本發(fā)明涉及一種改善眩暈的中藥組合物，屬于醫(yī)藥保健食品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

在現(xiàn)有技術(shù)中，眩暈是目眩和頭暈的總稱。以眼花、視物不清和昏暗發(fā)黑為眩，暈指頭暈，以視物旋轉(zhuǎn)不能站立為暈，兩者常同時(shí)并見(jiàn)，故稱眩暈。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的內(nèi)耳眩暈、頸椎病、高血壓病、貧血、顱內(nèi)腫瘤等，臨床表現(xiàn)均以眩暈為主。

眩暈癥一般采用化學(xué)藥（如：異丙嗪、地西泮、氟桂利嗪等）和中藥（如：眩暈寧片、天麻眩暈寧合劑等）治療?；瘜W(xué)藥存在一定的毒副作用，部分中藥也存在慢性毒副現(xiàn)象，中藥已經(jīng)成為藥物濫用的“重災(zāi)區(qū)”，不適合長(zhǎng)期使用。經(jīng)檢索，有助于改善眩暈保健功能的保健食品未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于：提供一種改善眩暈的中藥組合物。本發(fā)明采用的是藥食同源物質(zhì)，具有代替湯劑、迅速吸收、無(wú)糖、可長(zhǎng)期服用、食用安全、口味好、體積小、便于攜帶、改善眩暈效果好的中藥組合物。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料制成：蜜環(huán)菌子實(shí)體45－50%、葛根15－20%，桑葉15－20%、山楂15－20%、輔料麥芽糊精3－4%。

優(yōu)選，改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料制成：蜜環(huán)菌子實(shí)體48.128%、葛根16.043%，桑葉16.043%、山楂16.043%、輔料麥芽糊精3.743%。

一種改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料組成：蜜環(huán)菌子實(shí)體提取物30－35%、葛根提取物25－30%，桑葉提取物10－15%、山楂提取物6－8%、麥芽糊精20－25%。

優(yōu)選，改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料組成：蜜環(huán)菌子實(shí)體提取物33.33%、葛根提取物26.67%，桑葉提取物10%、山楂提取物6.67%、麥芽糊精23.33%組成。

按照中醫(yī)理論和中藥方劑君臣佐使配伍原則，蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）味甘、性平，歸肝經(jīng)。息風(fēng)平肝，祛風(fēng)通絡(luò)，強(qiáng)筋健骨，用于各類眩暈，頭暈，頭痛，失眠，四肢麻木為君藥；葛根性味甘、辛、涼。歸脾胃肺經(jīng)。解肌退熱，生津，透疹，通經(jīng)活絡(luò)。用于眩暈頭痛，高血壓引起的項(xiàng)背強(qiáng)痛為臣藥；桑葉性味甘、苦，寒。歸肺、肝經(jīng)。用于疏散風(fēng)熱，清肺潤(rùn)燥，清肝明目。用于風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花為佐藥；山楂性味酸、甘、微溫。歸脾、胃、肝經(jīng)，消食健胃，行氣散瘀，用于高脂血癥，改善微循環(huán)為使藥。諸藥合用，用于有助于改善各種眩暈、頭痛、失眠、四肢麻木等癥狀。

蜜環(huán)菌Armillaria mellea（Vahl. Ex Fr.）Quel.隸屬于口蘑科（Tricholomataceae）蜜環(huán)菌屬Armillaria（Fr.: Fr.）)Staude.，又名榛蘑、蜜環(huán)蕈、青岡蕈，是一種藥食兼用真菌。

榛蘑為真菌類擔(dān)子菌綱白蘑科蜜環(huán)菌屬植物蜜環(huán)菌Armillaria mellea（Vahl ex Fr.）Quel. 的子實(shí)體。野生榛蘑是中國(guó)東北特有的食用真菌，既是食用菌又是藥用真菌。天麻與蜜環(huán)菌的藥理作用相似，具體表現(xiàn)為二者都有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖、抑菌、改善記憶力、抗氧化、極高機(jī)體免疫力、延緩衰老的作用。這些相似的藥理作用都提示與天麻和蜜環(huán)菌中的多糖類成分有關(guān)。

榛蘑藥材收載于《全國(guó)中草藥匯編》，榛蘑性味甘，溫。祛風(fēng)活絡(luò)，強(qiáng)筋健骨。用于各種腰腿痛疼，佝僂病，癲癇等癥。榛蘑藥材還收載于《中藥大辭典》，具有祛風(fēng)活絡(luò)，強(qiáng)筋壯骨功能。治羊癇風(fēng)，各種腰腿疼痛，佝僂病。

榛蘑的技術(shù)要求收載于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)LY/T 2465-2015《榛蘑》，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行GB 7096-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食用菌及其制品》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

蜜環(huán)菌菌絲體是蜜環(huán)菌的營(yíng)養(yǎng)器官，為極纖細(xì)的絲狀體。在著生蜜環(huán)菌菌索的樹(shù)皮下，可見(jiàn)由大量菌絲組成的菌絲塊或菌絲束，呈粉白色或乳白色。

蜜環(huán)菌可采用發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)的蜜環(huán)菌粉收載于《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（13冊(cè)），標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS-10001-（HD-1224）-2002。液體發(fā)酵培養(yǎng)的蜜環(huán)菌粉，具有定驚，熄風(fēng)的功效。用于治療各種眩暈、神經(jīng)衰弱、失眠、耳鳴、肢體麻木等癥。

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根，習(xí)稱野葛，為藥食兩用成分，收載于《中國(guó)藥典》2015版一部。葛根性味甘、辛，涼。歸脾、胃、肺經(jīng)。具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽(yáng)止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒的功效。用于外感發(fā)熱頭痛，項(xiàng)背強(qiáng)痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，眩暈頭痛，中風(fēng)偏癱，胸痹心痛，酒毒傷中。

桑葉為?？浦参锷orus alba L.的干燥葉，為藥食兩用成分，收載于《中國(guó)藥典》2015版一部。桑葉性味甘、苦，寒。歸肺、肝經(jīng)。疏散風(fēng)熱，清肺潤(rùn)燥，清肝明目。用于風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花。

山楂為薔薇科植物山里紅pimiatificia Bge.var.m ajor N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果實(shí)，為藥食兩用成分，收載于《中國(guó)藥典》2015版一部。性味酸、甘，微溫。歸脾、胃、肝經(jīng)。消食健胃、行氣散瘀，化濁降脂。用于肉食積滯，胃脘脹滿，瀉痢腹痛，瘀血經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻，心腹刺痛，胸痹心痛，疝氣疼痛，髙脂血癥。

具體地說(shuō)，本發(fā)明的制備方法是這樣實(shí)現(xiàn)的：

1．蜜環(huán)菌子實(shí)體提取物（即蜜環(huán)菌粗多糖的制備）：取蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）粉碎成2mm～3mm的粗粉，料液比為1：20，溫度100℃，加水回流提取2次，第一次為3小時(shí)，第二次為2小時(shí)；合并提取液，真空濃縮成相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）的清膏；清膏用3～4倍量95%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）乙醇沉淀24小時(shí)，沉淀物用4～5倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）≥80℃熱水溶解，放冷后沉淀24～48小時(shí)，取上清液，濾去水不溶物，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得蜜環(huán)菌粗多糖。

2．葛根提取物的制備：取葛根，粉碎成2mm～5mm的粗粉或顆粒，用30%乙醇溶液回流提取2次，每次2小時(shí)，第一次加10倍量，第二次加8倍量，合并提取液，回收乙醇，提取液濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，沉淀12小時(shí)～24小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得葛根提取物。

3．桑葉提取物的制備：取桑葉，粉碎成粗粉，料液比為1：10，溫度80℃～90℃，用70%乙醇溶液回流提取2次，分別為1小時(shí)，合并濾液，回收乙醇，真空濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）；濃縮液加3倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）95%乙醇，沉淀24小時(shí)～48小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得桑葉提取物。

4．山楂提取物的制備：取山楂，粉碎成2mm～3mm的粗粉，用70%乙醇溶液，料液比1：10，90℃回流提取2次，每次1.5小時(shí)；合并提取液，回收乙醇，提取液濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）；濃縮液加3倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）95%乙醇，沉淀24小時(shí)～48小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得山楂提取物。

保健功能：有助于改善眩暈。

適宜人群：各種眩暈人群。不適宜人群：兒童。

食用方法及食用量：每天2～3次，每次1袋。規(guī)格：3g/袋。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明具有有助于改善眩暈的保健功能，采用的是藥食同源物質(zhì)，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，具有代替湯劑迅速吸收、無(wú)糖、可長(zhǎng)期服用、食用安全、口味好、體積小、便于攜帶等優(yōu)點(diǎn)，克服了現(xiàn)有技術(shù)不足。2、本發(fā)明的組合物以選用祛風(fēng)中藥為主。蜜環(huán)菌代替天麻息風(fēng)止痙，用于高血壓椎基底動(dòng)脈供血不足、美尼爾氏癥、植物神經(jīng)功能紊亂引起的眩暈、頭痛、肢體麻木；葛根、桑葉發(fā)散風(fēng)熱，用于風(fēng)熱、肺熱引起的眩暈頭痛、目赤腫痛、眼目昏花；山楂行氣散瘀、化濁降脂，用于血淤引起的頭暈?zāi)垦?、站立不穩(wěn)。組合物各組分共同協(xié)作，用以改善眩暈癥狀。

附圖說(shuō)明

圖1是提取料液比對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。

圖2是提取溫度對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。

圖3是提取時(shí)間對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。

圖4是乙醇濃度對(duì)桑葉總黃酮含量的影響。

圖5是溫度對(duì)桑葉總黃酮含量的影響。

圖6是料液比對(duì)桑葉總黃酮含量的影響。

圖7是提取時(shí)間對(duì)桑葉總黃酮含量的影響。

圖8是乙醇濃度對(duì)山楂總黃酮含量的影響。

圖9是溫度對(duì)山楂總黃酮含量的影響。

圖10是提取時(shí)間對(duì)山楂總黃酮含量的影響。

圖11是料液比對(duì)山楂總黃酮含量的影響。

具體實(shí)施方式

實(shí)驗(yàn)例

本發(fā)明中藥組合物的制備工藝研究

1．蜜環(huán)菌提取物制備工藝研究

蜜環(huán)菌提取物一般采用熱水浸提法、稀堿液浸提法、稀酸液浸提法。但因稀酸、稀堿條件下，易使多糖發(fā)生糖苷鍵的斷裂，部分多糖易發(fā)生水解而使多糖的收率降低，因此本發(fā)明采用熱水浸提法。

1.1 蜜環(huán)菌粗多糖的含量測(cè)定

蜜環(huán)菌粗多糖的含量測(cè)定采用SN/T 4260-2015《出口植物源食品中粗多糖的測(cè)定 苯酚-硫酸法》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定測(cè)定。

1.2 提取溫度、料液比、時(shí)間三因素對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。

1.2.1 提取料液比對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。

采用不同的料液比、沸點(diǎn)溫度提取5小時(shí)對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在料液比為1：20時(shí)，榛蘑粗多糖的得率最高，在料液比進(jìn)一步增加的情況下，粗多糖的得率沒(méi)有明顯提高。

1.2.2 提取溫度對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響

采用不同的溫度、1:20的料液比提取5小時(shí)對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，提取溫度對(duì)粗多糖的得率具有顯著影響，100℃與85℃提取條件下，粗多糖得率可提高60%以上。

1.2.3 提取時(shí)間對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響

采用不同的時(shí)間、1:20的料液比、沸點(diǎn)溫度對(duì)蜜環(huán)菌粗多糖得率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖3。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，提取時(shí)間以5小時(shí)為最佳條件，大于5小時(shí)粗多糖的得率沒(méi)有顯著提高。

1.2.4 蜜環(huán)菌粗多糖提取率正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

影響榛蘑多糖得率有三個(gè)因素，即料液比、提取溫度和提取時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

分析結(jié)果表明，影響蜜環(huán)菌粗多糖得率因素主次順序?yàn)椋禾崛囟龋玖弦罕龋咎崛r(shí)間，最佳因素組合為：B3、A3、C2，即采用提取溫度：100℃，提取時(shí)間：5小時(shí)，料液比：1：30，但料液比與1：20相差不多，考慮節(jié)省成本，料液比最終定為1：20。

2. 葛根提取物制備工藝研究

根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局《葛根提取物技術(shù)要求及編制說(shuō)明》中規(guī)定的技術(shù)要求和制備方法，經(jīng)資料分析，總結(jié)出最佳的制備工藝。

2.1 葛根提取物中葛根素的含量測(cè)定

葛根素含量測(cè)定執(zhí)行GB/T 22251-2008 《保健食品中葛根素的測(cè)定》標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法測(cè)定。

2.2 葛根素提取率正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

分別以水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇為提取溶劑，90℃～100℃加熱回流提取兩次，每次2小時(shí)，第一次加10倍量，第二次加8倍量，分別加乙醇使含醇量為60%、70%、80%進(jìn)行醇沉的制備條件，分析對(duì)葛根素含量的影響，分析結(jié)果見(jiàn)表2。

分析結(jié)果表明，影響葛根素得率因素主次順序?yàn)椋禾崛∪軇敬汲翝舛?，最佳因素組合為：A2、B2，即采用30%乙醇溶液提取2次，每次2小時(shí)，料液比為第一次加10倍量，第二次加8倍量，醇沉濃度70%為最佳制備工藝條件。

3．桑葉提取物制備工藝研究

桑葉主要含有總黃酮、生物堿和多糖類等有效成分，而其中黃酮類化合物含量較大，黃酮類化合物易溶于丙酮、乙醇、甲醇乙酸乙酯等溶劑。本發(fā)明采用乙醇為溶劑，分別設(shè)計(jì)以不同的提取溫度、不同的乙醇濃度、不同的提取時(shí)間，確定最佳的提取條件。

3.1 桑葉提取物總黃酮的含量測(cè)定

桑葉提取物總黃酮含量按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》保健食品中總黃酮的測(cè)定。

3.2 乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時(shí)間對(duì)桑葉總黃酮含量的影響

3.2.1 乙醇濃度對(duì)桑葉總黃酮含量的影響

采用料液比1：10，提取溫度100℃，提取時(shí)間1小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4。

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用濃度為70%和80%的乙醇溶液回流提取桑葉總黃酮提取效果相近，為了節(jié)約成本，乙醇濃度選擇70%為最佳。

3.2.2 溫度對(duì)桑葉總黃酮含量的影響

采用料液比1:10，乙醇濃度70%，提取時(shí)間1小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5。

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用70%乙醇溶液于80℃～100℃的水浴中回流提取效果較好，選擇80℃提取有利于節(jié)省成本，為最佳方案。

3.2.3 料液比對(duì)桑葉總黃酮含量的影響

采用溫度80℃，乙醇濃度70%，提取時(shí)間1小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖6。

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用70%乙醇溶液于80℃回流提取條件下，料液比為1：10、1：20、1：30效果最好，但在料液比大于1：10的條件下，桑葉總黃酮的含量上升緩慢，因此選擇料液比為1：10為最佳方案。

3.2.4 提取時(shí)間對(duì)桑葉總黃酮含量的影響

采用溫度80℃，乙醇濃度70%，料液比1：10。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖7。

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用70%乙醇溶液于80℃回流提取條件下，料液比為1：10，提取時(shí)間對(duì)桑葉總黃酮的含量沒(méi)有顯著影響，因此采用提取2次，每次1小時(shí)的制備工藝。

3.2.4 桑葉提取物正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

影響桑葉提取物總黃酮含量有4個(gè)因素，即溶劑選擇、提取溫度、料液比和提取時(shí)間，分析結(jié)果見(jiàn)表3。

分析結(jié)果表明，影響桑葉總黃酮含量因素主次順序?yàn)椋毫弦罕龋咎崛∪軇咎崛囟龋咎崛r(shí)間，最佳因素組合為：C3、A2、B3、D1，即采用料液比1：20，乙醇濃度70%，提取溫度：80℃，提取時(shí)間2小時(shí)?？紤]料液比1：20與1：10影響因素較小，為了節(jié)省成本，最終選擇料液比1：10，溫度70℃～80℃，70%乙醇溶液回流提取2次，每次1小時(shí)最佳工藝條件。

4．山楂提取物制備工藝研究

山楂主要含有總黃酮成分，總黃酮易溶于丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑。本發(fā)明采用乙醇為溶劑，分別設(shè)計(jì)不同的提取溫度、乙醇濃度和提取時(shí)間，以確定最佳的制備工藝條件。

4.1 山楂提取物中總黃酮的含量測(cè)定

山楂提取物總黃酮含量執(zhí)行《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》保健食品中總黃酮的測(cè)定。

4.2 乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時(shí)間對(duì)山楂總黃酮含量的影響

4.2.1 乙醇濃度對(duì)山楂總黃酮含量的影響

采用料液比1：20，提取溫度90℃，提取時(shí)間1小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖8。

試驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇濃度從40％～50％基本無(wú)變化，從50%～60%逐漸增加，當(dāng)濃度升到70％時(shí)黃酮提取量上升比較大并達(dá)到最高值。但是隨著乙醇濃度的繼續(xù)增加，黃酮提出量下降，70％乙醇所提取出的黃酮最多。

4.2.2 溫度對(duì)山楂中黃酮提取的影響

采用料液比1：20，乙醇濃度70%，提取時(shí)間1小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖9。

試驗(yàn)表明，當(dāng)溫度50℃～80℃逐漸上升的時(shí)候，黃酮提取量也隨著上升，這是由于黃酮在乙醇中的溶解度隨著溫度的升高而增大。但是當(dāng)溫度大于80℃時(shí)，隨著溫度的進(jìn)一步升高，黃酮提取量上升不那么明顯，漸漸趨于平衡，生產(chǎn)中從山楂中提取黃酮，溫度最高采用80℃～90℃為易。

4.2.3 提取時(shí)間對(duì)山楂總黃酮提取的影響

采用料液比1：20，乙醇濃度70%，提取溫度80℃。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖10。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)提取時(shí)間從1小時(shí)到2小時(shí)總黃酮提取量急劇上升，但是當(dāng)提取時(shí)間到3小時(shí)總黃酮含量無(wú)明顯變化，隨著時(shí)間的進(jìn)一步增加，總黃酮提取量反而下降，因此采用提取時(shí)間2～3小時(shí)為最佳。

4.2.4 料液比對(duì)山楂總黃酮提取的影響

采用乙醇濃度70%，提取溫度80℃，提取時(shí)間2小時(shí)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖11。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，料液比對(duì)山楂總黃酮含量影響因素較小，當(dāng)料液比大于1：20時(shí)，提取率增加緩慢，因此采用料液比為1：20為最佳。

4.2.5 山楂提取物正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

影響山楂提取物總黃酮含量有4個(gè)因素，即溶劑濃度、提取溫度、料液比和提取時(shí)間，分析結(jié)果見(jiàn)表4。

分析結(jié)果表明，影響山楂總黃酮含量因素主次順序?yàn)椋禾崛囟龋救軇舛龋咎崛r(shí)間＞料液比，最佳因素組合為：B3、A3、D3、C3，即采用提取溫度：90℃，乙醇濃度80%，提取時(shí)間3小時(shí)料，料液比1：30?？紤]70%和80%乙醇濃度、各料液比之間的影響因素較小，為了節(jié)省成本，最終選擇料液比為1：10，提取溫度90℃，70%乙醇溶液回流提取2次，每次1.5小時(shí)最佳工藝條件。

5．中藥組合物制劑研究

5.1 中藥組合物制劑制備：分別稱取蜜環(huán)菌提取物1000g、葛根提取物800g、桑葉提取物300g、山楂提取物200g，混合均勻；另取700g麥芽糊精用2000mL冷水?dāng)嚢杈鶆?，加熱制成漿糊作為粘合劑，再用85%～95%食用酒精做濕潤(rùn)劑，用14～16目尼龍篩制成濕顆粒，經(jīng)50℃～60℃干燥至水分≤5.0%（質(zhì)量比），裝袋，每袋3g，制成1000袋。

5.2 中藥組合物制劑功效成分及檢驗(yàn)結(jié)果

5.2.1 粗多糖：按《保健食品功效成分檢測(cè)方法(2002)》保健食品中粗多糖含量測(cè)定的方法檢驗(yàn)，本發(fā)明的制劑每100g含粗多糖：12136mg。

5.2.2 葛根素：按GB/T 22251-2008《保健食品中葛根素的測(cè)定》規(guī)定的方法測(cè)定，本發(fā)明的制劑每100g含葛根素：925.6mg。

本發(fā)明功效成分及技術(shù)要求的研究

1．功效成分的確定

本發(fā)明是以蜜環(huán)菌（榛蘑）、葛根、桑葉、山楂為主要原料制成的功能食品，具有有助于改善眩暈的保健功能。

本發(fā)明根據(jù)組合物中所含有的主要化合物和這些化合物所具有的保健功能，結(jié)合法定的現(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，具有可操作性。

本發(fā)明確定的功效成分為：粗多糖和葛根素。

1.1 功效成分的保健功能

1.1.1 粗多糖

蜜環(huán)菌為最著名的藥食兩用真菌，與所有菌類一樣，蜜環(huán)菌富含多糖。多糖是蜜環(huán)菌具有多種生物活性的主要功效物質(zhì)。蜜環(huán)菌菌索和子實(shí)體胞內(nèi)多糖由葡萄糖和木糖組成，菌索多糖中葡萄糖與木糖的摩爾比為1:14，子實(shí)體多糖為 1:10。

榛蘑水溶性多糖主要由D-葡萄糖組成，含糖類94.8%、糖醛酸2.3%、蛋白質(zhì)0.5%，分子量為4.6×10⁵Da。

張嘉等從蜜環(huán)菌子實(shí)體中分離到3個(gè)新的化合物，其中2個(gè)為甾醇類化合物，一個(gè)為C-18植物鞘氨醇型神經(jīng)酰胺。

此外，還有從蜜環(huán)菌子實(shí)體中分離出水溶性葡聚糖和多肽葡聚糖的報(bào)道。但還沒(méi)有與天麻主要藥理活性成分——天麻素類似物質(zhì)的報(bào)道。

天麻與蜜環(huán)菌的藥理作用相似，具體表現(xiàn)為二者都有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖、抑菌、改善記憶力、抗氧化、極高機(jī)體免疫力、延緩衰老的作用。這些相似的藥理作用都提示與天麻和蜜環(huán)菌中的多糖類成分有關(guān)。

1.1.2 葛根素

葛根主要含有黃酮類及其苷類化合物、三萜類及甾體類化合物、香豆素類及葛酚苷類化合物。葛根中主要有效成分是異黃酮類化合物以及少量的黃酮類物質(zhì)，包括：大豆苷元、大豆苷、葛根素、金雀花異黃素、鷹嘴豆芽素、染料木素苷、芒柄黃花素、芒柄花苷、3′‐羥基葛根素（PG21）、葛根素木糖苷（PG22）、3′2甲氧基葛根素（PG23）、大豆黃素4′,7‐雙葡萄糖甙、葛根素芹菜糖苷、異甘草素等30余種異黃酮。

在葛根的有效成分中，最受關(guān)注的是葛根素、大豆苷元等。葛根素能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管，降低血脂，增強(qiáng)心肌收縮力，降低血壓，防治高血壓頭暈、頭痛、頸項(xiàng)疼痛。大豆素具有抗乙酰膽堿作用，被認(rèn)為是葛根主要功效之一解痙作用的有效成分。

呂通政將68例椎-基底動(dòng)脈缺血性眩暈患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，治療組采用葛根素注射劑治療，對(duì)照組給予復(fù)方丹參注射劑治療。比較兩組臨床療效和椎-基底動(dòng)脈血液平均流速。結(jié)果治療組療效優(yōu)于對(duì)照組，其椎-基底動(dòng)脈血液平均流速提高程度亦優(yōu)于對(duì)照組。結(jié)論：葛根素是治療椎-基底動(dòng)脈缺血性眩暈的一種有效藥物。

2．本發(fā)明的技術(shù)要求研究

本發(fā)明以GB 16740-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 保健食品》和《保健食品產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)范》為依據(jù)，對(duì)產(chǎn)品技術(shù)要求進(jìn)行研究，確定各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)，以作為生產(chǎn)和檢驗(yàn)的依據(jù)。

2.1 配方：蜜環(huán)菌、葛根、桑葉、山楂；輔料為麥芽糊精。

2.2 生產(chǎn)工藝：取蜜環(huán)菌提取物、葛根提取物、桑葉提取物、山楂提取物，以麥芽糊精為輔料，經(jīng)混合后制成顆粒，包裝即得。

注：提取物制備方法見(jiàn)附錄

2.3 原輔料質(zhì)量要求

2.3.1 蜜環(huán)菌應(yīng)符合GB 7096《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食用菌及其制品》或LY/T 2133《森林食品 榛蘑干制品》的規(guī)定。

2.3.2 葛根、桑葉、山楂應(yīng)符合《中國(guó)藥典》2015版一部的規(guī)定。

2.3.3 麥芽糊精應(yīng)符合GB/T 20884《麥芽糊精》的規(guī)定。

2.4 技術(shù)要求

2.4.1 感官要求：感官要求見(jiàn)表5。

2.4.2 理化指標(biāo)：理化指標(biāo)見(jiàn)表6。

2.4.3 微生物限量：微生物限量見(jiàn)表7.

2.4.4功效成分或標(biāo)志性成分：功效成分或標(biāo)志性成分見(jiàn)表8。

2.5 保健功能：有助于改善眩暈。

2.6 適宜人群：各種眩暈人群。

2.7 不適宜人群：兒童

2.8 食用方法及食用量：每天2～3次，每次1袋。

2.9 規(guī)格：3g/袋

2.10 貯藏：常溫，至陰涼干燥處。

2.11 保質(zhì)期：24個(gè)月

附錄：提取物制備方法

1．蜜環(huán)菌提取物制備：取蜜環(huán)菌子實(shí)體，洗凈，干燥，粉碎成粗粉；料液比為1：20，溫度100℃，加水回流提取2次，第一次為3小時(shí)，第二次為2小時(shí)；合并提取液，真空濃縮成相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）的清膏；清膏用3～4倍量95%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）乙醇沉淀24小時(shí)，沉淀物用4～5倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）≥80℃熱水溶解，放冷后沉淀24～48小時(shí)，取上清液，濾去水不溶物，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。

2．葛根提取物制備：取葛根，粉碎成粗粉，用30%乙醇溶液回流提取2次，每次2小時(shí)，第一次加10倍量，第二次加8倍量，合并提取液，回收乙醇，提取液濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，沉淀12小時(shí)～24小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。

3．桑葉提取物制備：取桑葉，粉碎成粗粉，料液比為1：10，溫度80℃～90℃，用70%乙醇溶液回流提取2次，分別為1小時(shí)，合并濾液，回收乙醇，真空濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）；濃縮液加3倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）95%乙醇，沉淀24小時(shí)～48小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。

4．山楂提取物制備：取山楂，粉碎成的粗粉，用70%乙醇溶液，料液比1：10，90℃回流提取2次，每次1.5小時(shí)；合并提取液，回收乙醇，提取液濃縮至相對(duì)密度1.10～1.20（室溫）；濃縮液加3倍量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）95%乙醇，沉淀24小時(shí)～48小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。

本發(fā)明組合物的安全性研究：

本發(fā)明的安全性研究主要以科學(xué)文獻(xiàn)、安全性評(píng)價(jià)文獻(xiàn)檢索和篩選報(bào)告等進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，對(duì)安全性以及適宜人群、不適宜人群、食用方法和食用量、注意事項(xiàng)等進(jìn)行綜合研究。

大量試驗(yàn)都證明，蜜環(huán)菌菌絲和發(fā)酵液都具有鎮(zhèn)靜、抗驚厥、治療心腦血管疾病等功效，并無(wú)毒副作用。另有文獻(xiàn)研究表明，蜜環(huán)菌菌索多糖AMP-1能使正常小鼠的糖耐量增強(qiáng)，AMP-1、AMP-2均能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高，AMP-2能顯著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖，AMP-1、AMP-2（灌胃劑量為10g·kg^-1·d^-1）對(duì)供試小鼠無(wú)毒性作用，內(nèi)臟器官均正常無(wú)損。用蜜環(huán)菌菌索多糖連續(xù)ig小鼠4d后，未發(fā)現(xiàn)小鼠因藥物中毒死亡現(xiàn)象，內(nèi)臟器官均正常無(wú)損，未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。

通過(guò)小鼠急性毒性試驗(yàn)、鼠傷寒沙門氏菌試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）、中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞（CHL）染色體畸變?cè)囼?yàn)和小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，考察桑葉水提液急性毒性和遺傳毒性。結(jié)果桑葉水提液40g/kg小鼠灌胃給藥未出現(xiàn)死亡，體質(zhì)量與正常對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P〉0.05）。經(jīng)Ames試驗(yàn)、CHL細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)、小鼠微核試驗(yàn)，桑葉水提液的結(jié)果均為陰性。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下，桑葉水提液的小鼠灌胃給藥最大給藥劑量為40g/kg，且未表現(xiàn)出遺傳毒性。

葛根總黃酮的急性毒理及長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)證明，腹腔注射LD₅₀為5.97（5.46～6.48）g/kg，經(jīng)口灌胃LD₅₀為10.11（9.41～10.8）g/kg。對(duì)大鼠長(zhǎng)期毒性：給動(dòng)物經(jīng)口灌胃葛根總黃酮?jiǎng)┝繛?.50，1.66及0.83g/kg，1次/d，連用90d；動(dòng)物一般情況良好，除大、中劑量對(duì)雄性動(dòng)物體重及白細(xì)胞總數(shù)稍有影響外，對(duì)血小板、血色素、肝腎功能及各主要臟器病理組織學(xué)均無(wú)明顯影響。長(zhǎng)期應(yīng)用本品可能不產(chǎn)生蓄積性毒性。

研究表明，對(duì)山楂葉水提取物進(jìn)行污染物致突變性檢測(cè)（Ames）試驗(yàn)，小鼠骨髓微核試驗(yàn)和小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)，未見(jiàn)山楂葉水提取物有致突變及胚胎毒性和明顯的致畸潛力。

用大果山楂浸膏對(duì)小鼠灌胃72h，LD₅₀為（44.6±4）g（按生藥計(jì)）。據(jù)資料報(bào)道，藥用山楂對(duì)小鼠口服LD₅₀為18.5g。故大果山楂比藥用山楂毒性要小得多。金雪萍以林檎葉5組不同提取液對(duì)小鼠進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)和最大安全耐受量實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，A，C，E，F(xiàn)組的濃度為 2.6g/ml沒(méi)有發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，其最大安全耐受量倍數(shù)為132，認(rèn)為安全無(wú)毒，而D組的死亡率為80%，經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)測(cè)定其半致死劑量為2.1g/ml，說(shuō)明經(jīng)乙醇提取后，通過(guò)酸水溶解的生物堿具有毒性；潘瑩等以大果山楂總黃酮進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)和最大安全耐受量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明大果山楂總黃酮最大耐受劑量為168g/kg，相當(dāng)于生藥成人口服日用量 （33.3g·kg^-1·d^-1）的678倍（按照生藥的果山楂果實(shí)中大果山楂總黃酮的平均含量計(jì)），認(rèn)為安全無(wú)毒。

本發(fā)明的組合物中單組份一次服用量為蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）9g、葛根3g、桑葉3g、山楂3g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于《中國(guó)藥典》2015版和有關(guān)藥材使用量的相關(guān)規(guī)定。

本發(fā)明的組合物符合中藥相須、相使的配伍原則，也符合中藥配伍禁忌原則。

本發(fā)明的功能學(xué)研究

本發(fā)明以原料保健功能為依據(jù)，結(jié)合保健功能科學(xué)文獻(xiàn)、文獻(xiàn)檢索和篩選報(bào)告等統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)結(jié)果，對(duì)功能聲稱進(jìn)行綜合研究。

1．抗眩暈作用

以蜜環(huán)菌培養(yǎng)液、蔗糖、枸櫞酸、尼泊金甲酯等制成的蜜環(huán)菌糖漿主治眩暈頭痛、神經(jīng)衰弱、失眠、美尼爾氏綜合征。5-HMF為蜜環(huán)菌發(fā)酵液的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗心肌缺血、改善學(xué)習(xí)記憶障礙，并且對(duì)阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）有良好的改善作用。

經(jīng)臨床研究，蜜環(huán)菌多糖對(duì)眩暈癥有良好的藥效。

葛根總黃酮、大豆元和葛根素對(duì)高血壓引起的頭痛、頭暈、項(xiàng)強(qiáng)和耳鳴等 癥狀有明顯的療效，尤以緩解頭痛項(xiàng)強(qiáng)為顯著。應(yīng)用葛根素注射液400mg加入5%葡萄糖注射液500ml中靜滴，1次/日，治療62例椎-基底動(dòng)脈缺血性眩暈患者，與復(fù)方丹參注射液治療的30例作對(duì)照，兩組均治療14d。結(jié)果顯示治療組總有效率為87.1 %，療效優(yōu)于對(duì)照組（P <0.05）。尤其在治療椎-基底動(dòng)脈粥樣硬化合并高血壓患者和頸部肌肉勞損患者，總有效率為95%，療效滿意。另有文獻(xiàn)顯示，用葛根素注射液治療36例椎-基底動(dòng)脈供血不足性眩暈患者，總有效率為88.8%。

2．鎮(zhèn)靜作用

天麻與蜜環(huán)菌的藥理作用相似，具體表現(xiàn)為二者都有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖、抑菌、改善記憶力、抗氧化、極高機(jī)體免疫力、延緩衰老的作用。這些相似的藥理作用都提示與天麻和蜜環(huán)菌中的多糖類成分有關(guān)。

葛根對(duì)小鼠、豚鼠離體腸管具有罌粟堿樣解痙作用。多種異黃酮成分可能是舒張平滑肌的成分，收縮成分可能是膽堿、乙酰膽堿和卡塞因R等物質(zhì)。

3．抗驚厥作用

研究發(fā)現(xiàn)，小鼠ip蜜環(huán)菌制劑可增強(qiáng)戊巴比妥鈉（閾下值催眠劑量）的作用，顯著延長(zhǎng)戊巴比妥鈉或環(huán)己烯巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)間，并且能保護(hù)小鼠戊四唑引起的驚厥。

小鼠尾靜脈注射試驗(yàn)證明，蜜環(huán)菌發(fā)酵液能保護(hù)戊四氮引起的驚厥、能降低尼古丁引起的小鼠死亡數(shù)、能增加狗的腦血流量與冠狀動(dòng)脈血流量；小鼠口服蜜環(huán)菌發(fā)酵液試驗(yàn)證明無(wú)毒害作用。

4．改善睡眠作用

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥理室新藥組1977年報(bào)道，在小鼠腹腔中注射蜜環(huán)菌發(fā)酵液可以延長(zhǎng)小鼠的睡眠時(shí)間，并且與天麻水劑一樣具有與閾下劑量的巴比妥鈉協(xié)同的作用。

5．改善循環(huán)作用

葛根素可降低血液粘度，改善微循環(huán)，并具有興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)，改善腦細(xì)胞代謝，保護(hù)腦細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，提高腦組織耐缺氧能力，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。

葛根素能明顯改善正常金黃地鼠腦微循環(huán)，對(duì)局部滴加去甲腎上腺素引起 的微循環(huán)障礙都有明顯的改善作用。葛根總黃酮對(duì)腦血管擴(kuò)張作用比冠狀血管明顯，能溫和地改善腦循環(huán)和外周循環(huán)，這種改善作用并非單項(xiàng)擴(kuò)張血管增加血流量所致，而是使低幅波升高，高幅波降低，異常波趨向正常。

6．調(diào)節(jié)血脂作用

以100、200和400mg·kg^-1劑量的桑葉提取物連續(xù)給大鼠灌胃30d，大鼠血清的總膽固醇、三酰甘油含量低于模型組，而其高密度脂蛋白膽固醇含量高于模型組，可見(jiàn)桑葉提取物具有調(diào)節(jié)血脂功能。有研究結(jié)果表明，桑葉水提取液的抗凝血活性成分是一種多糖組分。

研究表明，山楂總黃酮3個(gè)劑量（80、40、20g/kg）均有降低急性血瘀模型大鼠全血比黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積的活血化瘀作用。山楂醇提取物對(duì)中、低切全血比黏度有顯著降低作用。山楂總黃酮表現(xiàn)出顯著的調(diào)血脂作用，對(duì)高脂血癥所致大鼠血管功能損傷具有明顯保護(hù)作用，其機(jī)制可能與NO的升高，內(nèi)皮素（ET）合成減少有關(guān)。山楂用于瘀阻腫痛，可入血分，能通行氣血，化瘀散結(jié)而止痛。

7．抗缺氧作用

小鼠sc蜜環(huán)菌水提物，能明顯提高小鼠耐缺氧能力，延長(zhǎng)氰化鉀引起的小鼠死亡時(shí)間，明顯降低東莨菪堿引起的小鼠的高活動(dòng)性，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，減輕遲發(fā)性神經(jīng)元死亡，保護(hù)缺血性腦組織；麻醉犬iv蜜環(huán)菌菌絲體制劑，可增加犬的腦血流量與冠脈血流量。

8．抗衰老作用

浙江醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所科研小組發(fā)現(xiàn)，桑葉通過(guò)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能、內(nèi)分泌系統(tǒng)機(jī)能和免疫系統(tǒng)機(jī)能的調(diào)節(jié)，以及抗自由基、對(duì)微量元素的補(bǔ)充和控制等作用來(lái)實(shí)現(xiàn)其延緩衰老的作用。

研究發(fā)現(xiàn)，蜜環(huán)菌菌索多糖可顯著延長(zhǎng)秀麗隱桿線蟲的壽命，在氧化應(yīng)激 條件下，顯著增強(qiáng)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)HSP-16.2和SOD-3的表達(dá)，提高DAF-16蛋白在細(xì)胞核的分布率，說(shuō)明蜜環(huán)菌菌索多糖具有保護(hù)機(jī)體、延緩衰老的作用。

本發(fā)明的組合物以選用祛風(fēng)中藥為主。蜜環(huán)菌代替天麻息風(fēng)止痙，用于高血壓椎基底動(dòng)脈供血不足、美尼爾氏癥、植物神經(jīng)功能紊亂引起的眩暈、頭痛、肢體麻木；葛根、桑葉發(fā)散風(fēng)熱，用于風(fēng)熱、肺熱引起的眩暈頭痛、目赤腫痛、眼目昏花；山楂行氣散瘀、化濁降脂，用于血淤引起的頭暈?zāi)垦?、站立不穩(wěn)。組合物各組分共同協(xié)作，用以改善眩暈癥狀。

本發(fā)明的穩(wěn)定性研究綜述

本發(fā)明按照《保健食品穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》對(duì)本發(fā)明組合物進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)，考察樣品在不同環(huán)境條件下的感官、化學(xué)、物理及生物學(xué)隨時(shí)間增加其變化程度和規(guī)律，從而判斷樣品包裝、貯存條件和保質(zhì)期內(nèi)的穩(wěn)定性。

1．加速穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.1 試驗(yàn)樣品：本發(fā)明組合物制成的顆粒，批號(hào)：20150801、20150802、20150803

1.2 儀器與設(shè)備見(jiàn)表9

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品：葛根素標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥95%；葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品，分子量MW5×10⁵，純度≥97%。

1.4 試驗(yàn)條件：模擬上市保健食品包裝，采用聚酯、鋁、聚乙烯復(fù)合膜封裝，外加紙盒的包裝形式，置于溫度37±2℃、相對(duì)濕度RH75±5%、避免光線直射的條件下貯存3個(gè)月。重點(diǎn)考察感官、水分、功效成分、微生物等隨儲(chǔ)存條件和貯存時(shí)間容易發(fā)生變化的指標(biāo)。

1.5 試驗(yàn)方法：本發(fā)明組合物按配方和制備方法制成三批樣品，采用聚酯、鋁、聚乙烯復(fù)合膜袋封裝，外加紙盒的包裝，將樣品置于溫度37±2℃、相對(duì)濕度RH75±5%、避免光線直射的條件下放置3個(gè)月，分別于第1個(gè)月、第2個(gè)月、第3個(gè)月末取樣測(cè)定，重點(diǎn)考察感官、水分、功效成分含量、微生物等指標(biāo)，各項(xiàng)指標(biāo)與第0個(gè)月檢測(cè)數(shù)據(jù)比較，考察其穩(wěn)定性。

1.6 檢驗(yàn)方法

1.6.1 感官要求：用正常視力和鼻嗅、口嘗的方法檢驗(yàn)；

1.6.2 水分測(cè)定：執(zhí)行GB 5009.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》。

1.6.3 功效成分：粗多糖含量測(cè)定：執(zhí)行《保健食品功效成分檢測(cè)方法（2002版）》；葛根素含量測(cè)定：執(zhí)行GB/T 22251-2008《保健食品中葛根素的測(cè)定》。

1.6.4 微生物：執(zhí)行GB 4789.2-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》、GB 4789.3-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》和GB 4789.15-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》。

1.7 穩(wěn)定性加速試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表10、表11、表12

1.8 本品貯存條件和保質(zhì)期的確定

根據(jù)《保健食品穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中“采用加速試驗(yàn)考察產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性的樣品，根據(jù)加速試驗(yàn)結(jié)果，保質(zhì)期一般定為2年”的規(guī)定，本品的貯藏方法為：常溫，置于陰涼干燥處保存；保質(zhì)期為24個(gè)月。

實(shí)施例1

蜜環(huán)菌提取物制備：稱取蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）9000g，粉碎成2～3mm的粗粉，料液比為1：20，溫度100℃，分別加水90kg回流提取2次，第一次為3小時(shí)，第二次為2小時(shí)；合并提取液，真空濃縮得清膏3410g；清膏用13000mL 95%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）乙醇沉淀24小時(shí)，得到沉淀物2135g；用10000mL80℃熱水溶解，放冷后沉淀24小時(shí)，取上清液，濾過(guò)，濃縮成稠膏，60℃溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制得干浸膏1052g，干浸膏得率為11.69%，干浸膏粗多糖含量為335.60mg/g，榛蘑（干重）可溶性粗多糖得率為3.9228%。

實(shí)施例2

葛根提取物制備：稱取3000g葛根，粉碎成2mm～5mm的粗粉或顆粒，90℃回流提取2次，每次2小時(shí)，第一次加30%乙醇溶液30kg，第二次30%乙醇溶液24kg，合并提取液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.18（室溫）得到清膏1860g，放冷，加乙醇6000mL，沉淀24小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制得干浸膏956g，干浸膏得率為31.87%，干浸膏葛根素含量為112.04mg/g，葛根（干重）葛根素得率為3.5703%。

實(shí)施例3

桑葉提取物制備：稱取3000g桑葉，粉碎成粗粉，每次用70%乙醇溶液30kg，溫度90℃，回流提取2次，每次1小時(shí)，用合并濾液，回收乙醇，真空濃縮至相對(duì)密度1.18（室溫），得到清膏；濃縮液加95%乙醇，沉淀24小時(shí)～48小時(shí)；取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，制得桑葉干浸膏326g，干浸膏得率為10.87%，干浸膏總黃酮含量為32.52mg/g，桑葉（干重）總黃酮得率為0.3534%。

實(shí)施例4

山楂提取物制備：稱取山楂3000g，粉碎成2～3mm的粗粉，分別用70%乙醇溶液30kg，90℃回流提取2次，每次1.5小時(shí)；合并提取液，回收乙醇，提取液濃縮至相對(duì)密度1.18（室溫），得到清膏396g，清膏加95%乙醇1200g，沉淀24小時(shí)，取上清液，水浴上揮去乙醇，濃縮成稠膏，60℃以下溫度真空干燥，粉碎成細(xì)粉，得山楂干浸膏213g，干浸膏得率為7.10%，干浸膏總黃酮含量為32.46mg/g，山楂（干重）總黃酮得率為0.2305%。

實(shí)施例5

本發(fā)明中藥組合物制備：分別稱取蜜環(huán)菌提取物1000g、葛根提取物800g、桑葉提取物300g、山楂提取物200g，放入混合機(jī)內(nèi)混合均勻；稱取90%乙醇溶液1000mL作為濕潤(rùn)劑，在混合機(jī)運(yùn)行狀態(tài)下，緩慢噴灑在組合物細(xì)粉表面，攪拌均勻；另取700g麥芽糊精加2000mL水?dāng)嚢杈鶆蚝?，加熱制成透明狀的液體，放冷至50℃，緩緩放入上述組合物中攪拌均勻；如濕度不足，可補(bǔ)充90%乙醇溶液，直至達(dá)到要求；再取14目尼龍篩用顆粒機(jī)制成濕顆粒，經(jīng)50℃干燥，裝袋，每袋3g，制成1000袋。

實(shí)施例6

將實(shí)施例5中藥組合物經(jīng)分光光度法和HPLC測(cè)定，其中：

蜜環(huán)菌粗多糖：

（1）樣品處理：

a. 樣品提?。悍Q取樣品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL，于沸水浴上加熱2小時(shí)，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。

b. 沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取（a）項(xiàng)終初濾液5.0mL，置于50mL離心管中，加入無(wú)水乙醇20mL，混勻5min后，以3000r/min離心5min，棄去上清液。殘?jiān)?0%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄上清液，反復(fù)操作3～4次。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?.0mL，混勻后，供沉淀葡聚糖。

c. 沉淀葡聚糖：準(zhǔn)確吸取（b）項(xiàng)終溶液2.0mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min離心5min，棄去上清液。殘?jiān)孟礈煲簲?shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3次，殘?jiān)?0%（體積分?jǐn)?shù)）硫酸溶液2.0mL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液為樣品測(cè)試溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：準(zhǔn)確稱取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相當(dāng)于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分別置于25mL比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡聚糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)定液2.OmL，置于25mL比色管中，加人50g/L苯酚溶液1.OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.OmL于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處，以試劑空白為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量，同時(shí)做樣品空白實(shí)驗(yàn)。

葛根素：

（1）樣品處理：準(zhǔn)確稱取0.50g～1.00g試樣（精確至0.001g），加適量水溶解，并于超聲波清洗器中超聲20min，冷卻至室溫后用水定容至10mL，混勻，4000r/min離心5min。取1mL上清液上大孔吸附樹(shù)脂層析柱，用約40mL水以1mL/min淋洗雜質(zhì)，再用50mL70%甲醇洗脫葛根素，將洗脫液置于沸水浴蒸發(fā)近干，用70%甲醇將其溶解并定容至1mL，過(guò)0.45μm濾膜后待高效液相色譜用。

（2）液相色譜參考條件：色譜柱：ODS C₁₈，250mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：甲醇+36%乙酸+水=25+3+72；流速：0.6mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：247nm；進(jìn)樣體積：10μL。

該中藥組合物有效成分含量：

粗多糖：121.36mg/g

葛根素：9.26mg/g

對(duì)實(shí)施例5所述的改善眩暈功能的中藥組合物進(jìn)行動(dòng)物造模試驗(yàn)，證明本發(fā)明的中藥組合物具有改善眩暈癥的作用。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

昆明種小鼠100只，雄性，體重20～22g；豚鼠50只，雌雄兼用，體重230～260g，均由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物

本發(fā)明組合物（蜜環(huán)菌山楂葛根顆粒）；天麻素膠囊（昆明制藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)）。

1.3 儀器

實(shí)驗(yàn)用三通迷宮（上海豪敦工貿(mào)有限公司）；跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)儀（上海產(chǎn)電刺激器連接跳臺(tái)改裝）；旋轉(zhuǎn)儀（上海南匯電訊器材廠681型磁力加熱攪拌器改裝）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 本發(fā)明組合物對(duì)豚鼠中毒性眩暈反應(yīng)的影響

取豚鼠50只，隨機(jī)分為5組：模型組（生理鹽水），對(duì)照組（天麻素膠囊，1.00g·kg^-1），本發(fā)明組合物（1.0、0.5、0.25g/kg）高、中、低劑量組。每天給藥1次，連續(xù)給藥14天。末次給藥后1h于豚鼠外耳道內(nèi)4～5mm處快速注入三氯甲烷20μL/只，在其后20、40、60min仔細(xì)觀察，以動(dòng)物眼球震顫次數(shù)、頭搖擺次數(shù)為觀察指標(biāo)，每次觀察時(shí)間為1min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表13。

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

表13可知，本發(fā)明組合物3個(gè)劑量組均可以減少豚鼠中毒性眩暈不同時(shí)間頭擺動(dòng)次數(shù)和眼球震顫次數(shù)（P<0.05或P<0.01）。

2.2 本發(fā)明組合物對(duì)小鼠抗眩暈作用

2.2.1 迷宮實(shí)驗(yàn)

取健康小鼠50只，隨機(jī)分成5組：正常對(duì)照組（生理鹽水），陽(yáng)性對(duì)照組（天麻素膠囊，1.0g/kg），本發(fā)明組合物低、中、高組（1.0、0.5、0.25g/kg），灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥3天。實(shí)驗(yàn)小鼠在跳臺(tái)儀中連續(xù)進(jìn)行逃避電擊反射訓(xùn)練，連續(xù)訓(xùn)練3次為1遍，每天上、下午各訓(xùn)練1遍，以鞏固其反射，連續(xù)3d，建立起穩(wěn)定且牢固的逃避電擊反射。3天后在試驗(yàn)前1h給藥，訓(xùn)練1次后，除正常組外，將小鼠在旋轉(zhuǎn)儀上50r/min勻速旋轉(zhuǎn)10min并驟停，立即將小鼠置于跳臺(tái)儀中，打開(kāi)電源，記錄小鼠成功逃避電擊跳上平臺(tái)所用的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

小鼠分組、訓(xùn)練、給藥以及致眩暈方法同迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄小鼠受到電擊后第1次跳上平臺(tái)并且不跌落所需的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表14。

2.2.3 進(jìn)食量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后定量喂食，觀察小鼠的活動(dòng)力并記錄各組小鼠3h內(nèi)的進(jìn)食量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表15。

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01

由表14可知，本發(fā)明組合物各劑量組和陽(yáng)性組均可顯著縮短小鼠在迷宮中的逃避時(shí)間，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；本發(fā)明組合物各劑量組和陽(yáng)性組均可明顯縮短小鼠成功跳上平臺(tái)的時(shí)間，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），本發(fā)明組合物的作用呈現(xiàn)劑量依賴性。由表15可知，本發(fā)明組合物各劑量組和陽(yáng)性組均能增加眩暈小鼠的活動(dòng)能力，可不同程度地增加小鼠進(jìn)食量。

從以上實(shí)驗(yàn)可知，本發(fā)明組合物可以減少豚鼠中毒性眩暈的頭擺動(dòng)次數(shù)和眼球震顫次數(shù)，本發(fā)明組合物可顯著縮短小鼠在迷宮中的逃避時(shí)間，明顯縮短小鼠跳上平臺(tái)的逃避時(shí)間，增強(qiáng)小鼠的活動(dòng)能力，證實(shí)其對(duì)小鼠眩暈?zāi)Ｐ鸵灿锌隙ǖ乃幮ё饔谩？傊?，本發(fā)明組合物能增強(qiáng)眩暈小鼠的活動(dòng)能力，使機(jī)體對(duì)環(huán)境變化的適應(yīng)力提高。

實(shí)施例7

一種改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料制成：蜜環(huán)菌子實(shí)體48.128%、葛根16.043%，桑葉16.043%、山楂16.043%、輔料麥芽糊精3.743%。

實(shí)施例8

一種改善眩暈的中藥組合物，其特征在于由以下重量的原料組成：蜜環(huán)菌子實(shí)體提取物33.33%、葛根提取物26.67%，桑葉提取物10%、山楂提取物6.67%、麥芽糊精23.33%組成。

實(shí)施例9

一種改善眩暈的中藥組合物：分別稱取蜜環(huán)菌提取物1000g、葛根提取物800g、桑葉提取物300g、山楂提取物200g，混合均勻；另取700g麥芽糊精用2000mL冷水?dāng)嚢杈鶆颍訜嶂瞥蓾{糊作為粘合劑，再用85%～95%食用酒精做濕潤(rùn)劑，用14～16目尼龍篩制成濕顆粒，經(jīng)50℃～60℃干燥至水分≤5.0%（質(zhì)量比），裝袋，每袋3g，制成1000袋。

實(shí)施例10

一種改善眩暈的中藥組合物：蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）9000g、葛根3000g，桑葉3000g、山楂3000g、輔料麥芽糊精700g組成。蜜環(huán)菌子實(shí)體、葛根、桑葉、山楂分別經(jīng)水提或乙醇提取、濃縮、精制、干燥，粉碎成細(xì)粉，再與麥芽糊精混合制成顆粒，經(jīng)干燥、包裝，即得。

實(shí)施例11

一種改善眩暈的中藥組合物：蜜環(huán)菌子實(shí)體（榛蘑）提取物1000g、葛根提取物800g，桑葉提取物300g、山楂提取物200g、麥芽糊精700g組成。經(jīng)混合、制粒、干燥、包裝，即得。每袋3g，制成1000袋。