本發(fā)明涉及小動物活體成像中，將下頜下腺固定后在雙光子激光掃描顯微鏡下觀察熒光示蹤分子經(jīng)旁細胞途徑流動性的裝置。由于下頜下腺離心臟和肺臟距離較近，因此容易受到心跳和呼吸搏動的波及，焦平面一直在變動，無法得到連續(xù)清晰的動態(tài)圖片。本發(fā)明的主要目的即是尋找一種簡單易行且可根據(jù)腺體大小進行調整的固定裝置，使得活體動物的下頜下腺固定較為穩(wěn)固，從而避免焦平面變動對實驗連貫性和實驗條件均一性的影響。

背景技術：

旁細胞途徑是下頜下腺分泌唾液的重要途徑，以往關于旁細胞途徑通透性的檢測僅僅是在培養(yǎng)的細胞系和離體孵育的組織塊上進行，但這兩種均與活體動物的唾液分泌過程有較大差異，如能進行活體動態(tài)觀察旁細胞途徑熒光示蹤分子的流動性可更為準確和真實地反應旁細胞途徑的開放在調控唾液分泌中的作用。此外，小動物活體下頜下腺成像不僅可以實時定量觀察下頜下腺腺泡細胞和血管內皮細胞各自的旁細胞途徑通透性的開放程度，還可用于熒光標記的炎癥細胞進入腺體的動態(tài)追蹤、過表達帶有熒光標簽的蛋白在藥物作用下的轉位情況等實驗。下頜下腺位于頸部皮下，位置表淺，將動物俯臥式置于倒置顯微鏡下可觀察到下頜下腺腺泡、導管以及間質結構。然而，采用俯臥位在進行動態(tài)拍攝時，由于下頜下腺距離心臟和肺臟均較近，即使動物處于麻醉狀態(tài)下，其快速的心跳和呼吸依然存在，因此可導致動態(tài)成像時的焦平面一直在不停地變動，無法得到清晰、準確和具有可比性的圖像。對這一困難的解決方案國內尚無報道，國外有報道制作一個細長且有一定硬度的尺子，將一端壓在腺體上，另一端用膠帶粘在顯微鏡臺面上。這種方法的不足之處在于當顯微鏡的載物臺不是很大或者不是一個水平面時，均可導致腺體固定的不穩(wěn)定或不能緊密貼合在用于觀察的共聚焦小皿玻璃片上，這將直接影響動態(tài)觀察和記錄的效果。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明采用更易置于下頜下腺組織上并可以調整重量的固定裝置。圓形螺絲狀裝置垂直且平整地壓在小動物一側下頜下腺組織上，根據(jù)下頜下腺大小調節(jié)金屬墊片的數(shù)量，以保證鏡下腺體內血管流動的通暢以及焦平面的穩(wěn)定，從而簡便、靈活可調控地獲得可連續(xù)記錄的焦平面穩(wěn)定的完整視頻圖像。

技術方案

本實用新型解決其技術問題所采用的技術方案是：制備直徑與小動物腺體匹配的螺絲狀裝置，如體重為20g的8周齡C57/BL6雄性小鼠，下頜下腺重量約為0.04g，可制備直徑為8mm螺絲狀裝置(重量為1.9g)，螺絲狀圓底朝下，其上套幾個與螺絲底大小一樣的圓形金屬墊片(單個重量為0.6g)，以保證該裝置既具有一定的重量可以穩(wěn)定地固定住下頜下腺組織，又可以通過調整金屬墊片的數(shù)量來選擇與不同周齡或不同大小的小動物腺體所匹配的固定裝置。

附圖說明

圖1上排：顯微鏡載物臺上小鼠下頜下腺固定裝置的示意圖

1.載物臺(帶加熱臺)，2.膠帶，3.墊片，4.固定裝置，5.螺絲狀裝置，6.濾紙，7.下頜下腺，8.共聚焦小皿，9.玻璃片。

下排：是本發(fā)明裝置側面放大圖，其中：

a.螺絲狀裝置外徑長8mm；b.墊片外徑長8mm。

具體實施方式

選取8-12周齡的C57/BL6小鼠，飼養(yǎng)于北京大學醫(yī)學部實驗動物部，自由進食和飲水，12小時/12小時日照節(jié)律。經(jīng)尾靜脈注射不同分子量大小的熒光示蹤分子FITC-右旋糖酐(1.5mg/kg)后腹腔注射0.4g/kg水合氯醛麻醉小鼠，切開頸部皮膚分離出一側下頜下腺。小鼠側臥位置于37℃加熱臺上，將下頜下腺拉出置于共聚焦小皿的玻璃片中心后在腺體上方蓋一層去離子水潤濕的濾紙，此時將組裝好的螺絲狀裝置和金屬墊片垂直放在濾紙上方，再使用膠帶以螺絲頭為中心進行十字交叉式粘在臺面上，調節(jié)焦平面，鏡下對焦即可拍攝動態(tài)視頻，觀察正常狀態(tài)下熒光示蹤分子的流動性，并進一步進行藥物處理，記錄熒光分子從血管內向腺體基底側以及順著相鄰腺泡細胞間的旁細胞途徑流入腺泡腔的情況。