本發(fā)明涉及一種慢性腎臟疾病模型的構建，尤其涉及一種腎臟特異性給藥模型的制作方法。
背景技術：
隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活方式的改變，慢性腎臟病(CKD)已呈流行趨勢，人群中的發(fā)病率高達10％以上。鑒于人們對CKD發(fā)病機制的認識還不夠深入，臨床上也缺乏滿意的干預手段，大部分病人最終進入終末期腎病階段，需要血液凈化及腎臟移植治療，給家庭和社會帶來沉重的負擔。腎小管間質纖維化是CKD重要組織學表現(xiàn)。腎功能的惡化，很大程度上取決于腎小管間質纖維化的程度。單側輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)模型是以進行性小管間質纖維化為特征的實驗性腎病模型，普遍用于研究CKD。然而，目前的UUO模型尚存在一些不足之處。
1、目前UUO小鼠一旦造模完成，便無法解除體內(nèi)梗阻，這不利于觀察疾病治療效果。
2、對于CKD的治療，基本上是經(jīng)全身給藥，觀察腎臟功能恢復效果，尚無有效的腎臟局部給藥治療。然而，全身給藥可產(chǎn)生腎外副作用，且無法明確腎臟局部藥物濃度是否達到治療效果以及藥物在腎內(nèi)及腎外的具體作用機制。
3、近年來，基因治療已逐步應用，目前基因轉染方法包括三種：病毒感染、超聲轉染、高壓注射轉染。但是這三種轉染方法均不適合治療腎臟疾病。病毒感染法是通過慢病毒載體包裹目的基因，從而將目的基因攜帶至細胞內(nèi)；全身性病毒感染后，感染的病毒較多蓄積在肝臟及其他器官中，腎臟局部很難達到治療所需量。超聲轉染是通過超聲波將基因轉染至體內(nèi)，超聲轉染只適用于動物，不易操作，且強超聲波可對周圍正常組織造成損傷。高壓注射轉染是通過包含目的基因的高容量液體瞬間注射至體內(nèi)，產(chǎn)生一過性高灌注壓，從而使目的基因進入細胞內(nèi)；高壓注射轉染會對體內(nèi)造成瞬間高血壓及高容量負荷，對機體危害極大，限制了其推廣應用。
正是缺少可以廣泛應用及認可治療梗阻性腎病動物模型，使得該領域的研究無法快速進展，也極大的限制了臨床干預手段的研發(fā)。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種腎臟特異性給藥模型的制作方法。
本發(fā)明通過以下技術方案來實現(xiàn)上述目的：
本發(fā)明將連接有微量滲透壓泵的導管置入單側小鼠輸尿管并結扎，并將微量滲透泵埋入皮下持續(xù)給藥或者基因轉染。其操作過程包括以下步驟：
(1)將小鼠麻醉后打開腹腔，分離暴露出右側輸尿管；
(2)距腎盂1.0cm處將導管插入輸尿管；
(3)將導管與輸尿管結扎固定；
(4)將導管與裝有藥物或者目的基因的微量滲透壓泵連接；
(5)將微量滲透壓泵埋入皮下；
(6)微量滲透壓泵以ul/h的劑量緩慢經(jīng)輸尿管向小鼠注入藥物或者目的基因；
(7)依次縫合肌層、皮膚層關閉腹腔；
(8)將小鼠正常飼養(yǎng)1周，取雙側腎臟進行病理及分子生物學分析。
進一步，所述步驟(1)的具體方法為：取小鼠腹部正中線切開皮膚及肌層，進入腹腔，暴露一側腎臟，充分游離暴露輸尿管；所述步驟(2)的具體方法為：挑起輸尿管，距腎盂1.0cm處切開輸尿管，并將細導管插入輸尿管，終端達到腎盂處；所述步驟(3)的具體方法為：將導管與輸尿管以縫線結扎固定；所述步驟(4)的具體方法為：將導管外端與微量滲透壓泵連接；所述步驟(5)的具體方法為：將微量滲透壓泵埋入皮下；所述步驟(6)的具體方法為：微量滲透壓泵以ul/h的劑量緩慢經(jīng)輸尿管向小鼠注入藥物或者目的基因；所述步驟(7)的具體方法為：依次縫合肌層、皮膚層；所述步驟(8)的具體方法為：將小鼠正常飼養(yǎng)1周后，取雙側腎臟進行病理及分子生物學的分析。
本發(fā)明的有益效果在于：
本發(fā)明是一種腎臟特異性給藥模型的制作方法，與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明將有利于藥物或者攜帶目的基因的病毒載體通過腎盂的逆向擴散，均勻到達所用腎單位的所有腎小管及腎小球囊，藥物或者靶基因在腎臟局部形成均一治療高濃度，而對腎外組織器官影響較少，是一種理想的腎臟靶向給藥方法，有利于高效研究慢性腎臟病的治療靶點及發(fā)病機制。與目前的其他方法相比較，具有操作簡單，器官特異性好，給藥(基因)的器官內(nèi)分布均一，濃度可控，腎外影響小等優(yōu)點。
具體實施方式
下面對本發(fā)明作進一步說明：
本發(fā)明將連接有微量滲透壓泵的導管置入單側小鼠輸尿管并結扎，并將微量滲透泵埋入皮下持續(xù)給藥或者基因轉染。其操作過程包括以下步驟：
將小鼠麻醉后打開腹腔，分離暴露出右側輸尿管；
(2)距腎盂1.0cm處將導管插入輸尿管；
(3)將導管與輸尿管結扎固定；
(4)將導管與裝有藥物或者目的基因的微量滲透壓泵連接；
(5)將微量滲透壓泵埋入皮下；
(6)微量滲透壓泵以ul/h的劑量緩慢經(jīng)輸尿管向小鼠注入藥物或者目的基因；
(7)依次縫合肌層、皮膚層關閉腹腔；
(8)將小鼠正常飼養(yǎng)1周，取雙側腎臟進行病理及分子生物學分析。
進一步，所述步驟(1)的具體方法為：取小鼠腹部正中線切開皮膚及肌層，進入腹腔，暴露一側腎臟，充分游離暴露輸尿管；所述步驟(2)的具體方法為：挑起輸尿管，距腎盂1.0cm處切開輸尿管，并將細導管插入輸尿管，終端達到腎盂處；所述步驟(3)的具體方法為：將導管與輸尿管以縫線結扎固定；所述步驟(4)的具體方法為：將導管外端與微量滲透壓泵連接；所述步驟(5)的具體方法為：將微量滲透壓泵埋入皮下；所述步驟(6)的具體方法為：縫合背部肌肉及皮膚；所述步驟(7)的具體方法為：將小鼠正常飼養(yǎng)2周后，取雙側腎臟進行病理及分子生物學的分析。
傳統(tǒng)的UUO模型是用手術縫線將動物輸尿管結扎，模型一旦建立后，便不能再解除梗阻。本發(fā)明應用單側腎臟經(jīng)輸尿管植入連接有微量滲透壓泵的導管，只要將微量滲透壓泵與導管分離后，已梗阻的尿道便可以解除梗阻，導管自動成為一根人工導尿管。解除梗阻后，可將裝有藥物或者目的基因的微量滲透壓泵再與已植入輸尿管的導管連接，便可腎臟器官特異性輸注藥物或者目的基因。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征及本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。