本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及用于防治阿爾茨海默病的保健品及其制備方法。

背景技術(shù)：

隨著人類社會(huì)物質(zhì)、經(jīng)濟(jì)水平的改善，人類社會(huì)逐步進(jìn)入老年性社會(huì)。伴隨而來的是阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病發(fā)病率逐年上升。目前認(rèn)為，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的改變及超氧化物積聚是導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡及退化的主要原因。

大豆，是豆類中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高的品種，在百種天然的食品中，它名列榜首，含有大量的不飽和脂肪酸，多種微量元素、維生素及優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)。大豆肽是指大豆蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，它由大豆蛋白水解后的許多種肽分子混合物所組成，產(chǎn)品中還含有少量游離氨基酸、糖類和無機(jī)鹽等成分。大豆肽含有人體必需的8種氨基酸，除蛋氨酸為限制氨基酸外，其它氨其酸，均超過或接近WHO推薦標(biāo)準(zhǔn)，因此大豆肽具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。中國(guó)是大豆生產(chǎn)大國(guó)，但有關(guān)大豆肽功能活性研究及機(jī)制探討遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于西方發(fā)達(dá)國(guó)家。開發(fā)大豆肽相關(guān)產(chǎn)品及深入研究大豆肽功能活性機(jī)制任重道遠(yuǎn)。

大豆肽通常是由3～6個(gè)氨基酸組成，其分子量分布以低于1000Da為主，主要出峰位置在分子量300～700 Da范圍內(nèi)。大豆肽的蛋白質(zhì)含量為85%左右，其氨基酸組成幾乎完全與大豆蛋白質(zhì)一樣，必需氨基酸的平衡良好，含量也豐富。

從pH與溶解性看，大豆蛋白質(zhì)在pH4.5等電點(diǎn)附近，會(huì)形成沉淀。但大豆肽保持溶解狀態(tài)，并具有抑制蛋白質(zhì)形成凝膠、較強(qiáng)的吸濕性和保濕性、調(diào)整蛋白質(zhì)食品的硬度、改善口感和易消化吸收等特性。由此可見，大豆肽很適合于生產(chǎn)速溶飲品和高蛋白質(zhì)食品。

過去的科學(xué)認(rèn)為，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式吸收。近兩年的科學(xué)研究認(rèn)為，人體吸收蛋白質(zhì)的主要形式不是以氨基酸的形式吸收的，而是以多肽的形式吸收的，這是人體吸收蛋白質(zhì)機(jī)制的重大突破。

科學(xué)試驗(yàn)證明大豆肽是一種活性多肽，具有獨(dú)特的生理功能，在食品工業(yè)上作為功能因子具有十分廣泛的用途和較廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。大豆肽作為一種健康的食品已經(jīng)被廣泛的研究。綜合目前文獻(xiàn)研究表明，大豆肽具有下列功能：（1）降低活性氧產(chǎn)生具有抗氧化、抗衰老功能；（2）提高人體免疫力；（3）提高肝的代謝能力；（4）基因合成促進(jìn)劑；（5）具有降血壓和血脂作用；（6）具有降低血糖作用；（7）具有降膽固醇的功能；（8）抑制腫瘤增殖作用。

近年來研究發(fā)現(xiàn)大豆肽具有抗氧化作用，其在老年癡呆等神經(jīng)退行性疾病中的防治作用也逐漸引起科學(xué)界的重視。Katayama S等研究發(fā)現(xiàn)定期給老年癡呆小鼠及正常衰老小鼠喂養(yǎng)大豆肽，能顯著提高小鼠的認(rèn)知能力。Xi YD等研究表明大豆肽能減緩Aβ_1-42對(duì)大鼠的氧化損傷作用。但口服大豆肽是否能改善神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)纖維纏結(jié)、突觸功能等目前還未見文獻(xiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中缺少大豆肽是否能改善神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)纖維纏結(jié)、突觸功能的研究的技術(shù)問題，提供一種用于防治阿爾茨海默病的口服制品。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種用于防治阿爾茨海默病的口服制品，該防治阿爾茨海默病的制品的活性成分包括大豆肽，所述大豆肽由復(fù)合蛋白酶對(duì)大豆水解獲得。

進(jìn)一步的，所述大豆肽的平均分子量為1000～2000道爾頓。

進(jìn)一步的，所述大豆肽中分子量在3000～5000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3%～3.5％；分子量在2000～3000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3%～3.5％；分子量在1000～2000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為10.5%～12％；分子量在500～1000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為26%～28.5％；分子量在300～500道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為26.5%～28％；分子量在180～300道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為21%～22％；分子量在低于180道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為4～5.2％,各肽段的質(zhì)量份數(shù)之和為100%。

優(yōu)選的，所述大豆肽中分子量在3000～5000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.15％；分子量在2000～3000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.31％；分子量在1000～2000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為11.20％；分子量在500～1000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為27.76％；分子量在300～500道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為27.58％；分子量在180～300道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為21.8％；分子量在低于180道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為5.2％。

本發(fā)明的用于防治阿爾茨海默病的口服制品，作用于阿爾茨海默病細(xì)胞模型（PC12細(xì)胞），能顯著降低A?_25-35對(duì)PC12細(xì)胞的毒性，可以降低A?_25-35對(duì)PC12誘導(dǎo)凋亡的作用，有效改善老年小鼠記憶認(rèn)知功能，延緩小鼠老年癡呆進(jìn)展。我們的發(fā)明對(duì)進(jìn)一步了解大豆肽的功能活性，開發(fā)大豆肽相關(guān)的功能產(chǎn)品提供理論依據(jù)，為大豆深加工開拓了新思路。本發(fā)明用于防治阿爾茨海默病的口服制品在可以為病人、老年人或體質(zhì)弱的人補(bǔ)充氮源，快速恢復(fù)體力，提高免疫力。

附圖說明

附圖用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1是本發(fā)明的實(shí)施例1的大豆肽在改善A?25-35對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用；

圖2是本發(fā)明的實(shí)施例1的大豆肽對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用的細(xì)胞核染色檢測(cè)圖；

圖3是本發(fā)明的水迷宮實(shí)驗(yàn)的軌跡圖。

具體實(shí)施方式

以下對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例1

一種用于防治阿爾茨海默病的口服制品，該防治阿爾茨海默病的制品的活性成分包括大豆肽，該大豆肽由復(fù)合蛋白酶對(duì)大豆水解獲得。大豆肽的平均分子量為1500道爾頓。大豆肽中分子量在3000～5000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.15％；分子量在2000～3000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.31％；分子量在1000～2000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為11.20％；分子量在500～1000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為27.76％；分子量在300～500道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為27.58％；分子量在180～300道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為21.8％；分子量在低于180道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為5.2％。

實(shí)施例2

一種用于防治阿爾茨海默病的口服制品，該防治阿爾茨海默病的制品的活性成分包括大豆肽，該大豆肽由復(fù)合蛋白酶對(duì)大豆水解獲得。大豆肽的平均分子量為1000道爾頓。大豆肽中分子量在3000～5000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3％；分子量在2000～3000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3％；分子量在1000～2000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為10.5%；分子量在500～1000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為28.5%；分子量在300～500道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為28%；分子量在180～300道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為22％；分子量在低于180道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為5.0％。

實(shí)施例3

一種用于防治阿爾茨海默病的口服制品，該防治阿爾茨海默病的制品的活性成分包括大豆肽，該大豆肽由復(fù)合蛋白酶對(duì)大豆水解獲得。大豆肽的平均分子量為2000道爾頓。大豆肽中分子量在3000～5000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.5％；分子量在2000～3000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為3.5％；分子量在1000～2000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為12%；分子量在500～1000道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為28.5%；分子量在300～500道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為27.5%；分子量在180～300道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為21％；分子量在低于180道爾頓的肽段的質(zhì)量份數(shù)為4％。

實(shí)施例1-3的大豆肽，經(jīng)國(guó)家教育部江南大學(xué)分析測(cè)試中心檢驗(yàn)符合大豆肽國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。我們以PC12 細(xì)胞構(gòu)建阿爾茨海默病的細(xì)胞模型，檢測(cè)大豆肽在改善A?_25-35對(duì)PC12細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用；以BALB/c小鼠自然衰老到18個(gè)月齡建立衰老動(dòng)物模型，研究大豆肽在減緩阿爾茨海默病發(fā)病及病程進(jìn)展中的作用，探討大豆肽在調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、改善記憶與認(rèn)知功能方面的機(jī)制。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，我們生產(chǎn)的大豆肽能顯著降低A?_25-35對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性；降低PC12細(xì)胞凋亡；改善阿爾茨海默病小鼠記憶及認(rèn)知功能。

一、大豆肽在改善A?25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用的研究

1. MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大豆肽在改善A?_25-35對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC12細(xì)胞接種到96孔板中（每孔5×10³）， 24h 后開始加入A?_25-35（10 μM）及實(shí)施例1的大豆肽，繼續(xù)培養(yǎng)24h-96h；每孔加入20 μL MTT試劑（5毫克/毫升）溶液，并于37℃溫育4 h；每孔加入150 μL的DMSO溶解甲臜晶體，震蕩溶解后檢測(cè)490nm處的光密度，結(jié)果如圖1所示。

圖1表明：加大豆肽處理組與A?25-35處理組比較，OD492值顯著增高，說明細(xì)胞多于A?25-35處理組，從而得出施例1的大豆肽顯著降低A?25-35對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性的結(jié)論。

2. 細(xì)胞核染色檢測(cè)大豆肽對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC12細(xì)胞按1×10⁴個(gè)/mL濃度接種于提前用多聚賴氨酸處理的蓋片上；24 h 后開始加入10 μM A?_25-35及施例1的大豆肽處理48 h后，傾去培養(yǎng)液，加入預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2次；調(diào)整Hoechst 33342/ PI染液濃度至終濃度5 μg /mL，37 ℃避光染色15 min；棄去染液，加入4 %多聚甲醛4 ℃固定5 min；在熒光顯微鏡下觀察拍攝，結(jié)果見圖2。

圖2中的亮點(diǎn)即為凋亡細(xì)胞，而大豆肽處理后亮點(diǎn)細(xì)胞數(shù)顯著少于A?_25-35處理組，可見大豆肽顯著降低PC12細(xì)胞凋亡率。

二、本發(fā)明制品在改善BALB/c自然衰老小鼠記憶和認(rèn)知方面的效果驗(yàn)證

BALB/c小鼠80只，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，其中雌鼠60只(未生育)，雄鼠20只，體重20~30 g，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境飼養(yǎng)，其中食物購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飲水為自制單蒸水。

待小鼠生長(zhǎng)到18個(gè)月，因疾病及預(yù)實(shí)驗(yàn)損失20只小鼠。從第18個(gè)月開始進(jìn)行進(jìn)食大豆肽干預(yù)，具體分組如下: 8周齡小鼠；18月老年鼠；18月老年鼠+施例1的大豆肽干預(yù)組；18月老年鼠+實(shí)施例2大豆肽干預(yù)組；18月老年鼠+實(shí)施例3大豆肽干預(yù)組。大豆肽干預(yù)組每只小鼠每天灌胃一次，每次400微升不同濃度大豆肽液體；對(duì)照組灌入等體積單蒸水。連續(xù)干預(yù)2個(gè)月開始進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

為檢測(cè)大豆肽是否對(duì)小鼠記憶及認(rèn)知能力有改善作用，我們采用MT-200 Morris（成都泰盟科技有限公司）水迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。具體程序包括：①獲得性訓(xùn)練（歷時(shí)5天）：每天4次，將小鼠于平臺(tái)所在象限對(duì)側(cè)象限面壁下水，記錄60 s內(nèi)探尋平臺(tái)所用時(shí)間（逃逸潛伏期），若探尋時(shí)間超過60 s，則該鼠逃逸潛伏期按60 s計(jì)算，同時(shí)引導(dǎo)小鼠到達(dá)平臺(tái)并停留510 s；②探查性檢驗(yàn)（1天）：撤去平臺(tái)，觀察小鼠60 s內(nèi)在目標(biāo)象限（平臺(tái)所在象限）停留時(shí)間。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程保持室內(nèi)燈光、物品擺放等一致，以排除環(huán)境干擾。

統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用配對(duì)t檢驗(yàn)及單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

軌跡圖結(jié)果顯示，20月齡的小鼠（老年鼠）記憶認(rèn)知能力顯著低于8周齡小鼠（年輕鼠），而喂食大豆肽溶液后能顯著改善小鼠記憶認(rèn)知功能。在附圖3中，線路越長(zhǎng)說明小鼠需要的時(shí)間越長(zhǎng)，記憶力越差。由圖3可知，實(shí)施例1-實(shí)施例3的大豆肽都可以很好的實(shí)現(xiàn)小鼠記憶認(rèn)知功能改善，并且以實(shí)施例1的大豆肽效果最好。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。