本發(fā)明涉及生物制劑的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法。

背景技術(shù)：

糖尿病主要是由于體內(nèi)胰島素相對或絕對不足所引起的糖代謝紊亂所致的一種全身性疾病，臨床以高血糖為主要原因。而餐后血糖升高的主要原因是飲食中的碳水化合物在α-葡萄糖苷酶的作用下釋放葡萄糖，小腸吸收葡萄糖進(jìn)入血液。通過抑制體內(nèi)α-葡萄糖苷酶的活性來降低餐后血糖是一種有效的治療方法。α-葡萄糖苷酶抑制劑(AGI,α-glucosidase inhibitor)是一類新型的口服降糖試劑，可通過調(diào)節(jié)小腸α-葡萄糖苷酶的活性，有效阻止糖類在小腸的消化和吸收，從而抑制血糖水平的升高，控制餐后高血糖，預(yù)防和治療糖尿病。臨床上應(yīng)用的α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物主要為：阿卡波糖(Acarbose)、伏格列波糖(Voglibose)和米格列醇(Miglitol)。由于阿卡波糖等均為合成藥物，口服時會出現(xiàn)惡心、嘔吐等胃腸道不良反應(yīng)。因此，越來越多的學(xué)者開始青睞于從其他方向篩選新的α-葡萄糖苷酶抑制劑，以期待尋找到安全并有效的藥物。

5-羥甲基糠醛(5-hydroxymethyl-2-furfural，C₆H₆O₃，5-HMF)是單糖如葡萄糖或果糖脫水產(chǎn)生的一種醛類化合物。研究表明，5-羥甲基糠醛具有抗心肌缺血、抗氧化、改善學(xué)習(xí)記憶、改善血液流變性、抗酪氨酸酶、非競爭抑制氧化左旋多巴等對機(jī)體積極的效應(yīng)。目前關(guān)于用5-羥甲基糠醛為原料制備α-葡萄糖苷酶抑制劑的研究還未見報道。有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計了一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法，本案由此產(chǎn)生。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法，以5-羥甲基糠醛為原料，經(jīng)酸催化、減壓濃縮干燥，以獲得一種有研究價值的α-葡萄糖苷酶抑制劑。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種α-葡萄糖苷酶抑制劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、酸催化：取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:1～1:250(g:mL)的比例加入0.01～4mol/L的鹽酸，于20～100℃水浴中催化3～110min；

步驟二、濃縮：將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮；制得所述α-葡萄糖苷酶抑制劑。

作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，在步驟一中，所述5-羥甲基糠醛與所述鹽酸的料液比1:200。

作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，在步驟一中，所述鹽酸的濃度為1.5mol/L。

作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，在步驟一中，所述水浴溫度為90℃。

作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，在步驟一中，所述酸催化的時間為60min。

作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，還包括步驟三、測定α-葡萄糖苷酶抑制活性：將5-羥甲基糠醛酸解液調(diào)至pH＝7，取8μl上述溶液，加入pH 6.8、0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液112μL，再加入0.2U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液20μL，37℃水浴10min，加入2.5mM對硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)20μL后于37℃反應(yīng)10min，加入0.2mol/L Na₂CO₃溶液(80μL)終止反應(yīng)，在405nm下測定吸光值。

采用本發(fā)明的技術(shù)方案后，具有以下有益效果：

1.本發(fā)明制備α-葡萄糖苷酶抑制劑工藝簡單，操作方便，時間短；

2.本發(fā)明制備的產(chǎn)物具有很強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性。本發(fā)明的α-葡萄糖苷酶抑制劑對α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度(IC₅₀)低于陽性對照阿卡波糖的0.66mg/mL。

本發(fā)明方法為制備降血糖活性藥物提供了新的研究方向。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的α-葡萄糖苷酶抑制劑對α-葡萄糖苷酶的抑制作用。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式以對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定：將5-羥甲基糠醛酸解液調(diào)至pH＝7，取8μl上述溶液，加入pH 6.8、0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液112μL，再加入0.2U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液20μL，37℃水浴10min，加入2.5mM對硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)20μL后于37℃反應(yīng)10min，加入0.2mol/L Na₂CO₃溶液(80μL)終止反應(yīng)，在405nm下測定吸光值。計算α-葡萄糖苷酶抑制率及半抑制濃度(IC₅₀，為對α-葡萄糖苷酶活性的抑制率達(dá)到50％時所需的樣品濃度)。

α-葡萄糖苷酶抑制率計算如下：

α-葡萄糖苷酶抑制率(％)＝[(a-b)-(c-d)]/[a-b]×100；

a：未加酸解液而加酶的混合液所測的吸光度；

b：未加酸解液也未加酶的混合液所測的吸光度；

c：加酸解液和酶的混合液所測的吸光度；

d：加酸解液而未加酶的混合液所測的吸光度。

實(shí)施例1

(1)取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:200(g:mL)的比例加入4mol/L的鹽酸，于20℃水浴中催化3min；

(2)將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得到產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其半抑制濃度為0.61mg/mL。

實(shí)施例2

(1)取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:250(g:mL)的比例加入4mol/L的鹽酸，于55℃水浴中催化110min；

(2)將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得到產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其半抑制濃度為0.44mg/mL。

實(shí)施例3

(1)取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:200(g:mL)的比例加入0.01mol/L的鹽酸，于90℃水浴中催化60min；

(2)將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得到產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其半抑制濃度為0.38mg/mL。

實(shí)施例4

(1)取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:1(g:mL)的比例加入4mol/L的鹽酸，于20℃水浴中催化110min；

(2)將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得到產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其半抑制濃度為0.45mg/mL。

實(shí)施例5

(1)取適量5-羥甲基糠醛，按料液比1:200(g:mL)的比例加入1.5mol/L的鹽酸，于90℃水浴中催化60min；

(2)將反應(yīng)產(chǎn)物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸干，或者中和后再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，所得到產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其半抑制濃度為0.26mg/mL。

如圖1所示，為實(shí)施例1-5所得產(chǎn)物對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，可知，實(shí)施例1-5的產(chǎn)物具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性。表1為實(shí)施例1-5的5-羥甲基糠醛酸催化濃縮液及陽性對照對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，可知，本發(fā)明的5-羥甲基糠醛酸催化濃縮液對α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度(IC₅₀)低于陽性對照阿卡波糖，其中，以實(shí)施例5的抑制效果最佳。

表1 5-羥甲基糠醛酸催化濃縮液及陽性對照對α-葡萄糖苷酶的抑制作用

當(dāng)然，本發(fā)明采用的鹽酸也可以是硫酸、醋酸、乳酸的一種。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。