本發(fā)明涉及藥物制備領(lǐng)域，具體地，涉及一種載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：載藥微球一般指粒徑尺度為1-500微米的球形顆粒，其主要包括兩種組成成分，一是微球的骨架材料，另一是微球包載的原料藥。載藥微球需要與人體組織接觸才能夠在臨床中發(fā)揮藥效，因此骨架材料一般是生物相容性良好且可在人體中被降解的材料，包括人工合成的高分子聚合物以及天然高分子聚合物等，上述兩類(lèi)材料在藥典中均有詳細(xì)的描述，作為輔料被廣泛的應(yīng)用在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中。載藥微球延長(zhǎng)了藥物的釋放周期，并降低了毒副作用，因此可以作為注射劑、口服劑或局部組織植入劑的主要成分，目前主要應(yīng)用在病菌感染、腫瘤、糖尿病以及抑郁癥等疾病的治療中。由于原料藥以及骨架材料的物理化學(xué)性質(zhì)不同，其相應(yīng)載藥微球的制備工藝也有所差異，現(xiàn)行的微球制備工藝主要包括以下幾種：第一種為靜電噴霧法。靜電噴霧又稱(chēng)電紡技術(shù)，電紡過(guò)程中，原料藥與骨架材料溶解分散在有機(jī)溶液中，在靜電力的作用下形成“taylor”液錐，在不考慮重力的情況下“taylor”液錐受到靜電力作用與反方向的表面張力作用。當(dāng)靜電力突破表面張力束縛時(shí)，“taylor”液錐逐漸被拉長(zhǎng)并在電場(chǎng)下形成微米級(jí)的液滴，有機(jī)相揮發(fā)之后即形成微球。靜電噴霧法優(yōu)點(diǎn)是工序簡(jiǎn)單，但是走向產(chǎn)業(yè)化還有很大的困難。第二種為噴霧干燥法。制備過(guò)程中，將聚合物與原料藥溶解于水相或者有機(jī)相，通過(guò)噴霧器使藥物溶液迅速變成微米級(jí)的液滴，其中形成的液滴與熱氣體(空氣或者氮?dú)?接觸使溶劑揮發(fā)，從而得到聚集于干燥塔底部的干燥顆粒。噴霧干燥法在食品工業(yè)中應(yīng)用廣泛，但應(yīng)用于載藥微球的制備過(guò)程中，其產(chǎn)率與藥物緩釋效果的優(yōu)化還需要探索。第三種是乳液交聯(lián)法。乳液交聯(lián)法一般分為離子交聯(lián)法與戊二醛交聯(lián)法，制備過(guò)程中，首先將聚合物與原料藥溶解于水相，并加入到含有表面活性劑的油相中通過(guò)攪拌、超聲等形成反相乳液。根據(jù)骨架材料的性質(zhì)不同，可以選擇加入陽(yáng)離子(如鈣離子)或者戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)后的微球通過(guò)離心、洗滌、干燥即可獲取。本方法適用于可以溶于水的骨架材料，但有機(jī)相的去除比較困難。第四種為乳液溶劑揮發(fā)法。該制備方法分為一步乳化法以及復(fù)乳法。一步乳化法以水包油類(lèi)乳液為主，骨架材料一般是合成的高分子聚合物，原料藥溶解或者分散在油相中。復(fù)乳法制備過(guò)程中，藥物水溶液首先在油相中形成初乳，然后初乳再次在水相中形成復(fù)乳，本方法適合于包載水中溶解度較高的原料藥或者有活性的生物大分子。本方法制備載藥微球已經(jīng)在醫(yī)藥工業(yè)中廣泛應(yīng)用，但仍有一些問(wèn)題需要解決，例如緩釋速度控制的工藝以及降低藥物突釋的工藝等。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中藥物緩釋速度難以控制的缺陷，提供一種可以有效控制藥物緩釋速度的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種制備載藥微球的方法，該方法包括：(1)將表面活性劑與水混合，制得水相；(2)將藥物、藥物載體用聚合物材料、第一溶劑和第二溶劑混合，制得油相；(3)將油相加入到水相中進(jìn)行混合；其中，所述第一溶劑與所述第二溶劑不同，且所述第二溶劑與所述第一溶劑互溶，所述第二溶劑為c1-c3的醇、c1-c3的脂肪酸、c1-c3的脂肪酸酯、c1-c2的醚和乙腈中的至少一種，所述第一溶劑的用量大于所述第二溶劑的用量。第二方面，本發(fā)明提供了上述方法制備的載藥微球。第三方面，本發(fā)明提供了上述載藥微球在制備用于治療腫瘤以及粘膜相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明方法制備的載藥微球的外觀為球形顆粒。采用本方法制備的載藥微球，其藥物緩釋效果不僅可以通過(guò)第二溶劑進(jìn)行控制，0.5小時(shí)內(nèi)的藥物突釋量也比目前報(bào)道的數(shù)值要少，藥典中“微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則”中規(guī)定在開(kāi)始的0.5小時(shí)內(nèi)釋放量要求低于40％，本發(fā)明工藝中加入第二溶劑后所制備的微球均達(dá)到了要求。本發(fā)明的方法制成的微球可以作為栓劑、粘膜沖洗液(如陰道沖洗液)、泡騰片、軟膏、粉劑以及藥膜的組成成分，并應(yīng)用于需要持續(xù)給藥的相關(guān)疾病，其中，利用注射、口服、外用或植入等給藥方式，將載藥微球與人體的粘膜組織、血液或者間質(zhì)組織結(jié)合，從而應(yīng)用到病菌感染、腫瘤等疾病的治療中去。上述相關(guān)疾病例如與呼吸道粘膜、消化道粘膜、泌尿系統(tǒng)粘膜或生殖系統(tǒng)粘膜相關(guān)的腫瘤、上皮組織內(nèi)病變或炎癥。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說(shuō)明。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明實(shí)施例1制得的載藥微球掃描電鏡圖；圖2是本發(fā)明實(shí)施例1制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖3是本發(fā)明實(shí)施例2-4制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖4是本發(fā)明實(shí)施例5-7制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖5是本發(fā)明實(shí)施例8-10制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖6是本發(fā)明實(shí)施例11-13制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖7是本發(fā)明實(shí)施例14-16制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖8是本發(fā)明實(shí)施例17-19制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖9是本發(fā)明實(shí)施例20-21制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖10是本發(fā)明實(shí)施例22制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖；圖11是對(duì)比例1制得的載藥微球藥物累計(jì)釋放量曲線(xiàn)圖。具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。一方面，本發(fā)明提供了一種制備載藥微球的方法，該方法包括：(1)將表面活性劑與水混合，制得水相；(2)將藥物、藥物載體用聚合物材料、第一溶劑和第二溶劑混合，制得油相；(3)將油相加入到水相中進(jìn)行混合；其中，所述第一溶劑與所述第二溶劑不同，且所述第二溶劑與所述第一溶劑互溶，所述第二溶劑為c1-c3的醇、c1-c3的脂肪酸、c1-c3的脂肪酸酯、c1-c2的醚和乙腈中的至少一種，所述第一溶劑的用量大于所述第二溶劑的用量。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，優(yōu)選地，所述第二溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、乙酸、乙酸乙酯、乙醚和乙腈中的至少一種，更優(yōu)選為甲醇、乙酸、乙醇、乙醚、乙腈和異丙醇中的至少一種，從而能夠顯著提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，第一溶劑可以為本領(lǐng)域各種有機(jī)溶劑，例如可以為二氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、氯仿、二氯乙烷、正己烷和二甲基甲酰胺中的至少一種，優(yōu)選為二氯甲烷、氯仿和四氫呋喃中的至少一種，更優(yōu)選為二氯甲烷，從而能夠與第二溶劑相互配合，進(jìn)而顯著提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。本發(fā)明的發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，第二溶劑可以溶解于水中或揮發(fā)性較強(qiáng)。根據(jù)第二溶劑粘度的不同，其對(duì)藥物緩釋效果的調(diào)控呈現(xiàn)出兩個(gè)不同的特點(diǎn)：當(dāng)?shù)诙軇┱扯却笥诘谝蝗軇r(shí)，隨著第二溶劑在油相體系中比例的增加，藥物釋放的總量也增加，但當(dāng)?shù)诙軇┰谟拖囿w系中比例增加到一定程度時(shí)，藥物釋放的總量反而減小；當(dāng)?shù)诙軇┱扯刃∮诘谝蝗軇r(shí)，隨著第二溶劑在油相體系中比例的增加，藥物釋放的總量隨之降低。前兩種情況之下，藥物釋放的總量整體上均比沒(méi)有加第二溶劑時(shí)的藥物釋放量要大。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(1)中，表面活性劑的濃度可以為本領(lǐng)域常規(guī)的濃度，例如，水相中表面活性劑與水的質(zhì)量體積百分?jǐn)?shù)為0.1％-10％，優(yōu)選為0.5％-5％。即步驟(1)制得的水相是表面活性劑的水溶液，該水溶液配制方法為本領(lǐng)域的常規(guī)方法，例如可以包括：將表面活性劑緩慢加入到水中，然后在400-500r/min轉(zhuǎn)速下攪拌10-15min，再將該混合溶液在90-100℃下加熱10-15min，然后降溫至室溫。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(1)中，表面活性劑的種類(lèi)可以為本領(lǐng)域各種常規(guī)的表面活性劑，例如可以為o/w型乳化劑，優(yōu)選地，所述表面活性劑為聚乙烯醇和/或聚乙烯吡咯烷酮，從而能夠提高藥物在制得的載藥微球中的分散性。其中，表面活性劑的重均分子量可以為本領(lǐng)域常規(guī)的分子量范圍，例如可以為20000-30000g/mol。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，藥物載體用聚合物材料可以為本領(lǐng)域各種藥物載體，例如可以為聚己內(nèi)酯、聚乳酸、聚氨酯、明膠、聚丙烯酸、羧甲基纖維素鈉、聚卡波非、殼聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乳酸-羥基乙酸共聚物和聚乙烯醇中的至少一種。為了進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制，優(yōu)選地，所述藥物載體用聚合物材料為聚乳酸和/或聚乳酸-羥基乙酸共聚物。其中，所述藥物載體用聚合物材料為聚乳酸-羥基乙酸共聚物時(shí)，其乳酸與羥基乙酸的單體配比可以為75/25或者50/50。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，優(yōu)選地，所述藥物載體用聚合物材料的重均分子量為10000g/mol以上，更優(yōu)選為30000-300000g/mol，從而能夠提高藥物在藥物載體用聚合物材料中的分散性，進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，所述第一溶劑的用量只要大于所述第二溶劑的用量即可，優(yōu)選地，所述第一溶劑的體積用量與所述第二溶劑的體積用量比例為1：0.005-0.5，優(yōu)選為1：0.01-0.1，從而能夠進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，優(yōu)選地，相對(duì)于10ml第一溶劑，所述藥物的用量為0.01-2g，所述藥物載體用聚合物材料的用量為0.3-3g，更優(yōu)選地，相對(duì)于10ml第一溶劑，所述藥物的用量為0.03-1g，所述藥物載體用聚合物材料的用量為0.5-2g，從而能夠進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(2)中，藥物、藥物載體用聚合物材料、第一溶劑和第二溶劑混合順序沒(méi)有特別地限定，只要混合后形成均勻的油相溶液或者懸浮液即可。例如，當(dāng)藥物與第一溶劑互容時(shí)，可以將藥物、藥物載體用聚合物材料、第一溶劑和第二溶劑一起混合，當(dāng)藥物與第一溶劑不互容時(shí)，可以先將藥物與第一溶劑混合，再將得到的混合液與藥物載體用聚合物材料混合，最后再加入第二溶劑。在一種具體的實(shí)施方式中，將藥物與第一溶劑在400-600r/min轉(zhuǎn)速下混合10-15h，然后加入藥物載體用聚合物材料溶解，再加入第二溶劑混合均勻。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(3)中，更優(yōu)選地，步驟(1)得到的水相和步驟(2)得到的油相的體積比為1：0.01-0.15。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，步驟(3)中，所述混合的條件可以為本領(lǐng)域常規(guī)的混合條件，例如可以包括：溫度為-5～25℃，攪拌速度為200-2000轉(zhuǎn)/分鐘；優(yōu)選地，溫度為-5～5℃，攪拌速度為400-1000轉(zhuǎn)/分鐘；從而更有利于形成載藥微球，進(jìn)而進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制，其中攪拌的時(shí)間可以根據(jù)實(shí)際需要調(diào)整，只要能夠使得水相和油相混合形成微球，且第一溶劑和第二溶劑揮發(fā)完全即可。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟(3)中，在100-200r/min攪拌速度下，將油相加入到水相中，然后在400-1000r/min攪拌速度下攪拌1-2h，最后將混合液固液分離，得到載藥微球。其中，固液分離的方式可以為離心分離或者過(guò)濾分離。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，該方法還可以包括：將得到的載藥微球進(jìn)行干燥處理，其中，所述干燥處理的方式可以為本領(lǐng)域的常規(guī)方式，例如可以根據(jù)藥物載體用聚合物材料與藥物的物理化學(xué)性質(zhì)選擇以下方式進(jìn)行干燥。一是在真空干燥箱或者鼓風(fēng)干燥箱中烘干，溫度一般設(shè)置為25℃到45℃。二是利用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行凍干，凍干之前，將微球放置于-80℃的冰箱中進(jìn)行預(yù)冷，使微球凍住，然后利用已經(jīng)預(yù)冷的冷凍干燥機(jī)在真空條件下進(jìn)行凍干。本發(fā)明中，所述藥物可以為本領(lǐng)域各種常規(guī)的藥物，例如可以為抗腫瘤藥、消炎藥、止痛藥、抗生素、抗過(guò)敏藥以及抗真菌藥中的至少一種，更優(yōu)選地，所述藥物為5-氟尿嘧啶、阿司匹林、布洛芬、甲硝唑、西替利嗪和硝酸咪康唑中的至少一種，最優(yōu)選為5-氟尿嘧啶。根據(jù)本發(fā)明所述的方法，其中，所述藥物的大小可以為本領(lǐng)域各種常規(guī)的尺寸，例如藥物的平均粒徑可以小于50μm，優(yōu)選為0.05-20μm，從而能夠提高藥物在藥物載體用聚合物材料上的分散性，進(jìn)而進(jìn)一步提高對(duì)藥物緩釋性的有效控制。第二方面，本發(fā)明提供了上述方法制備的載藥微球。本發(fā)明制得的載藥微球的平均粒徑可以為60-400μm，載藥微球的藥物包封率可以高達(dá)55-90％。本發(fā)明中，載藥微球表面形貌定性以及定量檢測(cè)的方法如下：將制備的載藥微球粘附于導(dǎo)電膠上，并將導(dǎo)電膠固定于電子顯微鏡樣品臺(tái)上，在高倍下觀察微球的尺寸以及微球表面的形貌信息，利用電子顯微鏡自帶軟件測(cè)量微球的尺寸。載藥微球的藥物包載率測(cè)試方法和原理如下：將載藥微球溶解于可溶解高分子支架材料的溶劑中，然后加入與所述溶劑不互溶的藥物溶劑中進(jìn)行藥物的萃取，取萃取液利用酶標(biāo)儀、紫外分光光度計(jì)或液相色譜儀測(cè)定藥物濃度，藥物包載率等于單位質(zhì)量微球中實(shí)際的藥物含量與理論含量之比。例如溶解高分子支架材料的溶劑可以為二氯甲烷，與二氯甲烷不互溶的藥物溶劑可以為水。載藥微球的藥物釋放效率測(cè)試方法可以如下：將載藥微球分散于ph7.4的磷酸鹽緩沖液中，在37℃搖床條件下進(jìn)行藥物釋放，每隔一段時(shí)間取一定體積的釋放液，然后補(bǔ)加相同體積的ph7.4的磷酸鹽緩沖液，連續(xù)測(cè)定一段時(shí)間。計(jì)算藥物的累計(jì)釋放量并繪制藥物的釋放曲線(xiàn)。第三方面，本發(fā)明提供了上述的載藥微球在制備用于治療腫瘤以及粘膜相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明所述的應(yīng)用，可以采用各種常規(guī)的方法將上述載藥微球作為栓劑、粘膜沖洗液(如陰道沖洗液)、泡騰片、軟膏、粉劑以及藥膜的組成成分，并應(yīng)用于需要持續(xù)給藥的相關(guān)疾病，其中，利用注射、口服、外用或植入等給藥方式，將載藥微球與人體的粘膜組織、血液或者間質(zhì)組織結(jié)合，從而應(yīng)用到病菌感染、腫瘤等疾病的治療中去，上述相關(guān)疾病例如與呼吸道粘膜、消化道粘膜、泌尿系統(tǒng)粘膜或生殖系統(tǒng)粘膜相關(guān)的腫瘤、上皮組織內(nèi)病變或炎癥。實(shí)施例1本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。(1)水相制備：稱(chēng)取2g聚乙烯醇pva(重均分子量為20000g/mol，購(gòu)自acrosorganics)，緩慢加入100ml水中，然后在500r/min轉(zhuǎn)速下攪拌10分鐘，再將聚乙烯醇與水的混合液在90℃水浴鍋中，水浴加熱10分鐘后取出，放置1h將溫度降至室溫備用。(2)油相制備：將90mg5-氟尿嘧啶(5-fu)與3ml二氯甲烷在500r/min轉(zhuǎn)速下攪拌混合12h，然后再加入450mg左旋聚乳酸plla(重均分子量為80000g/mol，購(gòu)自濟(jì)南岱罡生物工程有限公司)渦旋溶解1分鐘，再加入150μl無(wú)水乙醇，渦旋混勻1min。(3)微球制備：將3ml上述制得的油相倒入燒杯100ml水相中，利用冰浴將液體溫度控制在0℃，使用磁力攪拌器以200r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行低速攪拌，邊低速攪拌邊將制得的油相加入水相中。隨后將攪拌速度提高至800r/min，持續(xù)攪拌1h。然后收集混合液，利用離心的方法進(jìn)行固液分離，收集微球顆粒，將該微球顆粒在30℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干，制備成載有5-fu的左旋聚乳酸微球。(4)載有5-fu的左旋聚乳酸微球用于制備治療腫瘤以及粘膜相關(guān)的疾病的藥物。對(duì)比例1按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，不加入第二溶劑無(wú)水乙醇。實(shí)施例2本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。(1)水相制備：稱(chēng)取2g聚乙烯醇(重均分子量為30000g/mol，購(gòu)自acrosorganics)，緩慢加入100ml水中，然后在500r/min轉(zhuǎn)速下攪拌10分鐘，再將聚乙烯醇與水的混合液在90℃水浴鍋中，水浴加熱10分鐘后取出，放置1h將溫度降至室溫備用。(2)油相制備：將60mg5-氟尿嘧啶(5-fu)與3ml二氯甲烷在500r/min轉(zhuǎn)速下攪拌混合12h，然后再加入450mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物plga(重均分子量為40000g/mol，單體比例為75/25，購(gòu)自濟(jì)南岱罡生物工程有限公司)渦旋溶解1分鐘，再加入30μl異丙醇，渦旋混勻1min。(3)微球制備：將3ml上述制得的油相倒入燒杯100ml水相中，利用冰浴將液體溫度控制在3℃，使用磁力攪拌器以200r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行低速攪拌，邊低速攪拌邊將制得的油相加入水相中。隨后將攪拌速度提高至600r/min，持續(xù)攪拌2h。然后收集混合液，利用離心的方法進(jìn)行固液分離，收集微球顆粒，將該微球顆粒在30℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干，制備成載有5-fu的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球。(4)載有5-fu的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球用于制備治療腫瘤以及粘膜相關(guān)的疾病的藥物。實(shí)施例3-4本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例2的方法制備載藥微球，不同的是，異丙醇的用量分別為150μl、300μl，制得載有5-fu的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球。對(duì)比例2按照實(shí)施例2的方法制備載藥微球，不同的是，不加入第二溶劑異丙醇。實(shí)施例5-7本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，5-fu的使用量是60mg，將乙醇替換為乙酸，乙酸的用量分別為30μl、150μl，300μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。實(shí)施例8-10本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，將乙醇替換為甲醇，甲醇的用量分別為30μl、150μl，300μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。實(shí)施例11-13本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，5-fu的使用量是60mg，將乙醇替換為乙腈，乙腈的用量分別為30μl、150μl，300μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。實(shí)施例14-16本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，5-fu的使用量是60mg，將乙醇替換為乙醚，乙醚的用量分別為30μl、150μl，300μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。實(shí)施例17-19本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，5-氟尿嘧啶(5-fu)的用量為45mg，無(wú)水乙醇的用量分別為150μl、240μl，300μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。實(shí)施例20-21本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，5-氟尿嘧啶(5-fu)的用量為16mg，二氯甲烷的量為2ml，左旋聚乳酸plla用量為160mg，聚乙烯醇pva用量為1g，無(wú)水乙醇的用量分別為20μl、60μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。對(duì)比例3按照實(shí)施例20的方法制備載藥微球，不同的是，不加入第二溶劑無(wú)水乙醇。實(shí)施例22-23本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，二氯甲烷體積為8ml，5-氟尿嘧啶(5-fu)的用量為128mg，左旋聚乳酸plla用量為1600mg，聚乙烯醇pva用量為4g，無(wú)水乙醇的用量分別為80μl、400μl，制得載有5-fu的左旋聚乳酸微球。對(duì)比例4按照實(shí)施例22的方法制備載藥微球，不同的是，不加入第二溶劑無(wú)水乙醇。實(shí)施例24本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例1的方法制備載藥微球，不同的是，第二次的攪拌速度為400r/min，持續(xù)攪拌2h。實(shí)施例25本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的載藥微球及其制備方法和應(yīng)用。按照實(shí)施例2的方法制備載藥微球，不同的是，plga分子量為300000g/mol，制備載有5-fu的聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球。測(cè)試?yán)?.1微球粒徑統(tǒng)計(jì)將制備的載藥微球粘附于導(dǎo)電膠上，并將導(dǎo)電膠固定于電子顯微鏡樣品臺(tái)上，在高倍下觀察微球的尺寸以及微球表面的形貌信息(參見(jiàn)圖1)，利用電子顯微鏡自帶軟件測(cè)量微球的尺寸，結(jié)果見(jiàn)下表1。1.2微球的包封率測(cè)試稱(chēng)取微球質(zhì)量30mg，加入二氯甲烷適量，攪拌溶解后，加入30ml純水，以800r/min轉(zhuǎn)速攪拌，蒸發(fā)二氯甲烷，直至燒杯中不見(jiàn)液相分層。取部分液體，經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾，使用紫外分光光度計(jì)測(cè)量266nm處吸光度。根據(jù)5-fu吸光度曲線(xiàn)計(jì)算溶液中5-fu的濃度n。計(jì)算得包封率和微球載藥量，結(jié)果見(jiàn)下表2。1.3微球的緩釋性能測(cè)試量取微球11mg置于15ml離心管，加入pbs10ml，旋緊管蓋，在37℃水浴搖床中，于放置后不同時(shí)間點(diǎn)取出離心管離心，取樣，補(bǔ)液。樣品在266nm處測(cè)得吸光度，根據(jù)5-fu吸光度曲線(xiàn)計(jì)算藥物釋放量結(jié)果見(jiàn)下表3-11和圖1-11。表1實(shí)施例載藥微球平均粒徑(μm)實(shí)施例1182μm對(duì)比例1185μm實(shí)施例2-483.3μm對(duì)比例278μm實(shí)施例5-7170.9μm實(shí)施例8-10225.75μm實(shí)施例11-13168.9μm實(shí)施例14-16183μm實(shí)施例17-19145.7μm實(shí)施例20-21130.3μm對(duì)比例3125μm實(shí)施例22233.7μm實(shí)施例23381μm實(shí)施例24240μm實(shí)施例25173μm對(duì)比例4190μm表2表3表4表5表6表7表8表9表10表11通過(guò)表3和圖2、11可以看出，實(shí)施例1制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為3.9％，而對(duì)比例1制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為3.75％，比較可以看出，當(dāng)加入第二溶劑時(shí)，能夠顯著提高對(duì)藥物緩釋效果的控制。通過(guò)表4和圖3可以看出，實(shí)施例2-4制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為2.74％，6.53％，3.83％，并且實(shí)施例2-4制得的載藥微球在24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙酸體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例2。通過(guò)表5和圖4可以看出，實(shí)施例5-7制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為1.33％，7.69％，10.02％，并且實(shí)施例5-7制得的載藥微球在24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙酸體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例1。通過(guò)表6和圖5可以看出，實(shí)施例8-10制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為3.78％，12.54％，8.83％，并且實(shí)施例8-10制得的載藥微球24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑甲醇體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例1。通過(guò)表7和圖6可以看出，實(shí)施例11-13制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為4.25％，5.06％，5.62％，實(shí)施例11-13制得的載藥微球24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙腈體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例1。通過(guò)表8和圖7可以看出，實(shí)施例14-16制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為1.26％，3.80％，8.92％，實(shí)施例14-16制得的載藥微球24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙腈體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例1。通過(guò)表9和圖8可以看出，實(shí)施例17-19制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為14.83％，10.40％，15.81％，實(shí)施例17-19制得的載藥微球24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙醇體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例1。通過(guò)表10和圖9可以看出，實(shí)施例20-21制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為7.15％，3.28％，24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙醇體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例3。通過(guò)表11和圖10可以看出，實(shí)施例22和23制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量分別為5.89％，8.24％，24小時(shí)內(nèi)藥物釋放的總量隨著第二溶劑乙醇體積比的增加而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，且均優(yōu)于對(duì)比例4。通過(guò)表11的數(shù)據(jù)還可以看出，實(shí)施例24制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為4.99％，實(shí)施例25制得的載藥微球在半小時(shí)內(nèi)藥物釋放量為0.44％。由圖1可以看出，本發(fā)明方法制備的載藥微球的外觀為球形顆粒。采用本方法制備的載藥微球，其藥物緩釋效果不僅可以通過(guò)第二溶劑進(jìn)行控制，0.5小時(shí)內(nèi)的藥物突釋量也比目前報(bào)道的數(shù)值要少，藥典中“微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則”中規(guī)定在開(kāi)始的0.5小時(shí)內(nèi)釋放量要求低于40％，本發(fā)明工藝中加入第二溶劑后所制備的微球均達(dá)到了要求。本發(fā)明的方法制成的微球可以作為栓劑、粘膜沖洗液(如陰道沖洗液)、泡騰片、軟膏、粉劑以及藥膜的組成成分，并應(yīng)用于需要持續(xù)給藥的相關(guān)疾病，其中，利用注射、口服、外用或植入等給藥方式，將載藥微球與人體的粘膜組織、血液或者間質(zhì)組織結(jié)合，從而應(yīng)用到病菌感染、腫瘤等疾病的治療中去。上述相關(guān)疾病例如可以與呼吸道粘膜、消化道粘膜、泌尿系統(tǒng)粘膜或生殖系統(tǒng)粘膜相關(guān)的腫瘤、上皮組織內(nèi)病變或炎癥。以上結(jié)合附圖詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說(shuō)明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過(guò)任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說(shuō)明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開(kāi)的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁(yè)12