本發(fā)明涉及獸藥技術領域，更具體地說，涉及一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑及其制備方法。
背景技術：
近幾年來，魚類養(yǎng)殖進入了規(guī)?；图s化養(yǎng)殖的新時代，養(yǎng)殖密度越來越大，養(yǎng)殖環(huán)境亦日益變差，魚類疾病的發(fā)生和危害也不斷增大，給養(yǎng)殖戶帶來了很大困擾的同時，也制約了我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。其中，魚類寄生蟲病在魚類疾病中占據(jù)了相當大的比例.寄生于魚體上的原生動物種類很多，它們大多寄生在魚體的表面及體內的各種器官上，導致魚體生長緩慢、不育、抵抗力低下，甚至造成魚體大量死亡。
其中，隱鞭蟲病由隱鞭蟲(Cryptobia)寄生在魚鰓、皮膚或其他組織器官所引起的寄生蟲病。主要危害夏花草魚、鯪和鯉魚苗。隱鞭蟲寄生于淡水魚的鰓和皮膚。鰓隱鞭蟲主要破壞鰓小片上皮并產(chǎn)生凝血酶,使其血管阻塞,黏液增多,嚴重時魚類呼吸困難,不攝食,離群獨游或靠岸邊聚集于水面,體色暗黑,體形消瘦。此類疾病發(fā)病后很難治療，數(shù)天內可致病魚大量死亡。因此對于鞭毛蟲引起的疾病應以預防為主，一般是對水環(huán)境進行消毒，殺滅水體中的病原寄生蟲。
由于傳統(tǒng)殺蟲劑高頻率的廣泛使用使寄生蟲產(chǎn)生抗藥性，降低藥物療效，對水質造成不可逆轉性的破壞，且對魚類的毒副作用較大，殘留期太長，使養(yǎng)殖的魚類體內藥物殘留超標，直接影響水產(chǎn)品的品質，損害食用者身體健康。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術問題在于，針對現(xiàn)有技術的上述缺陷，提供一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑及其制備方法，該中藥復方制劑對各種畜禽原蟲病、寄生蟲病均具有較好的治療效果和預防效果，尤其適用于魚類隱鞭蟲病的治療。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，由如下重量份數(shù)的組分制備而成：土荊皮2-6份、苦參2-6份、銀杏外種皮2-6份、川芎0.5-1.5份、丹參0.5-1.5份、乳香2-4份、枯草芽胞桿菌0.5-9份、嗜酸乳桿菌0.5-8份、米曲霉0.5-8份；所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：(0.2-1)。
本發(fā)明所述的治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，其中，所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.6。
本發(fā)明所述的治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，其中，所述土荊皮2.8-5份、苦參3-4.5份、銀杏外種皮2.3-4份、川芎0.5-1.2份、丹參1-1.5份、乳香2.5-3.8份、枯草芽胞桿菌4.5-6.5份、嗜酸乳桿菌2.5-4份、米曲霉2.5-4份。
本發(fā)明所述的治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，其中，所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉的重量比為6.5：3.5：2。
本發(fā)明所述的治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，其中，所述土荊皮5.8份、苦參4.2份、銀杏外種皮4.5份、川芎1.2份、丹參1.5份、乳香2.8份、枯草芽胞桿菌6.5份、嗜酸乳桿菌3.5份、米曲霉2份。
本發(fā)明還提供一種如上所述治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑的制備方法，包括如下步驟：
(1)取配方量的土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參，粉碎至150目，加入8倍量蒸餾水，加熱煮沸1-3小時，放冷，離心機750-900r/min離心5-8min，濾過，濾渣再次加熱煮沸1小時，離心機750-900r/min離心3-6min，濾過，濾渣加入4-6倍量濃度為70-85％的乙醇，回流提取2-4小時，離心機450-700r/min離心5-8min，濾過，反復2-3次，合并以上所有濾液，減壓回收乙醇，經(jīng)薄膜蒸發(fā)濃縮至相對密度為0.75-0.98的液體，得到提取液，待用；
(2)取配方量的乳香加入溫水融化，待用；
(3)取步驟(2)的乳香少量多次加入至步驟(1)得到的提取液，用攪拌槳緩慢勻速攪拌，攪拌40-45min后成槳料，然后在無菌條件下加入配方量的枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉，繼續(xù)攪拌，攪拌混合后置沸騰制粒罐中，混合20min，制粒即得成品。
本發(fā)明所述治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑的制備方法，其中，步驟(3)中還包括進行β—環(huán)糊精包合制粒的過程。
實施本發(fā)明的治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑及其制備方法，具有以下有益效果：
本發(fā)明的中藥復方制劑對魚類隱鞭蟲病具有較好的治療效果和預防效果，解決了傳統(tǒng)殺蟲劑高頻率的廣泛使用使寄生蟲產(chǎn)生抗藥性，降低藥物療效以及對水質造成不可逆轉性的破壞。本發(fā)明的中藥復方制劑是一種理想的天然、環(huán)保型綠色藥物,具有高效、毒副作用小,安全性高,殘留少等諸多優(yōu)點,且來源廣、成本低。在目前全面提倡健康養(yǎng)殖的新形勢下,應用中草藥防治魚病具有廣闊的前景。
本制劑以土荊皮、苦參、銀杏外種皮三藥為君藥，具有攻積殺蟲之效，加配以川芎、乳香的活血化瘀藥，取其具有抗凝血的功能，能夠消除鰓隱鞭蟲破壞鰓小片上皮產(chǎn)生凝血酶,使其血管不再阻塞,黏液減少,從而治療患有隱鞭蟲病的癥狀，如呼吸困難。此外，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，配以調節(jié)魚類微生態(tài)的菌劑有益于上述中藥的吸收利用。
(2)本研究發(fā)現(xiàn)，當土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.6。其中枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉用量比例為6.5：3.5：2其助吸收的效果顯著?？莶菅挎邨U菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉進入消化道后，迅速由休眠狀態(tài)復活，在短期內繁殖成高含菌量的優(yōu)勢種群，消耗掉腸道內大量氧氣，并能產(chǎn)生過氧化氫、細菌素，建立微生態(tài)平衡，促進有益厭氧微生物的繁殖，抑制有害細菌(大腸桿菌、沙門氏桿菌)的生長，在快速繁殖過程中，產(chǎn)生大量多種維生素、有機酸、氨基酸、蛋白酶、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，能降解植物性中藥中復雜的有機物，從而促進消化吸收，提高中藥的利用率。
(3)本發(fā)明的制備工藝簡單，適用范圍廣。乳香先溶解成液體，然后混入至其他藥材中，能夠完整地保留乳香的有效成分。
(4)本發(fā)明還利用β—環(huán)糊精對藥物進行包被，β—環(huán)糊精則可以作為保護性材料阻止內層藥物有效成分降解，包合后的藥物顆粒具有緩控釋的特性，有效的延緩藥物有效成分釋放時間，提高了藥物的穩(wěn)定性，促進藥物與生物膜的接觸，增加藥物的吸收。與傳統(tǒng)給藥方式相比，具有生物利用度高，毒副作用低的特點，孕畜及體弱者均可進行使用。
具體實施方式
下面，結合具體實施方式，對本發(fā)明做進一步描述：
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所采用的設備和原料等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規(guī)方法。
一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，由如下重量份數(shù)的組分制備而成：土荊皮2-6份、苦參2-6份、銀杏外種皮2-6份、川芎0.5-1.5份、丹參0.5-1.5份、乳香2-4份、枯草芽胞桿菌2-9份、嗜酸乳桿菌2-8份、米曲霉2-8份；所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為(1：0.2-1)。
優(yōu)選地，所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.6。所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉的重量比為6.5：3.5：2。
該治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑的制備方法，包括如下步驟：
(1)取配方量的土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參，粉碎至150目，加入8倍量蒸餾水，加熱煮沸1-3小時，放冷，離心機750-900r/min離心5-8min，濾過，濾渣再次加熱煮沸1小時，離心機750-900r/min離心3-6min，濾過，濾渣加入4-6倍量濃度為70-85％的乙醇，回流提取2-4小時，離心機450-700r/min離心5-8min，濾過，反復2-3次，合并以上所有濾液，減壓回收乙醇，經(jīng)薄膜蒸發(fā)濃縮至相對密度為0.75-0.98的液體，得到提取液，待用；
(2)取配方量的乳香加入溫水融化，待用；
(3)取步驟(2)的乳香少量多次加入至步驟(1)得到的提取液，用攪拌槳緩慢勻速攪拌，攪拌40-45min后成槳料，然后在無菌條件下加入配方量的枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉，繼續(xù)攪拌，攪拌混合后置沸騰制粒罐中，混合20min，另取稱量好的β—環(huán)糊精制成糊精漿，開啟制粒機，進行β—環(huán)糊精包合制粒，即為成品。
組份中各原料的藥理藥效簡介如下：
土荊皮，為松科植物金錢松(Pseudolarix kamepferi Gord.)的干燥根皮或近根樹皮。性味辛，溫；有毒。具有殺蟲，止癢的功效。主治疥癬瘙癢。
苦參，為豆科植物苦參的干燥根。性味苦，寒。具有清熱燥濕，殺蟲，利尿之功。用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風，外治滴蟲性陰道炎。
銀杏外種皮，為銀杏科、銀杏屬植物銀杏Ginkgo biloba L.的果實外種皮。性平，味甘苦澀。具有斂肺氣、定喘嗽、止帶濁、縮小便的功用?？芍蜗?、痰嗽、白帶、白濁、遺精、淋病、小便頻數(shù)等病。
川芎，為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong hort.的干燥根莖。性味辛，溫。具有行氣開郁，祛風燥濕，活血止痛。治風冷頭痛旋暈，脅痛腹疼，寒痹筋攣，經(jīng)閉，難產(chǎn)，產(chǎn)后瘀阻塊痛，癰疽瘡瘍。用于月經(jīng)不調，經(jīng)閉痛經(jīng)，瘕腹痛，胸脅刺痛，跌撲腫痛，頭痛，風濕痹痛。
丹參，為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖。性味苦，微寒。具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。用于胸痹心痛，脘腹脅痛，瘕瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛。
乳香，為橄欖科植物乳香樹Boswellia carterii Birdw.及同屬植物Boswellia bhaurdajiana Birdw.樹皮滲出的樹脂。性味辛、苦，溫?；钛袣庵雇矗[生肌。用于胸痹心痛，胃脘疼痛，痛經(jīng)經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻，癥瘕腹痛，風濕痹痛，筋脈拘攣，跌打損傷，癰腫瘡瘍。
枯草芽胞桿菌，屬芽孢桿菌屬的一種?？莶菅挎邨U菌以孢子狀態(tài)進入消化道后，迅速由休眠狀態(tài)復活，在短期內繁殖成高含菌量的優(yōu)勢種群，消耗掉腸道內大量氧氣，并能產(chǎn)生過氧化氫、細菌素，建立微生態(tài)平衡，促進有益厭氧微生物的繁殖，抑制有害細菌(大腸桿菌、沙門氏桿菌)的生長。
嗜酸乳桿菌，嗜酸乳桿菌屬于乳桿菌屬，革蘭氏陽性桿菌，桿的末端呈圓形，主要存在小腸中，釋放乳酸，乙酸和一些對有害菌起作用的抗菌素，但是抑菌作用比較弱。具有調整腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖。
米曲霉，屬真菌中的一個常見種。米曲霉在淀粉酶的作用下，將原料中的直鏈、支鏈淀粉降解為糊精及各種低分子糖類，如麥芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，將不易消化的大分子蛋白質降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸，而且可以使輔料中粗纖維、植酸等難吸收的物質降解，提高營養(yǎng)價值、保健功效和消化率，廣泛應用于食品、飼料、生產(chǎn)曲酸、釀酒等發(fā)酵工業(yè)。
實施例1一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，
其由如下重量份數(shù)的組分制備而成：
土荊皮5.8份、苦參4.2份、銀杏外種皮4.5份、川芎1.2份、丹參1.5份、乳香2.8份、枯草芽胞桿菌6.5份、嗜酸乳桿菌3.5份、米曲霉2份。所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.6。所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉的重量比為6.5：3.5：2。
制備方法，包括如下步驟：
(1)取配方量的土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參，粉碎至150目，加入8倍量蒸餾水，加熱煮沸1-3小時，放冷，離心機750-900r/min離心5-8min，濾過，濾渣再次加熱煮沸1小時，離心機750-900r/min離心3-6min，濾過，濾渣加入4-6倍量濃度為70-85％的乙醇，回流提取2-4小時，離心機450-700r/min離心5-8min，濾過，反復2-3次，合并以上所有濾液，減壓回收乙醇，經(jīng)薄膜蒸發(fā)濃縮至相對密度為0.75-0.98的液體，得到提取液，待用；
(2)取配方量的乳香加入溫水融化，待用；
(3)取步驟(2)的乳香少量多次加入至步驟(1)得到的提取液，用攪拌槳緩慢勻速攪拌，攪拌40-45min后成槳料，然后在無菌條件下加入配方量的枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉，繼續(xù)攪拌，攪拌混合后置沸騰制粒罐中，混合20min，另取稱量好的β—環(huán)糊精制成糊精漿，開啟制粒機，進行β—環(huán)糊精包合制粒，即為成品。
實施例2一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑
分別按下述的配比秤取原料，按照實施例1中的步驟進行制備，不同之處在于所添加的原料配比不同，制備產(chǎn)品：
實施例2的原料配比：
土荊皮2份、苦參2份、銀杏外種皮2份、川芎0.5份、丹參0.5份、乳香2份、枯草芽胞桿菌0.6份、嗜酸乳桿菌0.6份、米曲霉0.6份；所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.2。
實施例3一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑，
分別按下述的配比秤取原料，按照實施例1中的步驟進行制備，不同之處在于所添加的原料配比不同，制備產(chǎn)品：
實施例3的原料配比：
土荊皮6份、苦參6份、銀杏外種皮6份、川芎1.5份、丹參1.5份、乳香4份、枯草芽胞桿菌9份、嗜酸乳桿菌8份、米曲霉8份；所述土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：1。
對比實施例1臨床治療隱鞭蟲病的常用藥，硫酸銅：硫酸亞鐵質量比5：2，池內濃度為0.7ppm。
對比實施例2一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑(缺少枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉，其他組分與實施例1的配方相同，制備方法與實施例1相同)
其由如下重量份數(shù)的組分制備而成：
土荊皮5.8份、苦參4.2份、銀杏外種皮4.5份、川芎1.2份、丹參1.5份、乳香2.8份。
制備方法，包括如下步驟：
(1)取配方量的土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參，粉碎至150目，加入8倍量蒸餾水，加熱煮沸1-3小時，放冷，離心機750-900r/min離心5-8min，濾過，濾渣再次加熱煮沸1小時，離心機750-900r/min離心3-6min，濾過，濾渣加入4-6倍量濃度為70-85％的乙醇，回流提取2-4小時，離心機450-700r/min離心5-8min，濾過，反復2-3次，合并以上所有濾液，減壓回收乙醇，經(jīng)薄膜蒸發(fā)濃縮至相對密度為0.75-0.98的液體，得到提取液，待用；
(2)取配方量的乳香加入溫水融化，待用；
(3)取步驟(2)的乳香少量多次加入至步驟(1)得到的提取液，用攪拌槳緩慢勻速攪拌，攪拌40-45min后成槳料，攪拌混合后置沸騰制粒罐中，混合20min，另取稱量好的β—環(huán)糊精制成糊精漿，開啟制粒機，進行β—環(huán)糊精包合制粒，即為成品。
對比實施例3一種治療隱鞭蟲病的中藥復方制劑
由如下重量份數(shù)的組分制備而成：
土荊皮7份、苦參8.5份、銀杏外種皮7.8份、川芎3份、丹參3.6份、乳香4.5份、枯草芽胞桿菌10.3份、嗜酸乳桿菌9.5份、米曲霉8.8份。
制備方法：與實施例1相同
急性毒性試驗：
應用NIH小鼠120只，SPF級，雌雄各半，體重18-22g，進行急性毒性實驗。小鼠隨機分為三組，即對照組、給藥組1(本發(fā)明實施例1的中藥復方制劑，濃度為3.78g中藥制劑/ml，最高濃度)、給藥組2(本發(fā)明實施例2的中藥復方制劑，濃度為2.36g中藥制劑/ml，最高濃度)、給藥組3(本發(fā)明實施例3的中藥復方制劑，濃度為5.14g中藥制劑/ml，最高濃度)，實驗前禁食12小時。給藥組1-3分別將本發(fā)明實施例1-3制備的中藥復方制劑溶解在蒸餾水中對小鼠灌胃，灌胃容積為5ml/kg，對照組給等量的生理鹽水，1天給藥2次，給藥間隔6小時，給藥后連續(xù)觀察14天，并記錄小鼠的毒性反應及死亡數(shù)。實驗結果表明：與對照組相比，給藥后小鼠未見明顯差異，試驗連續(xù)觀察14天，小鼠全身狀況、攝食、飲水、體重增長均正常。因此本發(fā)明的中藥制劑急性毒性低，臨床用藥安全。
本發(fā)明的中藥復方制劑無毒性，使用方便，可添加到飼料中使用，下面，取實施例1-3以及對比實施例1-3的復方制劑，進行效果檢測，結果見表。
取六個相同大小的魚池，每個魚池放入50條患有隱鞭蟲病的草魚(診斷草魚患有隱鞭蟲病的方法：取草魚的鰓及皮膚，置于清潔的載玻片上，加1滴自來水，然后減去少量鰓絲或刮去少量粘液，蓋上蓋玻片，輕壓后，先用低倍鏡觀察，然后用高倍鏡檢查，當發(fā)現(xiàn)大量鰓隱鞭蟲時作出診斷)。服用方法為將本發(fā)明的中藥制劑按草魚每公斤體重0.4g中藥制劑直接噴灑至魚池內喂養(yǎng)，連續(xù)服用10天，10天后，取草魚皮膚及鰓在顯微鏡下觀察是否發(fā)現(xiàn)鰓隱鞭蟲液。草魚放入魚池生長前，分別稱取實施例1-3以及對比實施例2-3的制劑池潑灑至魚池內。對比實施例1潑灑硫酸銅：硫酸亞鐵＝質量比5：2，使池內濃度達到0.7ppm。
治愈率％＝試驗后患有隱鞭蟲病的草魚條數(shù)/試驗前患有隱鞭蟲病的草魚條數(shù)*100％
表實施例1-3及對比實施例1-3的治療結果
由上表中數(shù)據(jù)可以看出，患有隱鞭蟲病的草魚服用本發(fā)明實施例1-3制備的中藥復方制劑后，體內鰓隱鞭蟲消失明顯，治愈率達到84％以上，與對比實施例1的常規(guī)殺蟲法76％的治愈率還要高，說明本發(fā)明的中藥復方制劑的治療效果明顯，值得注意的是，本發(fā)明實施例1的配方比例的治療效果尤為顯著，可達98％，該治療效果得益于本發(fā)明的組方比例，尤其在土荊皮、苦參、銀杏外種皮、川芎、丹參、乳香六藥的用量與所述枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三菌種的用量其質量比為1：0.6；枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉的重量比為6.5：3.5：2時，其組方效果最優(yōu)。
另外，對比實施例2與實施例1的配方差異在于缺少微生物調節(jié)劑枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉三種菌種，其治愈效果大打折扣，甚至比對比實施例1常規(guī)治療方法的治愈率還差。
對比實施例3與實施例1的配方差異在于各組分用量超過本發(fā)明設計的最大用量(土荊皮2-6份、苦參2-6份、銀杏外種皮2-6份、川芎0.5-1.5份、丹參0.5-1.5份、乳香2-4份、枯草芽胞桿菌0.5-9份、嗜酸乳桿菌0.5-8份、米曲霉0.5-8份)，且枯草芽胞桿菌、嗜酸乳桿菌、米曲霉的用量并沒有按照重量比為6.5：3.5：2進行配置，其治愈效果大打折扣，甚至比對比實施例1常規(guī)治療方法的治愈率還差?？梢姡景l(fā)明的組分用量并非越高效果越好的，反而配方比例用量恰到好處即可，如實施例1的配方用量。
對本領域的技術人員來說，可根據(jù)以上描述的技術方案以及構思，做出其它各種相應的改變以及形變，而所有的這些改變以及形變都應該屬于本發(fā)明權利要求的保護范圍之內。