本發(fā)明屬于醫(yī)藥用途領域，特別是涉及一種利魯唑在抑制金黃色葡萄球菌方面的應用。
背景技術：
：利魯唑(化學名：2-氨基-6-三氟甲氧基苯并噻唑)是苯并噻唑類化合物，有廣泛的藥理學作用，如調節(jié)谷氨酸及其轉運體、神經(jīng)保護作用、抗抑郁、抗焦慮、鎮(zhèn)痛等。利魯唑現(xiàn)在仍是美國食品與藥物管理局批準惟一用于治療肌萎縮側索硬化癥的藥物，可延長存活期和/或推遲氣管切開的時間。目前，沒有見到利魯唑應用于抑菌治療方面的報道。金黃色葡萄球菌是臨床十分常見的病原菌之一，隸屬于葡萄球菌屬，有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，能夠引起局部組織化膿感染、肺炎、敗血癥等疾病，嚴重威脅著人類的身體健康。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10～15％NaCl肉湯中生長。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但是由于菌株可產(chǎn)生青霉素酶等而產(chǎn)生耐藥性。金黃色葡萄球菌對β-內酰胺類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類等抗菌藥物耐藥。金黃色葡萄球菌對青霉素G和紅霉素耐藥率大于50.0％，(參考文獻：劉智勇，張波，吳昊等，2014年某院主要病原菌分布及耐藥監(jiān)測分析，檢驗醫(yī)學與臨床，2016年5月，第13卷第9期，頁碼1233至1236)金黃色葡萄球菌對β-內酰胺類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類等抗菌藥物耐藥。目前，細菌的耐藥性已經(jīng)成為日益嚴峻的全球性公共衛(wèi)生問題，對于能夠抑制細菌而不產(chǎn)生耐藥性的非抗生素類藥物的研發(fā)已經(jīng)刻不容緩。技術實現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有抗生素類藥物具有細菌耐藥性的不足，本發(fā)明提供一種利魯唑在抑制金黃色葡萄球菌方面的應用。該應用將利魯唑化合物溶解于LB液體培養(yǎng)基中，超聲使之成為均勻分散的容易液，利用LB液體培養(yǎng)基通過二倍稀釋法配制成不同藥物濃度的液體培養(yǎng)液，接種菌懸液于上述藥物培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，通過觀察濁度確定利魯唑的最底抑菌濃度。實驗證明，利魯唑最低抑菌濃度為256μg/mL～350μg/mL。本發(fā)明了提供了一種非抗生素類化合物利魯唑的抑菌作用，為解決抗生素類耐藥性提供有益幫助，在醫(yī)藥領域有潛在的應用前景。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種利魯唑在抑制金黃色葡萄球菌方面的應用，所述利魯唑的中文名稱為2-氨基-6-三氟甲氧基苯并噻唑，英文名稱為2-amino-6-trifluomethoxy-benzothiazole，分子式是C8H5F3N2OS，分子量是234.2，CAS號是1744-22-5，熔點是116～118℃，分子結構是：其特點是包括以下步驟：按照利魯唑與LB液體培養(yǎng)基的質量/體積比為1.920:1～2.048:1g/L配料，將利魯唑溶解在LB液體培養(yǎng)基中，超聲振蕩使其充分溶解，配成均勻含有利魯唑的培養(yǎng)基溶液；采用二倍稀釋法用LB液體培養(yǎng)基將上述步驟制備的利魯唑溶液稀釋成不同濃度的受試液；將含菌量為105cfu/mL的金黃色葡萄球菌的菌懸液接種于上述中含利魯唑培養(yǎng)基中，作為實驗組樣本；以同樣方法將含菌量為105cfu/mL的金黃色葡萄球菌的菌懸液接種于不含利魯唑的培養(yǎng)基中，作為陽性對照組樣本；將試驗組樣本、陽性對照組樣本放置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h，觀察樣本濁度，確定最低抑菌濃度。本發(fā)明的有益效果是：該應用將利魯唑化合物溶解于LB液體培養(yǎng)基中，超聲使之成為均勻分散的容易液，利用LB液體培養(yǎng)基通過二倍稀釋法配制成不同藥物濃度的液體培養(yǎng)液，接種菌懸液于上述藥物培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，通過觀察濁度確定利魯唑的最底抑菌濃度。實驗證明，利魯唑最低抑菌濃度為256μg/mL～350μg/mL。本發(fā)明了提供了一種非抗生素類化合物利魯唑的抑菌作用，為解決抗生素類耐藥性提供有益幫助，在醫(yī)藥領域有潛在的應用前景。下面結合具體實施方式對本發(fā)明作詳細說明。具體實施方式實施例1：(1)培養(yǎng)基的制備：用蒸餾水配制LB(溶菌肉湯，LysogenyBroth)液體培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L，用氫氧化鈉調制pH至7.4并且高溫高壓滅菌。(2)接種菌液的制備：利用細菌生長法制備接種菌液。用接種環(huán)挑取金黃色葡萄球菌單菌落2～3個，接種于8～10mLLB液體培養(yǎng)基中，37℃孵育6～8h。增菌后的對數(shù)生長期菌液用多功能酶標儀(型號SynergyHT)檢測波長600nm測定OD值，當OD值為0.6時及菌液含量約為5×108cfu/mL。(3)將20.48mg利魯唑溶于10mLLB液體培養(yǎng)基中，超聲振蕩使利魯唑充分溶解，配制成分散均勻利魯唑培養(yǎng)基溶液(2048μg/mL)。在無菌操作臺中操作，取無菌樣品瓶(10mL)7個排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培養(yǎng)基，在第一樣品瓶中加入5mL利魯唑抗菌藥物原液(2048μg/mL)混合均勻，然后吸取2.5mL至第二瓶，混勻后再吸取2.5mL至第三管，如此連續(xù)二倍稀釋至第6瓶，并從第6瓶中吸取2.5mL棄去，第7瓶為不含藥物的生長對照。此時各瓶藥物濃度依次為2048、1024、512、256、128、64μg/mL。然后將制備好的接種菌懸液稀釋，取2.5mL至各樣品瓶中，使每瓶最終菌液濃度約為5×108cfu/mL。第1樣品瓶到第6樣品瓶藥物濃度分別為1024、512、256、128、64、32μg/mL。(4)孵育：將接種好的樣品瓶蓋緊蓋子，至于37℃培養(yǎng)箱孵育18～24h。觀察濁度，確定最低抑菌濃度。表1.實施例1藥物濃度與抑菌效果序號1234567利魯唑濃度μg/mL102451225612864320濁度澄清澄清澄清渾濁渾濁渾濁渾濁實驗結果如表1所示，利魯唑對于金黃色葡萄球菌及大腸桿菌的最低抑菌濃度為512μg/mL。實施例2：(1)培養(yǎng)基的制備：用蒸餾水配制LB(溶菌肉湯，LysogenyBroth)液體培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L，用氫氧化鈉調制pH至7.4并高溫高壓滅菌。(2)接種菌液的制備：利用細菌生長法制備接種菌液。用接種環(huán)挑取金黃色葡萄球菌單菌落2～3個，接種于8～10mLLB液體培養(yǎng)基中，37℃孵育6～8h。增菌后的對數(shù)生長期菌液用多功能酶標儀(型號SynergyHT)檢測波長600nm測定OD值，當OD值為0.6時及菌液含量約為5×108cfu/mL。(3)將19.20mg利魯唑溶于10mLLB液體培養(yǎng)基中，超聲振蕩使利魯唑充分溶解，配制成分散均勻利魯唑培養(yǎng)基溶液(1920μg/mL)。在無菌操作臺中操作，取無菌樣品瓶(10mL)7個排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培養(yǎng)基，在第一樣品瓶中加入5mL利魯唑抗菌藥物原液(1920μg/mL)混合均勻，然后吸取2.5mL至第二瓶，混勻后再吸取2.5mL至第三管，如此連續(xù)二倍稀釋至第6瓶，并從第6瓶中吸取2.5mL棄去，第7瓶為不含藥物的生長對照。此時各瓶藥物濃度依次為1920、960、480、240、120、60μg/mL。然后將制備好的接種菌懸液稀釋，取2.5mL至各樣品瓶中，使每瓶最終菌液濃度約為5×108cfu/mL。第1樣品瓶到第6樣品瓶藥物濃度分別為960、480、240、120、60、30μg/mL。(4)孵育：將接種好的樣品瓶蓋緊蓋子，至于37℃培養(yǎng)箱孵育18～24h。觀察濁度，確定最低抑菌濃度。表2.實施例2藥物濃度與抑菌效果序號1234567利魯唑濃度μg/mL96048024012060300濁度澄清澄清渾濁渾濁渾濁渾濁渾濁實驗結果如表2所示，利魯唑對于金黃色葡萄球菌及大腸桿菌的最低抑菌濃度為480μg/mL。實施例3：(1)培養(yǎng)基的制備：用蒸餾水配制LB(溶菌肉湯，LysogenyBroth)液體培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L，用氫氧化鈉調制pH至7.4并高溫高壓滅菌。(2)接種菌液的制備：利用細菌生長法制備接種菌液。用接種環(huán)挑取金黃色葡萄球菌單菌落2～3個，接種于8～10mLLB液體培養(yǎng)基中，37℃孵育6～8h。增菌后的對數(shù)生長期菌液用多功能酶標儀(型號SynergyHT)檢測波長600nm測定OD值，當OD值為0.6時及菌液含量約為5×108cfu/mL。(3)將28.00mg利魯唑溶于10mLLB液體培養(yǎng)基中，超聲振蕩使利魯唑充分溶解，配制成分散均勻利魯唑培養(yǎng)基溶液(2800μg/mL)。在無菌操作臺中操作，取無菌樣品瓶(10mL)7個排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培養(yǎng)基，在第一樣品瓶中加入5mL利魯唑抗菌藥物原液(2800μg/mL)混合均勻，然后吸取2.5mL至第二瓶，混勻后再吸取2.5mL至第三管，如此連續(xù)二倍稀釋至第6瓶，并從第6瓶中吸取2.5mL棄去，第7瓶為不含藥物的生長對照。此時各瓶藥物濃度依次為2800、1400、700、350、175、87.5μg/mL。然后將制備好的接種菌懸液稀釋，取2.5mL至各樣品瓶中，使每瓶最終菌液濃度約為5×108cfu/mL。第1樣品瓶到第6樣品瓶藥物濃度分別為1400、700、350、175、87.5、43.75μg/mL。(4)孵育：將接種好的樣品瓶蓋緊蓋子，至于37℃培養(yǎng)箱孵育18～24h。觀察濁度，確定最低抑菌濃度。表3.實施例3藥物濃度與抑菌效果序號1234567利魯唑濃度μg/mL140070035017587.543.750濁度澄清澄清澄清渾濁渾濁渾濁渾濁實驗結果如表3所示，利魯唑對于金黃色葡萄球菌及大腸桿菌的最低抑菌濃度為350μg/mL。當前第1頁1 2 3