所示，將濾血膜粘入底板過濾區(qū)中，將存儲池內(nèi)置入底板。然后按圖2所示，以單面膠帶和雙面膠帶，將頂板和底板組裝成微流控芯片。裝入鋁箔袋中，密封4°保存。
[0081](三)樣本檢測
[0082]用正常人血楽作稀釋液，將NT-proBNP標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成如下濃度:0pg/ml、5pg/ml、50pg/ml、500pg/ml、5ng/ml、50ng/ml、200ng/ml、1000ng/ml 和 5000ng/ml。
[0083]將50 μ 1樣本滴入加樣口后，蓋上蓋子。將微流控芯片放入配套儀器(磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為2000高斯)中，儀器擠出吖啶酯標(biāo)記單抗，并使樣本和吖啶酯標(biāo)記單抗混合均勻后注入底板過濾區(qū)。樣本過濾后，到達(dá)微通道，并溶解磁顆粒標(biāo)記單抗，磁鐵加速樣本反應(yīng)，形成吖啶酯標(biāo)記抗體-NT-proBNP抗原-磁顆粒標(biāo)記抗體的三明治夾心結(jié)構(gòu)，然后磁鐵收集磁顆粒。清洗液存儲池釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，發(fā)光激發(fā)液釋放，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度。總檢測時(shí)間15min。每個(gè)樣本分別用3個(gè)微流控芯片測定3次，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0084]將50 μ 1全血樣本滴入加樣口，15min內(nèi)儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣本中NT-proBNP濃度。
[0085]檢測原理為:當(dāng)全血加入微流控芯片后，全血先與吖啶酯標(biāo)記抗體混合，然后經(jīng)過濾區(qū)后，混合了吖啶酯標(biāo)記抗體的血漿到達(dá)微通道，血漿溶解磁標(biāo)記抗體。當(dāng)血樣中含有NT-proBNP,則形成吖啶酯標(biāo)記抗體-NT-proBNP-磁顆粒標(biāo)記抗體的三明治結(jié)構(gòu)(雙抗體夾心法)。經(jīng)清洗后，發(fā)光基底液釋放，經(jīng)混合后與吖啶酯作用產(chǎn)生直接化學(xué)發(fā)光，儀器檢測系統(tǒng)測試發(fā)光信號。依據(jù)配套儀器獲取的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而分析血漿中NT-proBNP濃度。血漿中NT-proBNP含量越高，則發(fā)光信號越強(qiáng)。
[0086]結(jié)果表明，其最低檢測限為5.0pg/ml，最低定量限為20pg/ml，定量檢測范圍為5.0?35000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2> 0.99 ;在檢測范圍內(nèi)，未出現(xiàn)Η00Κ效應(yīng)；且批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于10%?？蔀樾墓Ｐ乃ゼ膊≡\斷提供參考。
[0087]實(shí)施例3:磁微粒顆粒尺寸篩選
[0088]其他的實(shí)驗(yàn)條件參見實(shí)施例2，磁顆粒尺寸和磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度按照以下方案進(jìn)行。
[0089]顆粒尺寸為0.1 μ m、0.5 μ m、0.7 μ m、1 μ m、2.4 μ m、3 μ m、10 μ m。磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500尚斯、1000尚斯、4000尚斯、8000尚斯、12000尚斯、30000尚斯。分別以這八種磁鐵分別驅(qū)動(dòng)七種尺寸的磁顆粒。
[0090]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:0.1 μ m磁顆粒和500高斯磁鐵組合使用時(shí)，其最低檢測限為40pg/ml，定量檢測范圍為40?20000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2> 0.90 ;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:化學(xué)發(fā)光信號較弱，靈敏度不高，重復(fù)性較差。
[0091]10 μ m磁顆粒和30000高斯磁鐵組合使用時(shí)，其最低檢測限為50pg/ml，定量檢測范圍為50?15000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.92 ;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:陰性樣本信號較高(清洗不充分)，線性范圍不寬。
[0092]1?3 μ m的磁顆粒為和1000?8000高斯的磁鐵組合使用時(shí)，其最低檢測限均小于30pg/ml，定量檢測范圍可達(dá)到30?30000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2> 0.95 ;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于12%。滿足為臨床心梗心衰疾病診斷提供參考的需要。
[0093]根據(jù)以上結(jié)果，磁顆粒尺寸優(yōu)選1?3 μ m，磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度優(yōu)選1000?8000高斯?？筛鶕?jù)磁顆粒所用尺寸，進(jìn)一步確定磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度。
[0094]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種檢測全血中氮末端腦鈉肽的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括頂板(I)結(jié)構(gòu)和底板(2)結(jié)構(gòu)，其中頂板(I)上的氣栗(3)、加樣口(4)、樣本填充區(qū)(12)、標(biāo)記抗體存儲池(5)和樣本混合區(qū)(13)依次相連；底板⑵上的過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)⑶依次連接，底板(2)上檢測區(qū)⑶通過液體釋放通道(16)與清洗液存儲池(9)和發(fā)光基底液存儲池(10)連接；所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)和磁顆粒包被區(qū)(7)中存儲預(yù)封裝試劑；所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)為液體密封池，可通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；所述標(biāo)記抗體存儲池(5)中存儲酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體溶液；所述磁顆粒包被區(qū)(7)包被磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體；所述微流控芯片測試流程中，用磁鐵操控磁顆粒移動(dòng)或聚集。2.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片的測試流程包括: 步驟I)將全血樣本滴入加樣口(4)后，微流控芯片放入配套儀器中，從標(biāo)記配體存儲池(5)釋放酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，擠壓氣栗(3)使樣本經(jīng)樣本填充區(qū)(12)和酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體在樣本混合區(qū)(13)混合均勻，然后注入底板過濾區(qū)(6)； 步驟2)樣本經(jīng)過濾區(qū)后，溶解磁顆粒包被區(qū)(7)包被的磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，充分反應(yīng)后磁鐵收集磁顆粒，清洗液存儲池(9)釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，移至檢測區(qū)，發(fā)光基底液存儲池(10)釋放發(fā)光基底液，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)NT-proBNP的定量檢測。3.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述酶標(biāo)記抗NT-proBNP抗體使用的酶包含過氧化氫酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)。4.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體使用的發(fā)光劑包含吖啶酯和吖啶磺酰胺。5.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體使用的磁顆粒為超順磁性顆粒，包含三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物，顆粒尺寸為0.1?10 μ m，磁感應(yīng)強(qiáng)度為500?30000高斯。6.如權(quán)利要求5所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁顆粒為超順磁性顆粒，包含三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物，顆粒尺寸為I?3 μ m，磁感應(yīng)強(qiáng)度為1000?8000高斯。7.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗體溶液包含牛血清白蛋白、吐溫-20和Proclin300的pH7.4Tris_HCl緩沖液；所述磁顆粒標(biāo)記抗體溶液包含牛血清白蛋白、葡萄糖、吐溫-20和Proclin300的pH7.4Tris_HCl緩沖液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測全血中氮末端腦鈉肽的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，所述微流控芯片包括頂板(1)結(jié)構(gòu)和底板(2)結(jié)構(gòu)，其中頂板(1)上的氣泵(3)、加樣口(4)、樣本填充區(qū)(12)、標(biāo)記抗體存儲池(5)和樣本混合區(qū)(13)依次相連；底板(2)上的過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)(8)依次連接，底板(2)上檢測區(qū)(8)通過液體釋放通道(16)與清洗液存儲池(9)和發(fā)光基底液存儲池(10)連接。
【IPC分類】G01N33/68, G01N21/76
【公開號】CN105241870
【申請?zhí)枴緾N201510696684
【發(fā)明人】王東, 李泉
【申請人】深圳華邁興微醫(yī)療科技有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年10月26日