本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是具有抗急性酒精肝損傷的藥物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

肝損傷所引起的肝臟疾病已成為困擾全球醫(yī)療領(lǐng)域的一個(gè)重要問題。肝損傷包括化學(xué)性肝損傷、藥物性肝損傷、免疫性肝損傷和酒精性肝損傷等類型，其中酒精性肝損傷在臨床上最為常見。酒精性肝損傷包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化，由長期過量飲酒所致，主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、黃疸、肝臟腫大和壓痛，可并發(fā)肝衰竭和上消化道出血等。目前臨床上多采用抗病毒、抗纖維化、人工肝支持治療、肝移植、免疫調(diào)節(jié)聯(lián)合治療。某些療法雖十分有效，但價(jià)格昂貴，并且濫服中草藥對肝損傷也有較大毒副作用，因此市場上亟需安全有效、作用機(jī)制明確的抗急性酒精肝損傷藥物。

民族藥種類多，來源廣，抗急性酒精肝損傷具有價(jià)廉易得、不良反應(yīng)小等特點(diǎn)，如何從民族藥中提取得到抗急性酒精肝損傷藥物的有效成分一直是現(xiàn)代民族藥領(lǐng)域具有挑戰(zhàn)性的研究。

短穗兔耳草（Lagotis brachystachy Maxim）屬玄參科兔耳草屬植物，藏名直打薩曾，以全草入藥，為常用藏藥的上品，具有治肺胃淤血、肺結(jié)核、血熱性化膿癥等功效。短管兔耳草為玄參科植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim的干燥全草，可作為藏藥洪連入藥。洪連能清熱解毒、利濕、平肝，可用于治療濕熱黃疸?，F(xiàn)代研究表明短穗兔耳草有治肺胃淤血、肺結(jié)核、血熱性化膿癥等功效，能治赤巴病、培根病，適用于血熱性化膿癥、肺胃淤血、赤巴胸悶、黃水病、膿瘍；短管兔耳草有抗菌消炎、抗腫瘤、降尿酸等作用，主要用于治療全身發(fā)燒、肺病、腎炎、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、月經(jīng)不調(diào)等疾病。但未見短穗兔耳草和短管兔耳草中的提取物、有效部位或活性成分治療急性酒精性肝損傷方面的研究報(bào)道。此外，也未見任何關(guān)于短穗兔耳草和短管兔耳草作為單方或復(fù)方用于治療急性酒精性肝損傷的公開報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供具有抗急性酒精肝損傷的藥物及其應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

具有抗肝急性酒精損傷作用的藥物，其有效成分為短穗兔耳草和短管兔耳草。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述具有抗急性酒精肝損傷作用的藥物，其有效成分為短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述具有抗急性酒精肝損傷作用的藥物，其有效成分為短管兔耳草50-95%乙醇提取部位。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位、短管兔耳草50-95%乙醇提取部位的制備過程為：將短穗兔耳草和短管兔耳草分別稱取100 g，分別用6-15倍體積50-95%乙醇加熱回流2-4次，每次1-2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，濃縮得醇提物。

短穗兔耳草和短管兔耳草在制備預(yù)防急性酒精肝損傷藥物中的應(yīng)用。

短穗兔耳草和短管兔耳草在制備抗急性酒精肝損傷藥物中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：短穗兔耳草的有效部位為短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位，短管兔耳草的有效部位為短管兔耳草50-95%乙醇提取部位。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位、短管兔耳草50-95%乙醇提取部位的制備過程為：將短穗兔耳草和短管兔耳草分別稱取100g，分別用6-15倍體積50-95%乙醇加熱回流2-4次，每次1-2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，濃縮得醇提物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1、短穗兔耳草為玄參科植物短穗兔耳草Lagotis brachystachys Maxim的干燥全草，主要有肺胃淤血、肺結(jié)核、血熱性化膿癥等功效，能治赤巴病、培根病，適用于血熱性化膿癥、肺胃淤血、赤巴胸悶、黃水病、膿瘍。短管兔耳草為玄參科植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim的干燥全草，具有抗菌消炎、抗腫瘤、降尿酸等作用，主要用于治療全身發(fā)燒、肺病、腎炎、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、月經(jīng)不調(diào)等疾病。兩種兔耳草為多年生植物，且分布廣泛，資源豐富，均可作為藏藥洪連入藥。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，兩種兔耳草均具有抗急性酒精性肝損傷作用，具有較好的保肝效果。

2、該發(fā)明有效提取部位安全性高。

該發(fā)明有效部位的制備方便，市場前景廣闊，蘊(yùn)藏極大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。有望開發(fā)成為新一代安全有效，用于多種類型的抗肝損傷藥物。

附圖說明

圖1是本發(fā)明小鼠肝組織病理切片（HE，×200）示意圖（A-I）；

（A）：正常組肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊，核圓且清晰，胞漿豐富；

（B）：模型組可見大部分肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂，中央靜脈出現(xiàn)大量瘀血，肝血竇擴(kuò)張，肝細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)疏松淡染，部分肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變和核固縮，大量肝細(xì)胞呈灶狀壞死；

（C）：陽性藥組可見肝組織結(jié)構(gòu)較完整，肝小葉結(jié)構(gòu)較清晰，肝細(xì)胞壞死數(shù)量明顯減少，胞漿較豐富；

（D）：短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位低劑量組肝索排列紊亂，肝血竇擴(kuò)張，大量肝細(xì)胞呈灶狀壞死；

（E）：短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位中劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞壞死數(shù)量明顯減少；

（F）：短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位高劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞壞死數(shù)量明顯減少；

（G）：短管兔耳草50-95%乙醇提取部位低劑量組肝索排列紊亂，肝血竇擴(kuò)張，肝細(xì)胞出現(xiàn)大量核增生及核固縮，大量肝細(xì)胞呈灶狀壞死；

（H）：短管兔耳草50-95%乙醇提取部位中劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞出現(xiàn)部分核固縮，肝細(xì)胞壞死數(shù)量明顯減少；

（I）：短管兔耳草50-95%乙醇提取部位高劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞出現(xiàn)少量核固縮，肝細(xì)胞壞死數(shù)量明顯減少；

圖2為各組小鼠肝組織TNF-α mRNA 表達(dá)的比較；圖中，1:正常組；2:模型組；3:聯(lián)苯雙酯組（陽性藥組）；4:短穗兔耳草4.0 g·kg-1給藥組；5:短穗兔耳草2.0 g·kg-1給藥組；6:短穗兔耳草1.0 g·kg-1給藥組；7:短管兔耳草4.0 g·kg-1給藥組；5:短管兔耳草2.0 g·kg-1給藥組；6:短管兔耳草1.0 g·kg-1給藥組；與正常組比較，* P＜0.05，** P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。

實(shí)施例1 短穗兔耳草有效部位的制備方法

短穗兔耳草稱取100g，用6倍體積（600ml）50%乙醇加熱回流2次，每次1h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到短穗兔耳草50%乙醇提取部位。

實(shí)施例2 短穗兔耳草有效部位的制備方法

將短穗兔耳草稱取100g，用10倍體積（1000ml）60%乙醇加熱回流3次，每次2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，得到短穗兔耳草60%乙醇提取部位。

實(shí)施例3 短穗兔耳草有效部位的制備方法

將短穗兔耳草稱取100g，用15倍體積（1500ml）95%乙醇加熱回流3次，每次2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，得到短穗兔耳草95%乙醇提取部位。

實(shí)施例4短管兔耳草有效部位的制備方法

短管兔耳草稱取100g，用6倍體積（600ml）50%乙醇加熱回流2次，每次1h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到短管兔耳草50%乙醇提取部位。

實(shí)施例5 短管兔耳草有效部位的制備方法

將短管兔耳草稱取100g，用10倍體積（1000ml）60%乙醇加熱回流3次，每次2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，得到短管兔耳草60%乙醇提取部位。

實(shí)施例6 短管兔耳草有效部位的制備方法

將短管兔耳草稱取100g，用15倍體積（1500ml）95%乙醇加熱回流3次，每次2h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，得到短管兔耳草95%乙醇提取部位。

實(shí)施例7 兩種兔耳草乙醇提取物對乙醇所致小鼠急性肝損傷的療效試驗(yàn)研究

1 材料與儀器

1.1材料和試劑

短穗兔耳草、短管兔耳草提取物，提取方法，見實(shí)施例1-6。

ALT測試盒（IFCC法）、AST測試盒（速率法）、TC測試盒（氧化酶法）、TG測試盒（酶法），均購自南昌百特生物高新技術(shù)股份有限公司；超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、還原性谷胱甘肽（GSH）、考馬斯亮藍(lán)測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所；TNF-α ELISA試劑盒，購自欣博盛生物；NF-κB ELISA試劑盒，購自武漢華美生物工程有限公司；動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒，購自天根生化科技（北京）有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒，購自普洛麥格（北京）生物技術(shù)有限公司；蘇木素-伊紅染液，購自南京建隸生物工程研究所；聯(lián)苯雙酯滴丸，購自浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司；無水乙醇，購自西隴化工股份有限公司。

1.2儀器

AU480全自動(dòng)生化分析儀，購自貝克曼庫爾特公司；UV-2100紫外分光光度計(jì)，購自北京瑞利分析儀器公司；DY89-II電動(dòng)勻漿機(jī)，購自寧波新芝生物科技股份有限公司；Allegra64R高速冷凍離心機(jī)，購自美國Beckman公司；Multiskan GO全波長酶標(biāo)儀，購自美國Thermo公司；超低溫冰箱，購自美國Thermo公司；電熱恒溫水溫箱，購自上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；電子分析天平，購自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；TKY-BMB型石蠟包埋機(jī)，購自湖北省泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司；包埋專用冷臺(tái)，購自湖北省泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司；半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)LeicaRM2245，購自北京長恒榮創(chuàng)科技有限公司；XI15正置顯微鏡，購自日本奧林巴斯有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

90只雄性小鼠，昆明種，SPF級，體重18-22g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（生產(chǎn)許可證號SCXK(湘)2013-0004）。飼養(yǎng)溫度：22-26℃，自由水食，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2實(shí)驗(yàn)方法

將小鼠隨機(jī)分為共9組，每組10只，分別為正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯組（陽性對照組）、短穗兔耳草低（SL）、中（SM）、高（SH）劑量組、短管兔耳草低（GL）、中（GM）、高（GH）劑量組。連續(xù)給藥7d，0.15ml/10g小鼠，正常組和模型組灌胃生理鹽水，陽性藥組灌胃聯(lián)苯雙酯（150mg/kg，450mg溶于45ml水），每天給藥4h后，以0.14ml/10g劑量一次灌胃50%乙醇溶液，灌胃后禁食，于造模后16h各組取血2份，全血5000r/min，離心5min，取血清，一份應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀按照說明測定ALT、AST、TC、TG各項(xiàng)指標(biāo)；另一份用酶標(biāo)儀按照說明測定TNF-α、NF-κB各項(xiàng)指標(biāo)。斷頸脫臼致死，并于冰臺(tái)快速分離相同部位肝臟組織3份，其中一份10%甲醛固定，制備病理切片；一份肝臟組織稱取0.1g左右，制備成10%的肝組織勻漿，5000r/min離心5min取上清液，按照各個(gè)測試盒說明書進(jìn)行測定SOD、MDA、GSH、蛋白的含量；另一份肝臟組織稱取15mg左右，按動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒和反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，測定TNF-α相對表達(dá)量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1短穗兔耳草和短管兔耳草提取物對乙醇致肝損傷小鼠血清ALT、AST、TC、TG含量的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，* P＜0.05，** P＜0.01；與模型組比較，^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

從表1可以看出，模型組與正常組比較，血清中ALT、AST、TC、TG含量顯著增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），表明造模成功。短穗兔耳草（2.0,4.0g/kg）中、高劑量組和短管兔耳草（4.0g/kg）高劑量組與模型組比較，ALT、AST、TC、TG含量顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），短管兔耳草（2.0g/kg）中劑量組TC、TG含量顯著降低（P＜0.05），短管兔耳草（2.0g/kg）中劑量組ALT、AST含量雖有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明短穗兔耳草60%乙醇提取部位和短管兔耳草60%乙醇提取部位都具有較強(qiáng)的保肝作用。

表2短穗兔耳草和短管兔耳草提取物對乙醇致肝損傷小鼠肝勻漿SOD、MDA、GSH活性的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，* P＜0.05, ** P＜0.01；與模型組比較，^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

從表2可以看出，模型組與正常組比較，肝組織勻漿中SOD、GSH含量極顯著降低，MDA含量極顯著升高，說明造模成功。短穗兔耳草（4.0g/kg）高劑量組和短管兔耳草（4.0g/kg）高劑量組與模型組比較，SOD、GSH含量明顯升高，MDA含量明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。短穗兔耳草（1.0g/kg,2.0g/kg）低、中劑量組SOD含量顯著升高，MDA含量顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），短管兔耳草（2.0g/kg）中劑量組MDA含量顯著降低，GSH含量顯著升高（P＜0.05）。

表3短穗兔耳草和短管兔耳草提取物對乙醇致肝損傷小鼠血清TNF-α、NF-kB含量的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，* P＜0.05, ** P＜0.01；與模型組比較，^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

從表3可以看出，模型組與正常組比較，血清中TNF-α、NF-kB含量極顯著升高，說明造模成功。短穗兔耳草（1.0,2.0,4.0g/kg）各劑量組和短管兔耳草（4.0g/kg）高劑量組與模型組比較，TNF-α、NF-kB含量明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。短管兔耳草（2.0g/kg）中劑量組NF-kB含量明顯降低（P＜0.05），短管兔耳草（1.0g/kg）低劑量組TNF-α、NF-kB含量和短管兔耳草（2.0g/kg）中劑量組TNF-α含量雖有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

參考圖1-2，RT-PCR檢測結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠肝組織中TNF-α mRNA的相對表達(dá)量極顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中TNF-α mRNA的相對表達(dá)量顯著降低（P＜0.01）；短穗兔耳草提取物1.0 g·kg^-1給藥組和短管兔耳草提取物1.0 g·kg^-1給藥組均顯著下調(diào)小鼠肝組織中TNF-α mRNA的相對表達(dá)量（P＜0.05）；短穗兔耳草提取物2.0，4.0 g·kg^-1給藥組和短管兔耳草提取物2.0，4.0 g·kg^-1給藥組小鼠肝組織中TNF-α mRNA的相對表達(dá)量均極顯著降低（P＜0.01）。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，短穗兔耳草50-95%乙醇提取部位和短管兔耳草50-95%乙醇提取部位均具有治療急性酒精性肝損傷的作用。

以上實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，可以對本發(fā)明做出任何修改和改動(dòng)，而所有這些修改和改動(dòng)同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍。