本發(fā)明屬于藥物敷料領(lǐng)域，具體涉及一種皮膚創(chuàng)面用的濕性敷料及其制備方法。

背景技術(shù)：

皮膚創(chuàng)面不愈形成潰瘍，有幾個(gè)方面原因：手術(shù)切口、創(chuàng)面的感染、脂肪液化以及下肢靜脈曲張。創(chuàng)面愈合大致可分為4個(gè)漸次發(fā)生而又相互重疊的過程，即止血、炎癥反應(yīng)、增殖、重塑。糖尿病潰瘍的修復(fù)需要有充足的血液供應(yīng)和良好的創(chuàng)面愈合環(huán)境。近年來，不斷有研究發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面局部生長因子缺乏和活性下降等因素是造成創(chuàng)面愈合困難的重要原因，每位糖尿病患者在其生命周期中發(fā)生潰瘍的比例為15％。糖尿病潰瘍一旦發(fā)生，治療非常困難，容易形成慢性潰瘍且復(fù)發(fā)率高。糖尿病足潰瘍治療的重點(diǎn)：一是改善局部血液循環(huán)和營養(yǎng)，二是抗感染。

過去傳統(tǒng)的傷口治療原則為干燥愈合，就是讓傷口保持干燥結(jié)痂，促進(jìn)傷口愈合，由于傷口滲液的蒸發(fā)而形成干痂，敷料易粘連創(chuàng)面，換藥時(shí)容易損傷新生肉芽組織，導(dǎo)致傷口愈合速度緩慢及患者疼痛?，F(xiàn)在隨著創(chuàng)面護(hù)理的研究發(fā)展，提倡濕性愈合理論，認(rèn)為濕性環(huán)境更容易促進(jìn)傷口的愈合。原因在于濕性愈合時(shí)，保留在創(chuàng)面的滲出物含有組織蛋白溶解酶，促進(jìn)壞死組織和纖維蛋白的溶解，有利于吸收和起到清創(chuàng)的作用。濕性環(huán)境通常是在閉合性的敷料下形成，傷口微環(huán)境常形成低氧張力，在相對(duì)低氧環(huán)境下，成纖維細(xì)胞生長的速度最快并刺激巨噬細(xì)胞釋放多種生長因子，加速血管形成，促進(jìn)肉芽組織的形成同時(shí)濕性的環(huán)境保持了創(chuàng)面的恒溫，利于組織的無結(jié)痂愈合，避免了新生肉芽組織再次機(jī)械性損傷，減輕疼痛。

血竭又名麒麟竭，龍血竭為純中藥制劑，系百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹的含脂木材提取得到的樹脂，具有活血化瘀、消腫止痛、收斂止血、軟堅(jiān)散結(jié)和生肌斂瘡等顯著功效；現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)龍血竭中含有的龍血竭皂甙具有明顯的抗菌鎮(zhèn)痛作用；植物防衛(wèi)素含黃體酮成分，屬于天然的抗菌防腐物質(zhì)，具有去腐生肌作用。已有多項(xiàng)研究證實(shí)，龍血竭對(duì)糖尿病足潰瘍、難愈性皮膚創(chuàng)面、壓瘡等皮膚損傷有良好愈合療效。對(duì)血竭粉進(jìn)行超微化處理，使其粒徑變小，暴露面積增大，增大皮膚接觸面，溶出物增加，提高療效。

重組人表皮生長因子是一類具有促進(jìn)細(xì)胞增殖分化及傷口的血管化等生物活性的多肽或蛋白質(zhì)，對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)起重要的調(diào)控作用，可明顯促進(jìn)上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等的增殖、分化和遷移，促進(jìn)新生肉芽組織形成和傷口的再上皮化，加速皮膚組織的創(chuàng)傷愈合。但重組人表皮生長因子無去腐生肌的作用，用于大量壞死組織的創(chuàng)面欠佳，而龍血竭膠囊由天然植物中藥龍血樹有效成份研制而成，含有血竭皂苷和植物防衛(wèi)素等多種活性成份，具有抗炎去腐生肌、活血化瘀、散痛止血功效，兩者合用充分發(fā)揮了去腐生肌、促進(jìn)組織愈合的作用，可改善局部血液循環(huán)，改善局部營養(yǎng)狀態(tài)，促進(jìn)肉芽組織生長，加速創(chuàng)面愈合，臨床效果明顯。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要提供了一種皮膚創(chuàng)面用的濕性敷料及其制備方法，制備的敷料可改善局部血液循環(huán)，改善局部營養(yǎng)狀態(tài)，促進(jìn)肉芽組織生長，加速創(chuàng)面愈合，臨床效果顯著。其技術(shù)方案如下：

一種皮膚創(chuàng)面用的濕性敷料，其包括以下組分：0.05-0.3wt％的龍血竭、0.0001-0.001wt％的表皮生長因子、1-5wt％的凝膠基質(zhì)、2-10wt％的保濕劑、0.5-5wt％的促滲劑、0.01-2wt％的抑菌劑，余量為注射用水。

優(yōu)選的，所述龍血竭為龍血竭超微粉，所述龍血竭超微粉的粒徑不大于10μm。

優(yōu)選的，所述表皮生長因子選自重組人表皮生長因子和成纖維細(xì)胞生長因子中的一種或兩種，所述表皮生長因子的質(zhì)量濃度為1000-10000IU/ml。

優(yōu)選的，所述凝膠基質(zhì)選自羥甲基纖維素、羥丙甲纖維素、卡波姆和玻璃酸鈉中的一種或幾種。

優(yōu)選的，所述保濕劑為甘油和/或丙二醇。

優(yōu)選的，所述促滲劑選自丙二醇、氮酮和尿素中的一種或幾種。

優(yōu)選的，所述抑菌劑選自尼泊金酯類、苯甲酸/苯甲酸鈉、季銨鹽-15、乳酸鏈球菌素和苯扎溴銨中的一種或幾種。

優(yōu)選的，所述濕性敷料的pH為5.5-7.5，采用氫氧化鈉、鹽酸、硼酸緩沖液或磷酸緩沖液調(diào)節(jié)。

一種皮膚創(chuàng)面用的濕性敷料的制備方法，包括以下步驟：

(1)先使用氣流粉碎機(jī)干法粉碎龍血竭，得粗粒，然后使用球磨機(jī)干法研磨粗粒，得龍血竭超微粉粒徑不大于10μm，干粉收集待用；

(2)量取配方量40-50％的注射用水，加熱至70-90℃，將配方量凝膠基質(zhì)加入其中，攪拌直至成為凝膠基質(zhì)；

(3)量取40-50％的注射用水，將處方量表皮生長因子、保濕劑、促滲劑、抑菌劑加入其中，攪拌均勻；

(4)將(3)中配制的溶液倒入(2)制備的凝膠基質(zhì)中，再加入步驟(1)制備的龍血竭超微粉，攪拌并調(diào)節(jié)pH至5.5-7.5；

(4)補(bǔ)足注射用水，攪拌均勻，灌裝，即得濕性敷料。

采用上述治療皮膚潰瘍的濕性敷料及其制備方法，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

在敷料中加入表皮生長因子，能夠促進(jìn)皮膚組織修復(fù)，生物相容性好，且龍血竭能彌補(bǔ)生長因子治療皮膚潰瘍的缺陷，微粉化處理后，顯著提高藥效，起到高效治療效果；凝膠基質(zhì)為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，藥物溶解其中可通過凝膠層持續(xù)釋藥，延長藥物作用時(shí)間，保持創(chuàng)口在濕潤環(huán)境下，有利于傷口愈合，使傷口不會(huì)結(jié)痂。本發(fā)明的濕性敷料可以直接涂抹于創(chuàng)口表面，也可以聯(lián)合醫(yī)用透明貼膜和紗布使用，防止藥物被洗掉或擦掉。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1.血竭0.17wt％、重組人表皮生長因子0.0004wt％、羥甲基纖維素1.7wt％、甘油2wt％、氮酮0.5wt％、尼泊金乙酯1wt％、5％NaOH調(diào)節(jié)pH為6.0，余量為注射用水。

2.操作方法：

(1)在溫度20℃，相對(duì)濕度45％的條件下，使用氣流粉碎機(jī)，干法粉碎龍血竭1h，粉碎后粒徑約10μm，然后在環(huán)境溫度20℃，相對(duì)濕度35％的條件下，使用球磨機(jī)，轉(zhuǎn)速為1000rpm/min干法研磨5次，每次研磨5min，使血竭粉粒徑小于10μm，干粉收集待用；

(2)量取配方量40％重量的注射用水，加熱至80℃，將處方量羥甲基纖維素加入其中，邊攪拌邊降溫，攪拌速率200rpm，待降至常溫后即為凝膠基質(zhì)；

(3)量取處方量50％的注射用水，將處方量生長因子、甘油、氮酮、尼泊金乙酯加入其中，攪拌均勻；

(4)將(3)中溶液倒入(2)中，再加入處方量血竭粉，攪拌20分鐘，加5％氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH為6.0；

(5)補(bǔ)足注射用水，攪拌均勻，灌裝，即得濕性敷料。

實(shí)施例2

1.血竭0.3wt％、重組人表皮生長因子0.001wt％、羥丙甲纖維素5wt％、甘油5wt％、尿素2wt％、乳酸鏈球菌素0.01wt％、5％NaOH調(diào)節(jié)pH為7.0，余量為注射用水。

2.操作方法：

(1)在溫度10℃，相對(duì)濕度25％的條件下，使用氣流粉碎機(jī)，干法粉碎龍血竭1h，粉碎后粒徑約10μm，然后在環(huán)境溫度15℃，相對(duì)濕度55％的條件下，使用球磨機(jī)，轉(zhuǎn)速為1200rpm/min干法研磨4次，每次研磨6min，血竭粉粒徑小于10μm，干粉收集待用；

(2)量取處方量60％的注射用水，加熱至90℃，將處方量羥丙甲纖維素加入其中，邊攪拌邊降溫，攪拌速率300rpm，待降至常溫后即為凝膠基質(zhì)；

(3)量取處方量40％的注射用水，將處方量生長因子、甘油、氮酮、乳酸鏈球菌素加入其中，攪拌均勻；

(4)將(3)中溶液倒入(2)中，再加入處方量血竭粉，攪拌20分鐘，加5％氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH為7.0；

(5)攪拌均勻，灌裝，即得濕性敷料。

實(shí)施例3

1.龍血竭0.05wt％、重組人表皮生長因子0.0001wt％、卡波姆3wt％、甘油4wt％、丙二醇6wt％、苯甲酸鈉2wt％、磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH至5.5，余量為注射用水。

2.操作方法：

(1)在溫度10℃，相對(duì)濕度65％的條件下，使用氣流粉碎機(jī)，干法粉碎血竭1h，粉碎后粒徑約10μm，然后在環(huán)境溫度30℃，相對(duì)濕度55％的條件下，使用球磨機(jī)，轉(zhuǎn)速為700rpm/min干法研磨6次，每次研磨2min，血竭粉粒徑小于10μm，干粉收集待用；

(2)量取處方量40％的注射用水，加熱至80℃，將處方量卡波姆加入其中，邊攪拌邊降溫，攪拌速率200rpm，待降至常溫后即為凝膠基質(zhì)；

(3)量取處方量40％的注射用水，將處方量生長因子、甘油、丙二醇、苯甲酸鈉加入其中，攪拌均勻；

(4)將(3)中溶液倒入(2)中，再加入處方量血竭粉，攪拌15分鐘，加磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH為5.5；

(5)補(bǔ)足注射用水，攪拌均勻，灌裝，即得。

實(shí)施例4

1.龍血竭0.24，成纖維細(xì)胞生長因子0.0008，玻璃酸鈉2，丙二醇4，季銨鹽-15 0.07，硼酸緩沖液調(diào)節(jié)溶液pH為7.5，余量為注射用水。

2.操作步驟：

(1)在溫度15℃，相對(duì)濕度25％的條件下，使用氣流粉碎機(jī)，干法粉碎血竭1h，粉碎后粒徑約10μm，然后在環(huán)境溫度15℃，相對(duì)濕度25％的條件下，使用球磨機(jī)，轉(zhuǎn)速為800rpm/min干法研磨4次，每次研磨4min，血竭粉粒徑小于10μm，干粉收集待用；

(2)量取處方量50％的注射用水，將處方量玻璃酸鈉加入其中，攪拌速率1500rpm，直至成為凝膠基質(zhì)；

(3)量取處方量40％的注射用水，將處方量生長因子、甘油、丙二醇、季銨鹽-15加入其中，攪拌均勻；

(4)將(3)中溶液倒入(2)中，再加入處方量血竭粉，攪拌18分鐘，加5硼酸緩沖液調(diào)節(jié)pH為7.5；

(5)補(bǔ)足注射用水，攪拌均勻，灌裝，即得。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

一、考察制劑對(duì)大鼠創(chuàng)面損傷修復(fù)作用

1.樣品：實(shí)驗(yàn)組：按照本實(shí)施例1制備的敷料樣品；陽性對(duì)照組：生長因子敷料(除不含血竭，其余處方同實(shí)施例1)；陰性對(duì)照組：無菌生理鹽水。

2.動(dòng)物：健康成年SD大鼠30只，體重200-250g，雄性。

3.操作：

將30只大鼠隨機(jī)分為3組，各10只，組內(nèi)編號(hào)，分別為試驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組。3組大鼠腹部注射麻醉后，于背部兩側(cè)制作機(jī)械性全層皮膚創(chuàng)面，創(chuàng)面直徑2cm，呈圓形，深及皮下肌筋膜，用無菌紗布?jí)浩戎寡?。試?yàn)組及陽性對(duì)照組用相應(yīng)濕性敷料覆蓋，外層無菌敷料包扎，對(duì)照組以0.2mL生理鹽水載入紗布覆蓋創(chuàng)面，隔日更換。造模時(shí)及造模后第3、6、10、16天測定創(chuàng)面愈合率，造模后第3、6天測創(chuàng)面炎癥積分，造模時(shí)及造模后第3、6、10天取創(chuàng)面組織用于檢測I/Ⅲ型膠原比例。①創(chuàng)面愈合率計(jì)算：用Image J軟件測定創(chuàng)面面積，按下列公式計(jì)算創(chuàng)面愈合率：愈合率＝[(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積]×100％。②創(chuàng)面炎癥積分：創(chuàng)面滲液性狀分為血清樣、漿液樣、混濁樣；滲液量為極少量、少量、中量、大量時(shí)分別計(jì)為1、2、3、4分，滲液量以浸透紗布的層數(shù)來觀察(<1層為極少量，≥1層但<4層為少量，≥4層但<8層為中量，≥8層為大量)，創(chuàng)面愈合為0分。③創(chuàng)面I/Ⅲ型膠原比例測定：膠原提取采用乙酸-胃蛋白酶法，膠原檢測采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以表示，用t檢驗(yàn)比較組間差異，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.結(jié)果：

(1)各組大鼠創(chuàng)面愈合率比較結(jié)果見表1。

由結(jié)果可見，治療第3天，三組創(chuàng)面愈合率即有差別，試驗(yàn)組愈合率要高于其他兩組，其創(chuàng)面內(nèi)明顯可見新生毛細(xì)血管、細(xì)胞；治療第7天，各組愈合率均有明顯提高，其中試驗(yàn)組愈合率已到75％，創(chuàng)緣上皮增殖更明顯，創(chuàng)面內(nèi)肉芽組織增多，成纖維細(xì)胞及毛細(xì)血管數(shù)目更多，愈合效果明顯；治療第10天，試驗(yàn)組愈合率已到90％以上，創(chuàng)面新生表皮細(xì)胞已基本覆蓋傷口，并可見明顯角化，陽性對(duì)照組創(chuàng)面膠原纖維也明顯多于陰性對(duì)照組；治療第16天，試驗(yàn)組基本完全愈合，陽性對(duì)照組愈合率也已達(dá)到95％，顯著高于陰性對(duì)照組。

表1不同時(shí)間創(chuàng)面愈合率

注：與陰性對(duì)照組比較，p<0.01；與陽性對(duì)照組比較，p<0.05。

(2)各組大鼠創(chuàng)面炎癥積分比較結(jié)果果見表2。

治療第3天，陰性對(duì)照組創(chuàng)面積分較高，主要表現(xiàn)為創(chuàng)面有中等量漿液滲液，陽性對(duì)照組及試驗(yàn)組滲液明顯少于陰性對(duì)照組，表現(xiàn)為少量血清液滲液；治療第7天，各組創(chuàng)面滲液量均顯著減少，陰性對(duì)照組仍有部分創(chuàng)面滲液為漿液樣，其他2組均表現(xiàn)為極少量血清樣滲液，其中試驗(yàn)組積分低于陽性對(duì)照組；治療第10天，陰性對(duì)照組仍有少量滲液，其他兩組創(chuàng)面趨向愈合，炎癥不明顯，其中試驗(yàn)組優(yōu)于陽性對(duì)照組。

表2各組大鼠創(chuàng)面炎癥積分比較

注：與陰性對(duì)照組比較，p<0.01；與陽性對(duì)照組比較，p<0.05。

(3)創(chuàng)面I/Ⅲ型膠原比例測定

皮膚中I、Ⅲ型膠原含量較高，在創(chuàng)面修復(fù)中以Ⅲ型膠原為主，當(dāng)膠原中新生膠原增加時(shí)，I、Ⅲ型膠原比值降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3，結(jié)果可見，3組比值均呈下降趨勢，明顯試驗(yàn)組降低更明顯。

表3各組創(chuàng)面I/Ⅲ型膠原比例測定表

注：與陰性對(duì)照組比較，p<0.01；與陽性對(duì)照組比較，p<0.05。

以上結(jié)果可見，生長因子聯(lián)合血竭用于創(chuàng)面修復(fù)有顯著促進(jìn)創(chuàng)面愈合功效，抑制炎癥等并發(fā)癥發(fā)生，本制劑性能穩(wěn)定，治療效果顯著。

二、考察制劑用于糖尿病皮膚潰瘍治療作用

1.樣品：治療組：按照本實(shí)施例3制備的濕性敷料，EGF凝膠組(不含龍血竭，其他組分同實(shí)施例3)，龍血竭組(不含生長因子，其他組分同實(shí)施例3)；

2.動(dòng)物：健康成年SD大鼠30只，體重200-250g，雌雄各半。

3.操作：

造模以pH4.6的0.1mmol/L的枸櫞酸緩沖液溶解鏈脲佐菌素(STZ)，配成1％溶液，選取42只SD大鼠以60mg/kg連續(xù)3d腹腔內(nèi)注射誘導(dǎo)糖尿病，注射3d后尾靜脈采血和收集尿液，用傳統(tǒng)的氧化酶反應(yīng)檢測血糖水平。誘導(dǎo)后血糖水平>16.7mmol/L時(shí)，即可視為糖尿病模型建立成功。選取造模成功的大鼠36只制作糖尿病皮膚潰瘍模型，將糖尿病大鼠用3％戊巴比妥鈉溶液30mg/kg腹腔注射麻醉，背部剪毛，用75％乙醇擦拭消毒，在脊椎兩側(cè)做直徑15mm的圓形標(biāo)記，用外科方法切除標(biāo)記處全層皮膚，止血后用無菌紗布覆蓋，即成糖尿病皮膚潰瘍模型。將36只糖尿病皮膚潰瘍模型大水隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、龍血竭組、EGF組，每組12只。用相應(yīng)敷料覆蓋創(chuàng)口表面，每天換藥1次，療程2周。

評(píng)價(jià)潰瘍愈合面積的觀察：各組動(dòng)物分別于傷后第3、7、10、14天，用透明膜覆蓋創(chuàng)面畫膜、剪膜，稱重量并換算成面積。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以表示，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.結(jié)果：

(1)潰瘍面愈合面積結(jié)果見表4所示。

治療組創(chuàng)面面積減少明顯較其他2組快，血竭組比EGF組愈合速率快，與EGF組比較，p<0.05；與血竭組比較，p<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4各組潰瘍創(chuàng)面愈合面積

由結(jié)果可知，血竭和生長因子聯(lián)合使用對(duì)糖尿病皮膚潰瘍的治療效果優(yōu)于單一組分，對(duì)臨床用藥有指導(dǎo)意義。

對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以及形變，而所有的這些改變以及形變都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。