本發(fā)明涉及南沙參皂苷的制備方法和新用途，特別涉及南沙參皂苷在制備用于治療肺動脈高壓的藥物中的作用，屬于中醫(yī)藥領域范疇。
背景技術：
：肺動脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，pah)是以肺血管阻力和肺動脈壓力進行性升高為特點的一種病理生理狀態(tài)，其主要特征是由肺小動脈收縮、血管增生與重構而引起肺血管阻力進行性升高，進而引起右室負荷過重，導致右心室肥厚，最終可致患者死于右心衰竭。其血流動力學診斷標準為：海平面靜息狀態(tài)下，右心導管檢測肺動脈平均壓≥25mmhg。pah危害大、病死率高。pah產生機制尚未完全清楚，目前認為其發(fā)生機制同改變一氧化氮信號通路信號分子、肺血管炎癥損傷以及氧化-抗氧化系統平衡失衡等作用有關。目前pah的靶向治療藥物主要有3類，包括前列環(huán)素類似物、內皮素受體拮抗劑(endothelinreceptorantagonists，era)和磷酸二酯酶5（phosphodiesterase，pde-5）抑制劑，其應用可明顯改善患者的生存時間和生存狀況。三類靶向藥物在pah的治療地位毋庸質疑，但總體來說，pah的藥物治療效果未能讓人滿意，仍然有很多pah患者因右心衰竭而死亡；或者接受正規(guī)治療后仍有嚴重的癥狀，難以提高生活質量，且pah靶向治療藥物多為進口藥物，價格昂貴，未列入基本醫(yī)療保險藥品目錄，且肝臟毒性作用明顯，而長期聯合服藥又是pah患者必須面對的問題。因此，發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢，尋找安全、經濟的治療pah的中藥，對改善pah患者的預后和提高其生活質量具有重要意義。南沙參為桔梗科植物輪葉沙參或沙參的干燥根，始載于《神農本草經》：“味苦微寒，主血積驚氣、除寒熱、補中益肺氣、久服利人”，是清肺養(yǎng)陰、祛痰鎮(zhèn)咳的常用中草藥之一。現代研究證明，南沙參含有多糖、β-谷甾醇及其衍生物、三萜、磷脂等多種成分，并具有祛痰、強心、抗真菌、免疫調節(jié)、抗輻射、抗衰老、清除自由基、保肝等多種藥理作用，其開發(fā)應用很有前景。發(fā)明人通過研究發(fā)現南沙參皂苷可用于防治肺動脈高壓及肺動脈高壓引起的心血管疾病。技術實現要素：本發(fā)明的目的在于提供可用于防治肺動脈高壓的南沙參皂苷的制備方法，以及按本發(fā)明技術方案制備的南沙參皂苷在用于防治肺動脈高壓藥物中的應用。本發(fā)明所述的南沙參皂苷，可通過以下方法制備：南沙參藥材，洗凈，切碎，用5～75%（v/v）的乙醇溶液熱回流提取1～3次，每次提取時間一般為1～3h，每次溶劑體積用量為藥材重量的5～15倍，合并提取液，減壓濃縮，加水稀釋，加到已處理好的大孔吸附樹脂上，先后以水、25～95%（v/v）的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得。所用的乙醇洗脫液濃度優(yōu)選35～55%（v/v）。大孔吸附樹脂優(yōu)選hpd100型或d101型。所制備的南沙參皂苷適用于制備口服制劑，如膠囊劑、片劑、茶劑、顆粒劑等。具體方法是將有效量的南沙參皂苷與醫(yī)藥上可接受的賦形劑或/和添加劑配合，制成適合于人體使用的不同劑型的藥物。本發(fā)明所述的南沙參皂苷在用于防治肺動脈高壓藥物中的應用，其特征為口服，每日服用劑量為100~500mg。本發(fā)明所治療的肺動脈高壓為特發(fā)性肺動脈高壓、遺傳性肺動脈高壓、藥物和毒物相關性肺動脈高壓、危險因素或疾病相關性肺動脈高壓、肺靜脈閉塞病和(或)肺毛細血管瘤樣病所致的肺動脈高壓、新生兒持續(xù)性肺動脈高壓中的任意一種或幾種病癥。本發(fā)明所治療的遺傳性肺動脈高壓為bmpr2、alkl、eng、smad9、cav1、kcnk3中一個或過個基因突變導致的肺動脈高壓。本發(fā)明所治療的危險因素或疾病相關性肺動脈高壓，所述危險因素或疾病為結締組織病、hiv感染、門靜脈高壓、遺傳性心臟病、血吸蟲病、慢性溶血性貧血等一種或多種因素。具體實施方式下面通過具體實施例對該發(fā)明作進一步的描述。實施例1：防治肺動脈高壓的南沙參皂苷制備方法：取南沙參藥材500g，洗凈、切碎，加入50%乙醇熱回流3次，每次回流2h，每次溶劑用量5l，合并提取液，減壓濃縮，加水攪拌稀釋，加到已處理好的1kghpd100型大孔吸附樹脂柱上，先用水洗至收集液無色，再用50%乙醇洗脫至無色或很淺，合并50%乙醇洗脫液濃縮干燥，得南沙參皂苷。實施例2：南沙參皂苷對肺葉切除聯合野百合堿引起sd大鼠肺動脈壓高壓的影響2.1.實驗動物：sd大鼠，3月齡，雄性，200±20g，48只2.2實驗藥物及器材：南沙參皂苷、野百合堿（購自sigma公司）、水合氯醛、烏拉坦、壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統2.3采用肺葉切除聯合野百合堿（mct）注射建立重度pah模型：大鼠稱體重，12%烏拉坦經腹腔注射（8ml/kg）麻醉后，16g動靜脈留置針行氣管插管，連接harvard呼吸機(潮氣量2ml；頻率，80次/分；peep1.0cmh20。左側第四肋間進胸，結扎并切除左側肺葉，大鼠肺葉為左側1葉，右側4葉，關胸。手術結束后脫離呼吸機，保暖、持續(xù)吸氧4小時。繼續(xù)飼養(yǎng)1周后，按60mg/kg單次腹腔注射mct，mct注射1周后開始給藥，給藥4周。空白對照組：假手術+生理鹽水（等體積i.p.）1次+給予生理鹽水（i.g）模型組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予等體積生理鹽水（i.g）南沙參皂苷低劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（30mg/kg/d，i.g）南沙參皂苷中劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+受試藥（60mg/kg/d，i.g）南沙參皂苷高劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（120mg/kg/d，i.g）陽性藥組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予西地那非（7.5mg/kg/d）2.4血流動力學測量和右心室肥厚檢測：mct注射后第4周，測量大鼠平均肺動脈壓。大鼠以10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔內注射麻醉后，從右頸外靜脈插管至肺動脈干，接壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統(adinstruments)，當置入導管進入右心室穩(wěn)定后記錄其右室收縮壓（rvsp），監(jiān)護儀出現肺動脈波形時，待其穩(wěn)定后記錄平均肺動脈壓(mpap)。測完rvsp后，完整切下大鼠心臟，沿房室交界處剪去左右心房及大血管，分離右心室(rv)和左心室+室間隔(lv+s)，用濾紙吸干水分后稱質量，計算rv/(lv+s)值即右心室肥厚指數(rvhi)。2.5統計分析：應用spss17.0統計軟件進行統計學分析，數據均以mean±s.e表示，組間比較采用單因素方差分析。p<0.05為差異有顯著性意義。2.6實驗結果2.6.1實驗動物死亡情況：本實驗共用sd大鼠48只，死亡4只，mct組死亡2只，南沙參低劑量死亡1只，南沙參高劑量死亡1只，大鼠死亡前表現為呼吸困難、口鼻發(fā)紺。2.6.2南沙參皂苷對pah大鼠rvsp的結果顯示，與空白對照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.05)、西地那非組(p<0.01)能顯著降低rvsp，且呈劑量依賴性；與陽性藥比較，南沙參皂苷各組對pah大鼠rvsp的降低效果沒有顯著性差異。2.6.3南沙參皂苷對pah大鼠mpap的結果顯示，與空白對照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.01)、西地那非(p<0.01)組能顯著降低mpap；與陽性藥比較，南沙參皂苷各組對pah大鼠mpap的降低效果沒有顯著性差異。2.6.4南沙參皂苷對pah大鼠rvhi的結果顯示，與空白對照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，南沙參皂苷中劑量(p<0.05)和高劑量(p<0.05)能顯著降低rvhi；與陽性藥比較，南沙參皂苷中劑量組對pah大鼠rvhi的降低效果更好（見表1）。表1.南沙參皂苷對pah大鼠rvsp、mpap、rvhi的影響組別nrvsp(mmhg)mpap(mmhg)rvhi(%)空白對照組820.73±0.3213.07±0.2722.33±0.42模型組643.23±0.79###34.62±0.92###52.17±1.19###南沙參皂苷低劑量組740.17±1.83###32.18±1.64###48.94±1.17###南沙參皂苷中劑量組836.79±0.95**###26.94±0.93**###45.17±1.35*###南沙參皂苷高劑量組738.77±2.18*##27.28±1.56**###46.83±0.95*###西地那非組836.54±1.09**###26.23±1.07**###48.33±1.85###注：與正常組比較##p﹤0.01，###p﹤0.001；與模型組比較*p﹤0.05，**p﹤0.01結論：以上結果說明，南沙參皂苷對肺葉切除聯合野百合堿引起sd大鼠肺動脈壓高壓的平均肺動脈壓(mpap)、右室收縮壓（rvsp），右心室肥厚指數(rvhi)有明顯減輕作用。南沙參皂苷具有防治pah的作用。當前第1頁12