專利名稱：：治療癌癥的藥物組合物和靜脈注射液及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種治療癌癥的藥物組合物以及治療癌癥的靜脈注射液，本發(fā)明還涉及上述藥物組合物的醫(yī)藥用途。
背景技術：
：五加科植物中有大量具有各種藥用價值的達瑪烷皂苷存在，包括人參皂苷、三七皂苷等。目前在人參植物中已鑒定出達瑪烷結構的人參皂苷135種，根據(jù)苷元的不同可以分為34個類型(見中國專利03134176.4，“西洋參莖葉中三萜皂苷及其醫(yī)藥用途和制備方法”)，其中有抗腫瘤活性的皂苷，總皂苷或單體皂苷，如人參總皂苷、西洋參總皂苷、Rh2、Rg3、Rh1等等均已被應用與癌癥的治療。但是由于人參皂苷具有溶血作用，限制了皂苷類藥物的發(fā)展和臨床應用(楊藻宸主編，《醫(yī)用藥理學》，人民衛(wèi)生出版社，第二版，1994年)。在藥學界眾所周知皂苷的水溶液注射入靜脈中，溶血毒性極大，因此含皂苷的中草藥不能用于注射，特別是靜脈注射。根據(jù)文獻報道的對人參、西洋參莖葉和根中的皂苷溶血作用進行了研究，根據(jù)《中藥制劑的安全試驗和毒性實驗》中的溶血試驗方法，得出最低溶血濃度(溶血指數(shù))分別為人參莖葉總皂苷0.40g/L，人參根總皂苷0.10g/L，西洋參莖葉總皂苷0.60g/L，西洋參根總皂苷0.10g/L，西洋參莖葉原人參二醇組皂苷1.0g/L，西洋參根原人參二醇組皂苷0.8g/L，單體人參皂苷F2為0.12g/L，Rg1為0.20g/L，Rg2為0.16g/L(孟勤、孫平等，“人參、西洋參皂甙溶血作用的研究”，《白求恩醫(yī)科大學學報》，1998年第24卷第2期135-136頁)。通常藥物應用于疾病治療的安全有效劑量必須是在“最低有效劑量”和“最大耐受劑量”之間，在這個范圍內使用的劑量才能達到治療效果，如果使用劑量低于“最低有效劑量”，就沒有治療效果；如果超過“最大耐受劑量”，就會出現(xiàn)極強的毒副作用甚至死亡。而目前由于現(xiàn)有臨床使用的各種人參皂苷藥劑的使用的“最大耐受劑量”很低，所含人參皂苷的有效成分甚至低于治療的有效劑量，無法達到有效的治療效果；然而由于人參皂苷溶血的毒副作用存在，又不能大幅提高使用劑量，或者提高的幅度極小。如何能夠大幅提高臨床使用劑量，提高治療效果，而又不增加毒副作用，成為亟待解決的矛盾。例如，根據(jù)發(fā)明人的溶血實驗結果顯示，Rh2、Rg3、Rh1和達瑪烷苷元(aPPD、aPPT)、配基(PAM-120和PBM-110)的溶血指數(shù)分別為12.46μg/ml(20μM)和23.52μg/ml(30μM)、62.3μg/ml(100μM)、和＞100μM(參見發(fā)明詳細描述中的溶血實驗結果數(shù)據(jù))。然而，根據(jù)文獻報道體外細胞實驗，人參皂苷Rh2、Rg3體外腫瘤細胞實驗結果顯示，其IC50指標大大超過溶血指數(shù)上述例子顯示，由于人參皂苷溶血作用的存在，臨床應用的人參皂苷類藥物(靜脈注射劑)往往在達到最低有效治療劑量前，就因為會出現(xiàn)溶血毒性而停止劑量的增加，極大地限制了人參皂苷的抗癌治療效果。人參皂苷如人參總皂苷和西洋參總皂苷以及人參皂苷單體都具有不同程度的溶血作用，而且各種皂苷的治療有效劑量都超過其溶血指標。雖然在本領域中為解決皂苷溶血問題與大劑量靜脈注射之間的矛盾進行了努力，例如，在“靜脈注射高麗參針劑的生產方法”專利中(專利號90110374.8)，利用加入吐溫-80來解決高麗參中人參皂苷的溶血問題，使高麗參注射劑可用于靜脈注射。雖然該專利生產的注射劑沒有溶血作用，并可以用于靜脈注射，但是由于其有效成分(人參皂苷)含量仍然很低，僅含有人參總皂苷Rg116mg/10ml。該專利的方法雖然將人參皂苷Rg1的可以允許注射的最大劑量從Rg1為0.20g/L(相當于2mg/10ml)，提高到16mg/10ml，提高了8倍，但是該允許注射的劑量仍然偏低，只在很小的程度上緩解了皂苷溶血問題與大劑量靜脈注射之間的矛盾。另外，由于吐溫-80本身的溶血性及毒性相對過大，近來的制藥領域已經(jīng)很少將吐溫-80用于靜脈注射劑。日本專利(58-131999)公布了應用20(S)\(R)人參二醇和三醇苷元四種化合物的藥物組合物的抗癌的應用，上述日本專利披露了如下實驗方法和結果實驗方法日本專利使用了莫里斯肝癌細胞、路易斯肺癌細胞、希拉癌細胞以及梅拉諾瑪B-16癌細胞，用Lyibohits的L-15培養(yǎng)基預先將細胞的增殖率變成50％左右，并將牛胎兒血清添加濃度調節(jié)到2％。將其與HAMS-F10培基(這些培基的組成如后面的表2和表3所示)以7∶3的比例混合成培養(yǎng)液，再分別加入4種皂甙。20(S)-protopanaxadiol(I)，20(R)protopanaxadiol(II)，20(S)protopanaxatriol(III)以及20(R)-protopanaxatriol(IV)。它們的濃度分別為1μg/ml～12μg/ml。然后再分別將莫利斯肝癌細胞1×104個，露依斯肺癌細胞5×104個，希拉癌細胞5×104個以及梅拉諾瑪B-16癌細胞1×104個移殖入該培養(yǎng)液。另外再將同樣數(shù)量的各種癌細胞加入沒有添加皂甙的培養(yǎng)液中作為對照群(control)。將這些培養(yǎng)液在攝氏36度的環(huán)境下，進行4天的平板培養(yǎng)(各5枚)。將對照群增殖的癌細胞數(shù)和添加皂甙群的增殖癌細胞數(shù)進行比較，皂甙液各濃度的癌細胞增殖抑制率按下式計算癌細胞增殖抑制率(％)＝[(培養(yǎng)后的對照群平均癌細胞數(shù)-培養(yǎng)后的添加皂甙群平均癌細胞數(shù))/(培養(yǎng)后的對照群平均癌細胞數(shù)-培養(yǎng)開始時的對照群癌細胞數(shù))]×100實驗結果4天培養(yǎng)后的對照群癌細胞平均數(shù)莫利斯肝癌細胞數(shù)從1×104加為0.54×105個；露依斯肺癌細胞數(shù)從5×104增加為2.80×105個；希拉癌細胞數(shù)從5×104個增加為5.05×105個；梅拉諾瑪B-16癌細胞數(shù)從1×104個增加為0.81×105個。對癌細胞的增殖而言，皂甙的抑制效果，可以根據(jù)皂甙添加群的培養(yǎng)后平均細胞數(shù)，按照上述計算式將4種皂甙抑制率求出。其結果如表1所示。表1
發(fā)明內容本發(fā)明的目的之一在于提供一種治療癌癥的藥物組合物，用于克服現(xiàn)有人參皂苷在臨床中不能大劑量用作靜脈注射的不足。本發(fā)明的目的之二在于提供一種治療癌癥的的靜脈注射液，該靜脈注射液安全有效，無溶血和其他毒副作用，可以大劑量的應用與腫瘤的臨床，極大地提高了患者安全使用藥物的“最大耐受劑量”，從而極大地提高了腫瘤的治療效果。本發(fā)明的目的之三在于提供了該治療癌癥的藥物組合物在制備治療癌癥的藥物中的應用。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供的治療癌癥的藥物組合物，由達瑪烷類苷元及其配基組成，其組成如下達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為10％-90％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為1％-40％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-20％和PBM-110為1％-20％；其中為1％-40％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-20％和PBM-110為1％-20％；其中達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD和達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT具有下述結構式1達瑪烷類皂苷元PAM-120和PBM-110分別具有下述結構式2式3。上述治療癌癥的藥物組合物中達瑪烷類苷元及其配基組成的優(yōu)選方案是達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為30％-70％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為2％-20％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-10％和PBM-110為1％-10％。更優(yōu)選方案是達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為40％-60％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為4％-10％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-5％和PBM-110為1％-5％。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的之二，本發(fā)明提出的治療癌癥的的靜脈注射液，每1000mL含上述治療癌癥的藥物組合物10g，含輔料氧化蓖麻油(CremophorEL)130g和無水乙醇100mL，余量為注射用水。本發(fā)明藥物組合物所用的原料藥達瑪烷類苷元及其配基是從五加科植物，包括人參、西洋參、高麗參、三七參、刺五加參等植物中提取獲得的具有上述式1所述結構的皂苷元和配基。上述達瑪烷類皂苷元可以通過將原植物的莖、葉、根經(jīng)過酸水解、堿水解、生物降解、酶解等多種分離和提取的工藝方法來獲得；而通過對苷元結構的修飾，如去掉20位的羥基，可以獲得配基PAM-120(式2)和PBM-110(式3)。以從人參類植物中提取達瑪烷苷元為例(其他類植物的達瑪烷苷元的提取也可參照類似方法)，本發(fā)明提供了達瑪烷類苷元及配基及其靜脈注射液的制備方法，該方法包括以下步驟(一)原料藥達瑪烷類苷元及其配基的制備本發(fā)明的原料藥達瑪烷類苷元，例如人參苷元可以通過商購獲得，也可以通過商購所得到的人參皂苷經(jīng)過本發(fā)明所提供的方法制備成人參苷元。將所購得的人參皂苷Rh2進行酸水解法，將Rh2皂苷上的糖鏈水解，得到人參苷元。具體方法取100mg的人參皂苷Rh2，置于10ml的燒瓶中，加入5ml的2％的H2SO4，混勻。將其置于100度的水浴上2小時，并不時攪拌。冷卻，以NaHCO3溶液中和多余的酸，后加入5ml的CHCl3萃取3次，合并CHCl3萃取液，用水洗滌CHCl3萃取液3次，減壓回收CHCl3，得CHCl3萃取物76mg，重結晶得人參皂苷元61mg。皂苷元的純度大與90％。(二)靜脈注射液的配置以下按照達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液100L為例描述制劑生產的工藝過程第一步配液稱取原料藥1000g，加10L無水食用乙醇溶解拌勻，完全溶解后慢慢加入13kg氧化蓖麻油(CremopherEL，Polyoxyl35CastorOil)，攪拌均勻，緩慢加入注射用標準蒸餾水至100L。第二步灌裝將配制后的液體依次用0.45μm、0.22μm濾膜過濾，分別灌裝至已清洗好的100ml瓶中，蓋膠塞，以金屬壓蓋。第三步滅菌將灌裝好的瓶放入滅菌柜中，于121℃，滅菌30分鐘，取出，當瓶子的溫度降至80℃時，用力振搖，使混合充分。經(jīng)過滅菌的產品其無菌保證值不得低于6；滅菌之前，滅菌柜應進行熱分布試驗、熱穿透試驗和生物指示劑驗證試驗，以確定滅菌柜空載及不同裝載時腔室里的熱分布狀況及可能存在的最冷點；確認腔室的各點的差值≤±1℃、確認滅菌柜在裝載時，最冷點標準滅菌時間F0能夠保證達到設定的參數(shù)值；用生物指示劑進一步確認在滅菌柜不同裝載情況下滅菌物品(特別是最冷點處的物品)能夠達到無菌保證水平。常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus)。相對于日本專利(58-131999)，本發(fā)明的抗癌效果明顯增強由于無法獲得日本專利中的希拉癌細胞，本發(fā)明人對實驗鼠莫里斯肝癌細胞、路易斯肺癌細胞和B-16瘤進行了腫瘤細胞抑制對比試驗。除了細胞培養(yǎng)方法上的差別之外，本發(fā)明與日本發(fā)明的一個重要差別是，日本專利中進行了4天的處理，而本發(fā)明的實驗處理細胞時間為24小時。試驗方法將各種用于試驗的腫瘤細胞，在5％的二氧化碳于37℃溫度中，用RPMI-1640介質培養(yǎng)，加入2％的胎牛血清、100單位的青霉素/毫升和100μg鏈霉素/毫升。將各種用于試驗的腫瘤細胞在96孔平底精密測試板中培養(yǎng)，每孔1.2×103個細胞，每六孔為一組，在加濕的5％二氧化碳于37℃溫度中，培養(yǎng)24小時，按照試驗給與的劑量加入所選用的藥物。如圖8所示，分別用1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、和10μg/ml不同劑量的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的實驗鼠類莫里斯肝癌細胞、路易斯肺癌細胞、B-16細胞24小時，在施用10μg/ml劑量24小時后，殺死全部癌癥細胞。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明有以下突出的優(yōu)點(一)藥效學、毒理學研究結果證明，本發(fā)明提供的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對抑制和殺滅人體腫瘤細胞具有確切的效果，可以用于治療胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、直腸癌、宮頸癌、食道癌、血癌等惡性腫瘤，特別是對現(xiàn)在臨床上十分棘手的耐藥腫瘤、復發(fā)和轉移腫瘤具有良好效果。(二)本發(fā)明選用的人參皂苷元，既有極強的抗癌抑瘤作用，有沒有人參皂苷通常所具有的溶血作用，在臨床應用上可以極大地提高患者施用的“最大耐受劑量”。本發(fā)明的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液的臨床使用劑量是其他人參皂苷類藥物施用劑量的幾十倍甚至幾百倍，極大地發(fā)揮了人參皂苷元抗癌抑瘤的效果。(三)本發(fā)明的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液，在同等治療水平上的毒副作用極大地低于現(xiàn)有的抗癌藥物如紫杉醇(Taxol、Paclitaxel)、健擇(Gemzar、Gemcitabine)、喜樹堿、長春新堿和順鉑等，而具相同或更好的治療效果。圖1是人參皂苷和人參皂苷元的溶血試驗結果示意圖。圖2是本發(fā)明的靜脈注射液對人類胰腺癌BXPC-3細胞的殺傷效果圖。圖3是本發(fā)明的靜脈注射液對人類胰腺癌Capan-1細胞的殺傷效果圖。圖4是本發(fā)明的靜脈注射液對人類乳腺癌MCF7adr耐藥細胞的殺傷效果圖。圖5是本發(fā)明的靜脈注射液對人類乳腺癌MDA435LCC6M耐藥細胞的殺傷效果圖。圖6是本發(fā)明的靜脈注射液對人類腦腫瘤細胞的殺傷效果圖。圖7是本發(fā)明的靜脈注射液對前列腺癌細胞的抑制效果圖。圖8是本發(fā)明四種劑量的靜脈注射液處理腫瘤細胞的腫瘤抑制效果圖。具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述。按照
發(fā)明內容中治療癌癥的藥物組合物的制備方法，制備含治療有效濃度的藥物組合物。達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為10％-90％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為1％-40％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-20％和PBM-110為1％-20％；實施例1達瑪烷類苷元原人參二醇皂苷元aPPD為46％；達瑪烷類苷元原人參三醇皂苷元aPPT為4％、以及達瑪烷類配基PAM-120為20％和PBM-110為20％。實施例2達瑪烷類苷元原人參二醇皂苷元aPPD為30％；達瑪烷類苷元原人參三醇皂苷元aPPT為40％、以及達瑪烷類配基PAM-120為20％和PBM-110為10％。實施例3達瑪烷類苷元原人參二醇皂苷元aPPD為20％；達瑪烷類苷元原人參三醇皂苷元aPPT為40％、以及達瑪烷類配基PAM-120為20％和PBM-110為20％。實施例4達瑪烷類苷元原人參二醇皂苷元aPPD為30％；達瑪烷類苷元原人參三醇皂苷元aPPT為40％、以及達瑪烷類配基PAM-120為1％和PBM-110為10％。實施例5達瑪烷類苷元原人參二醇皂苷元aPPD為90％；達瑪烷類苷元原人參三醇皂苷元aPPT為8％、以及達瑪烷類配基PAM-120為1％和PBM-110為1％。實施例6原人參二醇皂苷元(aPPD)460mg、原人參三醇皂苷元(aPPT)40mg、以及其他人參皂苷元500mg，共計1000mg。本發(fā)明的以下效果實施例和臨床應用中治療癌癥的藥物組合物均為靜脈注射劑型，稱之為人參皂苷元靜脈注射液(劑)。一、人參皂苷和人參皂苷元的溶血試驗比較。發(fā)明人取人參皂甙Rh1、Rh2、Rg3以及苷元(aPPD、aPPT)、配基(PAM-120、PBM-110)按照下列方法進行溶血實驗(1)用3mL的人血加10u/ml的肝素100-150ul，試管、注射器和針管使用前都經(jīng)肝素處理；(2)1400rpm離心10分鐘，棄去上清液；(3)用生理鹽水洗紅細胞，洗2-3次，并1400rpm離心5分鐘；(4)加入1mL的生理鹽水，輕輕地使紅細胞混勻；(5)將Rh1、Rg3、Rh2、aPPD、aPPT、PAM-120、PBM-110用生理鹽水配制成溶液；(6)加入20ul的紅細胞，輕輕混勻，在37℃放置1小時；(7)3000rpm離心5分鐘，轉移10ul上清液至96孔板；(8)測波長540nm的吸光度。發(fā)明人用的不同劑量Rg3、Rh2、Rh1和達瑪烷苷元(aPPD、aPPT)、配基(PAM-120、PBM-110)等的溶液，依據(jù)上述實驗方法進行溶血試驗，試驗結果如圖1所示Rg3的溶血指數(shù)為30μM(23.52μg/ml)、Rh2的溶血指數(shù)為20μM(12.46μg/ml)、Rh1的溶血指數(shù)為100μM(62.3μg/ml)、人參皂苷元(aPPD、aPPT、PAM-120、PBM-100)在實驗劑量下沒有溶血作用。上述溶血試驗顯示，人參皂甙Rh2、Rg3和Rh1在靜脈注射的臨床使用時，施用的劑量不能超過其溶血指數(shù)的限制，不能夠大劑量地使用。相反，達瑪烷苷元(aPPD、aPPT)、配基(PAM-120、PBM-110)幾乎沒有溶血指數(shù)的限制，在靜脈注射的臨床使用時，安全施用的劑量范圍極大地提高，使得能夠靜脈注射劑的臨床大劑量使用成為現(xiàn)實。二、達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液的急性毒性試驗。通過觀察達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液靜脈給藥后，小鼠所產生的急性毒性反應及死亡情況，為擬定人用安全劑量提供參考。達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液靜脈給藥的LD50為548.55mg/kg，95％可信限度為472.5～637.2mg/kg。試驗材料動物Balb/C小鼠，20～22g，雌雄各半，CharlesRiver公司提供。合格證號Experimentanimal1999(015)Canada。受試物達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液，批號19990120，規(guī)格100mL/瓶，含皂苷元1000mg，加拿大博新藥業(yè)股份有限公司提供。配置方法以氯化鈉注射液配置所需濃度。方法和結果取上述小鼠試驗前禁食16小時，按體重隨機分為5組，每組10只，按不同劑量組的劑量分別靜脈給藥，劑距1∶0.85，給藥體積為0.4mL/10g小鼠體重，給藥后連續(xù)觀察七天，記錄動物的反應及死亡情況，以Bliss法計算LD50，結果見表2。表2720.0mg/kg及612.0mg/kg組給藥后即刻發(fā)生抽搐、眼球突出、豎毛、呼吸困難、心跳減慢，動物躺臥不動等現(xiàn)象，給藥15分鐘內一半動物出現(xiàn)死亡；520.2mg/kg及442.4mg/kg劑量組先驚厥，后活動減少。375.8mg/kg劑量組小鼠反應程度較輕，無驚厥，僅為活動減少。死亡鼠大部分發(fā)生在24小時內，未死亡鼠8小時內恢復。死亡小鼠尸檢有腸系膜充血想象，其他未見異常。三、達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液的動物長期毒性試驗。受試藥物達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液，由加拿大博新藥業(yè)股份有限公司提供，批號19990205。分別為低濃度每瓶100mL，每1mL含藥量為10mg；中濃度每瓶100mL，每1mL含藥量為20mg；高濃度每瓶100mL，每1mL含藥量為30mg。試驗動物Sprague-Dawley種大鼠，雌雄各半，體重300±30g，CharlesRiver提供，合格證號合格證號Experimentanimal1999(025-136)Canada。試驗方法動物分組與飼養(yǎng)取Sprague-Dawley大鼠80只，雌雄各半分籠正常飼養(yǎng)1周，觀察動物活動、進食、糞便等情況，未見異常。將動物隨機分為4組，每組20只。給藥劑量與給藥方式本實驗設定為三個劑量組、一個空白組實驗，給藥劑量分別為150mg/kg、100mg/kg、50mg/kg(分別相當于臨床60kg體重人日用最大劑量的3倍、2倍、1倍)?？瞻捉M按給予同等劑量注射用水。采用不等濃度等容量的方法給藥。每周周一上午九時給藥，每周給藥一次，連續(xù)24周。給藥前、給藥后6、12、24周及停藥后2周稱量體重，根據(jù)新體重調整給藥劑量。試驗結果和結論連續(xù)給大鼠靜脈注射達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液150mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，(分別相當于臨床60kg體重人日用最大劑量的3倍、2倍、1倍)每周給藥一次，連續(xù)24周，停藥后觀察2周。結果表明150mg/kg達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液組于給藥2周開始出現(xiàn)明顯的行動遲緩，反應遲鈍狀態(tài)，表明150達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液具有明顯的鎮(zhèn)靜作用，于給藥第12周逐漸恢復正常；100mg/kg、50mg/kg達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液組和對照組動物毛發(fā)、行為活動、進食飲水、糞便等均未見明顯異常；150mg/kg達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液組于給藥第12周開始體重增長緩慢，于對照組比較無顯著性差異；在第26周恢復期體重與對照組基本一致；100mg/kg、50mg/kg達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液組體重增長情況和對照組基本一致。除了三個給藥組白細胞總數(shù)在給藥12周和24周時有統(tǒng)計學顯著意義的升高以外，給藥前、給藥后6、12、24周及停藥后2周，各給藥組的紅細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、血紅蛋白含量、白細胞分類及凝血時間與對照組比較均無顯著性差異。給藥前、給藥后6、12、24周及停藥后2周，各給藥組的血清間ALT、AST、ALP、T-CHO、TP、ALB、T-BLL、GLU、Crea、BUN與對照組比較均無顯著性差異。停藥24小時前列腺臟器系數(shù)明顯高于對照組，其余各臟器的臟器系數(shù)與對照組比較均無顯著性差異。停藥2周后，各給藥組的各臟器系數(shù)與對照組比較均無顯著性差異。停藥后24小時，停藥后2周，肉眼檢查心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、子宮、卵巢、睪丸、前列腺、胸腺等臟器組織均未見明顯病理改變。病理檢查亦均無明顯病理改變。達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液無明顯毒性反應劑量為150mg/kg，劑量相當于臨床成人日最大注射劑量的3倍。四、達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對腫瘤細胞的殺傷效果試驗。試驗方法細胞將各種用于試驗的腫瘤細胞，在5％的二氧化碳于37℃溫度中，用RPMI-1640介質培養(yǎng)，加入2％的胎牛血清、100單位的青霉素/毫升和100μg鏈霉素/毫升。離體實驗(Invitro)將各種用于試驗的腫瘤細胞在96孔平底精密測試板中培養(yǎng)，每孔1.2×103個細胞，每六孔為一組，在加濕的5％二氧化碳于37℃溫度中，培養(yǎng)24小時，按照試驗給與的劑量加入所選用的藥物。(一)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對人類胰腺癌BXPC-3細胞的殺傷效果。如圖2所示，用不同劑量1.25μg/ml---40μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的人類胰腺癌BXPC-3細胞24小時，在施用40μg/ml劑量24小時后，殺死全部癌癥細胞。(二)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對人類胰腺癌Capan-1細胞的殺傷效果。如圖3所示，用不同劑量1.25μg/ml---40μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的人類胰腺癌Capan-1細胞24小時，在劑量40μg/ml施用24小時后，殺死全部癌癥細胞。(三)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對人類乳腺癌MCF7adr耐藥細胞的殺傷效果。如圖4所示，用不同劑量10μg/ml---160μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的人類乳腺癌MCF7adr耐藥細胞48小時，在劑量40μg/ml施用48小時后，殺死全部癌癥細胞。(四)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對人類乳腺癌MDA435LCC6M耐藥細胞的殺傷效果。如圖5所示，用不同劑量10μg/ml---160μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的人類乳腺癌MDA435LCC6M耐藥細胞48小時，在劑量40μg/ml施用48小時后，殺死全部癌癥細胞。(五)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對人類腦腫瘤U87細胞的殺傷效果。如圖6所示，用不同劑量1.25μg/ml---40μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的人類腦腫瘤U87細胞48小時，在劑量20μg/ml施用48小時后，殺死全部腫瘤細胞。(六)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對前列腺癌LNCaP細胞的抑制效果。如圖7所示，用不同劑量5μg/ml---20μg/ml的達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液處理依據(jù)上述方法培養(yǎng)的前列腺癌LNCaP細胞48小時，在劑量20μg/ml施用24小時后，經(jīng)藥物處理后的細胞中的PSA指標大幅降低。五、達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液對荷瘤動物的腫瘤抑制效果試驗方法將40只重量為18-22克的C57BL/6J小鼠，隨機地分為四組一組對照組和三組治療組，每組各10只，然后將鼠類肉瘤180系細胞(Sarcoma180cells)經(jīng)由移植針由腋窩殖入皮下，經(jīng)過移植所有小鼠羅患腫瘤。在每日給藥前，先稱量體重，然后決定實際所需藥量，在腫瘤移植后24小時開始給藥，治療組的三組小鼠分別以胃管(gastriccatheter)口灌方式給予上述組成，每日劑量分別為20mg/kg、40mg/kg和60mg/kg，共8天，對照組小鼠則給予安慰劑生理鹽水(normalsalineplacebo)，給藥后24小時，給予過量麻醉劑處死小鼠，稱量每只小鼠的腫瘤重量，然后計算每一實驗組(Wti)及對照組(Wc)中每只小鼠的平均腫瘤重量，每一治療組的腫瘤抑制比例(Ri)可由下列公式得出Ri(%)=Wc-WtiWc×100%]]>試驗結果結果顯示，在劑量為20mg/kg、40mg/kg和60mg/kg時，可分別使腫瘤抑制率達65％、78％及85％，如表3所示表3.腫瘤重量比例(％)帶腫瘤小鼠的壽命延長測試將40只重量為18-22克的C57BL/6J小鼠，不分性別隨機地分為一組對照組和三組治療組，每組各10只動物，將鼠類肉瘤180系細胞殖入小鼠腹腔，在每日給藥前，先稱量體重，然后決定實際所需藥量，在腫瘤移植后24小時開始給藥，每日給藥劑量分別為20mg/kg、40mg/kg和60mg/kg，給藥時間為終身或至多120天，對照組小鼠，則給予普通生理食鹽水，并記錄每一組50％動物的存活天數(shù)(DS50)及平均存活天數(shù)(ADS)，任一組中，如果動物存活天數(shù)超過120天(設計處死天數(shù)為120天)，ADS的計算方式，則視為在第120天死亡，并加以記錄，其生命延長率(LPR)，可由下列公式得出LPR(%)=ADS(treatment)-ADS(control)ADS(control)×100%]]>結果如表4所示表4.攜帶鼠類肉瘤180系細胞小鼠的壽命延長率(％)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射液的抗癌作用，顯示能有效地延長攜帶鼠類肉瘤的小鼠的壽命(與對照組平均生存天數(shù)相比，P＜0.001)，其顯著的抗癌作用，可以顯示在能有效地延長攜帶鼠類肉瘤小鼠的壽命。在接受60mg/kg治療成分組別中的兩只小鼠，存活120天，死亡后，檢查發(fā)現(xiàn)身體中沒有任何腫瘤存在。六、達瑪烷類苷元及配基靜脈注射劑的臨床應用病例(1)53歲女性，體重59kg，身高164cm病史患者為一53歲女性乳癌患者，于1999年發(fā)現(xiàn)骨轉移。又于2000年12月發(fā)現(xiàn)兩處顱內病灶；分別位于右頂葉(3.0×2.1公分)及顱底靠額葉部位(1.6×1.4公分)，同時合并病灶旁水腫?；颊邿o痙攣現(xiàn)象，但呈現(xiàn)情緒及情感反應異常。2001年2月接受了診斷性核磁共振(DiagnosticMRI)檢查，血液檢查顯示CA12.5＝46I.U./ml；CEA4.7ng/ml。治療按臨床試驗方案治療，靜脈滴注達瑪烷類苷元及配基注射劑4000mg/次，每周2次，連續(xù)12周。除此以外，并無接受皮質類固醇或其它治療。在整個治療過程中，血常規(guī)未見任何變化。在接受人參皂苷元注射劑治療過程中，未見脫發(fā)或食欲減退情況，亦未見其它毒性反應。病情進展經(jīng)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射劑治療兩個月后，MRI追蹤檢查顯示顱內病灶明顯縮小，右頂葉病灶從原來的3.0×2.1公分縮小至2.3×1.7cm公分，顱底靠額葉部位病灶從原來的1.6×1.4cm公分縮小至1.2×1.2公分，病灶旁水腫也明顯改善。在整個治療過程中，患者無任何不適。病人現(xiàn)況病人目前自覺良好，生活正常。體內腫瘤標記，血液檢查顯示CEA已下降為2.87ng/ml、CA12.5＝32.8I.U./ml。病例(2)63歲女性，體重79kg，身高163cm病史患者為一63歲女性乳癌患者，于2000年發(fā)現(xiàn)骨轉移。于2001年2月接受了診斷性核磁共振(DiagnosticMRI)檢查，結果在顱內右側頂葉發(fā)現(xiàn)一較大獨立病灶(3.4×2.3公分)；并合并明顯病灶旁水腫?；颊咴袛?shù)次癲癇發(fā)作，因此，給于抗癲癇藥物治療以及用皮質類固醇來治療腦水腫。血液檢查顯示CA12.5＝38.9I.U./ml；CEA5.7ng/ml，血常規(guī)呈腫瘤性貧血(Hgb8.9g/L)。治療按臨床試驗方案治療，靜脈滴注達瑪烷類苷元及配基靜脈注射劑3000mg/次，每周2次，連續(xù)12周。除此以外，并無接受皮質類固醇或其它治療。針對腫瘤所導致的貧血，給予Erythropoietin，每周9x10,000I.U.共3周。在接受治療過程中，未見脫發(fā)或食欲減退情況，亦未見其它毒性反應。貧血亦有所改善；血紅素(Hgb)在治療終結時已回升至11.2g/L。病情進展經(jīng)達瑪烷類苷元及配基靜脈注射劑治療兩個月后，MRI追蹤復檢顯示顱內病灶明顯縮小，從原來的3.5×2.3公分縮小至3.0×1.9公分，病灶旁水腫也明顯改善。在整個治療過程中，患者感覺良好，無明顯不適。病人現(xiàn)況病人目前自我感覺良好，生活正常。體內腫瘤標記，血液檢查顯示CEA已下降為3.93ng/ml、CA12.5＝31.8I.U./ml。目前所接受的治療包括H-15(每日三次，每次一粒)；IMUSAN(每日三次，每次一粒)；MGN-3，每日1.0克。病例(3)74歲，女性，體重56kg病史病人在2000年7月胸部CT計算機斷層掃瞄檢查。發(fā)現(xiàn)一約10公分大小之腫瘤位于右上葉之主支氣管處，并且造成局部支氣管阻塞，而且已侵犯到附近肺動脈血管。已不能手術。病理報告為肺鱗狀細胞癌。治療按臨床試驗方案治療，靜脈滴注達瑪烷類苷元及配基靜脈注射劑2000mg/次，每周2次，連續(xù)12周。除此以外，并無其它治療。在接受靜脈注射治療過程中，未見脫發(fā)或食欲減退情況，亦未見其它毒性反應。貧血亦有所改善；血紅素(Hgb)在治療終結時已回升至11.2g/L。經(jīng)過12周(三個療程)的靜脈注射治療，影像報告及圖片如下1、肺右上葉有些微鈣化表現(xiàn)。2、無殘留腫塊發(fā)現(xiàn)。3、無其它異常。腫瘤標識物，血液檢查顯示CEA由30.7ng/ml降至3.8ng/ml，CA12.5由140.89I.U./ml降至12.52I.U./ml?，F(xiàn)況病人目前生活正常，無任何不適，仍繼續(xù)接受隨訪。權利要求1.一種治療癌癥的藥物組合物，其特征是其由達瑪烷類苷元及其配基組成，其組成如下達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為10％-90％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為1％-40％，達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-20％和PBM-110為1％-20％；上述達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD和達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT具有下述結構<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="615">取代基R1R2R3(20S)/R’3(20R)aPPDHHaPPTHHH</table></tables>上述達瑪烷類皂苷元PAM-120和PBM-110分別具有下述結構2.根據(jù)權利要求1所述的治療癌癥的藥物組合物，其特征是所述達瑪烷類苷元及配基的組成如下達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為30％-70％；達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為2％-20％；達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-10％和PBM-110為1％-10％。3.根據(jù)權利要求1所述的治療癌癥的藥物組合物，其特征是所述達瑪烷類苷元及配基的組成如下達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為40％-60％；達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為4％-10％；達瑪烷類皂苷元PAM-120為1％-5％和PBM-110為1％-5％。4.一種治療癌癥的的靜脈注射液，其特征是每1000mL該靜脈注射液中含權利要求1-3中任何一項所述的治療癌癥的藥物組合物10g，含氧化蓖麻油(CremophorEL)130g，含無水乙醇100mL，余量為注射用水。5.權利要求1-3任一項所述的治療癌癥的藥物組合物在制備治療胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、直腸癌、宮頸癌、食道癌和血癌等惡性腫瘤以及耐藥、復發(fā)和轉移腫瘤的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療癌癥的藥物組合物，由達瑪烷類苷元及其配基組成，其組成如下達瑪烷類苷元二醇皂苷元aPPD為10％－90％，達瑪烷類苷元三醇皂苷元aPPT為1％－40％，達瑪烷類皂苷元PAM－120為1％－20％和PBM－110為1％－20％。本發(fā)明還公開了一種治療癌癥的的靜脈注射液，每1000mL該靜脈注射液中含上述治療癌癥的藥物組合物10g，含氧化蓖麻油(CremophorEL)130g，含無水乙醇100mL，余量為注射用水。本發(fā)明還公開了上述治療癌癥的藥物組合物在制備治療胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、直腸癌、宮頸癌、食道癌和血癌等惡性腫瘤以及耐藥、復發(fā)和轉移腫瘤的藥物中的應用。文檔編號A61P35/00GK1742738SQ200410075340公開日2006年3月8日申請日期2004年9月1日優(yōu)先權日2004年9月1日發(fā)明者黃冬申請人:博新藥業(yè)股份有限公司