體，機械震蕩3分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例10：制備含CF4的西那普肽微泡制劑
稱取西那普肽1.0mg、二棕櫚酰磷脂酰膽堿20.0mg，磷脂酰甘油鈉鹽8.0mg，棕櫚酸4.5mg溶于3.0mL氯仿中，混合均勻，置于25℃水浴中、減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，減壓除去有機溶劑。將形成的脂膜加入含有0.2g/mL甘油的pH值7.4磷酸鹽緩沖溶液10mL，70℃條件下超聲水浴20分鐘，超聲頻率為60kHz，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充全氟化碳(CF4)氣體，機械震蕩10分鐘，封蓋，即得含西那普肽微泡制劑。
實施例11：西那普肽微泡制劑對受損Ⅱ型肺表面上皮細(xì)胞的作用
取對數(shù)生長期的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞，以1500rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，去上清，用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞2次，充分去除胎牛血清，再用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液將細(xì)胞配成1×106個/mL濃度的細(xì)胞懸液。隨后向細(xì)胞混懸液中加入濃度為20μg/mL脂多糖溶液。隨后采用RT-PCR半定量方法檢測肺表面活性蛋白A(SP-A)表達情況，以鑒定造模成功。待模型建立成功后，將細(xì)胞混懸液①生理鹽水組、②普通西那普肽混懸液組、③西那普肽微泡制劑組，分別在0、24、48h檢測SP-A表達情況。實驗結(jié)果表明，相比較①②組，第③組表達SP-A含量增多，證實西那普肽微泡制劑可更有效的促進受損Ⅱ型肺表面上皮細(xì)胞蛋白分泌功能恢復(fù)。
實施例12：西那普肽微氣泡超聲造影
按處方量稱取西那普肽、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油鈉鹽、棕櫚酸溶于氯仿中，旋蒸除去有機溶劑，將形成的脂膜加入含甘油的磷酸鹽緩沖溶液，超聲水浴，得含西那普肽脂質(zhì)混懸液，分裝在西林瓶中，填充氣體，震蕩得西那普肽微泡制劑。按瓊脂粉、甘油、水一定比例配制體模，注入上述制備的微泡，在21MHz超聲頻率下，檢測成像效果，實驗表明成像效果明顯，超聲下顯像時間大于30分鐘。