本發(fā)明涉及抗氧化劑、抗氧化化妝品或者防uv化妝品。

另外，本發(fā)明涉及活性氧抑制劑、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)劑、消化道炎癥的預(yù)防或治療劑。

本發(fā)明還涉及抗氧化飲食品和用于提高生物體內(nèi)的抗氧化作用的使用。

背景技術(shù)：

為了提高生物體的抗氧化能力，一般的方法是攝取維生素類或多酚類、類胡蘿卜素類等抗氧化作用高的成分。近年來，開發(fā)出了通過提高生物體內(nèi)產(chǎn)生的抗氧化酶的產(chǎn)生量來提高生物體的抗氧化能力的技術(shù)。作為該方法，提出了：將來自西洋蒲公英的多糖類(非專利文獻(xiàn)1)來自地耳的偽枝藻素(非專利文獻(xiàn)2)處理為免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的方法、和食用異葎草酮類或異構(gòu)化蛇麻草提取物的方法(專利文獻(xiàn)1)等。天然物存在非常昂貴和因生產(chǎn)批次而導(dǎo)致效果參差不齊的問題(專利文獻(xiàn)2～5)。另外，通常情況下這些天然物對光或熱不穩(wěn)定，在配合于飲食物中使用時(shí)在穩(wěn)定性方面存在問題。并且，還存在水溶性低、難以在飲料等中使用的問題(專利文獻(xiàn)6～8)。另外，為天然物的提取物時(shí)，有時(shí)多種化合物混合存在，活性主體不明確(專利文獻(xiàn)1)。

糖原作為動(dòng)物的儲藏多糖為公眾所知，是多個(gè)葡萄糖通過α-1,4糖苷鍵聚合的、分支多的高分子。糖原主要在肝臟和骨骼肌合成，發(fā)揮著將剩余的葡萄糖暫時(shí)儲藏起來的作用。

專利文獻(xiàn)9中記載了酶促合成糖原能夠全面地改善血糖值、內(nèi)臟脂肪、血中膽固醇、中性脂肪等。

另外，專利文獻(xiàn)10中公開了酶促合成糖原的制造方法。

另外，專利文獻(xiàn)11中公開了配合有酶促合成糖原的皮膚外用劑，但是并沒有關(guān)于酶促合成糖原的抗氧化作用的公開。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：wo2006/043671

專利文獻(xiàn)2：日本特開平9-23848

專利文獻(xiàn)3：日本特開2002-3709798

專利文獻(xiàn)4：日本特開平8-73350

專利文獻(xiàn)5：日本特開平1-279827

專利文獻(xiàn)6：日本特開2007-126455

專利文獻(xiàn)7：日本特開2007-126455

專利文獻(xiàn)8：日本特表2013-510076

專利文獻(xiàn)9：日本特開2013-75917

專利文獻(xiàn)10：wo2006/035848

專利文獻(xiàn)11：日本特開2009-227632

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：foodchemtoxicolvol.66page.56-64(2014)

非專利文獻(xiàn)2：foodchemtoxicol、vol.69page.330-338(2014)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的課題

本發(fā)明的目的在于提供一種低價(jià)、且安全性、穩(wěn)定性優(yōu)異、活性主體明確的抗氧化劑和化妝品。

另外，本發(fā)明的目的在于提供一種活性氧抑制劑、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)劑、消化道炎癥的預(yù)防或治療劑。

另外，本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗氧化作用的飲食品、用于提高哺乳類等生物的體內(nèi)的抗氧化作用的使用的發(fā)明。

用于解決課題的方法

本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，酶促合成糖原(enzymaticallysynthesizedglycogen，esg)或其α淀粉酶消化物(rg)具有抗氧化作用，具有腸中的炎癥的預(yù)防或治療作用，作為減輕肌膚因氧化應(yīng)激和uv(uv-a、uv-b)照射引起的障礙的抗氧化/防uv化妝品的成分、抗氧化飲食品的成分也是有用的。

本發(fā)明涉及以下的抗氧化劑、活性氧抑制劑、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)劑、抗氧化/防uv化妝品、消化道炎癥的預(yù)防或治療劑、抗氧化飲食品、以及用于提高生物體內(nèi)的抗氧化作用的使用。

項(xiàng)1.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的抗氧化劑。

項(xiàng)2.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的活性氧抑制劑。

項(xiàng)3.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)劑。

項(xiàng)4.如項(xiàng)3所述的產(chǎn)生促進(jìn)劑，其中，抗氧化酶為ho-1。

項(xiàng)5.如項(xiàng)3所述的產(chǎn)生促進(jìn)劑，其中，抗氧化酶為nqo-1。

項(xiàng)6.如項(xiàng)3～5中任一項(xiàng)所述的產(chǎn)生促進(jìn)劑，其中，通過使nrf-2的表達(dá)增加來促進(jìn)抗氧化酶的產(chǎn)生。

項(xiàng)7.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的抗氧化化妝品。

項(xiàng)8.如項(xiàng)7所述的抗氧化化妝品，其中，通過抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)來表現(xiàn)抗氧化作用。

項(xiàng)9.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的防uv化妝品。

項(xiàng)10.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的消化道炎癥的預(yù)防或治療劑。

項(xiàng)11.一種含有酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)的抗氧化飲食品。

項(xiàng)12.一種酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)用于提高生物體內(nèi)的抗氧化作用的使用。

發(fā)明的效果

根據(jù)本發(fā)明，通過提高生物體的抗氧化能力，能夠減輕腸的炎癥、和肌膚由于紫外線或活性氧引起的氧化應(yīng)激。利用esg、rg等獲得的抗氧化作用、防uv作用等可以認(rèn)為是基于抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)誘導(dǎo)而實(shí)現(xiàn)的，這些作用在細(xì)胞或生物體內(nèi)有效地發(fā)揮功能。

本發(fā)明能夠通過低價(jià)、且安全性、穩(wěn)定性優(yōu)異、活性主體明確的酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)提高生物體內(nèi)或肌膚中的抗氧化能力，能夠預(yù)防或治療氧化應(yīng)激所參與的肌膚的問題、小腸、大腸中的炎癥。

本發(fā)明作為具有抗氧化作用、活性氧抑制作用、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)作用、消化道炎癥的預(yù)防作用的、醫(yī)藥組合物、飲食品、制劑等是有用的。

附圖說明

圖1表示esg對因葡聚糖硫酸鈉(dss)引發(fā)的大腸的萎縮帶來的影響(小鼠)(a)體重。(b)大腸的長度(照片)。(c)大腸的長度(圖表)。

圖2表示esg對大腸組織中的氧化應(yīng)激的蓄積帶來的影響(小鼠)。

圖3表示esg對大腸組織中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果(小鼠)。

圖4表示esg和rg對巨噬細(xì)胞(raw264.7)中的活性氧類(ros)的蓄積帶來的影響。

圖5表示esg和rg對巨噬細(xì)胞(raw264.7)中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果。

圖6表示esg和rg對巨噬細(xì)胞(raw264.7)中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果。(a)表示rg(enz)、rg和esg的關(guān)系的示意圖。(b)用蛋白質(zhì)印跡法對與氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行解析的結(jié)果。(c)dcf/dapi的比。圖表以將veh(vehicle：溶劑)作為基準(zhǔn)的相對值表示。

圖7表示來自天然物的糖原對抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量和ros的蓄積帶來的影響(raw264.7)。(a)用蛋白質(zhì)印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行解析的結(jié)果。(b)以dcf/dapi的比算出的結(jié)果。圖表以將veh(溶劑)作為基準(zhǔn)的相對值表示。

圖8表示esg和rg對表皮細(xì)胞(nhek)中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的影響。

圖9表示esg和rg對nhek中的uvb照射誘導(dǎo)ros蓄積帶來的影響。

圖10表示esg對ho-1和nqo-1敲減nhek中的ros的蓄積帶來的影響。

圖11表示esg和rg對nhek中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果。(a)表示esg(enz)、rg(enz)、rg、esg的關(guān)系的示意圖。(b)使用esg(enz)、rg(enz)進(jìn)行與esg、rg的比較研究的結(jié)果。(c)以dcf/dapi的比算出的結(jié)果。圖表以將uvb(+)作為基準(zhǔn)的相對值表示。

圖12表示esg和rg對uvb照射誘導(dǎo)caspase-3、-9活性帶來的影響(nhek)。

具體實(shí)施方式

作為本發(fā)明中使用的酶促合成糖原(esg)，可以列舉按照專利文獻(xiàn)10(wo2006/035848)所記載的方法得到的酶促合成糖原。即，通過使具有合成糖原的能力的分支酶在溶液中與基質(zhì)發(fā)生作用從而產(chǎn)生糖原的工序制造。基質(zhì)是主要以α-1,4-糖苷鍵連結(jié)的聚合度4以上的α-葡聚糖，能夠優(yōu)選使用淀粉脫支物、糊精脫支物或者酶促合成直鏈淀粉作為該基質(zhì)。優(yōu)選的酶促合成糖原(esg)的重均分子量為100萬da以上，在通過malls法對使50u/g基質(zhì)的普魯蘭酶以60℃與esg作用30分鐘時(shí)得到的生成物進(jìn)行分析的情況下，重均分子量為50萬da以上；并且在通過malls法對使300u/g基質(zhì)的α-淀粉酶以37℃與esg作用30分鐘時(shí)得到的生成物進(jìn)行分析的情況下，重均分子量為50萬da以上。

用α淀粉酶消化酶促合成糖原(esg)而得到的消化物(rg)是模擬在攝取了esg的哺乳動(dòng)物(例如人類)的消化道中產(chǎn)生的消化物，在實(shí)施例中，使用用400u/gesg的α-淀粉酶消化esg24小時(shí)后回收未消化的高分子成分而制成的rg。esg和rg示意地在圖6(a)中表示。

天然的糖原沒有確認(rèn)到抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)誘導(dǎo)作用、抗氧化作用、防uv作用等，因此，這些作用是esg或rg所特有的作用。作為抗氧化酶，可以列舉血紅素加氧酶1(ho-1)、nad(p)h醌氧化還原酶1(nqo1)。酶促合成糖原(esg)或其α淀粉酶消化物(rg)誘導(dǎo)ho-1、nqo-1的表達(dá)，并且誘導(dǎo)參與ho-1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子nrf2。esg或rg表現(xiàn)出抗氧化作用的機(jī)制之一是經(jīng)由nrf2的ho-1和nqo-1的表達(dá)誘導(dǎo)。

抗氧化作用的機(jī)制之二是活性氧類(ros)的抑制。通過ros的抑制來抑制脂質(zhì)的氧化、炎癥等，抑制由ros引起的細(xì)胞損傷。

本發(fā)明的抗氧化劑、活性氧抑制劑、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)劑、消化道炎癥的預(yù)防或治療劑可以通過口服攝取在生物體內(nèi)表現(xiàn)抗氧化等的作用，也可以以化妝品的形態(tài)用于肌膚，在肌膚中表現(xiàn)這些作用。

在本說明書中，作為“化妝品”，可以列舉化妝水、乳液、霜、面膜等的臉部化妝品、或者粉底、口紅、眼影等的彩妝化妝品等?；瘖y品的優(yōu)選用途為抗氧化和防uv。

本發(fā)明還涉及含有esg和/或rg的飲食品。

在本發(fā)明中，作為含有esg或rg的飲食品，可以列舉乳飲料、發(fā)酵乳飲料、碳酸飲料、果汁飲料、清涼飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充飲料、糖、糖果、口香糖、巧克力、糖粒、零食、餅干、果凍、果醬、奶油、烘烤點(diǎn)心、冰淇淋、酸奶、黃油、奶粉、面包類、營養(yǎng)增補(bǔ)劑、營養(yǎng)食品、流動(dòng)食品等。這些飲食品優(yōu)選具有抗氧化作用、活性氧抑制作用、抗氧化酶的產(chǎn)生促進(jìn)作用、消化道炎癥的預(yù)防作用等。

esg和/或rg在動(dòng)物、特別是哺乳類的生物體內(nèi)具有抗氧化作用。作為哺乳類，可以列舉人類、猴、牛、馬、豬、羊、兔、大鼠、小鼠、倉鼠、狗、貓等，特別優(yōu)選人類。在本發(fā)明的抗氧化化妝品和防uv化妝品中，能夠與酶促合成糖原一起配合選自保濕成分、美白成分、紫外線吸收劑/散射劑、抗炎癥劑、細(xì)胞活化劑、表面活性劑、抗氧化劑和其它成分中的至少一種。

作為保濕成分，可以列舉抗壞血酸及其衍生物、抗壞血酸以外的維生素類、吡哆素的衍生物、α－生育酚的衍生物、泛酸衍生物、葡萄糖、木糖醇、糊精等的糖類和糖衍生物、d-泛酰醇及其衍生物、氨基酸類及其衍生物、多元醇、酚及其衍生物、膠原類、透明質(zhì)酸等的粘多糖類、天然保濕因子、高級醇類、低級醇類、醇、礦物油、植物性油脂、動(dòng)物性油脂、羥基羧酸及其鹽、羥基水楊酸糖苷、羥基水楊酸脂肪族酯的糖苷、羥基肉桂酸及其衍生物、咖啡酸及其衍生物、由植物提取的提取物類、中草藥提取物類、天然提取物類、胎盤提取物、油溶性甘草提取物、海藻提取物、神經(jīng)酰胺類、神經(jīng)酰胺類似結(jié)構(gòu)物、粗糖提取物、粗糖提取物、糖蜜提取物、菌絲體培養(yǎng)物及其提取物、植物發(fā)酵提取物類、酵母提取物類、各種菌的發(fā)酵提取物類、尿素、檜木醇、硫、壬二酸及其衍生物、維生素e－煙酸酯與二氯乙酸二異丙胺、深層水、堿性單純溫泉水、磷酸化糖及其礦物鹽等，能夠配合這些保濕成分的1種或2種以上。

作為美白成分，可以列舉酪氨酸酶抑制劑、內(nèi)皮素拮抗劑、α-msh抑制劑、α-熊果苷、熊果苷及其鹽以及其衍生物、抗壞血酸及其衍生物、鞣花酸系化合物及其堿金屬鹽、曲酸及其衍生物、間苯二酚衍生物、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、替普瑞酮、尿囊素、氨基乙基化合物、亞烷基二胺羧酸衍生物、甜菜堿衍生物、酰甲基牛磺酸、常春藤苷、匙羹藤總皂苷、甜菜皂苷γ－吡嚨糖苷(γ-pyrroneglycoside)、聯(lián)苯化合物、亞硫酸氫鈉、纖粘蛋白、植物提取液類等，能夠配合這些美白成分的1種或2種以上。

作為紫外線吸收劑/散射劑，可以列舉苯甲酸系紫外線吸收劑對氨基苯甲酸(以下簡記作paba)、paba單甘油酯、n,n－二丙氧基paba乙酯、n,n－二乙氧基paba乙酯、n,n－二甲基paba乙酯、n,n－二甲基paba丁酯、n,n－二甲基paba戊酯、n,n－二甲基paba辛酯、鄰氨基苯甲酸系紫外線吸收劑高薄荷基－n－乙酰鄰氨基苯甲酸酯、水楊酸系紫外線吸收劑水楊酸戊酯、水楊酸薄荷酯、水楊酸高薄荷酯、水楊酸辛酯、水楊酸苯酯、水楊酸芐酯、對異丙醇苯基水楊酸酯、肉桂酸系紫外線吸收劑肉桂酸辛酯、肉桂酸乙基－4－異丙酯、肉桂酸甲基－2,5－異丙酯、肉桂酸乙基－2,4－二異丙酯、肉桂酸甲基－2,4－二異丙酯、對甲氧基肉桂酸丙酯、對甲氧基肉桂酸異丙酯、對甲氧基肉桂酸異戊酯、對甲氧基肉桂酸異丙酯、對甲氧基肉桂酸異戊酯、對甲氧基肉桂酸辛酯(對甲氧基肉桂酸－2－乙基己酯)、對甲氧基肉桂酸－2－乙氧基乙酯、對甲氧基肉桂酸環(huán)己酯、α－氰基－β－苯基肉桂酸乙酯、α－氰基－β－苯基肉桂酸－2－乙基己酯、單－2－乙基己酰基－二對甲氧基肉桂酸甘油酯、二苯甲酮系紫外線吸收劑2,4－二羥基二苯甲酮、2,2′－二羥基－4－甲氧基二苯甲酮、2,2′－二羥基－4,4′－二甲氧基二苯甲酮、2,2′,4,4′－四羥基二苯甲酮、2－羥基－4－甲氧基二苯甲酮、2－羥基－4－甲氧基－4′－甲基二苯甲酮、2－羥基－4－甲氧基二苯甲酮－5－磺酸鹽、4－苯基二苯甲酮、2－乙基己基－4′－苯基－二苯甲酮－2－羧酸酯、2－羥基－4－正辛氧基二苯甲酮、4－羥基－3－羧基二苯甲酮、其它的紫外線吸收劑3－(4′－甲基亞芐基)－d,l－樟腦、3－亞芐基－d,l－樟腦、咪唑丙烯酸、咪唑丙烯酸乙酯、2－苯基－5－甲基苯并噁唑、2,2′－羥基－5－甲基苯基苯并三唑、2－(2′－羥基－5′－叔辛基苯基)苯并三唑、2－(2′－羥基－5′－甲基苯基)苯并三唑、二亞芐基吖嗪(dibenzalazine)、二甲氧苯甲?；淄椤?－甲氧基－4′－叔丁基二苯甲?；淄椤?－(3,3－二甲基－2－亞降冰片烯基)－3－戊烷－2－酮(5-(3,3-dimethyl-2-norbornylidene)-3-pentan-2-one))、氧化鈦、氧化鋅等，能夠配合這些紫外線吸收劑/散射劑的1種或2種以上。

作為細(xì)胞活化劑，可以列舉coq10、脫氧核糖核酸及其鹽、三磷酸腺苷、一磷酸腺苷等的腺苷酸衍生物以及它們的鹽、核糖核酸及其鹽、環(huán)amp、環(huán)gmp、黃素腺嘌呤核苷酸、鳥嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、黃嘌呤以及它們的衍生物、咖啡因、茶堿及其鹽、視黃醇和視黃醇棕櫚酸酯、視黃醇乙酸酯等的視黃醇衍生物、視黃醛和脫氫視黃醛等的視黃醛衍生物、胡蘿卜素等的類胡蘿卜素和維生素a類、白藜蘆醇、白藜蘆醇糖苷、硫胺和硫胺鹽酸鹽、硫胺硫酸鹽等的硫胺鹽類、核黃素和乙酸核黃素等的核黃素鹽類、吡哆素和鹽酸吡哆素、吡哆素二辛酸酯等的吡哆素鹽類、黃素腺嘌呤核苷酸、氰鈷胺、葉酸類、煙酸和煙酸酰胺、煙酸芐酯等的煙酸衍生物、膽堿類等的維生素b類、γ－亞麻酸及其衍生物、二十碳五烯酸及其衍生物、雌二醇及其衍生物以及它們的鹽、乙醇酸、琥珀酸、乳酸、水楊酸等有機(jī)酸和它們的衍生物以及它們的鹽、植物提取的提取物類、海藻提取的提取物類等，能夠配合這些細(xì)胞活化劑的1種或2種以上。

作為抗氧化劑，可以列舉視黃醇、脫氫視黃醇、視黃醇乙酸酯、視黃醇棕櫚酸酯、視黃醛、視黃酸、維生素a油等的維生素a類和它們的衍生物以及它們的鹽、α－胡蘿卜素、β－胡蘿卜素、γ－胡蘿卜素、隱黃素、蝦青素、巖藻黃質(zhì)等的類胡蘿卜素類及其衍生物、吡哆素、吡哆醛、吡哆醛－5－磷酸酯、吡哆胺等的維生素b類、它們的衍生物及它們的鹽、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、硬脂酸抗壞血酸酯、棕櫚酸抗壞血酸酯、二棕櫚酸抗壞血酸酯、抗壞血酸磷酸鎂等的維生素c類、它們的衍生物及它們的鹽、鈣化醇、膽鈣化醇、1,2,5－二羥基－膽鈣化醇等的維生素d類、它們的衍生物及它們的鹽、α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－生育酚、α－生育三烯酚、β－生育三烯酚、γ－生育三烯酚、δ－生育三烯酚、生育酚乙酸酯、生育酚煙酸酯等的維生素e類、它們的衍生物及它們的鹽、水溶性維生素e(trolox)、其衍生物及它們的鹽、二羥基甲苯、丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、二丁基羥基甲苯、α－硫辛酸、脫氫硫辛酸、谷胱甘肽、其衍生物及它們的鹽、尿酸、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉等的異抗壞血酸、其衍生物及它們的鹽、沒食子酸、沒食子酸丙酯等的沒食子酸、其衍生物及它們的鹽、蘆丁、α－糖基－蘆丁等的蘆丁、其衍生物及它們的鹽、色氨酸、其衍生物及它們的鹽、組氨酸、其衍生物及它們的鹽、n－乙酰半胱氨酸、n－乙酰高半胱氨酸、n－辛酰半胱氨酸、n－乙酰半胱氨酸甲酯等的半胱氨酸衍生物及它們的鹽、n,n′－二乙酰胱氨酸二甲酯、n,n′－二辛酰胱氨酸二甲酯、n,n′－二辛酰高胱氨酸二甲酯等的胱氨酸衍生物及它們的鹽、肌肽及其衍生物以及它們的鹽、高肌肽及其衍生物以及它們的鹽、鵝肌肽及其衍生物以及它們的鹽、丙氨酰基組胺(carcinin)及其衍生物以及它們的鹽、含有組氨酸和/或色氨酸和/或組胺的二肽或三肽衍生物以及它們的鹽、黃烷酮、黃酮、花青素、花色素、黃酮醇、槲皮素、槲皮苷、楊梅素、漆黃素、金縷梅單寧、兒茶素、表兒茶素、棓兒茶素、表?xiàng)攦翰杷?、棓酸表兒茶素酯、棓酸表?xiàng)攦翰杷仵サ鹊念慄S酮類、單寧酸、咖啡酸、阿魏酸、原兒茶酸、查爾酮、谷維醇、鼠尾草酚、芝麻酚、芝麻素、芝麻林素、姜酮、姜黃素、四氫姜黃素、clovamide、deoxy-clovamide、姜烯酚、辣椒素、香莢蘭胺、鞣花酸、溴苯酚、flavoglassine、蛋白黑素(melanoidin)、核黃素、核黃素丁酸酯、黃素單核苷酸、黃素腺嘌呤核苷酸、泛醌、泛醇、甘露醇、膽紅素、膽固醇、依布硒、硒代蛋氨酸、銅藍(lán)蛋白、運(yùn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、白蛋白、膽紅素、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化酶、金屬硫蛋白、o－膦基－吡哆醛羅丹明、和美國專利第5594012號記載的n－(2－羥基芐基)氨基酸、其衍生物以及它們的鹽、n－(4－吡哆基亞甲基)氨基酸、及其衍生物以及它們的鹽、植物提取的提取物類、海藻提取的提取物類等，能夠配合這些抗氧化劑的1種或2種以上。

作為表面活性劑，可以列舉脂肪酸鈉、單烷基硫酸鹽、烷基聚氧乙烯硫酸鹽、烷基苯磺酸鹽、單烷基磷酸鹽等的陰離子系表面活性劑、烷基三甲基銨鹽、二烷基二甲基銨鹽、烷基芐基二甲基銨鹽等的陽離子系表面活性劑、烷基二甲基氧化胺、烷基羧基甜菜堿等的兩親性表面活性劑、聚氧乙烯烷基醚、脂肪酸脫水山梨糖醇酯、烷基多糖苷、脂肪酸二乙醇酰胺、烷基單縮水甘油醚等的非離子表面活性劑、卵磷脂等的天然表面活性劑等，能夠配合這些表面活性劑的1種或2種以上。

作為抗炎癥劑，可以列舉氧化鋅、硫及其衍生物、甘草酸、甘草酸二鉀、甘草酸單銨等的甘草酸及其衍生物以及它們的鹽、β－甘草次酸、甘草次酸硬脂酯、3－琥珀酰氧基甘草次酸二鈉等的甘草次酸及其衍生物以及它們的鹽、氨甲環(huán)酸、硫酸軟骨素、甲滅酸、保泰松、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、尿囊素、愈創(chuàng)藍(lán)油烴及它們的衍生物以及它們的鹽、各種微生物和動(dòng)植物的提取物等，能夠配合這些抗炎癥劑的1種或2種以上。

作為其它成分，可以列舉精油等香料類或顏料、合成色素等色素類、血行促進(jìn)劑等，能夠配合這些的1種或2種以上。

在本說明書中，作為“消化道炎癥”，可以列舉活性氧或者氧化應(yīng)激參與的在消化道中產(chǎn)生炎癥或者表現(xiàn)出由炎癥引起的癥狀的消化道的疾患，具體而言，可以列舉胃炎、大腸炎、出血性大腸炎、潰瘍性大腸炎、過敏性腸道綜合癥等。利用本發(fā)明的預(yù)防或治療藥，消化道炎癥被治愈或者癥狀得到減輕。

作為本發(fā)明的化妝品中的esg或rg的配合量，只要表現(xiàn)抗氧化作用或者防uv作用即可，沒有特別限定，例如為0.01～10質(zhì)量％左右、優(yōu)選為0.05～5質(zhì)量％左右。

作為本發(fā)明的飲食品中的esg或rg的配合量，只要表現(xiàn)抗氧化作用即可，沒有特別限定，例如為0.01～50質(zhì)量％左右、優(yōu)選為0.05～20質(zhì)量％左右。

在本發(fā)明的用于提高生物體內(nèi)的抗氧化作用的使用的發(fā)明中，esg或rg的成人每1天的攝取量為0.1～20g左右、優(yōu)選為1～10g左右。通過在肌膚上應(yīng)用本發(fā)明的抗氧化或者防uv化妝品，能夠緩解、減輕由氧化應(yīng)激或紫外線引起的障害。

本發(fā)明的消化道炎癥的預(yù)防或治療劑的成人每1天的給藥量為0.1～20g左右、優(yōu)選為1～10g左右，能夠在1天中1次給藥或分成2～4次給藥。

本發(fā)明的消化道炎癥的預(yù)防劑通過制成含有營養(yǎng)增補(bǔ)劑的飲食品等日常攝取，能夠預(yù)防或者減輕消化道的炎癥。

實(shí)施例

以下，使用實(shí)施例，更詳細(xì)地說明本發(fā)明。

實(shí)施例中使用的esg、rg如下所述制備/獲得。另外，哺乳動(dòng)物口服攝取的esg的約20質(zhì)量％轉(zhuǎn)化為rg(t.furuyashikietal.foodfunct.,2011,2,183-189)，因此，rg以對應(yīng)于esg的20質(zhì)量％的量給予。

esg根據(jù)專利文獻(xiàn)10(wo2006/035848)所記載的方法制備。rg通過以esg為基質(zhì)、以400u/g基質(zhì)的量用α-淀粉酶以37℃處理24小時(shí)之后，對未消化的高分子成分進(jìn)行精制來制備。

關(guān)于esg(enz)，通過以esg為基質(zhì)，用充分量的α-淀粉酶和異淀粉酶以37℃處理2小時(shí)之后，用充分量的葡糖淀粉酶以37℃處理24小時(shí)，直至完全分解為葡萄糖，由此來制備。酶處理后，通過將葡萄糖量定量，確認(rèn)完全分解。

關(guān)于rg(enz)，通過以rg為基質(zhì)，進(jìn)行與esg(enz)同樣的處理，直至完全分解為葡萄糖，由此來制備。酶處理后，通過將葡萄糖量定量，確認(rèn)完全分解。

實(shí)施例1：對由dss引發(fā)的大腸的萎縮帶來的影響(圖1)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從日本slc購入c57bl/6小鼠(6周齡、雌性)，預(yù)備飼養(yǎng)1周之后，分為4組(a、b、c、d)，分別進(jìn)行以下的操作。

a)在2周內(nèi)口服給藥溶解在水中的esg(100mg)。(esg組)

b)在2周內(nèi)口服給藥溶解在水中的esg(100mg)。從給藥開始1周后，將飲用水更換為含有2％的葡聚糖硫酸鈉(dss)(分子量36,000-50,000)的藥物，持續(xù)直至飼養(yǎng)結(jié)束。(esg/dss組)

c)在2周內(nèi)口服給予不含esg的水。(cont組)

d)在2周內(nèi)口服給予不含esg的水。從給予開始1周后，將飲用水更換為含有2％的dss的藥物，持續(xù)直至飼養(yǎng)結(jié)束。(dss組)

飼養(yǎng)遵守《神戸大學(xué)六甲臺地區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)委員會(huì)規(guī)則》(授權(quán)編號：26-05-12)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)委員會(huì)的授權(quán)下，按照計(jì)劃實(shí)施。在調(diào)節(jié)為室溫25±2℃、環(huán)境濕度的房間中，在照明時(shí)間/天(9:00～21:00)的條件下進(jìn)行飼養(yǎng)。體重每天測量(圖1(a))。在飼養(yǎng)結(jié)束時(shí)，在給予了麻醉藥的情況下進(jìn)行心臟采血之后，摘出大腸，測定大腸的長度(圖1(b))。在圖1(a)、(c)中，顯示在不同的字母(a、b)間具有顯著差異(p＜0.05)。由圖1所示的結(jié)果可知，esg能夠預(yù)防或治療大腸的炎癥。

實(shí)施例2：對大腸組織中的氧化應(yīng)激的蓄積帶來的影響(圖2)

作為大腸內(nèi)的氧化應(yīng)激的指標(biāo)，將脂質(zhì)過氧化物量作為與2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituricacid)的反應(yīng)生成物的2-硫代巴比妥酸反應(yīng)物(2-thiobarbituricacid-reactivesubstances，tbars)測定。將實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)中回收的小鼠的大腸組織(30mg)用剪刀細(xì)細(xì)地剪斷，添加1ml緩沖液(20mmhepes-naoh，ph7.5，含有0.5％nonidetp-40、1mmedta、1μm丁化羥基甲苯、1mm苯甲基磺酰氟和10μg/ml亮肽素)，用均質(zhì)器均質(zhì)后，以20,000×g、4℃離心分離20分鐘，回收上清液，作為總蛋白質(zhì)成分。將蛋白質(zhì)成分(150μg/125μl)與20％三氯乙酸(75μl)、0.8％2-硫代巴比妥酸(50μl)混合，在90℃孵育40分鐘。冷卻至室溫之后，測定tbars的熒光強(qiáng)度(激發(fā)/吸收光：530nm/590nm)。圖2的圖表表示以對照(cont)為基準(zhǔn)的相對值。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b)間具有顯著差異(p＜0.05)?？芍猠sg能夠顯著抑制由dss誘發(fā)的過氧化脂質(zhì)的增加和活性氧。

實(shí)施例3：對大腸組織中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果(圖3)

將實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)中回收的小鼠的大腸組織(30mg)用剪刀細(xì)細(xì)地剪斷，添加1ml裂解液(lysisbuffer)(50mmtris-hcl，ph7.5，含有150mmnacl、0.5％nonidetp-40、10mm焦磷酸鈉、2mmedta、1mm苯甲基磺酰氟和10μg/ml亮肽素)，用均質(zhì)器均質(zhì)后，以20,000×g、4℃離心分離20分鐘，回收上清液，作為總蛋白質(zhì)成分。將回收的蛋白質(zhì)供于蛋白質(zhì)免疫印跡法(westernblot法)，評價(jià)nf-e2相關(guān)因子2(nrf2)、血紅素加氧酶-1(ho-1)、β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)的表達(dá)量。將蛋白質(zhì)免疫印跡法中得到的各蛋白質(zhì)的條帶強(qiáng)度用圖像解析軟件(imagej)數(shù)值化，以作為看家基因的β-肌動(dòng)蛋白的條帶強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化。圖表以將對照(cont)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c)間具有顯著差異(p＜0.05)?？芍猠sg使ho-1和nrf2的表達(dá)顯著增加。

實(shí)施例4：對培養(yǎng)細(xì)胞中的活性氧類(ros)的蓄積帶來的影響(圖4)

在大腸上皮存在大量的巨噬細(xì)胞，氧化應(yīng)激刺激巨噬細(xì)胞，從而分泌炎癥性細(xì)胞因子。并且，炎癥性細(xì)胞因子進(jìn)一步產(chǎn)生氧化應(yīng)激，由此出發(fā)惡性循環(huán)，誘發(fā)大腸炎。為此，對于esg對巨噬細(xì)胞中氧化應(yīng)激的蓄積帶來的效果進(jìn)行研究。

小鼠巨噬細(xì)胞(raw264.7細(xì)胞)由americantypeculturecollection(manassas,va,usa)購入，細(xì)胞用培養(yǎng)基(dmem-hg)培養(yǎng)，該培養(yǎng)基在含有10％胎牛血清的dulbecco'smodifiedeagle'smedium中配合有最終濃度達(dá)到4.5g/l的量的d-葡萄糖。在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中添加esg或rg，使其作用24小時(shí)。此后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的dmem-hg培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中添加最終濃度達(dá)到4mm的量的作為ros發(fā)生劑的2,2'-偶氮雙(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽(aaph)，對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在添加aaph1小時(shí)后在培養(yǎng)基中添加作為ros檢測試劑的二氯二氫熒光素二乙酸酯(dcf-da)(20μm)，接著培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后，對細(xì)胞進(jìn)行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)將核染色。dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/380nm進(jìn)行測定，作為dcf/dapi的比算出。圖4(a)和圖4(b)的圖表以將aaph(－)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c、d、e)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖4的結(jié)果可知，rg濃度依賴性地使ros量降低。此外，esg的20質(zhì)量％在消化道中轉(zhuǎn)化為esg，因此，esg也同樣地濃度依賴性地使ros量降低。

實(shí)施例5：對巨噬細(xì)胞中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果(圖5)

小鼠巨噬細(xì)胞(raw264.7細(xì)胞)由americantypeculturecollection(manassas,va,usa)購入，細(xì)胞用培養(yǎng)基(dmem-hg)培養(yǎng)，該培養(yǎng)基在含有10％胎牛血清的dulbecco'smodifiedeagle'smedium中配合有最終濃度達(dá)到4.5g/l的量的d-葡萄糖。

(a)在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到400μg/ml的量的esg和rg，使其作用24小時(shí)。

(b)在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到0-600μg/ml的量的rg，使其作用24小時(shí)。

此后，回收細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行分析。利用圖像解析軟件(imagej)將由蛋白質(zhì)免疫印跡法得到的各蛋白質(zhì)的條帶強(qiáng)度數(shù)值化，以作為看家基因的β-肌動(dòng)蛋白的條帶強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化。圖5(a)、圖5(b)的圖表以將對照(cont)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c、d)間存在顯著差異(p＜0.05)?？芍猺g濃度依賴性地促進(jìn)抗氧化蛋白質(zhì)(ho-1)和其轉(zhuǎn)錄因子nrf2的表達(dá)。另外，esg通過在哺乳動(dòng)物的消化道內(nèi)產(chǎn)生的rg，濃度依賴性地促進(jìn)抗氧化蛋白質(zhì)(ho-1)和其轉(zhuǎn)錄因子nrf2的表達(dá)。

實(shí)施例6：對巨噬細(xì)胞中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果(圖6)

為了研究由rg引起的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量的增加是否是由rg的結(jié)構(gòu)特異性地引發(fā)的，使用將rg用異淀粉酶和葡糖淀粉酶消化至葡萄糖的產(chǎn)物(rg(enz)，與rg進(jìn)行比較研究(圖6(a))。

在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，以最終濃度達(dá)到400μg/ml的量添加esg或者rg、rg(enz)，使其作用24小時(shí)。此后，回收細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行分析(圖6(b))。

在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到400μg/ml的量的esg或者rg、rg(enz)，使其作用24小時(shí)。此后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的dmem-hg培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中添加最終濃度達(dá)到4mm的量的作為ros發(fā)生劑的2,2'-偶氮雙(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽(aaph)，對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在添加aaph1小時(shí)后在培養(yǎng)基中添加作為ros檢測試劑的二氯二氫熒光素二乙酸酯(dcf-da)(20μm)，接著培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后，對細(xì)胞進(jìn)行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)將核染色。dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/380nm進(jìn)行測定，作為dcf/dapi的比算出(圖6(c))。圖6(c)的圖表以將veh(僅溶劑)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖6的結(jié)果可知，發(fā)生了分解的rg(enz)沒有效果，濃度依賴性地促進(jìn)抗氧化蛋白質(zhì)(ho-1)和其轉(zhuǎn)錄因子nrf2的表達(dá)的是rg。

實(shí)施例7：對抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量和ros的蓄積帶來的影響(圖7)

(a)在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到400μg/ml的量的6種來自天然物的糖原(牡蠣/oys、兔/typeiii、肌肉/typevii、甜玉米/phyto、slipperlimpet/typeviii、牛肝/typeix)或者rg，使其作用24小時(shí)。此后，回收細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行分析(圖7(a))。

(b)在培養(yǎng)raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到400μg/ml的量的6種來自天然物的糖原(牡蠣/oys、兔/typeiii、肌肉/typevii、甜玉米/phyto、slipperlimpet/typeviii、牛肝/typeix)或者rg，使其作用24小時(shí)。此后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的dmem-hg培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中添加最終濃度達(dá)到4mm的量的作為ros發(fā)生劑的2,2'-偶氮雙(2-甲基丙脒)二鹽酸鹽(aaph)，對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在添加aaph1小時(shí)后在培養(yǎng)基中添加作為ros檢測試劑的二氯二氫熒光素二乙酸酯(dcf-da)(20μm)，接著培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后，對細(xì)胞進(jìn)行清洗，用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)將核染色。dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/380nm進(jìn)行測定，作為dcf/dapi的比算出(圖7(b))。

圖7(a)、(b)的圖表以將veh作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b)間存在顯著差異(p＜0.05)。

實(shí)施例8：對nhek中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的影響(圖8)

正常人類表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(nhek)由kuraboindustries,ltd.(osaka，japan)購入，細(xì)胞在37℃、5％co2存在下用epilife(注冊商標(biāo))培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

在培養(yǎng)基中添加最終濃度達(dá)到300,600μg/ml的量的esg、rg和來自牡蠣的糖原，使其作用24小時(shí)。此后，回收細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)(nrf2,ho-1和nqo-1)的表達(dá)量進(jìn)行分析(圖8(a))。

利用圖像解析軟件(imagej)將由蛋白質(zhì)免疫印跡法得到的各蛋白質(zhì)的條帶強(qiáng)度數(shù)值化，以β-肌動(dòng)蛋白的條帶強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化(圖8(b)、(c)、(d))。圖8的圖表以將uvb-作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖8的結(jié)果可知，esg和rg均濃度依賴性地促進(jìn)nrf2、ho-1、nqo-1的產(chǎn)生。

實(shí)施例9：對nhek中的uvb照射誘導(dǎo)ros蓄積帶來的影響(圖9)

將nhek接種在35mm培養(yǎng)皿中，以最終濃度達(dá)到400,600μg/ml的量添加esg、rg和來自牡蠣的糖原(og)，使其作用24小時(shí)。在uvb照射(20mj/cm²，302nm)后，培養(yǎng)30分鐘，用熒光基質(zhì)20μmdcf-da處理30分鐘。此后，用dapi將核染色。用pbs清洗后，將處理過的細(xì)胞超聲破碎，dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/460nm測定，作為dcf/dapi的比算出(圖9)。圖9的圖表以將uvb(+)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c、d、e、f)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖9的結(jié)果可知，天然糖原(og)沒有抑制ros蓄積的效果，但是esg和rg能夠濃度依賴性地抑制ros蓄積。

實(shí)施例10：對ho-1和nqo-1敲減細(xì)胞中的ros的蓄積帶來的影響(圖10)

將nhek接種在35mm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24小時(shí)。使用轉(zhuǎn)染試劑lipofectaminernaimax，將以ho-1和nqo-1為標(biāo)的的sirna導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行rna干擾。添加各自的sirna和rnaimax，使其作用48小時(shí)。

回收rna干擾后的細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測標(biāo)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量(圖10(a))。

使最終濃度600μg/ml的esg與rna干擾后的細(xì)胞作用24小時(shí)。在uvb照射(20mj/cm²，302nm)后，培養(yǎng)30分鐘，用熒光基質(zhì)20μmdcf-da處理30分鐘。此后，用dapi將核染色。用pbs清洗后，將處理過的細(xì)胞超聲破碎，dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/460nm測定，作為dcf/dapi的比算出(圖10(b))。圖10(b)的圖以將uvb(+)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c、d)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖10的結(jié)果可知，esg的抗氧化效果是介由作為抗氧化蛋白質(zhì)的ho-1、nqo-1的表達(dá)誘導(dǎo)得到的效果。

實(shí)施例11：對巨噬細(xì)胞中的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量帶來的效果(圖11)

為了研究由esg和rg引起的抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)量的增加是否是由結(jié)構(gòu)特異性地引發(fā)的，使用將rg用異淀粉酶和葡糖淀粉酶消化至葡萄糖的產(chǎn)物esg(enz)、rg(enz)，與rg進(jìn)行比較研究(圖11(a))。

在培養(yǎng)nhek的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到600μg/ml的量的esg、rg、esg(enz)或rg(enz)，使其作用24小時(shí)。此后，回收細(xì)胞，用蛋白質(zhì)免疫印跡法對與抗氧化作用相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)量進(jìn)行分析(圖11(b))。

在培養(yǎng)nhek的培養(yǎng)基中，添加最終濃度達(dá)到600μg/ml的量的esg、rg、esg(enz)或rg(enz)，使其作用24小時(shí)。在uvb照射(20mj/cm²，302nm)后，培養(yǎng)30分鐘，用熒光基質(zhì)20μmdcf-da處理30分鐘。此后，用dapi將核染色。用pbs清洗后，將處理過的細(xì)胞超聲破碎，dcf和dapi的熒光強(qiáng)度分別以485nm/535nm、355nm/460nm測定，作為dcf/dapi的比算出(圖11(c))。圖11(c)的圖表以將uvb(+)作為基準(zhǔn)的相對值表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、b、c)間存在顯著差異(p＜0.05)?？芍哂蟹种Р糠值膃sg、rg具有抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)增強(qiáng)效果，而由酶分解至葡萄糖的rg(enz)、esg(enz)不具有抗氧化蛋白質(zhì)的表達(dá)增強(qiáng)效果。

實(shí)施例12：對uvb照射誘導(dǎo)caspase-3、-9活性帶來的影響(圖12)

將nhek接種于35mm培養(yǎng)皿中，添加最終濃度達(dá)到400,600μg/ml的量的esg、rg和og，使其作用24小時(shí)。在uvb照射(20mj/cm²，302nm)后，培養(yǎng)24小時(shí)，回收細(xì)胞。在細(xì)胞提取液中添加最終濃度達(dá)到50μm的量的熒光基質(zhì)ac-dmqd-7-氨基-4-甲基香豆素(amc，caspase-3)、ac-lehd-amc(caspase-9)，使其在37℃反應(yīng)1小時(shí)。以355nm/460nm測定amc的熒光強(qiáng)度(圖12)。圖表以利用校正曲線算出的amc量表示。統(tǒng)計(jì)分析(anova的turkeyposthoc)的結(jié)果，在不同的字母(a、ab、b、c、d、e)間存在顯著差異(p＜0.05)。由圖12的結(jié)果可知，esg、rg能夠用量依賴性地抑制caspase-3、-9的量，能夠抑制由uvb照射引起的細(xì)胞凋亡。