本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物提取及發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域、化妝品領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

隨著人們生活水平的不斷提高，人們?cè)诘玫交A(chǔ)物質(zhì)水平的滿足之后，還追求享受資料消費(fèi)，特別是對(duì)于個(gè)人形象方面，追求比如美白，抗衰老等功效的化妝品，這為抗衰老的功能性個(gè)人護(hù)理品提供了寬廣的市場(chǎng)前景。

現(xiàn)有的抗衰老用品中，較多的是選用某種含有抗衰老功能的植物進(jìn)行植物提取和純化，但這種方式會(huì)造成植物原料的浪費(fèi)，同時(shí)因?yàn)橹参锾崛〕鰜淼奈镔|(zhì)中具有大量的分子物質(zhì)，難以在較短時(shí)間內(nèi)被皮膚吸收，活性物吸收率較低。并且為了使提取液具有一定的保質(zhì)期，需要往里添加防腐劑，增加了提取物的刺激性，適用范圍低。

龍舌蘭麻是龍舌蘭科龍舌蘭屬多年生草本植物的總稱。葉纖維作物，纖維硬長(zhǎng)，質(zhì)地優(yōu)良，是重要的工業(yè)用料。其中，劍麻、灰葉劍麻、馬蓋麻、假菠蘿麻、番麻均為多年生草本，圓錐花序，花軸高大，原產(chǎn)墨西哥。龍舌蘭麻具有抗衰老功效，主要含有甾體皂苷、甾體皂苷元，尚含有 β-谷甾醇，三十四烷醇 ，十六烷酸三十四烷醇酯，5-羥基-7-甲氧基-2-三十三烷基-4-H-苯并吡喃-4-酮，龍舌蘭黃烷酮， 胡蘿卜苷，β-谷甾醇-3-O-阿拉伯呋喃糖基-( 1→4) -α -L-鼠李糖吡喃糖基-( 1→4) -β-D-葡萄吡喃糖苷等活性物質(zhì)，使其具有抗衰老、抗輻射的效果。

但是，如果直接對(duì)龍舌蘭麻進(jìn)行植物提取純化，并將其提取液直接應(yīng)用于個(gè)人護(hù)理品中，由于其活性成分分子量較大的緣故，使得其活性成分在皮膚上的吸收率較低，造成大量浪費(fèi)，同時(shí)直接提取的植物提取液，剩余的料渣較多，其中同樣含有諸多可利用的成分，同樣造成原料的浪費(fèi)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于抗衰老化妝品的龍舌蘭發(fā)酵物，還提供其制備方法及應(yīng)用。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種用于抗衰老化妝品的龍舌蘭發(fā)酵物，所述發(fā)酵物的發(fā)酵原料含有以下重量百分比的組分：龍舌蘭麻 50-98%，尿素0.5-2%，酵母菌 0.5-2%，乳酸菌 0.5-1.5%，去離子水補(bǔ)足至100%。

優(yōu)選的，所述發(fā)酵物由以下重量百分比的原料發(fā)酵而成：龍舌蘭麻 86%，尿素0.8%，酵母菌1.8%，乳酸菌 0.9%，去離子水補(bǔ)足至100%。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述龍舌蘭麻優(yōu)選龍舌蘭的塊莖部分，次選為龍舌蘭的葉，或者葉與塊莖的混合。

上述龍舌蘭發(fā)酵物的制備方法，制備步驟如下：

1）、將龍舌蘭麻進(jìn)行清洗，清洗之后加入去離子水，進(jìn)行粗粉碎，得到混合的龍舌蘭原漿；

2）、將乳酸菌和酵母菌分別進(jìn)行活化，分別得到乳酸菌二級(jí)種子液、酵母菌二級(jí)種子液；

3）、將步驟2所得的乳酸菌二級(jí)種子液、酵母菌二級(jí)種子液接種進(jìn)入步驟1所得的龍舌蘭原漿中，進(jìn)行粗發(fā)酵，過程中補(bǔ)加尿素，得到龍舌蘭粗發(fā)酵物；

4）、將步驟3所得的龍舌蘭粗發(fā)酵物進(jìn)行攪拌離心過濾，除去鞣質(zhì)、纖維等濾渣，得到龍舌蘭粗發(fā)酵物濾液；

5）、將步驟4所得到的龍舌蘭粗發(fā)酵物濾液加入萃取劑進(jìn)行萃取，充分?jǐn)嚢杈鶆?，靜置分層，下層為萃取劑沉淀溶解液，上層為其余濾液；

6）、將步驟5得到的萃取劑沉淀溶解液用緩沖液洗脫，提純收集其酶液；

7）、將步驟5所得到的其余濾液，經(jīng)過高溫?zé)嶙冃裕x心分離去除雜蛋白，得到多糖類提取物；

8）、將步驟7得到多糖類提取物進(jìn)行降溫處理，之后先經(jīng)過超濾膜分離、再經(jīng)過納米膜分離提純后，加入多元醇，得到龍舌蘭精細(xì)發(fā)酵物；該步驟中加入多元醇可提高最終產(chǎn)品的穩(wěn)定性和易用性，并且提升天然防腐劑的防腐效果，使用任一種多元醇都可以，優(yōu)選1，3-丁二醇。

9）、將步驟6所得的酶液，按一定比例與步驟8所得的龍舌蘭精細(xì)發(fā)酵物進(jìn)行混合，得到用于抗衰老化妝品的龍舌蘭發(fā)酵物。

進(jìn)一步的，步驟3中，粗發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為6-10天，粗發(fā)酵溫度為25-28℃，粗發(fā)酵氣壓為0.08-0.1Mpa。

進(jìn)一步的，步驟5中，萃取操作所用的萃取劑為丙酮，緩沖液為0.003-0.007mol·L^-1 pH 7.0-7.5 的Tris-HCl溶液，萃取分離溫度為2-5℃。

進(jìn)一步的，步驟6中，緩沖液為0.003-0.007mol·L^-1 pH 7.0-7.5 的Tris-HCl溶液，洗脫速率為流速 為4.2-4.6mL/4min，提純收集方法為Sephadex凝膠過濾法，收集兩個(gè)蛋白吸收峰的酶液。

進(jìn)一步的，步驟8中，超濾膜分離溫度為30℃，超濾膜分離壓力0.1-0.13Mpa，超濾膜透過率為48-52%；納米膜分離溫度為30℃，納米膜分離壓力為0.4-0.6Mpa，納米膜透過率為85-95%。

上述制備方法制備的龍舌蘭發(fā)酵物的個(gè)人護(hù)理組合物。

所述個(gè)人護(hù)理組合物為膏霜、乳液、凝膠、洗劑、爽膚水中的任意一種。

本發(fā)明具有如下有益效果：

1、本發(fā)明用發(fā)酵工藝對(duì)龍舌蘭植物進(jìn)行發(fā)酵處理，提高龍舌蘭植物原料的利用率，同時(shí)提高活性物成分在皮膚上的吸收率，并且聯(lián)同丙酮萃取方法和酶分離工藝，避免了原料的浪費(fèi)，超氧化岐化酶含量較一般的提取液更多，具有更好的單一針對(duì)清除自由基的功能，抗氧化抗衰老效果更加明顯，重復(fù)性好。

2、通過發(fā)酵得到的龍舌蘭發(fā)酵物具有大小分子結(jié)合的活性物分子，更容易被吸收，輔助超氧化岐化酶的抗氧化效果，同時(shí)補(bǔ)充皮膚營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使抗衰老效果更加地明顯。

3、酵母菌和乳酸均共生協(xié)同，減少菌類的用量，提高發(fā)酵速率，降低能耗。

4、通過發(fā)酵得到的龍舌蘭發(fā)酵物本身具有防腐的物質(zhì)，不需另外添加防腐劑也能存放較長(zhǎng)時(shí)間，因此刺激性低，適用范圍廣，保證產(chǎn)品的安全性、功效性和穩(wěn)定性。

附圖說明

圖1為實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4、對(duì)比例3、對(duì)比例4和空白對(duì)照在志愿者眼角區(qū)皮膚的細(xì)紋深度數(shù)值隨使用時(shí)間的變化趨勢(shì)圖。

圖2為實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4、對(duì)比例3、對(duì)比例4和空白對(duì)照在志愿者眼角區(qū)皮膚的細(xì)紋總面積數(shù)值隨使用時(shí)間的變化趨勢(shì)圖。

圖3為實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4、對(duì)比例3、對(duì)比例4和空白對(duì)照在志愿者眼角區(qū)皮膚彈性數(shù)值隨使用時(shí)間的變化趨勢(shì)圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合試驗(yàn)例及具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

除非另外指明，所有的百分比、份數(shù)和比例均基于與所列成分相關(guān)的含量重量計(jì)，并因此不包括可能包含在可商購獲得的原料中的載體和副產(chǎn)物。

實(shí)施例1

含超氧化歧化酶的用于化妝品抗衰老的龍舌蘭發(fā)酵物的制備工藝：

1、將占全部發(fā)酵原料重量百分比86%的龍舌蘭麻進(jìn)行清洗，清洗之后加入占全部發(fā)酵原料重量百分比10.5%的去離子水，進(jìn)行粗粉碎，得到混合的龍舌蘭原漿；

2、將占全部發(fā)酵原料重量百分比0.9%的乳酸菌和1.8%的酵母菌分別進(jìn)行活化， 37℃培養(yǎng)24h分別得到乳酸菌二級(jí)種子液、酵母菌二級(jí)種子液；

3、將步驟2所得的乳酸菌二級(jí)種子液、酵母菌二級(jí)種子液接種進(jìn)入步驟1所得的龍舌蘭原漿中，進(jìn)行粗發(fā)酵，粗發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為7天，粗發(fā)酵溫度為26℃，粗發(fā)酵氣壓為0.1Mpa，過程中補(bǔ)加占全部發(fā)酵原料重量百分比0.8%的尿素，得到龍舌蘭粗發(fā)酵物；

4、將步驟3所得的龍舌蘭粗發(fā)酵物進(jìn)行攪拌離心過濾，除去鞣質(zhì)、纖維等濾渣，得到龍舌蘭粗發(fā)酵物濾液；

5、將步驟4所得到的龍舌蘭粗發(fā)酵物濾液用丙酮進(jìn)行萃取操作，充分?jǐn)嚢杈鶆?，靜置分層，下層為萃取劑沉淀溶解液，上層為其余濾液；

6、將步驟5得到的萃取劑沉淀溶解液用0.005mol·L^-1 pH 7.2 的Tris-HCl溶液緩沖液洗脫，提純收集其酶液；

7、將步驟4所得到的其余濾液，經(jīng)過高溫65℃熱變性，離心分離去除雜蛋白，得到多糖類提取物；

8、將步驟7得到多糖類提取物進(jìn)行降溫處理，之后先經(jīng)過超濾膜分離、再經(jīng)過納米膜分離提純后，加入1，3-丁二醇，得到龍舌蘭精細(xì)發(fā)酵物；

9、將步驟6所得的酶液按酶液66%、龍舌蘭精細(xì)發(fā)酵物34%的比例混合得到用于化妝品抗衰老的龍舌蘭發(fā)酵物。

對(duì)比例1 的制備工藝與實(shí)施例1相同，但對(duì)比例1不在過程中補(bǔ)加尿素。

對(duì)比例2的制備工藝與實(shí)施例1相同，但對(duì)比例2直接去掉乳酸菌。

表1為實(shí)施例1、對(duì)比例1-2的成分組成；表2為所制發(fā)酵物的蛋白含量測(cè)試。

表1：實(shí)施例1、對(duì)比例1-2的成分組成比例

表2：實(shí)施例1、對(duì)比例1-2發(fā)酵物蛋白檢測(cè)結(jié)果

注：a、b、c在同一列字母中，相同表示差異不顯著，不同則表示差異顯著（p<0.05）

實(shí)施例2

含龍舌蘭發(fā)酵物的膏霜的制備：

（1）將辛酸/癸酸甘油三酯、碳酸二辛酯、硬脂酸甘油酯/peg-100硬脂酸酯稱量在一起作為油相，加熱至75℃；

（2）將卡波、1，3-丁二醇混合分散，加入純水，攪拌加熱至75℃，作為水相；

（3）將油相倒入水相中，均質(zhì)機(jī)均質(zhì)5min，均質(zhì)速率為3000rpm；

（4）冷卻降溫至40~45℃，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)至5.8；

（5）冷卻降溫至30~35℃加入實(shí)施例1制備的龍舌蘭發(fā)酵物；繼續(xù)攪拌，降溫至室溫停止攪拌。

實(shí)施例3的制備方法與實(shí)施例2相同；

對(duì)比例3的制備方法與實(shí)施例2相同，但用龍舌蘭提取物代替龍舌蘭發(fā)酵物；

對(duì)比例4的制備方法與實(shí)施例2相同，但用市售的抗衰老組合物代替龍舌蘭發(fā)酵物；

實(shí)施例2為含龍舌蘭發(fā)酵物的膏霜，實(shí)施例3為含龍舌蘭發(fā)酵物的凝膠，實(shí)施例4為含龍舌蘭發(fā)酵物的爽膚水，制備方法使用本領(lǐng)域公知方法，在此不作詳細(xì)說明。

表3為實(shí)施例2-3、對(duì)比例3-4的配方組成。

表3 實(shí)施例2、實(shí)施例3、對(duì)比例3、對(duì)比例4的配方組成

功效評(píng)估測(cè)試，隨機(jī)挑選志愿者，并進(jìn)行入組篩選，最終每組35人，用多功能皮膚測(cè)試儀分析受試者皮膚，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得表4的功效測(cè)試結(jié)果。

表4實(shí)施例2-4、對(duì)比例3-4的功效測(cè)試結(jié)果

對(duì)比實(shí)施例1和對(duì)比例1，可以得知在發(fā)酵過程中添加了尿素的發(fā)酵物，其真蛋白含量明顯高于未在發(fā)酵過程中添加尿素的發(fā)酵物；對(duì)比實(shí)施例1和對(duì)比例2可以知道，乳酸菌和酵母菌協(xié)同發(fā)酵，同樣具有提高發(fā)酵產(chǎn)物中真蛋白含量的作用；從圖1到圖3可得知，添加了龍舌蘭發(fā)酵物的膏霜的抗衰老效果明顯高于添加了龍舌蘭植物提取物的膏霜，并且皮膚不適人數(shù)更少，說明了經(jīng)過發(fā)酵后并且提高超氧化岐化酶的龍舌蘭發(fā)酵物具有更好的抗氧化、抗衰老效果， 適用范圍更廣；對(duì)比例4為市面上銷售較好的抗衰老組合物，抗衰老效果一般，皮膚不適人數(shù)較多，適用范圍較小。

對(duì)本發(fā)明中術(shù)語的任何含義或定義與以引用方式并入的文件中術(shù)語的任何含義或定義矛盾時(shí)，應(yīng)當(dāng)服從在本發(fā)明中賦予該術(shù)語的含義或定義。盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，但是對(duì)那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的是，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可作出許多其它的更改和修改。因此，隨附權(quán)利要求書旨在涵蓋本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些改變和變型。