相關申請的交叉引用

本申請要求2014年11月21日申請的名稱為“用于在醫(yī)院內(nèi)和醫(yī)院外治療蛇咬傷的中和毒液的藥物組合物(venomneutralizingdrugcombinationsforthetreatmentofsnakebiteinandoutsidethehospitalsetting)”的美國臨時申請nos.62/082,895及名稱相同、2015年3月11日申請的nos.62/131,441及名稱相同、2015年10月19日申請的nos.62/243,374的優(yōu)先權。為了所有目的，上述這些申請的全部公開內(nèi)容均通過引用而整體并入本文。

本發(fā)明涉及治療毒液蟄入(如蛇咬傷解毒)的方法和組合物，并且應用于醫(yī)藥、公共健康和獸醫(yī)技術領域。

背景技術：

毒液是具有簡單或復雜成分的毒物的子集，通常由含有毒素的毒牙、毒刺、殼針或觸角注入到體內(nèi)，使獵物不能動彈或殺死獵物或作為防御捕食者或競爭對手的手段。毒液通常通過咬傷或通過尖銳的身體部位插入而輸入到受害者體內(nèi)。雖然許多毒液僅會造成不適，但是，有些毒液的毒性非常大，并會引起受害者死亡、截肢或永久性殘廢。有毒動物的例子包括無脊椎動物(如黑寡婦毒蛛、箱形水母和芋螺)、魚類(如石魚和鲉科其它成員)和爬蟲動物(如蛇和珠狀蜥蜴)。特別地，毒蛇咬傷是許多國家重大的公共健康問題，除南極洲以外的所有大陸都有此類事件發(fā)生。

世界各地每年有500萬以上的毒蛇咬傷案例，其中許多案例或40多萬起案例造成了嚴重的后遺癥?？赡苡缮咭鸬乃劳霭咐哌_12.5萬起，并且造成許多起永久性殘廢。據(jù)估計，印度每年因蛇咬傷死亡的受害者超過4萬人(大多數(shù)是年輕人)。在美國，每年發(fā)生大約8000起毒蛇咬傷事件，澳大利亞盡管沒有來自大陸的毒蛇，但是，每年較高神經(jīng)毒性和血毒性毒蛇咬傷達1500多起。參見alirol等2010,"snakebiteinsouthasia:areview"plosnegltropdis.4(1):e603；andkasturiratneetal2008,"theglobalburdenofsnakebite:aliteratureanalysisandmodelingbasedonregionalestimatesofenvenominganddeaths/'plosmed.5:e218。

在蛇類中，毒液組合物的不同是普遍存在的現(xiàn)象，并且在物種間和物種內(nèi)都有發(fā)生，限制了抗蛇毒血清與其指定應用的蛇毒的交叉反應性，甚至更多蛇毒的清除是從抗蛇毒血清來源系統(tǒng)發(fā)生的。通過使抗蛇毒血清中的特異性抗體對不同毒液中的異源性毒素無效，毒液變異會對被蛇咬傷的受害者造成嚴重的后果。casewell等,"medicallyimportantdifferencesinsnakevenomcompositionaredictatedbydistinctpostgenomicmechanisms",proceedingsofthenationalacademyofsciences111.25(2014):9205-9210。同一品種的蛇-或甚至是同一條蛇產(chǎn)生的蛇毒組合物及外部結(jié)構(gòu)的特點差別非常大，使研制廣泛有效的抗蛇毒血清不可行。

許多毒液包括各種成分，這些成分通過干擾傳輸或破壞神經(jīng)末梢來阻斷神經(jīng)和肌肉之間乙酰膽堿的傳輸，使骨骼肌麻痹，它們本身使除高級生命支持以外的所有治療都無效。許多毒液破壞肌肉、結(jié)締組織和皮膚，而有些毒液引發(fā)嚴重的、通常致命性出血和凝血–或所有這些影響的結(jié)合(例如，許多眼鏡蛇類的毒液，如珊瑚蛇、太攀蛇和眼鏡蛇的毒液及蝰蛇，如拉塞爾蝰蛇、極北蝰的毒液及響尾蛇的毒液通常同時具有血毒性/細胞毒性和神經(jīng)毒性)。毒液通常是具有不同的活性組合(例如，神經(jīng)毒性與血毒性或肌肉毒性組合)的酶和非酶毒素的復雜混合物。

雖然有時候能夠得到抗蛇毒血清，但是因為各種原因，它們在治療受害者方面的價值受到限制。首先，即使同一種蛇，甚至同一條蛇，其毒液的組成和作用也會因飲食和地域而明顯不同。同一種蛇但地域不同，其毒液組成也會有很大差異，因此，在印度某個地方，一種蛇(例如，圓斑蝰)主要因出血問題而造成死亡，而在印度另一個地方，這種蛇更具有神經(jīng)毒性。同樣地，歐洲蝰(例如，極北蝰)的毒液會變化，因此，在某些情況下毒液更具神經(jīng)毒性，而在另一些情況下引起細胞色素氧化酶-血毒性。在北美，因地區(qū)而異，初步抗毒血清治療后的癥狀和體征出現(xiàn)復發(fā)，需要重新治療的發(fā)生率更高。在許多情況下，如果無法提供多價抗蛇毒血清，蛇的品種變得非常重要，從而使用合適的抗蛇毒血清，但是，即使正確辨別了動物的品種，也并不能保證已經(jīng)開發(fā)出其對應的抗蛇毒血清。在這種情況下，采用最相配或“副特異性”抗蛇毒血清作為最佳方案，但是，它們經(jīng)常無效，同時會出現(xiàn)并發(fā)癥和帶來嚴重的經(jīng)濟負擔。

其次，在某些情況下，例如，北美珊瑚蛇(單特異性的)或非洲蛇(多價的)，抗蛇毒血清已經(jīng)退出市場。在撒哈拉以南非洲，由于生產(chǎn)廠商決定中斷生產(chǎn)，這些重要的商業(yè)制劑已經(jīng)非常稀少。2015年，無國界醫(yī)生(msf，無國界醫(yī)生組織)在其全球“愿望清單”(facebook)上提供增加蛇咬傷治療方法的有效性，據(jù)世界新聞報道，2016年，大部分非洲大陸將消耗完有效的抗蛇毒血清治療，并聲稱(例如，msf出版社2015年9月4日和8日發(fā)布)“除非全球衛(wèi)生界采取行動確保提供治療和抗蛇毒血清，否則，將有數(shù)萬人繼續(xù)因蛇咬傷而造成不必要的死亡。”

再次，也許最重要的是，即使已經(jīng)辨別毒液的來源，并存在對應的抗蛇毒血清，受害者獲得抗毒血清的可能性非常低或經(jīng)濟上無法承擔，從而，受害者寧愿冒死亡的風險也不會尋求昂貴的醫(yī)學治療。據(jù)估計，每年因蛇咬造成的死亡75％以上發(fā)生在醫(yī)院以外的地方，通常是野外。大多數(shù)抗蛇毒血清容易腐壞，由于低溫運輸?shù)囊?，并且存在較高的嚴重副反應發(fā)生率，需要開展預防性或急性護理(如過敏性反應)，通常無法在醫(yī)院以外的地方提供。此外，由于毒蛇咬傷通常發(fā)生在遠離人口集中的偏遠地方，受害者不可能在癥狀出現(xiàn)后及時趕到醫(yī)院接受治療。最后，由于血液凝塊的物理性質(zhì)，抗蛇毒血清無法有效滲透通過已經(jīng)被毒液損害的組織，壞死組織不允許通過，抗蛇毒血清只能中和循環(huán)毒液，或通過其它手段直接接觸的毒液。由于抗蛇毒血清無法滲透周圍神經(jīng)系統(tǒng)組織和中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織，因此，通常認為其在治療神經(jīng)毒素-誘發(fā)的病理方面無效。相反，大多數(shù)情況下，生命-支持措施，如機械通風能夠拯救這些患者的生命。本發(fā)明通過減少對這些干預措施的需求，降低icu費用和減少個人和社會的護理總費用，并且通過任何途徑的單獨給藥、與其它已知干預(如抗蛇毒血清)聯(lián)合給藥或聯(lián)合配制，可以作為蛇咬傷的一線治療方法。除抗蛇毒血清之外，還嘗試了蛇咬傷補充治療方法。通過靜脈內(nèi)注射乙酰膽堿酯酶抑制劑騰喜龍治療蛇咬傷(warrelletal.,1983,"severeneurotoxicenvenomingbythemalayankraitbungaruscandidus(linnaeus):responsetoantivenomandanticholinesterase.brmedj(clinresed)286(6366):678-80；wattetal.1986,"positiveresponsetoedrophoniuminpatientswithneurotoxicenvenomingbycobras(najanajaphilippinensis)。aplacebo-controlledstudy"nengljmed.315(23):1444-8；andcurrieetal1988,"resolutionofneurotoxicitywithanticholinesterasetherapyindeath-adderenvenomation.med.j.aust.148:522-525)?；|(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(mpi)和磷脂酶a2抑制劑(plai2)被提出作為可能的治療方法，但是，尚未確定有效的廣泛應用示例。villalta-romero等.acsmedchemlett2012,3f540-543和marcusi等.snakevenomphospholipasea2inhibitors,currenttopicsinmedicinalchemistry,2007。

由于毒液分子的外部結(jié)構(gòu)變化多端，并且它們給抗蛇毒血清提出了非常困難且無效的靶標，因此，多功能抗蛇毒血清的蛇咬傷治療被證明是難以實現(xiàn)的。甚至更難實現(xiàn)的是對蛇咬傷毒液蟄入具有特異性或廣譜效果的藥物學蛇咬傷治療的研究。因此，明顯需要一種能夠及時提供的經(jīng)濟有效的蛇咬傷治療方法，這種需要目前尚未滿足。因為目前蛇咬傷治療的療效有限–及預期的經(jīng)濟損失，抗蛇毒血清及蛇咬傷治療的高昂費用通常符合世界衛(wèi)生組織對“災難性醫(yī)療保健費用”的定義。因此，不管受害者如何決定，決定治療或不治療蛇咬傷都進退兩難，猶豫不決通常導致死亡或殘疾的結(jié)果。此外，許多政府沒能力或不愿意對視為無效和過時的治療給予補貼，或?qū)で筚M用低、無效的抗蛇毒血清，導致制藥公司停止銷售效果更好但非常昂貴的抗蛇毒血清。傳統(tǒng)的來源于抗蛇毒血清的血清無法在醫(yī)院以外的地方安全地使用。對因蛇咬傷而承受生命和四肢威脅危險的數(shù)百萬人的健康來說，人們負擔得起的廣譜一線蛇咬傷解毒劑將帶來積極的影響。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明人已經(jīng)明確了迅速、有效治療毒液蟄入損害組織和廣泛的相關后遺癥(其中最顯著的是神經(jīng)毒素介導死亡和血液疾病引起的直接生命威脅)的通用治療方案和相關藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒。本發(fā)明的方法和藥物組合物對每種蛇毒pla2酶都非常有效，而與蛇的品種無關，在其它情況下，與其它毒液元素的直接和間接影響–以及宿主系統(tǒng)無關，除降低了蛇毒-誘導病理發(fā)生的可能性之外，還降低了災難性凝血障礙、組織損傷和腎衰竭的可能性，使酶和非酶蛇毒成分的有害性降低，同時鈍化受害者本身對蛇毒影響的病理反應。這種令人吃驚的發(fā)現(xiàn)導致有史以來首次開發(fā)出蛇咬傷現(xiàn)場-治療方法，這種方法可由技術有限的個人在醫(yī)院以外的地方實施，同樣，當這些組合物作為現(xiàn)場或醫(yī)院一線治療方案時，能夠以系統(tǒng)科學的完美方式改進傳統(tǒng)的抗蛇毒血清，因此，第一次有機會利用抗蛇毒血清的發(fā)明，在使用和試驗抗蛇毒血清方面建立臨床均勢。此外，這些解毒劑組合物中的一些組合物可以口服，甚至在到達醫(yī)院之前，藥物在血液中的濃度達到治療有效濃度，這對于生存和減少并發(fā)癥都是一項里程碑式的進步，尤其當與在蛇咬傷病理中具有復合相互作用的蛇和宿主酶的有效mp、sp或多功能抑制劑組合使用時尤其有效。

值得注意的是，與抗蛇毒血清不同，本發(fā)明的藥物組合物更容易滲透通過蛇毒損傷組織和神經(jīng)末梢，包括神經(jīng)肌肉接頭，比抗蛇毒血清的效果更快，更好?？股叨狙灞旧淼奈锢砦镔|(zhì)、血凝塊、壞死組織和神經(jīng)組織限制抗蛇毒血清的此種滲透，結(jié)果是抗蛇毒血清通常僅中和循環(huán)毒液或通過其它途徑直接接觸的毒液。本發(fā)明解決了這些局限性，并且在一些實施例中，當與抗蛇毒血清療法組合作為一線治療方案或聯(lián)合配制時，使抗蛇毒血清的效果遠好于單獨使用的效果。

因此，在一個實施例中，本發(fā)明涉及一種采用至少一種pla2抑制劑(通常是spla2抑制劑)化合物，優(yōu)選1h-吲哚-3-乙醛酰胺(更通常的是3-乙醛酰胺，不那么普通且更特別地是本領域定義的1h-吲哚-3-乙醛酰胺類中的1h-吲哚-3-乙醛酰胺；美國專利5654326)，例如，伐瑞拉迪(varespladib)和/或甲基伐瑞拉迪(methylvarespladib)治療毒液蟄入(例如，有毒動物咬傷或螫傷，如發(fā)明另有定義的蛇、蜥蜴、兩棲動物、蝎子、蜘蛛或無脊椎動物咬傷或螫傷)的方法，該方法涉及在特定的時間間隔內(nèi)，優(yōu)選在毒液蟄入后立即或盡快在大約6小時或更長時間內(nèi)(至少在大約24小時內(nèi)，通常在大約12小時內(nèi))施用有效劑量的spla2抑制劑化合物。一方面，本發(fā)明涉及一種治療或降低遭受毒液蟄入的患者死亡可能性、長期損傷性及減少對抗蛇毒血清治療和醫(yī)院資源需求的方法，所述方法是在毒液蟄入后立即或盡快(通常不超過24小時，甚至更經(jīng)常不超過12小時，優(yōu)選不超過大約6小時，甚至更優(yōu)選不超過大約1小時，甚至更通常在意識到患者遭遇毒液蟄入后馬上)及只要將患者送到醫(yī)院或其它護理設施點進行進一步診斷與/或治療的一段時間內(nèi)，經(jīng)由一種或多種給藥途徑，對遭受毒液蟄入的患者單獨施用至少一種spla2抑制劑或與一種或多種其它生物活性制劑聯(lián)合施用。任選根據(jù)情況及患者的狀況，通過一種或多種給藥途徑和制劑，提供一天至幾周的治療。

在一個替代實施例中，本發(fā)明還涉及一種采用pla2抑制劑化合物(優(yōu)選伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)單獨使用或所述pla2抑制劑化合物與抑制pla2(最常見的spla2)或其它毒液成分(如金屬蛋白酶(mp)和/或絲氨酸蛋白酶(sp))的其它化合物聯(lián)合使用治療毒液蟄入的方法，其中在毒液蟄入后立即(大約0小時)或盡快施用有效劑量的所述活性劑，并根據(jù)需要，繼續(xù)施用大約1至7天，或直到達到醫(yī)學確定的停用點。在一種方法中，所述方法包括施用有效劑量的本文所述的組合物，直到有害的spla2或mp活性水平降低，血球計數(shù)和凝血因子正常，并且受害者表現(xiàn)出的毒液蟄入的體征或癥狀持續(xù)改善，然后緊接著采用替代組合物，特別是包括傳統(tǒng)的抗蛇毒血清組合物，進行治療或再治療。

本發(fā)明涉及一種同時或者單獨通過注射或其它給藥途徑(即非注射)，單獨或聯(lián)合使用毒液抑制劑化合物以抑制pla2或其它毒液成分(如金屬蛋白酶(mp)和/或乙酰膽堿酯酶)，，的治療毒液蟄入的方法，通常涉及確認或懷疑毒液蟄入，其中所述活性成分是在咬傷或螫傷后立即(大約0小時)或盡可能快地在大約6小時內(nèi)施用，并繼續(xù)施用大約1至7天，或直到達到基于客觀或臨床措施的醫(yī)學上確定的停用點。該停用點可能是患者在醫(yī)院或其它護理設施站點進行診斷與/或接受治療時，或者可以是讓患者從毒液蟄入中完全康復的基本上幾周(例如，大約1-3周或更長時間)的延長期限。

本發(fā)明為患者提供pla2抑制劑、pla2抑制劑組合，任選與一種或多種金屬蛋白酶(mp)、乙酰膽堿脂酶和/或其它毒液成分的抑制劑，以緩解引起毒液注入有關的損傷情況的毒液蟄入的影響。在一些實施例中，所述化合物是一種以上蛇毒成分的抑制劑。在一些實施例中，所述spla2抑制劑，特別是那些基于1-h-吲哚-3-乙醛酰胺化學結(jié)構(gòu)，以及包括伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的spla2抑制劑單獨使用或彼此組合使用和/或與本發(fā)明另外描述的其它制劑組合使用。

本發(fā)明還涉及一種在被咬傷或螫傷后的0(即馬上或盡快)至24小時內(nèi)或在spla2水平升高之前、證明發(fā)生毒液蟄入的其它相應實驗室異常值升高之前，和/或表示毒液毒性的臨床體征或癥狀升高之前，施用此處所述的組合物，治療或預防遭受毒液蟄入的患者死亡、長期傷害和降低對(或增加)抗蛇毒血清治療、血液和凝塊替換治療、透析和醫(yī)院資源需求的方法。

本發(fā)明還涉及一種降低哺乳動物(包括人)因毒液蟄入而發(fā)生死亡或傷害的可能性，所述方法包括開始向懷疑存在或已知遭受毒液蟄入的患者施藥，所述方法包括在毒液蟄入后，但在局部、區(qū)域或全身性毒液蟄入導致發(fā)生損傷之前，特別是實質(zhì)性損傷之前，單獨或聯(lián)合施用有效劑量的多功能抑制劑化合物(例如，伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)或化合物組合(包括伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)。

本發(fā)明進一步涉及一種治療毒液蟄入的方法，其中采用治療有效劑量的本發(fā)明組合物治療患者，包括通過現(xiàn)場、送往醫(yī)院之前、實驗室、臨床或臨床試驗，客觀或臨床懷疑spla2水平或其它毒液蟄入指標升高而懷疑或證實毒液蟄入后的時間間隔內(nèi)，向患者施用至少一種pla2抑制劑(例如，spla2抑制劑)化合物，在優(yōu)選的實施例中，以減緩或減少對傳統(tǒng)抗蛇毒血清的需求和/或降低費用和對醫(yī)院，特別是臨床集中資源(如重癥監(jiān)護(icu時間))的要求。

在一個實施例中，本發(fā)明提供一種治療遭受毒液蟄入(如本文另有說明，例如，蛇、其它爬蟲動物、兩棲動物、節(jié)肢動物、軟體動物、刺包動物或腔腸動物等咬傷)的受試者的方法，所述方法包括施用(優(yōu)選，受試者口服或注射)治療有效劑量的至少兩種，以及在一些實施例中，不超過兩種選自由本發(fā)明另有說明的pla2抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(achel或直接煙堿受體激動劑，如與抗膽堿藥配對的煙堿)、擴散因子抑制劑(以降低活性劑在患者受影響組織以外地方分散的可能性，出乎意料地，該組中包括伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)及nmda受體拮抗劑(如地佐環(huán)平(mk-801))組成的組的活性成分，其中所述活性成分可以以混合物聯(lián)合施用，或單獨(獨立)、同時、并行或按順序施用。

優(yōu)選地，上述活性成分通過針頭或無針推進(如噴霧注射器或通過霧化施用)施用(至少初始)或口服，其它劑量的活性成分通過任何給藥途徑施用，從而在患者體內(nèi)維持有效的活性濃度，直到不管因任何原因，治療干預被停止，包括決定讓患者接受更傳統(tǒng)的抗蛇毒血清組合物，由于患者體內(nèi)的活性水平達到其治療指標的上限或患者的癥狀已消除或至少已平衡，不必接受進一步的治療。

優(yōu)選的其它治療劑包括抗蛇毒血清，可注射或局部施用的乙酰膽堿脂酶抑制劑和machr拮抗劑、止嘔劑或抗生素(通常是頭孢菌素、四環(huán)素或去甲金霉素等)等。這些其它治療劑中的許多治療劑是蛇和其它毒液中存在的主要的酶和非-酶(如響尾蛇肌肉毒素)的抑制劑。

在另一個實施例中，本發(fā)明提供一種治療遭受毒咬傷或其它毒液蟄入的受試者的方法，所述方法基本上由向受試者施用(優(yōu)選最初至少注射或口服)治療有效劑量的下述制劑的步驟組成：

(1)至少一種本文所述的pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸(indoxam)、甲基花生四烯酸(methylindoxam)或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及任選至少一種其它治療劑，所述其它治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選注射給藥)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(2)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種金屬蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(例如有時施用或口服)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(3)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(有時經(jīng)注射施用或經(jīng)鼻局部施用或眼部施用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(4)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種金屬蛋白酶抑制劑和至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(5)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種乙酰膽堿脂酶抑制劑(通常與毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑(如阿托品或甘羅溴銨)注射施用)，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、nmda受體拮抗劑、擴散因子抑制劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗毒蛇血清和抗生素組成的組(6)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及一種或多種擴散因子抑制劑，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(7)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，nmda受體拮抗劑，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(8)單獨使用或聯(lián)合使用普啉司他(prinomastat)、伏立諾他(vorinostat)、馬馬司他(marimastat)、萘莫司他(nafamostat)、伊洛馬司他(ilomastat)、強力霉素(doxycycline)、頭孢菌素、坦諾司他(tanomastat)、巴馬司他(batimastat)或伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪用于蛇咬傷，其中伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪是有效的mp抑制劑(如拉塞爾蝰蛇蛇毒)。

在一些優(yōu)選實施例中，本發(fā)明提供一種治療遭受如本文另有描述的毒液蟄入(通常是蛇咬傷)的患者的方法，所述方法基本上包括向患者施用(優(yōu)選注射)治療有效劑量的下述制劑：

(a)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種其他制劑，所述其他制劑選自由n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加貝酯)、deda和金屬蛋白酶抑制劑(如普啉司他、伏立諾他、馬馬司他或巴馬司他)和乙酰膽堿脂酶抑制劑(achel)(例如，新斯的明，阿托品或甘羅溴銨)組成的組；或

(b)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種其它制劑，所述其它制劑選自由n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加貝酯)、普啉司他、伏立諾他、馬馬司他、巴馬司他、新斯的明和阿托品組成的組；及

(c)任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、nmda受體拮抗劑、擴散因子抑制劑、抗毒血清及抗生素組成的組。

在本發(fā)明的方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒的優(yōu)選實施例中，所述金屬蛋白酶抑制劑是普啉司他、伏立諾他和/或馬馬司他，以及所述pla2抑制劑優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種。

在一個實施例中，向遭受蛇咬傷毒液蟄入的患者聯(lián)合施用pla2抑制劑(如優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽或其類似物、衍生物或藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物中的至少一種)，n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加貝酯)，或它們藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物，及金屬蛋白酶抑制劑(如普啉司他、伏立諾他、巴馬司他和/或馬馬司他，或其類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由乙酰膽堿脂酶抑制劑(如新斯的明或阿托品，優(yōu)選通過注射施用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組，進一步任選組合至少一種擴散因子抑制劑。

在一個實施例中，向遭受蛇咬傷毒液蟄入的患者聯(lián)合施用pla2抑制劑(如伐瑞拉迪與/或甲基伐瑞拉迪或其類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物)，n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加貝酯)和絲氨酸蛋白酶抑制劑(如4-(2-氨乙基)苯磺酰氟(4-(2-aminoethyl)benzenesulfonylfluoride)、萘莫司他或其類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物)，及任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由抗蛇毒血清、乙酰膽堿脂酶抑制劑(如新斯的明或吡啶斯的明，優(yōu)選通過注射施用)、蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑和抗生素組成的組，任選組合至少一種擴散因子抑制劑。

在一個實施例中，本發(fā)明涉及一種治療毒液蟄入的方法：向需要治療的受試者施用有效劑量的pla2抑制劑(優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種)，任選與本文其它地方描述的至少一種其它制劑聯(lián)合施用。出乎意料的是，施用所述治療劑可以預防或迅速逆轉(zhuǎn)毒液蟄入引起的癥狀和體征。正如本文其它地方提到的那樣，毒液蟄入的后遺癥包括虛弱、呼吸短促、出血、刺痛、焦慮、呼吸麻痹和死亡。出乎意料的是，在毒液蟄入后6小時內(nèi)，通常是2小時內(nèi)施用本發(fā)明的制劑，幾乎甚至可以完全有效地避免致命劑量毒液造成的死亡。出乎意料的是，在給藥后幾小時(如大約2小時)內(nèi)，所述患者或受試者的毒液蟄入的體征和癥狀明顯逆轉(zhuǎn)或減輕。出乎意料的是，逆轉(zhuǎn)效果可能在給藥后60分鐘內(nèi)或甚至在30分鐘內(nèi)發(fā)生。例如，研究表明，神經(jīng)傳導可能在8小時內(nèi)恢復到正常水平的至少80％。正如另一個實例所示，可在2小時內(nèi)觀察到溶血停止或減少–早期給藥可以避免出現(xiàn)毒液蟄入的這些體征和癥狀。

根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物和方法可有利地進一步包括利多卡因和/或布比卡因作為制劑，幫助活性成分的局部分配，進一步實現(xiàn)治療益處和鎮(zhèn)痛效果，同時通過松馳淋巴平滑肌以減慢毒液的擴散。

本發(fā)明的方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒治療或減少一種或多種神經(jīng)毒素-誘導的呼吸衰竭、心臟中毒、組織和肌肉破壞和/或毒液誘導的彌散性血管內(nèi)凝血的可能性，大幅減少患者因毒液蟄入導致的死亡和/或衰弱性傷害的可能性。實施本文所述的方法和藥物組合物，防止出現(xiàn)各種威脅生命的癥狀，包括血毒素、細胞毒素、心臟毒素或肌肉毒素-誘導的組織損傷、出血和凝血障礙，神經(jīng)毒素誘導的呼吸衰竭、四肢損傷、腎功能衰竭、多器官衰竭和/或心血管虛脫。在其中一種抑制劑也是抗生素和/或消炎劑(如伐瑞拉迪)時，因施用抗蛇毒血清引起的過敏和其它急性并發(fā)癥也減少，感染風險降低。

本發(fā)明的一些實施例通過向有需要的受試者施用以下制劑，治療或減少由其它有毒動物(如石魚、獅子魚、蝎子(如木蝎屬(centuroidesspp))、蜘蛛(如平甲蛛屬)、芋螺和熱帶水母的毒液蟄入后神經(jīng)毒素誘導的呼吸衰竭和組織損傷的可能性：

(a)至少一種pla2抑制劑(優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種)及任選(優(yōu)選)sp或mp抑制劑；及

(b)進一步任選一種或多種其它治療劑，所述其它治療劑選自由乙酰膽堿脂酶抑制劑(如新斯的明或吡啶斯的明，優(yōu)選通過注射施用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、抗蛇毒血清(antivenom)、抗生素和擴散因子抑制劑組成的組。

本發(fā)明優(yōu)選的藥物制劑包括治療有效劑量的：

(a)伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪(優(yōu)選伐瑞拉迪)、n,n-二甲基氨基甲酰甲基、4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他、卡莫司特)、乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯(加貝酯)或它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物；

(b)(1)普啉司他、伏立諾他、巴馬司他和/或馬馬司他或它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物，和/或(2)4-(2-氨乙基)苯磺酰氟或它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物或多晶型物；及

(c)任選，一種或多種藥學上可接受的賦形劑。

非限制性示例藥物組合物可以是注射液(優(yōu)選采用自動或筆式-注射裝置用于初步治療)、粉末、脂質(zhì)體、軟膏和氣霧劑的形式，并且可以包括與另一種化合物結(jié)合用于特異性靶向的活性成分(如納米顆粒)。本文描述的藥物組合物可以采用各種方法施用(例如，采用手動或自動注射裝置，其可以是針式的并且可任選包括噴射器、鼻內(nèi)給藥裝置、霧化器、定量霧化吸入器或噴霧設備)或采用口服制劑(如丸劑、片劑或酏劑)給藥。本發(fā)明的試劑盒包括這些組合物和設備，以及適當?shù)恼f明書和其它組件(如面罩)。組合物還可以是可形成注射液的凍干粉形式，用于初步(及隨后)治療毒液蟄入的患者。

在一個實施例中，本發(fā)明提供一種藥物組合物，優(yōu)選儲存穩(wěn)定、可注射、可霧化或可分散的藥物組合物，其包括藥學上可接受的稀釋劑和治療有效劑量的以下制劑中的任一種：

(1)至少一種本文所述的pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及任選，至少一種其他治療劑，所述其他治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選注射給藥或口服或獨立地呈口服、局部或腸胃外形式，與或不與抗毒血清一起使用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(2)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種金屬蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選注射施用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(3)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選注射施用)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(4)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種金屬蛋白酶抑制劑和至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(5)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種乙酰膽堿脂酶抑制劑(通常注射施用)和/或毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、nmda受體拮抗劑、擴散因子抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(6)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及一種或多種擴散因子抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(7)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，nmda受體拮抗劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組。

在另一個實施例中，本發(fā)明提供一種可復水的藥物制劑，包括一種或多種藥學上可接受的賦形劑與治療有效劑量的以下制劑的凍干或冷凍干燥混合物：

(1)至少一種本文所述的pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及任選至少一種其他治療劑，所述其他治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選通過注射給藥)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(2)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，和至少一種金屬蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選通過注射給藥)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(3)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，和至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由金屬蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(優(yōu)選通過注射給藥)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(4)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，和至少一種金屬蛋白酶抑制劑和至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(5)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及至少一種乙酰膽堿脂酶抑制劑(通常注射給藥)和/或毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、nmda受體拮抗劑、擴散因子抑制劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(6)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，及一種或多種擴散因子抑制劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組；或

(7)至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種，nmda受體拮抗劑，及任選一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑選自由至少一種金屬蛋白酶抑制劑、至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑、擴散因子抑制劑、nmda受體拮抗劑、抗蛇毒血清和抗生素組成的組。

在一個實施例中，上述組合物復水后施用于患者或受試者。

在一個實施例中，本發(fā)明涉及采用本文另外公開的抗蛇毒血清化合物或組合物(“抗蛇毒血清”)及pla2抑制劑和/或金屬蛋白酶抑制劑和/或絲氨酸蛋白酶抑制劑的組合治療毒液蟄入。在一個實施例中，所述抗蛇毒血清與選自由伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、普啉司他、馬馬司他、巴馬司他、伏立諾他、卡莫司他、加貝酯和萘莫司他(nafomostat)或它們藥學上可接受的鹽組成的組中的至少一種化合物聯(lián)合使用。在優(yōu)選的實施例中，抗蛇毒血清與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們藥學上可接受的鹽聯(lián)合使用。在另一個實施例中，所述抗蛇毒血清與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種及普啉司他、馬馬司他、巴馬司他或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種聯(lián)合使用。在另一個實施例中，所述抗蛇毒血清是上述組合可同時、并行或按順序聯(lián)合施用于有需要的患者或受試者。

在一個實施例中，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，包括至少一種抗蛇毒血清化合物或組合物與至少一種pla2抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑和/或絲氨酸蛋白酶抑制劑聯(lián)合。所述組合物可在一部分或多部分或單一組合物中配制和施用。在一個實施例中，所述抗蛇毒血清與選自由伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、普啉司他(prinomastat)、馬馬司他、巴馬司他、伏立諾他、卡莫司他、加貝酯和萘莫司他或它們藥學上可接受的鹽組成的組中的至少一種化合物聯(lián)合使用。在優(yōu)選的實施例中，抗毒血清與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們藥學上可接受的鹽一起使用。在另一個實施例中，所述抗蛇毒血清與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種及普啉司他、馬馬司他、巴馬司他或它們藥學上可接受的鹽中的至少一種聯(lián)合使用。在另一個實施例中，抗毒血清是crofab^tm。

值得指出的是，本發(fā)明的治療方法提供針對不同品種、不同地區(qū)的蛇的不同組合及通用廣義組合，其在被咬之前、期間和之后，伴隨住院或不住院或接受或不接受抗蛇毒血清治療，按順序或單獨地以幾種形式施用。滿足了目前無法滿足的極端緊急情況的長期需求。針對毒液蟄入–特別是蛇咬傷，目前并沒有有效的現(xiàn)場治療或預防方法，據(jù)估計，75％以上的毒液蟄入(特別是蛇咬傷)引起的死亡發(fā)生在醫(yī)院以外的地方。傳統(tǒng)的血清來源抗蛇毒血清無法在醫(yī)院以外的地方安全使用。因此，本發(fā)明提供了目前這個問題唯一可行的解決方案，并且滿足了這個領域的長期需求。

此外，根據(jù)咬傷的嚴重程度，可由受害者、旁人或接受過最少醫(yī)學培訓的現(xiàn)場急救員等現(xiàn)場單次緊急施用所述藥物或藥物組合物，本發(fā)明的治療方法完全有效。本發(fā)明的治療方法縮短了住院時間，降低了住院或緊急臨床處理咬傷對傳統(tǒng)血清來源的抗蛇毒血清用量的需求并降低了費用，可作為咬傷后的急救措施，然后，繼續(xù)接受幾天或數(shù)周的口服、鼻內(nèi)或注射形式的維持治療，以避免許多情況下對抗蛇毒血清的需求。這些方法降低了毒液蟄入(特別是蛇咬傷)的發(fā)病率、死亡率和總體治療費用。

在一個實例中，一名受害者被咬傷，自己注射、口服本發(fā)明組合物的酏劑或其它口服生物利用形式、鼻腔噴霧和/或吸入劑型，然后到醫(yī)院或其它醫(yī)療機構(gòu)接受抗蛇毒血清治療或觀察(診斷和/或接受本發(fā)明組合物進一步治療)。癥狀較輕時，本發(fā)明的組合物可以以丸劑、液體或噴霧形式定期(例如每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時一次或甚至每天一次按緩釋和/或控釋形式)施用，直到身體毒液得到清除(可能是1-10天或更多天–到大約3周)。

由于目前無法提供醫(yī)院以外的毒液蟄入的藥物治療，也無法提供除傳統(tǒng)抗蛇毒血清以外的明確治療方法，因此，本發(fā)明滿足了目前尚未滿足的重大臨床要求。此外，本發(fā)明的治療方法經(jīng)濟高效、安全，可以從緊急治療過渡到門診或簡單的醫(yī)院治療。

因此，本發(fā)明提供了一種人們負擔得起的廣泛適用的蛇咬傷和其它毒液-相關損傷的解毒劑，將使因毒液蟄入存在生命風險或四肢受傷威脅的數(shù)百萬人受益。值得指出的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪(伐瑞拉迪的前體藥物)對廣泛的毒液都是有效的和高效的。它們兩者都顯示出對某些蛇毒的mp/sp酶有效，并證明了作為一線治療方法，它們在任何蛇咬傷的立即治療中具有實用性。伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪可單獨施用，與抗蛇毒血清、mp抑制劑、sp抑制劑和其它抑制劑或有用的藥物及抗蛇毒血清按任何順序、制劑或劑型聯(lián)合施用或混合施用。這些藥物、前體藥物及它們與其它藥學上有用的組合物的組合，可以采用多種有用的給藥模式。

附圖說明

圖1顯示了過量毒液與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪組合或僅毒液(對照)時pla2活性的時間進程。圖中表明，盡管過量毒液具有極端活性，但伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪持續(xù)抑制蛇毒spla2活性(實例3)。

圖2a&b顯示了極高濃度毒液與試驗制劑組合時，金屬蛋白酶活性的時間進程(實例4)。

圖3顯示了極高濃度毒液與人們熟知的mp和spla2抑制劑組合時，絲氨酸蛋白酶活性的時間進程。圖中表明，伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪對試驗的蛇毒sp具有抑制活性(實例5)。

圖4顯示了伐瑞拉迪對蛇毒pla2活性的抑制作用。伐瑞拉迪或達普拉締(darapladib)都沒有明顯抑制蜂毒的spla2，它們對蜂毒并不具有與對蛇毒一樣的效力。伐瑞拉迪有效地抑制了蛇毒pla2，而達普拉締(陰性對照)并非如此。出乎意料的是，伐瑞拉迪并未抑制蜂毒pla2(實例6)。

圖5a-r伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪對蛇毒spla2活性具有非常高的效力。伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪對蜂毒spla2都未顯示出同等程度的效力(實例6)。

圖6a-h伐瑞拉迪對小鼠和大鼠中致死劑量的金黃珊瑚蛇(珊瑚蛇)蛇毒具有保護性和治療性效果。顯示了本發(fā)明的小鼠和大鼠體內(nèi)實驗實例。皮下注射高劑量金黃珊瑚蛇蛇毒之前、同時或之后，施用基于伐瑞拉迪的治療，結(jié)果表明，基于伐瑞拉迪的治療方法使小鼠和大鼠獲得了生存優(yōu)勢。通過靜脈注射伐瑞拉迪防止了嚴重的溶血現(xiàn)象，并且在相同動物中通過伐瑞拉迪治療相應地抑制了pla2水平。繼皮下施用金黃珊瑚蛇蛇毒之后，靜脈注射伐瑞拉迪，大鼠存活率達到100％(實例7)。

圖7顯示了同時注射響尾蛇蛇毒和伐瑞拉迪或伐瑞拉迪和mp抑制劑，改善了小鼠的存活率。此外，施用甲基伐瑞拉迪和mp抑制劑的小鼠可避免響尾蛇(c.atrox)蛇毒引發(fā)的死亡(實例8)。

圖8皮下注射伐瑞拉迪預處理的小鼠可避免因皮下注射拉塞爾蝰蛇(圓斑蝰)蛇毒而引發(fā)的死亡(實例9)。

圖9伐瑞拉迪對小鼠體內(nèi)致死劑量的極北蝰(普通蝰蛇)蛇毒具有保護性和治療性效果(實例10)。

圖10顯示了普啉司他、巴馬司他和馬馬司他的體外眼鏡蛇蛇毒抑制性。

圖11顯示了普啉司他作為體外蛇毒mp抑制劑的效果。

圖12顯示了巴馬司他作為體外蛇毒mp抑制劑的效果。

圖13顯示了馬馬司他作為體外蛇毒mp抑制劑的效果。

圖14顯示了絲氨酸蛋白酶抑制劑對毒蛇和眼鏡王蛇的抑制效果(體外)。萘莫司他對眼鏡王蛇、太攀蛇擁有出乎意料的活性(體外)。

圖15、表3顯示了伐瑞拉迪spla2抑制的ic50(實例12)。伐瑞拉迪對幾種蛇毒具有出乎意料的效力(實例12)。

圖16、表4顯示了甲基伐瑞拉迪spla2抑制的ic50。甲基伐瑞拉迪對幾種蛇毒具有出乎意料的效力(實例12)。

圖17、表5顯示了普啉司他-誘導的mp抑制的ic50(體外)(實例2)。普啉司他對蛇毒金屬蛋白酶的活性比以前報道的更廣。

圖18、表6顯示了馬馬司他-誘導的mp抑制的ic50(體外)。

圖19、表7顯示了巴馬司他-誘導的mp抑制的ic50(體外)。

圖20、表8顯示了伏立諾他、伊洛馬司他、加貝酯和萘莫司他誘導的mp抑制的ic50(體外)。

具體實施方式

i.定義

本發(fā)明說明書中采用下述詞語來描述本發(fā)明。若本發(fā)明中未對一個詞語專門進行定義，則該詞語應理解為其使用方式與熟悉本領域技術人員的使用方式一致。

當給出數(shù)值范圍時，除非上下文另外清楚地指出，應理解為該范圍上下限之間的每個中間值(到下限單位的十分之一)，以及在此所述范圍內(nèi)的任何其它聲明值或插入值均包括在本發(fā)明中。這些較小范圍的上限和下限可以獨立地包括在較小范圍內(nèi)并且也包括在本公開中，受限于所指出范圍內(nèi)任何明確的排除限制。若聲明范圍包括其中一個限值或全部兩個限值，則排除這兩個限值中任一個限值或兩個限值的范圍也包括在本發(fā)明中。在取代基可能是一個或多個馬庫什基團時，應理解為只能使用那些形成穩(wěn)定鍵的取代基。

除非特別規(guī)定，本發(fā)明使用的所有技術和科學術語的意義與本發(fā)明所屬領域技術人員通常理解的相同。雖然本發(fā)明實踐或試驗中也可以使用與此處所述類似或相當?shù)娜魏畏椒ê筒牧?，但是，現(xiàn)在描述的是優(yōu)選的方法和材料。

必須指出的是，除非上下文明確指明，否則，正如本專利說明書和權利要求書中所使用的那樣，單數(shù)形式“一種”、“和”和“所述(該)”包括復數(shù)意義。

在本發(fā)明中，“ache”是乙酰膽堿的縮寫；“achel”是乙酰膽堿酯酶抑制劑的縮寫；“machr”是毒蕈堿型乙酰膽堿受體的縮寫；“nachr”是煙堿型乙酰膽堿受體的縮寫；ache的抑制劑也抑制丁酰膽堿酯酶(bche)、假膽堿酯酶和其它酶?！癿p”是金屬蛋白酶的縮寫(如哺乳動物基質(zhì)金屬蛋白酶、mmp和蛇毒金屬蛋白酶、svmp；“sp”是絲氨酸蛋白酶的縮寫；“mpi”是金屬蛋白酶抑制劑的縮寫。毒液(例如，蛇毒)是分泌出來的，在上下文中，毒液“pla2”和“spla2”互換使用；pla2-i是磷脂酶抑制劑的縮寫；“spi”是絲氨酸蛋白酶抑制劑的縮寫。

此外，下述詞語應具有下述規(guī)定定義。

說明書中使用的詞語“患者“或“受試者”用于描述接受本發(fā)明化合物或組合物治療，包括預防性治療(預防法)的動物，通常是哺乳動物，特別是包括馴養(yǎng)動物(如狗、貓、牛、馬、綿羊、山羊等)，優(yōu)選是人。治療那些對特定動物(如人類患者)來說特定的癥狀或疾病時，詞語患者指的是該特定動物。在大多數(shù)情況下，本發(fā)明的患者或受試者是任一性別或兩種性別的人類患者。接受本發(fā)明方法治療的預期受試者包括人、寵物、實驗室動物、家畜、馬等。

除非特別聲明，此處使用的詞語“有效的”用于描述使用一定數(shù)量的化合物或組分，產(chǎn)生或得到指定結(jié)果，不管該結(jié)果是否與預防和/或治療此處描述的毒液蟄入和/或疾病狀態(tài)或狀況/癥狀有關。詞語有效的包括本申請中另外描述或使用的所有其它有效數(shù)量或有效濃度的詞語(包括詞語“治療有效”)。詞語有效的還包括施用期，不管此施用是否是單次施用，通常是口服或注射或單次施用，然后接下來補充施用數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周，直到因患者體內(nèi)毒液清除或決定采用替代療法，包括施用傳統(tǒng)血清-來源的抗蛇毒血清組合物而達到停用點。值得指出的是，一方面，本發(fā)明涉及施用有效劑量的本發(fā)明所述組合物，直到有害的spla2或mp活性水平降低，血球計數(shù)和凝血因子正常，受害者的毒液蟄入癥狀或體征持續(xù)改善。在此種施用之后，可接受替代組合物，特別是包括傳統(tǒng)抗毒血清組合物治療或重新治療。

本文使用的術語“化合物”用于描述本文公開的任何特定化合物或生物活性劑，包括任何和所有立體異構(gòu)物(包括非對映異構(gòu)體)、單個光學異構(gòu)體(對映異構(gòu)體)或外消旋混合物、藥學上可接受的鹽(包括替代藥學上可接受的鹽)、前體藥物形式和氘化或其它同位素形式。本文使用的術語化合物指的是穩(wěn)定的化合物。正如本發(fā)明另有描述的那樣，在其上下文使用范圍內(nèi)，術語化合物可能指的是單一化合物或化合物的混合物。本發(fā)明中使用的化合物還可能包括化合物的水合物、溶劑化物和/或多晶型物。除非特別聲明，當生物活性劑公開用于本發(fā)明時，應該理解的是，在其上下文使用范圍內(nèi)，該詞語包括它們藥學上可接受的鹽與/或替代藥學上可接受的鹽。

“蛇咬傷”包括“干”蛇咬傷及導致毒液蟄入的咬傷或無-毒蛇咬傷或未確定蛇的咬傷。確定患者是蛇咬傷受害者的方法有很多種。這些方法包括：受試者或另外一個人目睹被咬傷；觀察到蛇咬傷的物理證據(jù)(例如，刺傷或裂傷、局部疼痛、局部發(fā)紅或腫脹)；受試者出現(xiàn)與蛇咬傷毒液蟄入一致的體征或癥狀(如疼痛、發(fā)紅、出血或其它毒液蟄入證據(jù)，如虛弱或麻痹)；受試者出現(xiàn)與神經(jīng)毒性毒液蟄入一致的體征或癥狀，且以前并未診斷出現(xiàn)過這些癥狀或體征指示的除了神經(jīng)毒性中毒以外的疾?。粰z測出毒液或毒液活性(例如，采用蛇毒/蛇毒活性檢測試劑盒在咬傷部位、尿液或血液中)或分析發(fā)現(xiàn)pla2活性升高；即使在缺乏毒牙或牙印(如被金環(huán)蛇咬傷時)的情況下，肉眼辨識蛇也可以表明患者已經(jīng)被神經(jīng)毒性毒蛇咬傷。

神經(jīng)毒性毒液蟄入的“體征”和“癥狀”包括感覺異常、困倦、不良共軛凝視、導致上瞼下垂(瞼遲滯)的小肌肉麻痹、頸部肌肉無力、吞咽障礙、瞳孔放大、肌束震顫、唾液分泌增加、多汗、肌肉失去協(xié)調(diào)、腹痛、說話困難、惡心、吞咽困難和其它延髓麻痹，及嘔吐、低血壓、呼吸衰竭和呼吸肌麻痹。在一些情況下，受試者出現(xiàn)神經(jīng)毒性毒液蟄入的早期癥狀，如瞼遲滯形式的小肌肉麻痹(、不良共軛凝視、吞咽困難和其它延髓麻痹。遭受毒液蟄入或懷疑遭受毒液蟄入的受試者的肌肉功能的臨床評價包括：視覺敏銳度、吞咽難易程度、吐舌能力、發(fā)音、將頭從床上完全抬起5秒以上的能力(頸部彎曲)和峰值呼吸流量降低。

“毒液”具有其正常的含義，是動物(如蛇、其它爬蟲動物、兩棲動物、蜘蛛、蝎子、壁虱、芋螺(conesnail)、腔腸動物(水母)等咬或螫傳遞的有毒分泌物。

“抗蛇毒血清”、“抗毒素”或“抗蛇毒素”是治療有毒的咬傷或螫傷時使用的生物產(chǎn)品?？股叨狙逋ǔＪ峭ㄟ^從有毒脊椎動物(如蛇、蜥蜴或魚類擠出毒液，或從無脊椎動物(如蜘蛛、壁虱、昆蟲、腔腸動物或軟體動物)提取毒液制備得到的。然后，將毒液稀釋，并注射到馬、綿羊、兔或山羊或雞蛋內(nèi)。受試動物或雞蛋將對毒液產(chǎn)生免疫反應，產(chǎn)生抗毒液抗原分子的抗體，然后，可以從動物血液中收集這些抗體，精制，并用于治療毒液蟄入。在國際上，抗蛇毒血清必須符合藥典和世衛(wèi)組織的標準?！案碧禺愋浴笨股叨狙迨悄切┚哂谐暈獒t(yī)學上有用(例如，以確定抗蛇毒血清的副特異性作用)的特異性以外的作用或特性的抗蛇毒血清。

“毒液蟄入”指的是由于被爬蟲動物、兩棲動物、節(jié)肢動物、軟體動物、刺包動物、昆蟲、腔腸動物或其它有毒脊椎動物或無脊椎動物咬傷導致毒液注入受害者體內(nèi)，包括神經(jīng)毒性、非神經(jīng)毒性毒液蟄入，及未確定特征的毒液蟄入，以及眼鏡蛇噴到眼睛造成的眼炎。非神經(jīng)性毒液蟄入的實例包括血毒性、血管毒性、心臟毒性和肌肉毒性毒液蟄入，在下述說明中通常稱為“血毒性”或“細胞毒性”毒毒液蟄入。

“神經(jīng)毒性毒液蟄入”指的是神經(jīng)毒性的毒液的毒液蟄入。神經(jīng)毒性毒液包括，例如，但不限于毒蛇產(chǎn)生的毒液。

“毒蛇”指的是分泌任何比例的神經(jīng)毒性、血毒性、血管毒性、肌肉毒性、細胞毒性和/或其它毒性的毒液的蛇。例如，但不限于毒蛇包括眼鏡蛇、環(huán)蛇、蝰蛇、樹眼鏡蛇(ambas)、太攀蛇、新幾內(nèi)亞南棘蛇、非洲樹蛇(游蛇)、響尾蛇、珊瑚蛇、海蛇(海蛇科)等。所有蝰蛇科，包括響尾蛇、拉塞爾蝰蛇、鋸鱗蝰、矛頭蝮、極北蝰和竹葉青蛇及蝮蛇等都是有毒的。據(jù)了解，總共發(fā)現(xiàn)了大約600種毒蛇，其中200多種被視為在世界上具有醫(yī)學和獸醫(yī)學重要性。還應該認識到的是，毒液包括蛋白質(zhì)和其它有毒物質(zhì)的復雜混合物。因此，神經(jīng)毒性毒蛇的毒液可能包括具有血毒性、血管毒性、心臟毒性、肌肉毒性和/或其它有毒特性(包括神經(jīng)毒素)的制劑。

術語“治療”，“處理”指的是向存在毒液蟄入風險或遭受毒液蟄入的患者提供具有益處的任何行動，包括通過減輕、抑制、壓制或消除至少一種癥狀而改進狀況、延遲毒液蟄入或相關疾病的進程或損傷，預防、延遲或抑制毒液蟄入癥狀發(fā)作的可能性等。本文所述的治療可能包括主要在毒液蟄入情況下的預防和治療處理，但也包括本文所述的其它毒液蟄入-相關疾病或本領域技術人員熟悉的其他疾病的預防和治療處理。

“儲存穩(wěn)定”是指制劑在溫度大約20℃至35℃至大約40℃時在大約至少3個月至大約6個月期間內(nèi)穩(wěn)定。

本文使用的術語“藥學上可接受的”意思是根據(jù)疾病的嚴重程度和治療的必要性，適合向受試者(包括人類患者)施用該化合物或組合物，從而實現(xiàn)本文所述的治療，且并不造成不適當?shù)挠泻Ω弊饔谩?/p>

本文使用的術語“小分子”指的是分子量小于大約2500，或小于大約1000，或小于大約750，或小于大約500的分子。

ii.概述

在一些實施例中，本發(fā)明提供一種通過確定受試者是蛇咬傷或其它毒液蟄入的受害者，并施用pla2抑制劑，治療人類受試者(或其它哺乳動物)的神經(jīng)毒素-誘導的呼吸衰竭或降低這種可能性發(fā)生的方法。在一些實施例中，pla2抑制劑是1h-吲哚-3-乙醛酰胺(1h-lndole-3-glyoxylamide)。在一些實施例中，pla2抑制劑是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪。

本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、其它1h-吲哚-3-乙醛酰胺pla2抑制劑在避免大量有毒動物(包括蛇(包括蝰蛇和眼鏡蛇))毒液蟄入引起的死亡和其它不良作用方面非常有效。

在一些實施例中，本發(fā)明提供一種治療人類受試者神經(jīng)毒素誘導的呼吸衰竭或降低這種可能性發(fā)生的方法：確定受試者是蛇咬傷或其它毒液蟄入的受害者，并且施用(或聯(lián)合施用)藥學上有效劑量的一種或多種組合物，所述組合物選自由pla2抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組，及任選本文所述的輔助聯(lián)合治療(如聯(lián)合施用抗生素、擴散因子抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑(含或不含machr拮抗劑))。

一方面，本發(fā)明提供一種治療人類或動物組織損傷、出血和凝血障礙、心血管性虛脫或神經(jīng)毒素誘導的呼吸衰竭或降低這種可能性發(fā)生的方法，包括確定或臨床懷疑受試者是蛇咬傷的受害者，并且向受試者施用藥學上有效劑量的抑制劑，其中所述抑制劑采用或不采用注射施用，或采用注射和非注射方法組合施用。

本發(fā)明的優(yōu)選組合物包括至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，它們可以單獨施用或與上述的一種或多種制劑/組合物一起施用。

在一些實施例中，pla2抑制劑是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們的組合。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療(i)眼鏡蛇類；(ii)蝰蛇科；或(iii)游蛇科的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療眼鏡蛇屬(眼鏡蛇)，如中華眼鏡蛇、黃金眼鏡蛇、臺灣眼鏡蛇、孟加拉眼鏡蛇、森林眼鏡蛇、眼鏡王蛇、唾蛇以及亞洲、非洲、澳大利亞醫(yī)學上非常重要的其它眼鏡蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療金環(huán)蛇(環(huán)蛇屬)，如金環(huán)蛇、印度環(huán)蛇及亞洲、東南亞、太平洋島嶼、非洲、澳大利亞及有時的美洲和歐洲其它眼鏡蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療太攀蛇(太攀蛇屬)，如太攀蛇，棘蛇(死亡蛇蛇)，如南部棘蛇及伊澳蛇(王棕蛇和棕伊澳蛇)，虎蛇(虎蛇屬)及澳大利亞、巴布亞新幾內(nèi)亞周圍地區(qū)的其它眼鏡蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療東部珊瑚蛇(珊瑚蛇)，如金黃珊瑚蛇，及美洲和東南亞其它珊瑚蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療較大組的海蛇屬的海蛇(如半環(huán)扁尾海蛇)和其它海蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療曼巴蛇屬(黑曼巴蛇)，如黑樹眼鏡蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療蝰蛇科，如蝰蛇、響尾蛇、銅頭蛇/水蝮蛇及巨蝮，包括但不限于響尾蛇屬，如衲脊響尾蛇、西部菱斑響尾蛇、小盾響尾蛇及其它蛇，如極北蝰、三色矛頭蝮、美洲矛頭蝮、加蓬咝蝰、短尾蝮、竹葉青蛇及世界各地其它蝰蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療拉塞爾蝰蛇(蝰蛇屬)、圓斑蝰(亦稱為百步金錢豹、盧氏蝰)的咬傷，防止立即出現(xiàn)生命威脅、腎損害和腦垂體梗塞。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療鋸鱗蝰(鋸鱗蝰屬)，如鋸鱗蝰和其它醫(yī)學上重要的鋸鱗蝰屬蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療響尾蛇屬(蝮蛇、響尾蛇)，如小盾響尾蛇、西部菱斑響尾蛇、衲脊響尾蛇、西海岸響尾蛇和其它響尾蛇的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療蝮蛇屬(蝮蛇)，如水蝮蛇、銅頭蝮蛇、馬來紅口蝮、白眉蝮的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療非洲蝰，如加蓬咝蝰和砂膨蝰的毒液蟄入。

在一些實施例中，所述抑制劑用于治療游蛇，如非洲樹蛇、樹蛇、藤蛇和紅樹林蛇的毒液蟄入。

在一些方法中，pla2抑制劑可作為單一制劑使用。在優(yōu)選的方面，本發(fā)明采用有效劑量的pla2抑制劑(優(yōu)選1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特別是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽或它們的混合物)作為單一制劑或制劑治療遭受毒液蟄入的患者。

在一些方面，向遭受毒液蟄入的受試者施用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，不施用抗蛇毒血清、其它小分子mp抑制劑或其它小分子sp抑制劑。在一些方面，向遭受毒液蟄入的受試者施用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，在施用pla2抑制劑后的一段時間內(nèi)并不施用抗蛇毒血清、其它小分子mp抑制劑或其它小分子sp抑制劑。該段時間可能是至少大約1小時、至少大約2小時、至少大約3小時、至少大約4小時、至少大約5小時、至少大約10小時、至少大約12小時或至少大約24小時。在其它實施例中，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪可與特異性或多價抗蛇毒血清混合物聯(lián)合施用或共同配制。

值得注意的是，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，可以使用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，但不施用單獨的絲氨酸蛋白酶抑制劑或金屬蛋白酶抑制劑。

在一些實施例中，pla2抑制劑對毒液pla2并不具有特異性，但對哺乳動物(如人類、小鼠或大鼠)pla2和毒液pla2都具有抑制活性。不受限于特定的機理，pla2抑制劑(如伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)的療效來源于宿主(哺乳動物或人類)pla2活性的雙重抑制，降低了宿主c-反應性蛋白的產(chǎn)生量，以及減少了炎性反應和毒液pla2活性，從而降低了發(fā)展與毒液進入受害者體內(nèi)或眼睛而導致的組織損傷、消耗性凝血病有關的疾病連鎖及誘導的其它有毒連鎖反應的傾向。

在一個方法中，與蛇毒pla2的ic50相比，spla2抑制劑對人pla2具有更低的ic50值。在一些實施例中，毒液pla2的ic50相當于人pla2的10倍、100倍、1000倍或更低。

此外，如實例11所述，我們發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪除了對廣泛的蛇毒具有pla2抑制活性之外，還抑制多種蛇的毒液的mp和sp活性。令人吃驚的是，在一些情況下，與通常試驗用于對抗醫(yī)學上重要的蛇毒的抑制劑相比，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪是效力更強的mp抑制劑和sp抑制劑。例如，參見圖2a、b和圖3。不受限于特定的機理，pla2抑制劑作為單療法的效果通過組合pla2抑制活性和sp和/或mp抑制活性而增強。

在一些方法中，pla2抑制劑可作為組合療法使用。在一些實施例中，pla2抑制劑與一種或多種制劑聯(lián)合施用，所述制劑選自由抗蛇毒血清(或抗蛇毒素)、小分子金屬蛋白酶抑制劑和小分子絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組。

在各種實施例中，組合療法可能包括施用共同配制(如混合在一起或單位劑型組合)的2種或多種活性劑或聯(lián)合施用(都作為治療毒液蟄入的療法療程的一部分施用)這些活性劑。聯(lián)合施用制劑可以同時施用(如作為兩種或多種獨立單位劑型施用，同時口服和靜脈注射施用等)或大約同一時間(同時)施用或按順序(如彼此在大約1分鐘或2分鐘內(nèi)，大約10分鐘內(nèi)，大約30分鐘內(nèi)，或大約60分鐘內(nèi)，或大約90分鐘至120分鐘內(nèi)，或大約180分鐘內(nèi)施用)施用。制劑也可作為同一療程的一部分在不同時間施用。例如，作為同一療程的一部分，患者可以每天施用一種制劑，每周施用第二種制劑。同樣，作為同一療程的一部分，患者可以接受初步治療(例如，施用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)，啟動懷疑或確認毒液蟄入的患者的急性治療，隨后開展第二次治療(如抗蛇毒血清)(例如，在12小時內(nèi)、24小時內(nèi)或36小時內(nèi))。

術語“聯(lián)合施用”用于描述施用有效劑量的兩種或多種活性化合物。雖然術語聯(lián)合施用優(yōu)選包括大約同一時間(同步、同時或甚至按順序)向患者施用兩種或多種活性化合物，但是，這些化合物實際上并不一定在精確的同一時間(同時)或甚至接近的時間(同時/按順序)內(nèi)施用，只要向患者或受試者施用一定劑量的這些化合物，從而血液、血清或血漿中，或肺部組織中同時具有有效濃度，得到預期結(jié)果即可。

術語“共同配制”指的是一種以上活性化合物被配制到單一劑型內(nèi)，患者服用該單一劑型。正如指出的那樣，術語聯(lián)合施用包括術語共同配制，至少在組織處施用活性化合物時是如此。

在一個方法中，需要治療的受試者接受包括一種或多種pla2抑制劑(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和抗毒血清的聯(lián)合治療。

在一些方法中，pla2抑制劑可作為組合療法使用。在一個方法中，需要治療的受試者接受包括一種或多種pla2抑制劑(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和mp抑制劑的聯(lián)合治療。在一些方法中，mp抑制劑是普啉司他。在一些方法中，mp抑制劑選自伏立諾他、頭孢克肟和其它頭孢菌素、頭孢他啶(tazidime)、頭孢羥氨芐(abbott-50192)、強力霉素(doxycycline)和其它四環(huán)素、萘莫司他、銀杏苦內(nèi)酯a、左旋多巴、gm6001、加貝酯、阿克他利、格拉司瓊、馬馬司他、巴馬司他和莨菪堿。

在一些方法中，pla2抑制劑可作為組合療法使用。在一個方法中，需要治療的受試者接受包括一種或多種spl2抑制劑(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)和sp抑制劑的聯(lián)合治療。在一些方法中，sp抑制劑是萘莫司他或加貝酯或aebsf(4-(2-氨乙基)苯磺酰氟鹽酸鹽)。

在一些方法中，pla2抑制劑可作為組合療法使用。在一個方法中，需要治療的受試者接受包括一種或多種spl2抑制劑(例如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)及mp抑制劑和sp抑制劑的聯(lián)合治療。在一些方法中，sp抑制劑選自萘莫司他、加貝酯和aebsf，mp抑制劑選自普啉司他、伏立諾他、頭孢克肟和其它頭孢菌素、頭孢他啶、abbott-50192、強力霉素和其它四環(huán)素、萘莫司他、銀杏苦內(nèi)酯a、左旋多巴、gm6001、加貝酯、阿克他利、格拉司瓊、馬馬司他、巴馬司他和莨菪堿。在一些方法中，mp抑制劑是普啉司他或伏立諾他，sp抑制劑是萘莫司他、加貝酯或aebsf。

在一些方法中，患者的眼睛暴露于毒液(如眼鏡蛇唾液造成的眼炎)，局部采用基于伐瑞拉迪的單一療法或組合療法。

iii.受試者

在一些實施例中，遭受毒液蟄入風險或遭遇毒液蟄入的受試者承受因蛇、魚、節(jié)肢動物、軟體動物、刺胞動物、或其它有毒動物毒液蟄入后，血毒素、細胞毒素、心臟毒素或肌肉毒素誘導的組織損傷、四肢或眼睛傷害，存在或不存在由此引起的腎臟衰竭、多器官衰竭和/或心血管虛脫。

受試者是哺乳動物，包括，例如，人類、非人類靈長動物、小鼠、大鼠、狗和貓。

在一些實施例中，已經(jīng)遭遇毒液蟄入的受試者根據(jù)本發(fā)明進行治療(例如，采用1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪治療)。在一些實施例中，知道受試者被蝰蛇毒液蟄入。在一些實施例中，知道受試者被眼鏡蛇毒液蟄入。在一些實施例中，知道受試者被游蛇毒液蟄入。在一些實施例中，不知道受試者是被蝰蛇或眼鏡蛇或游蛇毒液蟄入(即治療時不知道蛇的種類)。在一些實施例中，受試者被種類未知的蛇毒液蟄入。

在一些實施例中，受試者被毒液蟄入比人類或非人類脊椎動物毒液平均ld50更高的劑量。在一些實施例中，受試者被毒液蟄入比人類或非人類脊椎動物毒液平均ld50更低的劑量。在一些實施例中，受試者被毒液蟄入的劑量是人類或非人類脊椎動物毒液平均ld50的至少0.5倍。在一些實施例中，受試者被毒液蟄入的劑量是人類或非人類脊椎動物毒液平均ld50的至少2倍。

iv.磷脂酶a2抑制劑

脂酶是從膜脂質(zhì)釋放生物活性分子的酶。關鍵的脂肪酶家族由磷脂酶a2(pla2)組成。磷脂酶a2催化sn-2位磷脂的水解，產(chǎn)生游離脂肪酸和溶血磷脂。pla2傾向于從膜花生四烯酸、血小板活化因子和溶血磷脂酸釋放和/或形成至少三種重要的脂質(zhì)介質(zhì)。人們認為，通過pla從膜磷脂釋放花生四烯酸是控制細胞內(nèi)類花生酸產(chǎn)生的關鍵步驟。pla2酶通常分為胞漿型pla2(cpla2)、分泌型pla2(spla2)和非鈣依賴型pla2(ipla2)。毒液(如蛇毒)pla2(即spla2)是分泌出來的。根據(jù)分子量、鈣的需求量、結(jié)構(gòu)特征、底物特異性和功能作用進行分類。參見ray,etal."phospholipasea2inairwaydisease:targetfordrugdiscovery/'journalofdrugdiscoveryandtherapeutics1(8)2013,28-40。

人們已經(jīng)在植物、蛇毒和其它來源中識別出pla2抑制劑。人們已經(jīng)對pla2抑制劑作為炎性疾病治療的潛在治療劑進行了研究。參見magrioti,victoria,和georgekokotos."phospholipasea2inhibitorsaspotentialtherapeuticagentsforthetreatmentofinflammatorydiseases."expertopinionontherapeuticpatents20.1(2010):1-18),和dennis,edwarda等."phospholipasea2enzymes:physicalstructure,biologicalfunction,diseaseimplication,chemicalinhibition,andtherapeuticintervention."chemicalreviews111.10(2011):6130-6185。marcussi等表明，pla2抑制劑的生物技術潛力可能提供抗蛇毒活性治療分子模型，補充針對pla2的傳統(tǒng)血清治療方法。參見marcussi,silvana,等."snakevenomphospholipasea2inhibitors:medicinalchemistryandtherapeuticpotential."currenttopicsinmedicinalchemistry7.8(2007):743-756)。亦參見abhijitdey和jitendranathde,2012.phytopharmacologyofantiophidianbotanicals:areview/'internationaljournalofpharmacology,8:62-79,andlsguimaraes,cesar,etal."biodiversityasasourceofbioactivecompoundsagainstsnakebites."currentmedicinalchemistry21.25(2014):2952-2979.但是，沒有任何小分子pla2抑制劑已經(jīng)被批準作為治療毒液蟄入的制劑。

本發(fā)明中可以使用的spla2抑制劑包括但不限于ly315920和s5920(伐瑞拉迪)、ly333013和s-3013(甲基伐瑞拉迪)、ly311727、bms181162、ym26567和variabilissb203347、s-2474(甲基花生四烯酸)和花生四烯酸。在一些實施例中，pla2抑制劑是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪。伐瑞拉迪是spla2抑制劑，經(jīng)配制可靜脈內(nèi)施用和口服，研究用于治療高血脂、膿毒癥誘導的全身炎癥反應綜合征，及急性胸部綜合征(鐮狀細胞疾病并發(fā)癥)。參見"varespladib"americanjournalofcardiovasculardrugs.11(2):137-43.2011。甲基伐瑞拉迪是伐瑞拉迪的前體藥物，通常優(yōu)選口服。

在優(yōu)選的實施例中，pla2抑制劑是小分子(如mw<2000、<1000或<500)。

正如本文所述，我們已經(jīng)證明，令人意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪擁有突出的特性，使其適合作為毒液蟄入的“通用”的一線且經(jīng)常全面的治療。正如上文所述，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，除對廣泛的蛇毒具有pla2抑制活性之外，還通過直接和間接抑制蛇毒毒性，減弱宿主對蛇毒的病理反應，降低傷害。據(jù)我們觀察，這種對蛇毒的廣泛活性尤其讓人吃驚，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪不是蜂毒pla2的有效抑制劑，一般說來，藥用pla2抑制劑對蛇毒的效力不如對哺乳動物的效力。

令人吃驚的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪還抑制多種蛇毒的mp和sp活性。實際上，令人吃驚的是，在一些實驗中，與這些抑制劑醫(yī)學上重要的幾種實例(如萘莫司他、馬馬司他和巴馬司他)相比，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪是效力更強的拉塞爾蛇毒的sp和mp抑制劑。

還讓人吃驚的是，我們觀察到，對基本上所有蛇毒來說，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的ic50明顯低于人spla2抑制的報道值。

還令人吃驚的是，我們發(fā)現(xiàn)，即使毒性效應主要是細胞毒性的(包括所有固體和液體器官的所有表現(xiàn))，采用伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪單一療法使注射毒液的小鼠都具有優(yōu)異的存活率。這表明伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪在治療被蛇毒液蟄入出血性變異有效，所述蛇包括但不限于西部菱斑響尾蛇、小盾響尾蛇、圓斑蝰(百步金錢豹)、極北蝰、金黃珊瑚蛇。不受限于特定的機理，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪可以安全地抑制宿主反應，抑制蛇毒pla2(降低ic50)比抑制人spla更有效，部分防止溶血反應的有害影響和其它組織破壞。伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的直接和間接毒液和宿主mp和sp抑制活性還可能部分解釋了其對抗溶血性毒液有害影響的阻止作用。

其它pla2抑制劑，例如，但不限于其它1h-吲哚-3-乙醛酰胺，在治療毒液蟄入也有用。在本發(fā)明的指導下，本領域的技術人員將能夠鑒別pla2抑制劑及對廣泛毒液與/或定制的特定毒液組(例如，蛇的特定種類，或特定種類無脊椎動物的毒液)有效的治療組合。

其它優(yōu)選的spla2抑制劑包括專利us5654326中描述的那些抑制劑–由下述化學結(jié)構(gòu)的化合物表示：

其中x是o或s，優(yōu)選o；

r1是c7-c20烷基、c7-c20烯基、c7-c20炔基、碳環(huán)基(優(yōu)選芐基或乙基苯基)或雜環(huán)基；

r2是氫、鹵(f、cl、br、i)、c1-c3烷基(優(yōu)選乙基)或c3-c4環(huán)烷基；

r4是h或-o-(ch2)m-c(o)orv基，其中m是1-3(優(yōu)選1)，rv是h或c1-c3烷基，優(yōu)選ch3；及

r5、r6和r7是h，或

它們藥學上可接受的鹽、溶劑化物或多晶型物。

本發(fā)明中使用的優(yōu)選spla2抑制劑化合物(伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)由下述化學結(jié)構(gòu)式表示：

式中rv是h(伐瑞拉迪)或甲基(甲基伐瑞拉迪)，或它們藥學上可接受的鹽。上述化合物還可作為前體藥物形式c1-c6烷基酯、c2-c7酰氧基烷基酯，或c3-c9烷氧基羰氧基烷基酯(每個都在r4形成)。本發(fā)明中使用的這些化合物和其它相關化合物都在bach等的美國專利5,654,326中進行了描述，該專利通過引用而全文并入本申請中。

其它pla2抑制劑包括，例如：伐瑞拉迪酯(varespladibmofetil)、n-乙酰半胱氨酸、ly329722([3-氨氧基-1-芐基-2-乙基-6-甲基-1h-吲哚-4-氧基]-乙酸鈉)、似梨木雙黃酮(天然存在的雙黃酮)、bppa(5-(4-芐氧基苯基)-4s-(7-苯基庚?；被?戊酸及對–溴苯乙酰基溴(p-bpb)及其它二苯甲酮肟衍生物。在一些實施例中，本發(fā)明中使用的spla2抑制劑選自下述化合物：{9-[(苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；θ-芐基-δj-二甲氧基-s-四氫咔唑-羧酸酰肼；9-芐基-5,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；[9-芐基-4-氨基甲酰-7-甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-7-甲氧基咔唑-5-基]氧基乙酸；甲基[9-芐基-4-氨基甲酰-7-甲氧基咔唑-5-基]氧基乙酸；9-芐基-7-甲氧基-5-氰基甲氧基-s-四氫咔唑-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-(1h-四唑基-5-基-甲基)氧基)-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；{9-[(苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基-咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-(4-三氟甲基苯基)-咔唑-4-基}氧基乙酸；9-芐基-5-(2-甲基磺酰氨)乙氧基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-4-{2-甲基磺酰氨)乙氧基-2-甲氧基咔唑-5-羧酰胺；9-芐基-4-(2-三氟甲基磺酰氨)乙氧基-2-甲氧基咔唑-5-羧酰胺；9-芐基-5-甲基磺酰氨基甲氧基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-4-甲基磺酰氨基甲氧-咔唑-5-羧酰胺；[5-氨基甲酰-2-戊基-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(1–甲基乙基)-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯基甲基)-2-[(三(-1-甲基乙基硅氧基甲基咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-苯基-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(4-氯苯基)-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(2-呋喃基)-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯基甲基)-2-[(三(-1–甲基乙基硅氧基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；{9-[(2-氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-三氟甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-芐基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(1-萘甲基-δ-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-氰基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-氰基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3,5-二甲基苯基)乙基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-碘苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-氯苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,3-二氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,6-二氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,6-二氯苯)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-聯(lián)苯)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-聯(lián)苯)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸甲酯；[9-芐基-4-氨基甲酰-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；{9-[(2-吡啶基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-吡啶基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-8-甲基-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[9-芐基-5-氨基甲酰-1–甲基咔唑-4-基]氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-8-氟-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-8-氯-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[[(丙烯-3-基)氧]甲基]咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[(丙氧基甲基]咔唑基]氧基乙酸；9-芐基-7-甲氧基-5-({甲酰氨基甲氧基-四氫咔唑-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-氰基甲氧基-咔唑-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-((1h-四唑-5-基-甲基)氧基)-咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-((甲酰氨基甲氧基)-咔唑-4-羧酰胺；[9-芐基-4-氨基甲酰-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；{9-[{苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基-咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基咔唑-4-基}氧基乙酸；{9～[(3-甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-甲基咔唑-4-基]氧基乙酸；{9-[(苯基)甲基]-5-氨基甲酰-2-(4-三氟甲基苯基)-咔唑-4-基}氧基乙酸；9-芐基-5-(2-甲基磺酰氨)乙氧基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-4-(2-甲基磺酰氨)乙氧基-2-甲氧基咔唑-5-羧酰胺；9-芐基-4-(2-三氟甲基磺酰氨)乙氧基-2-甲氧基咔唑-5-羧酰胺；9-芐基-5-甲基磺酰氨基甲氧基-7-甲氧基-1,2,3,4-四氫咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-4-甲基磺酰氨基甲氧基-咔唑-5-羧酰胺；[5-氨基甲酰-2-戊基-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(1–甲基乙基)-9-(苯甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[(三(-1–甲基乙基]硅氧基甲基咔唑基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-苯基-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(4-氯苯基)-9-(苯基甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-2-(2-呋喃基}-9-(苯甲基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[(三(-1-甲基乙基]硅氧基甲基咔唑基]氧基乙酸；{9-[(3-氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-氯苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-苯氧基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[{2-氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-三氟甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-芐基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-三氟甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(1-萘甲基]-δ-氨基甲酰咔唑-基}氧基乙酸；{9-[(2-氰基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-氰基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3,5-二甲基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-碘苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-氯苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,3-二氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,6-二氟苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2,6-二氯苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-三氟甲氧基苯基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-聯(lián)苯)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(2-聯(lián)苯)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸甲酯；[9-芐基-4-氨基甲酰-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；{9-[(2-吡啶基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；{9-[(3-吡啶基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基}氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-8-甲基-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[9-芐基-5-氨基甲酰-1-甲基咔唑-4-基]氧基乙酸；[θ-芐基-氨基甲酰-δ-氟-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[θ-芐基-δ-氨基甲酰-1-氟咔唑-4-基]氧基乙酸；[9-芐基-4-氨基甲酰-8-氯-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；[9-芐基-5-氨基甲酰-1-氯咔唑-4-基]氧基乙酸；[9-[(環(huán)己基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基]氧基乙酸；[9-[(環(huán)戊基)甲基]-5-氨基甲酰咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-(2-噻嗯基)咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[[(丙烯-3-基)氧基]甲基]咔唑-4-基]氧基乙酸；[5-氨基甲酰-9-(苯甲基)-2-[(丙基氧基甲基]咔唑-基]氧基乙酸；9-芐基-7-甲氧基-5-((甲酰胺基甲氧基-四氯咔唑-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-6-氰基甲氧基-咔唑-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-({1h-四唑-5-基-甲基)氧基)-咔唑-4-羧酰胺；9-芐基-7-甲氧基-5-((甲酰胺基甲基)氧基)-咔唑-4-羧酰胺；[9-芐基-4-氨基甲酰-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基]氧基乙酸；(r,s)-(9-芐基-4-氨基甲酰-1-氧代-3-硫代-1,2,3,4-四氫咔唑-5-基)氧基乙酸；(r,s)-(9-芐基-4-氨基甲酰-3-硫代-1,23,4-四氫咔唑-5-基)氧基乙酸；2-(4-氧代-5-甲酰胺基-9-芐基-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚)乙酰氯；[n-芐基-1-氨基甲酰-1-氮雜-1,2,3,4-四氫咔唑-8-基]氧基乙酸；4-甲氧基-6-甲氧基羰基-10-苯甲基-6,7,8,9-四氫吡啶并[1,2-a]吲哚；(4-甲酰胺基-9-苯甲基-4,5-二氫硫代吡喃并[3,4-b]吲哚-5-基)氧基乙酸；3,4-二氫-4-甲酰胺基-5-甲氧基-9-苯基甲基吡喃并[3,4-ib]吲哚；2-[(2,9雙-芐基-4-氨基甲酰-1,2,3,4-四氫-β咔啉-5-基)氧基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-甲芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-甲芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-甲芐基)-9/-/-吡啶并[3；4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-叔-丁基芐基)-9/-/-吡啶并[3/4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-五氟芐基-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-{2-氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-氟芐基)-9/-/-吡啶并[3；4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2,6-二氟芐基}-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3,4-二氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2,5-二氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3,5-二氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基--9-(2,4-二氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2,3-二氟芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3,5-雙(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,4-雙(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(a-甲基萘基)-9/-/-吡啶并[3,4～ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(b-甲基萘基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-{3,5-二甲基芐基}-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2,4-二甲基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-{2-苯基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-苯基芐基)-9/-/-吡啶并[3；4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-{4-苯基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(1-芴基甲基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-氟-3-甲芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-苯甲酰芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-苯氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-苯氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-苯氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-[2-(氟苯氧基)芐基]]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-[4-(氟苯氧基)芐基]]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-氟-3-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-氟-4-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-氟-5-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-氟-5-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-氟-2-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-氟-3-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-氟-6-(三氟甲基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,3,6-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,3,5-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,4,5-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,4,6-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2,3,4-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3,4,5-三氟芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-(三氟甲氧基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-(三氟甲氧基)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-甲氧基(四氟)芐基]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3-甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-乙基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-異丙基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3,4,5-三甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3,4-亞甲二氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-甲氧基-3-甲基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(3,5-二甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2,5-二甲氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(4-乙氧基芐基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(環(huán)己基甲基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(環(huán)戊基甲基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-乙基-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(1-丙基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-丙基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(1-丁基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(2-丁基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-異丁基-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[2-(1-苯乙基)]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[3-(1-苯丙基)]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-[4-(1-苯丁基)]-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(1-戊基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；2-[4-氧代-5-甲酰胺基-9-(1-己基)-9/-/-吡啶并[3,4-ib]吲哚基]乙酸；4-[(9-芐基-4-氨甲?；?1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；3-[(9-芐基-4-氨甲酰基-1,2,3,4-四氫咔唑-9-基)氧基]丙基膦酸；2-[(9-芐基-4-氨甲?；?1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]甲基苯甲酸；3-[(9-芐基-4-氨甲酰基-7-正-辛基-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丙基膦酸；4-[(9-芐基-4-氨甲酰基-7-乙基-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；3-[(9-芐基-4-氨甲?；?7-乙基-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丙基膦酸；3-[(9-芐基-4-氨甲?；?7-乙基-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丙基膦酸；(s)-(+)-4-[(9-芐基-4-氨甲?；?7-乙基-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；4-[9-芐基-4-氨甲?；?6-(2-氰乙基)-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；4-[9-芐基[-4-甲酰胺基-7-(2-苯乙基)--1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；4-[9-芐基[-4-甲酰胺基咔唑-6-基]氧基丁酸；2-[(9-芐基-4-氨甲?；?1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]甲基苯甲酸甲酯；4-[9-芐基-4-氨甲?；?7-(2-氰乙基)-1,2,3,4-四氫咔唑-6-基)氧基]丁酸；9-芐基-7-甲氧基-5-氰基甲氧基-四氫咔唑-羧酰胺；[9-芐基-4-氨甲?；?8-甲基-咔唑-5-基]氧基乙酸；及[9-芐基-4-氨甲?；?咔唑-6--基]氧基乙酸；或它們藥學上可接受的鹽、溶劑化物、前體藥物衍生物、外消旋體、互變異構(gòu)體或旋光異構(gòu)體。

直接或間接pla2抑制劑還包括n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯(卡莫司他，卡莫司特)或(乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)(加貝酯)及白三烯合成抑制劑，選自甲基花生四烯基氟代膦酸酯(mafp)、丙氧芬、ono-rs-082、1-[3-(4-辛基苯氧基)-2-氧代丙基]吲哚-5-羧酸、1-[3-(4-辛基苯氧基)-2-氧代丙基]吲哚-6-羧酸、花生四烯基三氟甲基酮、d609、4-{3-[5-氯-2-(2-{([(3,4-二氯芐基)磺酰基]氨}乙基)-1-(二苯甲基)-1h-吲哚-3-基]丙基}苯甲酸(way-196025)、艾非拉地(efipladib)、4-{2-[5-氯-2-(2-{[(3,4-二氯芐基)磺?；鵠氨}-乙基)-1-(二苯甲基)-1h-吲哚-3-基]乙氧基}苯甲酸、艾考拉地(ecopladib)、(e)-n-t(2s；4r)-4-[n-(聯(lián)苯基-2-基甲基)-n-2-甲基丙氨基-1-[2-(2,二氟苯甲酰)苯甲酰]吡咯烷-2-基]甲基-3-[4-(2,4-二氧噻唑烷二-正-5-基亞基甲基)苯基]丙烯酰胺(rsc-3388)、黃連素、谷氨酰胺、花生四烯酸、甲基花生四烯酸或它們藥學上可接受的鹽。

本發(fā)明的某些實施例涉及施用pla2抑制劑，這些抑制劑選自由伐瑞拉迪(ly315920)、甲基伐瑞拉迪(ly333013)、aiplai(印度苦楝樹pla2抑制劑)、bms-181162、ly311727、arl-67974、fpl67047、sb-203347、ro-23-9358、ym-26734、ym26567、is-741、mj33、氟尼辛、依非拉地(effipladib)、way196025、艾考拉地(ecopladib)、吉立拉地(giripladib)、variabilin、花生四烯酸、甲基-花生四烯酸、sb203347、paf-ah、戴拉普迪(darapladib)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰絲氨酸(ps)、磷脂酰絲氨酸(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)，及它們的混合物組成的組，所述抑制劑與至少一種選自由羧甲基纖維素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明質(zhì)酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸軟骨素a(csape、csape、csape)、聚明膠肽(海脈素)(hempe、hempe)、羥乙基淀粉(hespe、hespe)(優(yōu)選透明質(zhì)酸-連接的磷脂酰乙醇胺(hype))及它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物、多晶型物和混合物組成組的化合物連接(結(jié)合)。

pla2抑制劑還包括組合物，所述組合物包含至少一種磷脂質(zhì)，所述磷脂質(zhì)選自由磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰絲氨酸(ps)、磷脂酰膽堿(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)及它們的混合物組成的組，所述磷脂質(zhì)與選自羧甲基纖維素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明質(zhì)酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸軟骨素(csape、csape、csape)、聚明膠肽(海脈素)(hempe、hempe)、羥乙基淀粉(hespe、hespe)及它們的混合物中的至少一種化合物連接(結(jié)合)。透明質(zhì)酸連接的磷脂酰乙醇胺(hype)是優(yōu)選的pla2抑制劑。

在一些實施例中，pla2抑制劑是實例14中描述的抑制劑(“采用金黃珊瑚蛇蛇毒的眼鏡蛇pla2抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)”)。

v.抗蛇毒血清

許多抗脊椎動物和無脊椎動物毒素的抗蛇毒血清的抗-pla2、mp和sp效力可以增強，例如，通過單獨使用伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪(通常作為pla2抑制劑)或其與普啉司他、巴馬司他、馬馬司他(采用或不采用伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪與抗蛇毒血清聯(lián)合使用)和對毒液成分具有特異性和非特異性活性的其它抑制劑一起使用，有益地修飾宿主反應或組合有益效果。

因為可以在最終決定施用或不施用抗蛇毒血清之前先服用小分子解毒劑，因此，比抗蛇毒血清制備(按順序服用)更快提供解毒劑的能力將滿足抗毒血清隨機臨床試驗長期未滿足的需求。我們發(fā)現(xiàn)，與抗蛇毒血清一起使用，藥物-抗蛇毒血清組合的效力得到增強，可以滿足降低抗蛇毒血清用量、減少并發(fā)癥和降低生產(chǎn)、儲存費用和縮短住院時間等長期未滿足的需求。

當被蝰蛇、眼鏡蛇或游蛇咬傷時，毒液蟄入中既含有神經(jīng)毒性又含有血毒性成分，導致麻痹、出血或凝血障礙，而且，區(qū)域特定需求、其蛇咬傷風險和治療資源導致需求和制劑要求變化多端，此時，采用抗毒血清聯(lián)合療法特別適合。聯(lián)合療法還可以使用抗蛇毒血清及毒液中其它酶抑制劑(如磷脂酶(如磷脂酶a2)抑制劑)或其它導致麻痹、破壞神經(jīng)末梢和/或?qū)е鲁鲅约膊〉亩疽撼煞?如蜂毒素，其刺激磷脂酶并具有血毒性/細胞毒性和神經(jīng)毒性)的抑制劑(clapp等,1995,broinrgs.693:101-11)?；钚猿煞挚膳c抗蛇毒血清或直接抗毒液成分的抗體片段結(jié)合，還可任選聯(lián)合施用machr拮抗劑(如阿托品、甘羅溴銨)，用于減緩不希望出現(xiàn)的achel的毒蕈堿影響。

單價和多價抗毒血清可用于治療蛇、蜘蛛、壁虱(acarids)、昆蟲、蝎子和海洋動物引起的毒液蟄入。具有代表性的抗蛇毒血清和抗蛇毒血清生產(chǎn)方法是本領域技術人員公知的。參見專利no5,340,923。例如，(btginternational,pic.)是響尾蛇多價免疫fab(ovine)抗蛇毒血清，用于治療北美響尾毒液蟄入的患者。術語響尾蛇用于描述毒蛇中響尾蛇亞科(以前稱為響尾蛇科)，包括響尾蛇、銅頭蛇和棉口蛇/水蝮蛇。建議早期采用(蛇咬傷6小時以內(nèi))，防止臨床惡化和發(fā)生全身凝血功能異常。早期使用基于伐瑞拉迪的療法，將降低對抗蛇毒血清的需求，當不需要抗蛇毒血清時，減少并發(fā)癥和降低費用，當兩種治療方案都采用時，將改善結(jié)果。在一些情況下，基于伐瑞拉迪的療法將完全取代對抗蛇毒血清的需求(例如，許多蝰蛇咬傷和珊瑚蛇咬傷)。更重要的是，基于伐瑞拉迪的療法與特異性、副特異性或非特異性抗蛇毒血清聯(lián)合使用將改善所有抗蛇毒血清制劑的療效，不管它們是聯(lián)合施用或聯(lián)合配制。

重要的是，包含伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪及任選，優(yōu)選mp抑制劑(如普啉司他、巴馬司他和馬馬司他)的藥物組合物改善了副特異性抗蛇毒血清的效果。正如下文實例11中所述，示例性pla2抑制劑伐瑞拉迪和示例性抗蛇毒血清組合使用，并對其pla2抑制活性進行分析，出乎意料地觀察到其效力得到增強。用于南棘蛇時的協(xié)同效應最強(伐瑞拉迪)。在試驗的毒液中，南部棘蛇與crofab@抗蛇毒效果增強的蝰蛇毒液相關性最差。這一證據(jù)強烈表明，spla2抑制劑的使用拓寬了給定抗蛇毒血清能夠治療的蛇毒液蟄入范圍。當抗蛇毒血清是采用與咬人蛇不同的蛇毒制備得到的時候，與spla2抑制劑的聯(lián)合療法可以提高該抗毒血清的副特異性效果和效力(例如，抗蛇毒血清可用于這種蛇的亞種或相關品種)。在知道沒有任何抗毒血清或沒有特定種類蛇的抗毒血清或毒液蟄入類型未知(如不知道是哪種蛇、魚或無脊椎動物(如蝎子或蜘蛛))時，與spla2抑制劑的聯(lián)合療法也可以使用抗蛇毒血清。與spla2抑制劑的聯(lián)合療法還允許施用更低劑量的抗毒血清。普啉司他和其它mp抑制劑改善的效果，表明mp抑制劑和抗蛇毒血清聯(lián)合施用可用于治療毒液蟄入的患者。

本申請下文列出了特異性和副特異性抗蛇毒血清和基于抗蛇毒血清的組合物，其可與小分子pla2抑制劑(如1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)聯(lián)合使用，用于治療脊椎動物和非脊椎動物毒液蟄入。

抗蛇毒血清實例

在抗蛇毒血清之前施用伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，或伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪與抗毒血清聯(lián)合施用或聯(lián)合配制，可以改善抗蛇毒血清制劑的療效，從而改善結(jié)果，這些抗蛇毒血清的非限制性名單如下。

蝮蛇抗蛇毒血清，pfizerinc公司生產(chǎn)。蝮蛇(響尾蛇科)抗蛇毒血清是一種多價馬源抗血清產(chǎn)品，是從采用東部菱背響尾蛇(東部鉆石響尾蛇)、西部菱斑響尾蛇(西部鉆石響尾蛇)、南美響尾蛇(熱帶響尾蛇，響尾蛇)和矛頭蝮蛇蛇毒免疫的健康馬身上提取血液得到的精制濃縮血清球蛋白制劑。蝮蛇抗蛇毒血清用于治療響尾蛇(蝮蛇)引起的毒液蟄入；

anavip蛇毒(anavipsnakevenom)，institutobioclonsadecv,rarediseasetherapeuticsinc公司生產(chǎn)。anavip包含馬源響尾蛇科f(ab')2免疫球蛋白片段作為活性成分；

抗蛇毒血清(anti-snakevenomserumsnakevenom)，印度藥物&制藥有限公司(indiandrugs&pharmaceuticalsltd)生產(chǎn)。這種抗蛇毒血清包含多價馬源蛇毒免疫球蛋白，用于治療蛇咬傷；

抗蝰蛇血清(anti-vipersserum)vacsera蛇毒中毒，生物制品和疫苗控股公司(theholdingcompanyforbiologicalproducts&vaccines)(vacsera)公司生產(chǎn)?？跪裆哐?anti-vipersserum)包含多價蝰蛇毒抗血清。它用于治療蝰蛇咬傷。

抗蛇毒血清(antivenom)，pfizerinc生產(chǎn)?？股叨狙?金黃珊瑚蛇)是從采用東部珊瑚蛇(金黃珊瑚蛇)蛇毒免疫的健康馬身上提取血液得到的精制濃縮凍干血清球蛋白制劑；

antiviperinobirmex蛇毒中毒(antiviperinobirmexsnakevenompoisoning)，laboratoriesdebiologicosyreactivosdemexicosadecv(birmex)生產(chǎn)。antiviperino包含極北蝰蛇毒免疫球蛋白；

asvs-非洲蛇毒中毒(asvs-africasnakevenompoisoning)，bharat血清和疫苗有限公司(bharatserumsandvaccineslimited)生產(chǎn)，是一種多價抗蛇毒血清。它是用不同蛇咬傷超免疫健康馬，提取其血液得到的血清球蛋白精制濃縮制劑。asvs-africa用于治療毒蛇咬傷。

asvs–亞洲蛇毒中毒(asvs-asiasnakevenompoisoning)，bharat血清和疫苗有限公司(bharatserumsandvaccineslimited)生產(chǎn)，球蛋白，asvs-asia是一種多價抗蛇毒素。它是用不同蛇咬傷超免疫健康馬，提取其血液得到的血清球蛋白精制濃縮制劑。

黑蛇抗蛇毒血清cslltd蛇毒中毒(blacksnakeantivenomcslltdsnakevenompoisoning),csl有限公司生產(chǎn)。黑蛇抗蛇毒血清是用王棕蛇(棕伊澳蛇)，亦稱為伊澳蛇的蛇毒免疫馬，從該馬身上提取血漿制備的，然后，收集中和這種毒的這部分馬的血液。王棕蛇蛇毒包含神經(jīng)毒素、肌肉毒素和抗凝血毒素。

黑蛇抗蛇毒血清用于治療被王棕蛇或棕伊澳蛇及相關物種和子物種咬傷后出現(xiàn)全身性中毒的患者，作為“副特異性”抗蛇毒血清使用。

bothrofav蛇毒中毒(bothrofavsnakevenompoisoning),賽諾菲公司生產(chǎn)，抗體、球蛋白、免疫球蛋白、免疫蛋白、血清球蛋白，bothrofav是包含f(ab')2-抗血清，用于治療馬提尼克矛頭蝮毒液蟄入；

棕色蟒蛇抗蛇毒血清蛇毒中毒(brownsnakeantivenomsnakevenompoisoning)，csl有限公司生產(chǎn)，抗體、抗毒素、生物因子、球蛋白、免疫蛋白、肽、血清球蛋白，棕色蟒蛇抗蛇毒血清采用棕色蟒蛇(擬眼鏡蛇)蛇毒免疫馬的血漿制備。棕色蟒蛇抗蛇毒血清用于治療被擬眼鏡蛇屬咬傷后出現(xiàn)全身性中毒的患者。擬眼鏡蛇包括東部棕蛇、杜吉擬眼鏡蛇和西部擬眼鏡蛇(gwardar)；

coralmyn蛇毒中毒(coralmynsnakevenompoisoning)，institutobioclonsadeoj公司生產(chǎn)，毒素，生物，coralmyn是一種多價抗珊瑚蛇治療片段f(ab')2及免疫球蛋白g(igg)的fab；

血液球蛋白(serumglobulins)，(btg)包含綿羊響尾蛇科免疫球蛋白片段作為活性成分。響尾蛇科多價免疫fab(綿羊)是一種免疫球蛋白g(igg)的毒液-特異性fab片段，它是通過與蛇毒毒素結(jié)合及中和蛇毒毒素，并促進其遠離靶向組織重新分布及從體內(nèi)清除而發(fā)揮作用的。

南棘蛇抗蛇毒血清(deathadderantivenom)，cslltd蛇毒中毒(cslltdsnakevenompoisoning),csl有限公司生產(chǎn)，這種抗毒血清是從用南棘蛇(aconthophisantarcticus)蛇毒免疫的馬的血漿制備的。南棘蛇抗毒血清用于治療被南棘蛇咬傷后出現(xiàn)全身性中毒的患者。

fav-afrique，賽諾菲，球蛋白，fav-afrique是多價抗蛇毒血清，是用非洲眼鏡蛇科和蝰蛇科最危險的10種蛇蛇毒免疫馬得到的。僅保留和純化f(ab')2片段。該血清能夠減少循環(huán)毒液的量，從而降低其毒性。favirept(sanofipasteur)是一種多價馬f(ab')2抗毒血清，用于中東各種蛇：咝蝰屬、鋸鱗蝰屬、眼鏡蛇屬、角蝰屬和鈍鼻蝰屬咬傷；

凍干habu抗蛇毒血清，kaketsuken制造。凍干habu抗蛇毒血清包含馬源黃綠烙鐵頭免疫球蛋白。凍干mamushi抗蛇毒血清(kaketsuken)是馬源抗蛇毒血清；

多價蛇抗蛇毒血清(polyvalentsnakeantivenom)，csl有限公司生產(chǎn)，該多價抗毒血清包含下述蛇的蛇毒抗體：王棕蛇(棕伊澳蛇)、虎蛇(澳洲虎蛇)、棕蛇(擬眼鏡蛇)、死亡蝰蛇(南棘蛇)、太攀蛇屬(太攀蛇oxyuranusscutellatus)。這種抗蛇毒血清采用這些蛇的蛇毒免疫馬，提取馬的血漿制備。它用于治療巴布亞新幾內(nèi)亞及除維多利亞州和塔斯馬尼亞州以外澳大利亞所有州的患者；

海蛇抗蛇毒血清(csl有限公司生產(chǎn))海蛇抗蛇毒血清采用海蛇(鉤鼻海蛇)蛇毒免疫的馬的血漿制備。海蛇抗蛇毒血清用于治療被海蛇咬傷后出現(xiàn)全身性中毒的患者；

多價抗蛇毒血清(polyvalentantisnakevenomserum)，seruminstituteofindia有限公司生產(chǎn)，其是一種多價抗-蛇毒血清，是由印度最常見的四種毒蛇的毒液超免疫馬制備的；

biologicale，biologicale.有限公司制備，是一種多價制劑，是由馬超級免疫血清得到的胃蛋白酶消化的精制濃縮制劑。它用于中和鋸鱗蝰、眼鏡蛇、印度環(huán)蛇和拉塞爾蝰蛇(圓斑蝰)的蛇毒。

vinsbioproducts有限公司生產(chǎn)抗血清，包含蛇毒免疫球蛋白(馬)作為活性成分。snakevenomvaccine(蛇毒疫苗)，生物工業(yè)聯(lián)合公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)生產(chǎn)，用作治療蛇咬傷的預防性疫苗；

csl有限公司生產(chǎn)的太攀蛇抗蛇毒血清是采用太攀蛇屬(太攀蛇)的毒液免疫馬的血漿制備的太攀蛇抗蛇毒血清和類似制劑；

csl有限公司生產(chǎn)的虎蛇抗蛇毒血清是采用虎蛇(澳洲虎蛇)的毒液免疫馬的血漿制備的?；⑸呖股叨狙逵糜谥委煴换⑸摺~頭蛇或黑蛇咬傷后出現(xiàn)全身性中毒的患者。

viperatab包含極北蝰蛇毒免疫球蛋白作為活性成分。它是一種多價免疫抗原結(jié)合片段(綿羊)，包括結(jié)合和中和含蛋白酶、脂肪酶和心臟毒素的極北蝰蛇毒成分的特異性抗體片段，促進其在遠離靶向組織重新分布，及隨后從體內(nèi)清除。

viperfav(賽諾菲)是一種多價馬f(ab')2免疫球蛋白抗蛇毒血清，用于防止歐洲蛇(蝰蛇屬)中毒；

institutobioclonsadecv生產(chǎn)的抗蛇毒血清(kamada)antivipmyn包含蛇毒免疫球蛋白片段(馬)作為活性成分。它是一種免疫球蛋白g(igg)超免疫球蛋白的多價抗蛇治療片段f(ab')2。

伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪及其組合增強療效的特異性和副特異性無脊椎動物抗蛇毒血清名單：

箱形水母抗蛇毒血清，csl有限公司公司生產(chǎn)，箱形水母抗蛇毒血清是采用箱形水母(澳大利亞箱形水母)毒液免疫綿羊血漿制備的。analatro(institutobioclonsadecvandrarediseasetherapeutics公司生產(chǎn))包含寇蛛毒液f(ab')2免疫球蛋白片段作為活性成分；

institutobioclonsadecvandrarediseasetherapeuticsinc生產(chǎn)的aracmynplus包含多價蜘蛛毒液f(ab')2免疫球蛋白片段作為活性成分；

漏斗網(wǎng)蜘蛛抗蛇毒血清中毒(funnelwebspiderantivenompoisoning),csl有限公司生產(chǎn)：漏斗網(wǎng)蜘蛛抗毒血清(funnelwebspiderantivenom)是來源于悉尼漏斗網(wǎng)蛛免疫的兔血漿的提純免疫球蛋白(主要是免疫球蛋白g)；

reclusmyninstitutobioclonsadecv：reclusmyn包含免疫f(ab')2抗蛇毒血清。

紅背蜘蛛抗蛇毒血清中毒(redbackspiderantivenompoisoning),csl有限公司生產(chǎn)。紅背蜘蛛抗毒血清(redbackspiderantivenom)是從用雌性紅背蜘蛛(澳洲紅背蜘蛛)毒液免疫的馬血漿制備的；

石魚抗蛇毒血清(csl有限公司)是由石魚(synanceiatrachynis)免疫馬血漿制備的；

scorgen是bharatbiotechinternationallimited生產(chǎn)的。scorgen由來源于馬的蝎子毒液抗血清組成。這種抗血清包含提純酶精制濃縮特異性異源免疫球蛋白；

anascorpinstitutobioclonsadecv,accredohealthgroupinc,rarediseasetherapeuticsinc。anascorp包含刺尾蝎免疫球蛋白片段(馬)；

抗蝎子血清vacsera蝎子(anti-scorpionserumvacserascorpion).抗蝎子血清是純化的多價蝎子抗血清；

scorpifavscorpion，scorpifav是多價馬f(ab')2抗血清。scorpifav用于防止北非和中東蝎中毒(肥尾蝎、金蝎、鉗蝎)；

蝎毒抗血清(scorpionvenomantiserumscorpion),vinsbioproducts有限公司生產(chǎn)。蝎毒抗血清包含蝎毒免疫球蛋白片段(馬)作為活性成分。蝎毒抗血清用于治療蝎子咬傷；

蝎毒疫苗(scorpionvenomvaccinescorpion),生物工業(yè)聯(lián)合有限公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)。蝎毒疫苗作為蝎子咬傷的預防疫苗；

蝎毒抗毒素(scorpionvenomsantitoxin)，生物工業(yè)聯(lián)合有限公司(unitedcompanyforbiologicalindustriesltd)(bioegypt)生產(chǎn)。蝎毒抗毒素包含能夠中和毒素的抗蝎毒免疫球蛋白；

皮疹止癢水(stopitchskinrash),valeantpharmaceuticalsaustralasiapty有限公司生產(chǎn)。止癢水中的活性成分是木瓜蛋白酶，一種從木瓜(番木瓜)未成熟果實中提取的酶。木瓜蛋白酶以兩種方式作用：抑制感覺傳遞和中和昆蟲毒液，迅速緩和及減輕與昆蟲咬傷有關的疼痛、癢、腫脹及輕微皮膚刺激；

csl壁虱抗毒血清(csltickantivenom)，壁虱抗毒血清有助于中和全環(huán)硬蜱毒液的效果。所述抗毒血清是壁虱免疫狗得到的。壁虱抗毒血清用于治療因壁虱咬傷導致麻痹癥狀的患者。

vi.金屬蛋白酶抑制劑

一方面，pla2抑制劑(例如，1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪)的聯(lián)合療法是用于與對蛇毒金屬蛋白酶具有抑制活性的小分子聯(lián)合使用。

有用的“金屬蛋白酶抑制劑”包括但不限于普啉司他、bb-94(馬馬司他)、bb-2516(巴馬司他)、伏立諾他、頭孢克肟、銀杏內(nèi)酯。本發(fā)明可以使用的其它金屬蛋白酶抑制劑包括但不限于tapi-2、tapi-1、egta、edta、磷酸阿米酮、tapi-0、木犀草素、阿侖膦酸鈉、坦諾司他、伊洛馬司他、普啉司他、萘莫司他、膠原酶抑制劑1、ro-32-3555、乳糖醛酸、鄰二氮雜菲、大腸桿菌素、4-差向金霉素、四環(huán)素、強力霉素或具有有益抑菌作用的相關抗生素，n-丹磺酰-d-苯丙氨酸、20[r]人參皂苷rh2、甘氨酸氧肟酸(pro-leu-gly-hydroxymate)、gm6001、放線酰胺素、arp-100、mmp9抑制劑、mmp2抑制劑i、sb-3ct、塞奧芬(dl)、4-epi-去甲基金霉素、甲基丙烯酸鋅、funalenone、天然衍生的或合成的蛇毒金屬蛋白酶的短肽抑制劑及它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物和多晶型物和混合物。

出乎意料的是，包含和不包含某些金屬蛋白酶抑制劑的伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪組合可能證明對治療日本地區(qū)大多數(shù)毒蛇、美國許多蝰蛇(如果并非全部)和世界各地其它蛇的咬傷都有效。此外，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪與新斯的明或吡啶斯的明一起或不與新斯的明或吡啶斯的明一起使用及任選與阿托品或甘羅溴銨聯(lián)合施用將有效地治療美國每種珊瑚蛇咬傷，這是一個具有深遠治療意義的發(fā)現(xiàn)，因為它能夠立即治療威脅生命的癥狀，特別是毒液蟄入時受害者可以自己施用治療。

在一些實施例中，mp抑制劑是實例12(“西部菱斑響尾蛇蛇毒mp(代表新世界毒蛇)有用抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)”)中描述的抑制劑或?qū)嵗?3(“實例13鋸鱗蝰蛇毒mp(代表舊世界毒蛇)有用抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)”)中描述的抑制劑。

vii.絲氨酸蛋白酶抑制劑

一方面，pla2抑制劑(例如，1h-吲哚-3-乙醛酰胺，如伐瑞拉迪與/或甲基伐瑞拉迪)的聯(lián)合療法是與對蛇毒絲氨酸蛋白酶具有抑制活性的小分子聯(lián)合使用。

有用的絲氨酸蛋白酶抑制劑包括但不限于萘莫司他和加貝酯、卡莫司他或卡莫司特，并且出乎意料地在一些情況下伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪本身。在此處、上文或下文引用的某些情況下，在被蛇咬傷或其它毒液蟄入后，加貝酯、卡莫司他或卡莫司特及其它抑制劑直接或間接抑制蛇毒或宿主pla2活性的有益效果。其它有用的絲氨酸蛋白酶抑制劑包括但不限于：抑肽酶、亮抑酶肽、抗凝血酶(at)、α-1抗胰蛋白酶(α1抗胰蛋白酶(a1at))、aebsf(4-(2-氨乙基)苯磺酰氟鹽酸鹽)、pmsf(苯甲基磺酰氟或苯甲磺酰氟)、蛋白c抑制劑(pci，serpina5)、蛋白z-依賴性蛋白酶抑制劑、甲氧基花生?；姿?mafp)、骨髓和紅細胞核終止階段特異性蛋白(ment)、纖溶酶原激活劑抑制劑-1(pai-1)、纖溶酶原激活劑抑制劑-2(胎盤pa1)、蛋白酶-連接蛋白-1(pn-1)、抗凝血酶iii膠原結(jié)合蛋白、磷脂酰乙醇胺-結(jié)合蛋白、神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑、a2-抗纖維蛋白溶酶、絲氨酸蛋白酶抑制劑3、murinoglobini、蛇毒絲氨酸蛋白酶天然衍生的或合成的短肽-抑制劑、美國專利申請文件no20090318534所述減少絲氨酸蛋白酶多核苷酸轉(zhuǎn)錄和翻譯的核酶和小分子制劑、美國專利申請文件no20140341881中描述或引用的絲氨酸蛋白酶抑制劑，及它們的類似物、衍生物、藥學上可接受的鹽、對映體、非對映體、溶劑化物、多晶型物和混合物。

viii.其它制劑

a.乙酰膽堿脂酶抑制劑

乙酰膽堿(ach)是神經(jīng)細胞細胞質(zhì)中及非神經(jīng)組織(如頭部和頸部粘膜表面)中合成的神經(jīng)遞質(zhì)。當動作電位到達神經(jīng)末梢時，囊泡釋放乙酰膽堿到突觸。一旦進入突觸內(nèi)，乙酰膽堿擴散通過突觸間隙，并與突觸后乙酰膽堿受體結(jié)合。乙酰膽堿與其受體的結(jié)合觸發(fā)突觸后細胞的去極化。隨后，當乙酰膽堿被乙酰膽堿脂酶水解為乙酸和膽堿時，受體介導的反應被終止。乙酰膽堿脂酶(ache；ec3.1.1.7)是水解乙酰膽堿的絲氨酸蛋白酶。乙酰膽堿脂酶活性的分析方法是人們所熟悉的(參見例如，ellman等；biochem.pharmacol.,7,88-95,1961)。

乙酰膽堿與兩種主要類型的受體結(jié)合：煙堿型乙酰膽堿受體(nachr)和毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)。煙堿型乙酰膽堿受體通常存在于某些神經(jīng)元的質(zhì)膜內(nèi)和神經(jīng)肌肉接點(控制骨骼肌肉)的突觸后的一側(cè)。毒蕈堿型乙酰膽堿受體通常存在于涉及副交感神經(jīng)系統(tǒng)的器官內(nèi)。神經(jīng)毒素的毒害效應，或非去極化神經(jīng)肌肉阻滯劑(nnba)的殘留效應可通過抑制神經(jīng)肌肉接點處的乙酰膽堿脂酶而消除。乙酰膽堿脂酶通過將ach水解為乙酸和膽堿而終止nachr反應。抑制乙酰膽堿脂酶的活性，防止ach水解，提高神經(jīng)肌肉接點內(nèi)有效ach的濃度，從而改善α-神經(jīng)毒素和其它神經(jīng)毒素(如β-神經(jīng)毒素)的效應或nnba的殘留效應，這是可能的。

蛇毒中發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)毒素(如α-和β-神經(jīng)毒素)與ach競爭或阻斷ach，與煙堿型乙酰膽堿受體結(jié)合。乙酰膽堿-調(diào)節(jié)神經(jīng)毒素引發(fā)的大多數(shù)死亡通常是由預防神經(jīng)功能(“突觸前”)或與直接激活肌肉收縮(“突觸后”)側(cè)相關的ach受體部位的突觸前靶向毒素的骨骼肌麻痹引起的?？傊?，這些作用使神經(jīng)肌肉接點出現(xiàn)故障或破壞這些機制，觸發(fā)呼吸衰竭，除非受害者得到醫(yī)治，否則會引發(fā)死亡?？傊?，這些神經(jīng)毒素的作用機制是通過降低可與神經(jīng)肌肉接點結(jié)合的ach的有效濃度，破壞nachr的正常功能。發(fā)生這種情況是因為神經(jīng)毒素是nachr的拮抗劑，并與ach競爭nachr結(jié)合位點或損害突觸本身，損害神經(jīng)元釋放ach的能力。毒液/神經(jīng)毒素生理反應的嚴重程度與神經(jīng)毒素的nachr親和力或與釋放ach的神經(jīng)末梢直接相關或與這兩者都相關。

有用的乙酰膽堿脂酶抑制劑包括但不限于安貝氯銨；demarcarium；多奈哌齊；騰喜龍；加蘭他敏；石杉堿a；拉多替吉(ladostigil)；山萵苣苦素；新斯的明；毒扁豆堿；吡啶斯的明；卡巴拉?。凰肆?；碘磷靈；和恩其明(ungeremine)。

有用的machr拮抗劑包括競爭性拮抗劑。machr拮抗劑可以是可逆轉(zhuǎn)的競爭性拮抗劑，優(yōu)選不超出血腦屏障。優(yōu)選machr拮抗劑對machr的選擇性優(yōu)于nachr，半衰期4-6小時或更低。有用的machr激動劑包括但不限于甘羅溴銨和阿托品，及優(yōu)選的乙酰膽堿脂酶抑制劑–machr拮抗劑聯(lián)合治療組合包括新斯的明和甘羅溴銨或阿托品?？膳c金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑聯(lián)合施用的輔助治療的示例組合包括碘磷靈、肟-衍生ache修復劑(如氯解磷定)及machr抑制劑(如阿托品或比哌立登)。在一個實施例中，machr拮抗劑選自由阿托品、苯扎托品、甘羅溴銨、異丙托銨、美貝維林、奧昔布寧、哌侖西平、莨菪堿、比哌立登、噻托溴銨和托品酰胺組成的組。

b.nmda受體拮抗劑

“nmda受體拮抗劑”包括但不限于地佐環(huán)平(mk801)、艾芬地爾、r025-6981、tcn-201、克他命、氟乙酰胺、非爾氨酯、美金剛、右美沙芬、依利羅地、賽福太、芋螺睡眠肽-g、-r、aptigamel(cns1102)、強啡肽a(1-13)、dqp1105和nvp-aam077。

c.抗生素

有用的毒液抑制抗生素包括但不限于地美環(huán)素、強力霉素、多西環(huán)素二甲胺四環(huán)素、替加環(huán)素、氧四環(huán)素、四環(huán)素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、妥布霉素、巴龍霉素、奇霉素、格爾德霉素、除莠霉素、利福昔明、鏈霉素、厄他培南、多利培南、亞胺培南/西司他丁、美羅培南、頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢菌素、頭孢氨芐、頭孢克洛、頭孢羥唑、頭孢西丁、頭孢丙烯、頭孢呋辛、頭孢克肟、頭孢地尼、頭孢妥侖、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、頭孢洛林、頭孢吡普、替考拉寧、萬古霉素、特拉萬星、達托霉素、奧利萬星、wap-8294a、阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、紅霉素、羅紅霉素、泰利霉素、螺旋霉素、克林霉素、林可霉素、氨曲南、呋喃唑酮、呋喃妥因、惡唑菌酮(oxazolidonones)、利奈唑胺、潑斯唑來、雷得唑來(radezolid)、特地佐利(torezolid)、阿莫西林、氨芐西林、阿洛西林、羧芐青霉素、氯唑西林、雙氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素g、青霉素v、哌拉西林、替莫西林、替卡西林、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉維酸、桿菌肽、粘菌素、多粘菌素b、環(huán)丙沙星、依諾沙星、加替沙星、吉米沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星(grepafioxacin)、司帕沙星、磺胺米隆、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺地索辛、磺胺甲二唑、磺胺甲惡唑、柳氮磺胺吡啶、磺胺異惡唑、復方新諾明、2,4-二氨基偶氮苯-4-磺酰胺(sulfonamidochrysoidine)、氯法齊明、卷曲霉素(capreomycin)、環(huán)絲氨酸、乙胺丁醇、利福平、利福布汀、利福噴汀、胂凡納明、氯霉素、磷霉素、夫西地酸、甲硝唑、莫匹羅星、平板霉素、奎奴普丁/達福普丁、甲砜霉素、替加環(huán)素和替硝唑及它們的組合。

特別有用的毒液抑制劑抗生素治療與蛇咬傷有關的細菌并作為毒液中和劑。此類抗生素的實例包括頭孢菌素，如頭孢克肟和四環(huán)素，如強力霉素和地美環(huán)素。

d.分布增強劑

除上述組分外，本發(fā)明的組合物和方法可通過采用有效劑量的促進生物分布的制劑，如利多卡因與/或布比卡因得到增強，所述制劑可以包含在本發(fā)明的組合物中，用于增強活性成分在組合物注入組織中的分布，同時松馳平滑肌和減緩毒液擴散。

e.擴散因子抑制劑

使用“擴散因子抑制劑”，本發(fā)明治療方法和藥物組合物可以抑制與蛇咬傷有關的血管生成?！皵U散因子抑制劑”包括玻連蛋白受體α5β3的抑制劑，包括但不限于美國專利no8,546,526中描述或引用的玻連蛋白受體α5β3的抑制劑，及simone等"mechanismsofactionandtherapeuticpotentialinvasculardisease",jmolgenetmedfvolume8fissue3,1000125(2014)等中描述或引用的纖溶酶原激活物抑制劑(pai-1；serpine1)的抑制劑。xr330、xr334、xr1853、xr5082、xr5967、xr1121、ar-h029953xx、纖溶拮抗劑氟滅酸的fendosalanthranalic酸衍生物、ans、雙-ans、1-十二烷基硫酸、xr-5118、cde-066、cde-081、imd-1622、tiplaxtinin和tm5007。有用的擴散因子抑制劑還包括天然衍生的或合成的蛇毒擴散因子短肽抑制劑及天然衍生的或合成的非-酶性、組織破壞性、心臟毒性、肌肉毒性、麻痹性或出血性毒素的短肽抑制劑。利多卡因和其它卡因可以松馳淋巴平滑肌和減慢毒液擴散。物理擴散因子抑制劑包括壓力固定裝置，可與本發(fā)明一起使用，以減慢毒液的擴散，加大明確或輔助治療的時間窗口。

ix給藥劑量和途徑

一般說來，根據(jù)標準藥物實踐，根據(jù)受試者的體重和狀況來確定本文所述藥物組合物和治療化合物的給藥劑量和給藥途徑。采用的劑量水平范圍廣，熟悉本領域的人員可以容易確定。一般說來，采用的劑量是毫克至克范圍。

提供包含本文所述藥物、前體藥物或組合(例如，當包含在本發(fā)明的組合物中時，伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪、伐瑞拉迪的前體藥物及其它抑制劑化合物)和鹽水的制劑。一方面，這些制劑具有生理上可以接受的ph(例如，大約7.4-8.5)，例如，當溶解在58％v/v8.4％碳酸氫鹽和42％v/v10％葡萄糖溶液中時。這些制劑可以儲存，然后與藥物、前體藥物或組合一起使用，較長時間內(nèi)(例如，儲存期間)保持完整，并在施用于個人(如成人、兒童或嬰兒)時轉(zhuǎn)化為伐瑞拉迪，包含或不包含其它成分。在一些實施例中，藥物、前體藥物或組合作為干粉或粉末(特別是凍干粉)儲存，在施用之前，將這些干粉在鹽水或其它稀釋劑中溶解，得到所述制劑。一方面，提供這些制劑，例如，制劑包含藥物、前體藥物或組合，所述藥物、前體藥物或組合的摩爾當量是大約1ng/ml至1ug/ml至0.01mg/ml、0.1mg/ml、1mg/ml、5mg/ml、10mg/rnl、25mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml或200mg/ml或400mg/ml或600mg/ml或800mg/ml或1000mg/ml母體藥物(如伐瑞拉迪)，其中藥物、前體藥物或組合的摩爾當量是完成轉(zhuǎn)化后得到指定數(shù)量母體藥物的藥物、前體藥物或組合的用量。對任何用量(如劑量)的本文所述藥物、前體藥物或組合來說，還指的是達到其母體藥物用量的前體藥物的摩爾當量。還提供單一丸藥制劑，例如，高達大約5ml、10ml或15ml(例如，相當于大約1450mg至大約1600mg母體藥物(如伐瑞拉迪)的化學計量前體藥物)，或丸劑、膠囊或口服酏劑形式：口服劑量1mg至100mg、250mg、500mg、1000mg，每天1次、2次、3次，實現(xiàn)血清濃度10pm、100pm、1nm、10nm、50nm、100nm、200nm、500nm、1um、10um、100um，非人類動物中實現(xiàn)高達1、10、25、50、100、150mg/kg/天，但優(yōu)選單次或分次劑量0.5至100mg/kg/天。

施用的劑型將根據(jù)人們熟悉的因素而變化，如特定制劑的藥效特征、及它們的給藥模式和途徑、施用者的年齡、健康狀況和體重；癥狀的性質(zhì)和程度、同步治療的種類、治療頻次及期望效果。通常，活性化合物的每日劑量可以是大約0.1-500mg/kg體重。在每天1-6次的分次劑量中，通常采用0.5-50，優(yōu)選1-25mg/kg/天，或者采用持續(xù)釋放形式，都是有效的，可以獲得期望的結(jié)果。

根據(jù)患者的狀態(tài)，在蛇咬傷或無脊椎動物咬傷或螫傷誘導疾病的癥狀或體征開始之前，施用更低劑量范圍或更高劑量范圍(例如，在醫(yī)院里根據(jù)spla2水平升高臨床確定或可能確定)，而當表明需要采用主動干預來應對spla2水平升高時，可以施用更高劑量。

一般說來，將spla2抑制劑施用于動物，從而接受治療有效劑量。按照慣例，通過逐漸增加活性化合物的施用劑量，并觀察患者的反應，例如，麻痹、組織損傷減少或spla2活性水平上升得到抑制，或與蛇咬傷或無脊椎動物咬傷或螫傷有關的其它癥狀或體征減少，確定患者的治療有效劑量。

一般說來，化合物應以動物spla2或其它抑制劑的血藥濃度達到0.01-5000ng/ml，優(yōu)選1-1000ng/ml的方式和劑量施用。

由合格的醫(yī)生(主治醫(yī)師)決定，治療方案可以持續(xù)數(shù)小時至1天至幾周至數(shù)月或數(shù)年。為了患者方便性和耐受性起見，優(yōu)選口服與/或靜脈輸注。采用口服時，每天1至4次，每次大約0.01-100mg/kg體重，優(yōu)選劑量是大約0.1mg/kg至大約10mg/kg。

x.劑型、藥物制劑和給藥模式

活性化合物(特別包括1-h-吲哚-3-乙醛酰胺化合物伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪)的使用濃度可以是制劑重量的0.01-99.9％，在一些情況下，濃度是制劑重量的0.001-99.9％。優(yōu)選藥劑劑型是單位劑型。單位劑型可以是膠囊或片劑本身，或者是適當數(shù)量的這些劑型。根據(jù)涉及的特定治療，單位劑量組合物中活性化合物的含量可以變化或調(diào)整，是大約0.1至大約1000mg或更多。

適合內(nèi)部給藥的組合物(劑型)每單位包含大約1mg至大約1000mg活性化合物。在這些藥物組合物中，活性化合物的含量通常是組合物總重量的大約0.5-95重量％。有用的藥物組合物及其各成分比例的示例如下：

膠囊：膠囊可以通過在每個兩半式硬膠囊內(nèi)填充50mg粉末活性化合物、175mg乳糖、24mg滑石粉和6mg硬脂酸鎂制備。

軟膠囊：在大豆油中配制活性化合物的混合物，并通過容積式泵注入到明膠內(nèi)，形成含50-500mg活性化合物的軟膠囊。在石油醚中洗滌膠囊并干燥。

片劑：片劑可以采用傳統(tǒng)方法制備，從而劑量單位中含50mg活性化合物、6mg硬脂酸鎂、70mg微晶纖維素、11mg玉米淀粉和225mg乳糖。為了提高口感或延遲吸收，還可以采用合適的包衣。

懸浮液：配制口服含水懸浮液，從而每5ml懸浮液中包含25mg細分活性化合物、200mg羧甲基纖維素鈉、5mg苯甲酸鈉、1.0g山梨醇溶液、u.s.p.和0.025mg香草醛。

注射液：適合注射的腸胃外組合物是通過在10％體積丙二醇和水中攪拌1.5重量％活性化合物而制備。該溶液采用常用方法殺菌。其它注射液通過將粉末，特別是凍干粉溶解在醫(yī)學上可接受ph值的鹽水溶液中而制備。

鼻腔噴霧劑：制備水溶液，從而每1ml水溶液中包含10mg活性化合物、1.8mg對羥基苯甲酸甲酯、0.2mg對羥基苯甲酸丙酯和10mg甲基纖維素。將溶液分配到1-5ml小瓶內(nèi)。

氣霧劑能夠分散為大約0.5微米至大約10微米粒徑，內(nèi)含足夠多的spla2抑制劑，使氣道表面抑制劑的濃度是大約10-10至10-2mol/l。

若要快速減輕患者痛苦，如分析表明spla2水平升高或首次器官衰竭后不超過24小時，通常優(yōu)選采用腸胃外給藥(特別是，靜脈內(nèi)給藥)。腸胃外給藥的劑量0.001-200mg/kg/天，全天連續(xù)給藥或間歇給藥。腸胃外給藥時，化合物可以在生理鹽水媒介(如0.9％-生理鹽水、0.45％生理鹽水等)、葡萄糖媒介(例如，5％葡萄糖水溶液)或生理鹽水和葡萄糖媒介組合(0.9％生理鹽水溶于5％葡萄糖)中施用，可以包括或不包括4.2％-8.4％碳酸氫鈉，以使腸胃外給藥溶液的ph值升高到>8.0。

腸胃外給藥還優(yōu)選采用對本發(fā)明實踐有用的化合物的凍干組合物。

本發(fā)明的組合物可以向患者單獨施用，以單一劑型組合施用或不止一種組合物順序施用(按任何順序)。本發(fā)明的劑型可包括干燥且現(xiàn)場可復水的固體組合物、注射或口服溶液，或組合物可以包含在混合物中，或作為單獨組分配制，在懷疑或確認中毒毒液蟄入按順序給藥。在某些實施例中，所述組合物的劑型是腸胃外劑型，可以通過針頭或噴射(如肌肉內(nèi)、皮下)或靜脈輸液注入，即時釋藥或持續(xù)釋藥。其它劑型適合通過微注射或貼片(透皮給藥)單獨給藥或通過加壓固定夾板給藥，鼻內(nèi)給藥，以丸劑、酏劑或溶液形式口服，含服，舌下給藥，以凝膠形式給藥，霧化給藥，包含具有或不具有其它性質(zhì)(如抗菌活性和止痛活性)的藥物活性或惰性載體，任選在包含微脂囊、微膠粒、聚合物、金屬和脂質(zhì)納米粒子的媒介中給藥，及包含滲透劑以增強組織傳輸。

劑量和試驗產(chǎn)品–提供伐瑞拉迪(ly315920)或甲基伐瑞拉迪。施用：作為凍干粉溶于鹽水中，并根據(jù)需要和注射加入適當?shù)脑鋈軇?。每個小瓶可以包含0.1、1、10、50、100、250、500、750、1000、2000、5000至50,000mg伐瑞拉迪，從包裝中按照適當比例計量，加入到溶液中。復水后，所有伐瑞拉迪劑型的目標是血漿中伐瑞拉迪的濃度是大約1-2500ng/ml，優(yōu)選大約1000ng/ml。在本發(fā)明優(yōu)選的方面，為了實現(xiàn)最好療效，伐瑞拉迪血清濃度達到500ng/ml–大約1500ng/ml，優(yōu)選大約750ng/ml至大約1250ng/ml，最優(yōu)選大約1000ng/ml(1μg/ml)。其它pla2抑制劑的濃度將有所不同，大多數(shù)比伐瑞拉迪高很多，因為它們的活性通常比伐瑞拉迪低。在一些實施例中，金屬蛋白酶抑制劑和/或絲氨酸蛋白酶抑制劑在血清中的濃度是大約0.1ng/ml至大約500μg/ml。

給藥模式、劑量和給藥途徑預期可以根據(jù)護理階段而變化。為了進行說明，人或非人類患者被蛇咬傷，并肌肉內(nèi)注射藥學上有效劑量的解毒劑組合物，并以適當?shù)脑O施接受醫(yī)學護理，患者接受含有或不含有解毒劑的抗蛇毒血清治療，或接受含有或不含有抗蛇毒血清的解毒劑治療，給藥形式是靜脈內(nèi)注射、丸劑、海綿、重復注射、鼻內(nèi)噴霧或其它噴霧給藥，從而維持足夠高的血液濃度，以繼續(xù)抑制毒液，直到患者穩(wěn)定或確定不需要接受任何其它治療。

金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑的示例劑量范圍包括足夠的抑制劑用量，當采用藥學上可接受的載體(賦形劑)分散、溶解或稀釋時，抑制劑的濃度是大約0.000001、0.00001、0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725至大約750μm或高達800、850、900、950或1000μm。這些示例劑量范圍還應用于本文所述的輔助治療?？赡艿膭┝糠秶谴蠹s0.000001、0.00001、0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、230、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490至大約500μm。

在一些實施例中，本文描述的治療活性劑以膏狀或凝膠狀形式局部施用于咬傷或螫傷部位，用于中和毒液。在一些實施例中，第一治療劑直接施用于咬傷部位或損傷組織處或施用于它們附近，而第二治療劑經(jīng)由另一途徑聯(lián)合施用(任選作為輔助治療，與傳統(tǒng)抗蛇毒血清聯(lián)合施用)。在一些實施例中，治療活性劑代替抗毒血清施用于非-致命或非-四肢威脅傷害(如隔離面神經(jīng)癱瘓或顱神經(jīng)麻痹)處。在一些實施例中，治療活性劑通過經(jīng)皮貼片施用或通過加壓固定裝置一起施用，通過減少淋巴流動，減慢毒液的擴散。

在一些實施例中，本文所述的抑制劑與另一種分子(如生物相容性的與/或可生物降解的納米顆粒)結(jié)合。例如，抑制劑可與另一種消除復合毒液血毒性影響的藥物聯(lián)合使用，并通過單獨阻止纖維蛋白或其它凝血因子或它們的組合(如混合物或結(jié)合物)消耗，防止凝血障礙。在一些實施例中，解毒劑與抑制磷脂酶a2的中藥提取物或其它化合物聯(lián)合使用，防止神經(jīng)肌肉接點處突觸前神經(jīng)元的凝血障礙和降解。在一些實施例中，組合解毒劑與滲透增強劑聯(lián)合。

本發(fā)明方法和藥物組合物中使用的治療活性劑可采用各種方法給藥。示例性給藥途徑包括直接針頭注射、噴射或其它推進注射、靜脈內(nèi)給藥，直接施用于被咬部位、眼睛暴露處和受影響組織(局部、經(jīng)皮)、吸入、鼻腔內(nèi)給藥及舌下、直腸、陰道、口服或眼內(nèi)給藥。配制此類劑型的方法是公知的，或是本領域技術人員顯而易見的；例如，參見《雷明頓藥物科學》17版，mackpub.co.,1985)。施用的組合物將包含藥物學有效劑量的選擇化合物，用于生物系統(tǒng)治療，包括本發(fā)明的患者或受試者。

通常，識別毒液蟄入受試者/患者后，盡快施用金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和/或絲氨酸蛋白酶抑制劑及任選輔助治療劑。如果受試者/患者顯示出神經(jīng)毒素中毒癥狀，立即施用上述一種或多種活性成分。在一些方法中，當有理由認為受試者遭遇毒蟲咬傷或螫傷(例如，受試者出現(xiàn)疼痛、呼吸短促、出血、青腫等癥狀)，或咬患者的蛇被辨認為是分泌神經(jīng)毒素的蛇時，啟動治療。根據(jù)患者的反應，可以采用多種施用，或在接受專業(yè)醫(yī)學治療之前(例如，出現(xiàn)或發(fā)展麻痹癥狀)之前，防止癥狀出現(xiàn)。例如，pla2抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑和/或絲氨酸蛋白酶抑制劑的1％-10％溶液，優(yōu)選pla2抑制劑和金屬蛋白酶抑制劑(及任選輔助治療(如乙酰膽堿脂酶抑制劑和machr拮抗劑))可按15分鐘至12小時或更長時間間隔施用?；钚猿煞值氖┯每赡鼙仨毭刻鞄状位虿捎瞄L期釋藥。

在一個實施例中，本發(fā)明的做法涉及使用包含spla2抑制劑作為活性成分和有效劑量增溶劑作為螯合劑的藥物組合物，例如，所述增溶劑優(yōu)選至少一種選自檸檬酸、乙二胺四乙酸(例如也具有金屬蛋白酶抑制特性的edta二鈉)、多磷酸及其鹽，更優(yōu)選檸檬酸鈉的化合物。多磷酸及其鹽的實例有《日本食品添加劑標準(6版)》中描述的多聚磷酸鉀和《日本食品添加劑標準(6版)》或《日本化妝品成分標準(2版)》中描述的多聚磷酸鈉。檸檬酸鈉可以是無水檸檬酸三鈉、二水檸檬酸三鈉及五水檸檬酸三鈉，但是，最方便和最優(yōu)選的是二水檸檬酸三鈉形式(molwt.294.10)。

增溶劑的用量隨增溶劑的種類及所含抑制劑化合物的濃度而變化，例如，可以是抑制劑化合物用量的大約1％至大約400％(w/w)，優(yōu)選1至200％(w/w)，更優(yōu)選1至100％(w/w)。對于使用檸檬酸鈉的藥物組合物來說，增溶劑的重量是抑制劑化合物用量的10％-60％(w/w)，最優(yōu)選是25％-50％(w/w)。

優(yōu)選藥物組合物還包含任何有效劑量的穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑是至少一種藥學上可接受的化合物，選自固體糖和糖-醇，更優(yōu)選至少一種選自甘露醇、木糖醇、山梨糖、葡萄糖、果糖、乳糖和麥芽糖的化合物。甘露醇是最優(yōu)選的穩(wěn)定劑成分。

穩(wěn)定劑的用量隨穩(wěn)定劑的種類和spla2和/或其它抑制劑的濃度而變化，可以是抑制劑化合物用量的40％至500％(w/w)，優(yōu)選50％至300％(w/w)，更優(yōu)選50至200％(w/w)，最優(yōu)選100％至200％(w/w)。

有時候，泊洛沙姆是非離子三嵌段共聚物，由中間聚氧乙烯(聚(環(huán)氧丙烷))的疏水鏈及兩邊的聚氧乙烯(聚(環(huán)氧乙烷))親水鏈組成。泊洛沙姆的商品名稱有synperonics、pluronics和kolliphor等。由于聚合物嵌段的長度可以定制，存在性質(zhì)上略有不同的許多不同泊洛沙姆。這些共聚物的通用名稱是“泊洛沙姆”，通常以字母“p”(代表泊)后緊跟三個數(shù)字命名：前兩位數(shù)字x100得到的是核心聚氧丙烯的近似分子量，最后一位數(shù)字x10是聚氧乙烯的百分含量(例如，p407＝聚氧丙烯分子量4000g/mol，聚氧乙烯含量70％的泊洛沙姆)。此外，它們可用于提高疏水性油類物質(zhì)的水中溶解度，或提高具有不同疏水性的兩種物質(zhì)的混溶性。因此，這些聚合物通常用于工業(yè)應用、化妝品和藥物。它們還已經(jīng)被評估用于各種藥物輸送應用，可用于輸送伐瑞拉迪類治療劑，提供與預防和治療毒液凝血和細胞毒性影響有關的某種治療效果(如泊洛沙姆188及其提純衍生物通常作為輸液)。泊洛沙姆可通過任何給藥途徑：口服、眼內(nèi)、局部、直腸給藥或靜脈內(nèi)給藥，提高小分子抗-蛇毒治療的多功能性(例如，伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪及其與mp和sp抑制劑、抗蛇毒血清本身的組合及它們藥學上可接受的組合)，并且本身也具有治療效果。

在不脫離本發(fā)明的目的和范圍的情況下，可以任選地將其它藥學上可接受的添加劑加入到用于實施本發(fā)明的制劑中。其中本發(fā)明的溶液配制用于注射，可在溶液中加入等滲劑、安慰劑或其它添加劑。

除活性成分、增溶劑和穩(wěn)定劑之外，優(yōu)選上述藥物組合物不含鹽。

ix.組合物

a.組合物

一種或多種組合物，包括至少一種選自由金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組的抑制劑化合物及任選一種輔助治療劑，所述組合物可以聯(lián)合施用，如上文所述，用于治療有毒節(jié)肢動物(如木蝎屬動物(木蝎)、芋螺和熱帶水母)螫傷后神經(jīng)毒素引發(fā)的呼吸衰竭或降低其可能性。在優(yōu)選的方面，上述組合物包括至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，它們可在不使用絲氨酸蛋白酶抑制劑的情況下使用。

在一些實施例中，組合物包括至少一種選自由金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組的抑制劑化合物，直接施用于被咬部位或損傷組織或它們附近，而另一種組合物包含至少一種選自由金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組的抑制劑通過另一種途徑施用，采用或不采用注射，甚至可以與抗蛇毒血清一起施用或在抗蛇毒血清之后施用，作為輔助治療或縮短常規(guī)或重癥特護住院的時間。在一些實施例中，一種或多種組合物包含至少一種選自由金屬蛋白酶抑制劑、pla2抑制劑和絲氨酸蛋白酶抑制劑組成的組的抑制劑，代替抗蛇毒血清用于非-致命或非-四肢威脅性傷害，包括但不限于隔離面神經(jīng)癱瘓或顱神經(jīng)麻痹。在優(yōu)選的方面，所述組合物包括至少一種pla2抑制劑，更優(yōu)選包括伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪。

i)凍干組合物

優(yōu)選前面部分描述的藥物組合物是凍干的。更優(yōu)選地，使用可用于實施本發(fā)明的化合物的崩解溫度特性，通過退火步驟制備凍干組合物。

例如，凍干組合物包含組合物中活性化合物用量的大約1至大約200％(w/w)或更高的增溶劑。增溶劑的比例可根據(jù)采用的活性化合物和使用的增溶劑而變化。當增溶劑是二鈉edta(或其酸或其它鹽)時，優(yōu)選其用量是活性化合物用量的大約1％至大約15％(w/w)。熟悉本領域的技術人員可以容易確定穩(wěn)定劑的種類和比例。甘露醇是本發(fā)明凍干組合物最常用的穩(wěn)定劑成分。

凍干藥物制劑可以在藥學上可接受的載體(如無菌水)中溶解，無菌水任選含鹽水的無菌水和/或含糖無菌水。例如，用于靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)或皮下注射時，本發(fā)明的組合物可溶于4％葡萄糖/0.5％檸檬酸鈉水溶液中，濃度達到2mg/ml。

用于實現(xiàn)本發(fā)明的凍干組合物的制備方法：

用于實現(xiàn)本發(fā)明的凍干組合物指的是采用以下方法制備的制劑：將包含spla2抑制劑化合物(如伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪)的溶液冷凍干燥，任選進行加熱處理過程，并在高真空條件下干燥，使水升華。這種凍干制劑包括如上文所述注射用凍干制劑。凍干制劑可采用傳統(tǒng)方法制備，包括托盤凍干、噴霧凍干和小瓶凍干方法。小瓶凍干對于制備本發(fā)明的多劑量單位有利。

為了采用本發(fā)明的方法制備活性化合物溶液，將活性化合物、增溶劑和溶劑混合，并攪拌，直到混合物變得透明。溶劑優(yōu)選是如《日本藥典》所述含水溶劑，如水、純凈水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖注射液，更優(yōu)選無鹽含水溶劑，如水、純凈水、注射用水或葡萄糖注射液。

或者，形成本發(fā)明組合物溶液的合適溶劑是任何注射液，如《美國藥典(1995,isbn0195-7996)》中進一步給出的那些溶液，例如，“注射用無菌水”、“葡萄糖和氯化鈉注射液”、“葡萄糖注射液”、“甘露醇注射液”或“甘露醇氯化鈉注射液”。這些都是本領域公知的。

為了獲得活性化合物的凍干制劑，例如，通過本發(fā)明的方法，首先，在凍干之前配制處理溶液。凍干之前的處理溶液是通過將活性化合物、增溶劑和溶劑(優(yōu)選伐瑞拉迪、增溶劑、穩(wěn)定劑和溶劑)混合并攪拌，直到混合物變得透明而制備的。對于向溶劑中加入各組分的順序，最好是先溶解增溶劑和穩(wěn)定劑，然后溶解活性化合物。所述溶劑優(yōu)選是含水溶劑，如前面所述的溶劑及《日本藥典》中所述的溶劑，更優(yōu)選是無鹽含水溶劑，如水、純凈水、注射用水或葡萄糖注射液?；钚曰衔飪龈芍暗奶幚砣芤?，例如，可能包含，例如，濃度大約0.5％至2％(w/w)的活性化合物。如果需要的話，凍干前的處理溶液可以進行過濾。例如，若為注射制劑，過濾包括凍干前處理溶液的滅菌過濾和/或超過濾，在凍干前清除處理溶液中的微生物或其它污染物質(zhì)。

如果需要的話，凍干前的處理溶液可以進行分配過程。分配過程包括，例如，在小瓶凍干的情況下，在凍干前將適當體積的處理溶液分配到小瓶中的過程，考慮spla2抑制劑化合物的濃度，從而小瓶產(chǎn)品包含所需數(shù)量的spla2抑制劑化合物。

典型凍干過程如下：優(yōu)選采用順序加熱和冷卻過程制備凍干組合物。制備凍干組合物的過程包括以下順序步驟：

(a)將包含spla2抑制劑(如伐瑞拉迪)、增溶劑和穩(wěn)定劑的凍干組合物的各組分在含水溶劑中溶解；

(b)將步驟(a)中的處理溶液冷卻到-33℃以下；

(c)將步驟(b)中的產(chǎn)品加熱到-33℃以上；

(d)將步驟(c)中的處理溶液冷卻到-33℃以下；

(e)在負壓下將步驟(d)中的產(chǎn)品加熱到-13℃以上，保持足夠長的時間，脫除含水溶劑中的水，得到固體凍干產(chǎn)品。

優(yōu)選步驟(a)將下述組分在含水溶劑中溶解：spla2抑制劑和/或其它活性成分；增溶劑，選自檸檬酸、乙二胺四乙酸、多磷酸及它們的鹽，增溶劑的用量是活性劑相當酸用量的1至100％(w/w)；穩(wěn)定劑，選自甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、果糖、乳糖和麥芽糖，其用量是活性化合物相當用量的大約50至200％(w/w)。此外，步驟(b)、(c)、(d)和(e)中的每個步驟優(yōu)選進行至少半小時，以及步驟(e)在低于133pa(毫托)負壓條件下進行。凍干過程的優(yōu)選參數(shù)是其中，例如，化合物(vb)通過冷卻到-35至-45℃凝固。這種冷卻步驟優(yōu)選進行2至4小時。下文將此過程稱為“一級冷凍過程”。如果需要的話，然后，將一級冷凍過程得到的冷凍溶液加熱到-5℃至-25℃，優(yōu)選-10℃至～20℃。這一加熱步驟進行3小時以上，優(yōu)選5至10小時。該過程被稱為“加熱處理過程”。

將加熱處理過程得到的組合物重新冷凍，優(yōu)選冷凍到大約-35℃至-45℃。該冷卻步驟優(yōu)選進行2至4小時以上。該過程被稱為“重新冷凍過程”。

將通過一級冷凍過程、加熱處理過程和重新冷凍過程得到的組合物在高真空度條件下干燥，按照本領域技術人員熟悉的方法將水升華。從而得到本發(fā)明的凍干制劑，如果需要的話，可以進行溫度和真空度不同的兩步干燥，以完全除去水。。下文將此過程稱為“干燥過程”。如果采用兩步干燥，這些過程稱為“一級干燥”過程和“二級干燥”過程。凍干過程脫除原來存在的大多數(shù)水，但是，最終產(chǎn)品凍干組合物可能包含一些游離水。一般說來，水的含量可以是0.5％至5.0％重量百分數(shù)。更典型的情況是，水的含量是0.8％至2.0％。一旦制備好，凍干粉可用于配制鹽水溶液，并配制用于針頭注射或或無針推進(如噴霧注射器)注射。

吸入療法也可以單獨使用或作為其它給藥途徑的輔助手段。采用吸入療法時，減輕毒液蟄入臨床癥狀必須的劑量很容易確定和使用。

根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物通常包括傳統(tǒng)藥物載體或賦形劑，可能另外還包括其它藥物制劑、載體、佐劑、添加劑等。優(yōu)選所述組合物包含大約0.1％至大約95％、大約0.25％至大約85％、大約0.5％至大約75％、大約0.1％至大約10％的本發(fā)明化合物，其它組分基本上由合適的藥物賦形劑組成。

在一些實施例中，本發(fā)明的藥物制劑以液體、固體、半固體或凍干粉的形式(如配制為溶液和注射液)、即用或持續(xù)釋放制劑、片劑、膠囊、粉劑、栓劑、霜劑、軟膏、洗劑、噴霧劑、貼劑等給藥，優(yōu)選適合劑量精確簡單給藥的單位劑型。在治療的即時階段，為了使血清中活性成分的濃度快速增加，優(yōu)選采用腸胃外劑型組合物(優(yōu)選立即釋放形式的肌肉內(nèi)注射)。然后，為了在血清中維持有效濃度的活性成分，組合物可通過替代給藥途徑施用，從而維持劑量。

在一些實施例中，本發(fā)明的藥物制劑采用水包油乳劑、微乳液或納米乳液，油包水乳液、微乳液或納米乳液，硅油包水乳液、微乳液或納米乳液，液體，凝膠，油、膏，霜，洗劑，軟膏，懸浮液，泡沫，噴霧或血清載體，懸浮液，含脂質(zhì)體制劑，傳遞體，彈性(可變形)囊泡，醇質(zhì)體，侵入體(invasome)或含滲透增強劑的囊泡，搽劑，或制劑可包含貼劑、繃帶或封閉敷料組分，或其它通過皮膚或粘膜表面吸收的被動或主動系統(tǒng)。

通過皮膚或粘膜表面吸收的被動或主動系統(tǒng)可包括“皮膚滲透增強劑”，如烷基(n,n-雙取代氨基鏈烷酸酯)酯，如2-(n,n-二甲氨基)丙酸十二烷基酯(ddaip)，水中可分散酸性聚合物，如聚丙烯酸聚合物，卡波姆(如或carbopol(俄亥俄州亞克朗市(b.f.goodrichco.))，聚丙烯酸共聚物(如(b.f.goodrichco.)或(美國弗吉尼亞州里士滿(a.h.robbins))；多糖膠(如瓊膠、褐藻膠、卡拉膠、印度樹膠、卡拉亞膠、卡打亞樹膠、中性樹膠、黃原膠和半乳甘露聚糖膠(如瓜爾豆膠、角豆膠和槐豆膠))，纖維素衍生物(如乙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素)，二甲亞砜(dmso)和二甲基乙酰胺(dma)，2-吡咯烷酮，n，n-二乙基-間-甲苯酰胺(deet)，1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮(nelsonresearch)，n,n-二甲基甲酰胺，n-甲基-2-吡咯烷酮，巰基乙酸鈣，二氧戊環(huán)，環(huán)酮，n,n-2-(雙取代氨基)烷羧酸烷基酯，包括(n,n-二甲氨基)乙酸十四烷基酯，(n.n-二甲氨基)乙酸十二烷基酯，(n,n-二甲氨基)乙酸癸酯，(n,n-二甲氨基)乙酸辛酯和(n,n-二乙氨基)乙酸十二烷基酯。一組優(yōu)選的皮膚滲透增強劑包括肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、二甲亞砜、癸基甲基亞砜、中鏈脂肪酸的二甲基丙氨酰胺、2-(n,n-二甲氨基)丙酸十二烷基酯及其鹽(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸及硝酸加成鹽)及無機鹽(如乙酸、苯甲酸、水楊酸、乙醇酸、琥珀酸、煙堿酸、酒石酸、馬來酸、蘋果酸、帕莫酸、甲基磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、苦味酸和乳酸加成鹽)。

在一些實施例中，本發(fā)明的藥物組合物通過貼劑施用，所述貼劑包括含膠粘劑基質(zhì)的活性組分，膠粘劑基質(zhì)位于可滲透背層和可撕除薄膜層之間。參見美國專利申請文件nos.20140322284和20140335150。

腸胃外施用組合物

腸胃外(如靜脈內(nèi)、肌肉間、皮下或鞘內(nèi))給藥的注射組合物通常將包含溶于合適的標準的靜脈內(nèi)溶液(如無菌生理鹽水溶液)中的化合物。所述組合物還可以配制為水乳液中的懸浮液。組合物可以作為載入到注射器或注射裝置中立即施用的最終組合物供應，或者，可作為凍干粉或其它粉末形式供應，在毒蟲咬傷時臨時與溶液(如鹽水或其它溶液)混合，并施用。

注射制劑可皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)或輸液施用。注射液的賦形劑包括但不限于緩沖液(如檸檬酸鹽/檸檬酸)、酸化劑(如鹽酸)、堿化劑(如氫氧化鈉)、防腐劑(如苯酚)、共溶劑(如聚乙二醇400)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(如甘露醇)、穩(wěn)定劑(如表面活性劑、抗氧劑、氨基酸)?；钚猿煞挚梢圆捎脝蝿┝炕蚨鄤┝孔⑸湫问?，如筆的形式施用。藥物組合物可與施用裝置一起供應，例如，與注射器、注射筆或自動注射器一起供應。這些裝置可與藥物組合物分開供應，或預裝藥物組合物。注射裝置的實例包括肌肉內(nèi)裝置，如自動注射器-deypharma、自動注射器-meridianmedicaltechnologiescorp、自動注射器–kaleo,lnc，.皮下裝置，如rasuvo-medac(皮下)、otrexup-antarespharmainc.,imitrexstatdose和statdose-glaxosmithkline,mini-ject^tm-valeritas,inc.,-bectondickinson，及噴霧注射器，如vitajet3–bioject和penjet一penjet公司等。

液體組合物可通過將活性組分(大約0.5％至大約20％重量或更多)及任選藥物佐劑溶解于或分散于載體中，例如，鹽水、含水葡萄糖、甘油或乙醇中，形成溶液或懸浮液而制備。作為口服液體制劑使用時，組合物可以配制為溶液、懸浮液、乳液或糖漿；采用液體形式供應或適合在水中或生理鹽水中水化的干燥形式供應。

ii)口服劑型

用于口服時，所述賦形劑包括藥物級甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。如果需要的話，所述組合物還可以包含少量無-毒輔助物質(zhì)，如潤濕劑、乳化劑或緩沖溶液等。

當組合物以用于口服給藥的固體制劑形式使用時，制劑可以是片劑、粒劑、粉末、膠囊等。以片劑形式，組合物通常加入添加劑配制，如賦形劑(如糖類或纖維素)、粘結(jié)劑(如淀粉糊或甲基纖維素)、填料、崩解劑及藥劑生產(chǎn)中通常使用的其它添加劑及配制緩釋制劑使用的添加劑。

粘膜吸收增強劑

注射、霧化和鼻內(nèi)制劑可以包含粘膜吸收增強劑，如dmso、檸檬酸、檸檬酸鈉、丙二醇、甘油、l-抗壞血酸、焦亞硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、苯扎氯銨、氫氧化鈉、二甲基甲酰胺、乙醇、丙二醇、1,3-丁二醇、2-吡咯烷酮及它們的混合物。其它粘膜吸收增強劑是本領域公知的，包括美國專利申請文件nos.20070026079和20060003989及constantino等2008,bmcneuroscience9(suppl3):s6；sghirlanzoni等，"efficacyofintranasaladministrationofneostigmineinmyasthenicpatients."jneurol.239:165-9(1992)中描述的那些。眼用制劑是本領域公知的，可能包含鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水，任選包含防腐劑。

iii)鼻腔給藥和裝置

雖然優(yōu)選口服和/或注射制劑，但是，本發(fā)明有用的替代制劑包括鼻用滴劑、鼻用噴霧劑、鼻用粉末、機械或電子產(chǎn)生氣霧劑、鼻用凝膠或任何其它鼻內(nèi)劑型。有用的鼻內(nèi)給藥裝置包括但不限于吸入器和噴霧器。還可以使用mdi's、混合mdis/鼻用噴霧器或滴管及粘膜霧化裝置及電子煙用裝置。通過鼻腔粘膜的霧化吸收可以產(chǎn)生粒徑大約2-10微米的活性成分液滴。參見mygind等，rhinology1978；16(2):79-88?？梢圆捎胊ccuspraynasalatomizer^tm、mucosalatomizationdevice^tm、optinose^tm和vianasaelectronicatomizer^tm。在其它實施例中，采用滴管或計量鼻用噴霧器。鼻內(nèi)給藥還可以采用棉塞、海綿、吹藥器或泵。在雷明頓《藥物科學與實踐(19版)》中也提供了噴霧吸入藥物用加壓裝置的信息，其通過引用并入本文，參見第95章“氣霧劑”及第41章“藥物吸收、作用和配置”?？梢圆捎冒从嬃縿┝拷o藥的裝置。在一些實施例中，這些裝置按藥物的單位劑型給藥。在一些實施例中，這些裝置是一次性的。在一些實施例中，這些裝置是可以重新裝藥的。任選給藥系統(tǒng)可以是能夠提供單次計量劑量或1-5次計量劑量的一次性裝置。

抑制劑和輔助治療劑的鼻內(nèi)給藥劑量可以是每劑100微克至10克，通常是0.1mg至100mg，經(jīng)常是大約1至50mg每劑，經(jīng)常是1.5至12mg每劑，抑制劑和輔助治療劑可以同時施用(例如，同時從單臺給藥裝置的兩個室同時給藥)或作為混合物施用。通過醫(yī)學和藥物學文獻指導，優(yōu)化劑量和給藥間隔屬于本領域技術人員的能力范疇。

利用標準氧氣管霧化室和噴霧吸入面罩，一種或多種活性組分可以以噴霧形式鼻內(nèi)施用。它們還可以連續(xù)給藥或非連續(xù)給藥。在一些情況下，活性劑在1-10分鐘的短時間內(nèi)間歇給藥或連續(xù)給藥1至30分鐘，提供或不提供補充氧、類固醇和/或腎上腺素。

在一個實施例中，本發(fā)明提供一種鼻用噴霧吸入器，包含氣溶膠噴霧制劑，所述制劑包括選自金屬蛋白酶抑制劑、磷脂酶a2(pla2)抑制劑及可能的絲氨酸蛋白酶抑制劑和藥物學上可接受的分散劑的一種或多種組合物，其中所述裝置經(jīng)計量，通過形成包含一劑量的對治療毒液蟄入有效的一種或多種組合物的噴霧以分散一定量的噴霧制劑。該吸入器可包括，例如，盛放有效劑量的一種或多種組合物的容器，分配組件(如本體和噴嘴)，及任選氣源，如輸送泵(可以是注射器)。參見美國專利申請文件no.20140364837。

共包裝

一方面，提供一種治療毒液蟄入的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包括pla2抑制劑以及mp抑制劑、sp抑制劑和抗蛇毒血清中的一種或多種。在試劑盒中，多種制劑可以盛放在獨立但包裝在一起的容器內(nèi)。

實施例

在優(yōu)選的方面，本發(fā)明采用有效劑量的pla2抑制劑(優(yōu)選1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特別是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們的混合物)作為單一制劑或制劑治療遭受毒液蟄入患者。我們意外地發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪都顯示有效的pla2抑制性，有時候還表現(xiàn)出金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶抑制性，可單獨使用，或聯(lián)合使用以期實現(xiàn)良好的毒液蟄入治療效果。在替代實施例中，本發(fā)明另外還可以包括有效劑量的一種或多種其它制劑，包括一種或多種其它pla2抑制劑(正如本發(fā)明其它地方所述，使用時，通常是卡莫司特、加貝酯)、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑(例如，優(yōu)選新斯的明或吡啶斯的明和/或阿托品或甘羅溴銨)、一種或多種金屬蛋白酶抑制劑(如普啉司他、馬馬司他、伏立諾他或巴馬司他)、一種或多種絲氨酸蛋白酶抑制劑(如萘莫司他、卡莫司他或加貝酯)、至少一種擴散因子抑制劑和至少一種nmda受體拮抗劑；此外，可包括有效劑量的利多卡因和/或布比卡因，以提高組合物施用區(qū)域的血液流動，同時減輕痛苦，增加制劑活性部位的生物分配。在某些優(yōu)選實施例中，小分子抑制劑，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪與抗蛇毒血清聯(lián)合使用，對毒蟲咬傷具有令人吃驚的療效。

本發(fā)明提供治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒，它們使用至少一種活性成分，在某些情況下，至少兩種活性成分，在其它一些情況下，不超過兩種活性成分，所述活性成分選自由選擇性分泌pla2抑制劑(spla2或pla2抑制劑，它們也可以作為有效的金屬蛋白酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑和擴散因子抑制劑組成的組，用于治療遭受毒液蟄入的患者。初次給藥可以是在毒液蟄入時，通常是在毒液蟄入(如被蛇或無脊椎動物咬傷)后幾小時以內(nèi)(1分鐘至12小時)至不到大約1小時，有時候是不超過大約1至大約20分鐘，有時候是大約1至大約10分鐘。在其它實施例中，特別是一種或多種上述化合物(優(yōu)選小分子)與抗蛇毒血清一起使用時，這些組合物可以在毒液蟄入幾小時后，接受抗蛇毒血清治療之前或之后，但優(yōu)選之前，作為醫(yī)院或其它患者護理設施蛇咬傷的一線治療方法。

在一些實施例中，或此外，可以采用pla2ls的順序給藥。在優(yōu)選的方面，本發(fā)明采用有效劑量的pla2抑制劑(優(yōu)選1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特別是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們的混合物)作為治療遭受毒液蟄入的患者的單一制劑或制劑。

1.我們意外地發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪，特別值得注意的是甲基伐瑞拉迪表現(xiàn)出有效的蛇毒pla2抑制性，但對蜂毒并不具有高度有效的pla2抑制性，有些情況下還表現(xiàn)出有效的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶抑制性，因此，可單獨使用，或聯(lián)合使用以期實現(xiàn)良好的治療毒液蟄入的效果。在替代實施例中，本發(fā)明另外還可以包括有效劑量的一種或多種其它制劑，包括一種或多種其它pla2抑制劑(正如本發(fā)明其它地方所述，通常是花生四烯酸、甲基花生四烯酸)、可降低血清pla2活性水平的sp抑制劑(卡莫司特或加貝酯，使用時)、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑(例如，優(yōu)選新斯的明、騰喜龍或吡啶斯的明和/或阿托品或甘羅溴銨)、一種或多種金屬蛋白酶抑制劑(如馬馬司他、普啉司他、坦諾司他、伏立諾他、巴馬司他、伊洛馬司他和抗生素，如強力霉素、頭孢克肟和其它頭孢菌素)、一種或多種絲氨酸蛋白酶抑制劑(如萘莫司他、加貝酯和卡莫司他或卡莫司特，其中萘莫司他對某些毒液還具有金屬蛋白酶抑制性)、至少一種擴散因子抑制劑和至少一種nmda受體拮抗劑，此外，以及包括有效劑量的利多卡因和/或布比卡因，用于提高組合物施用區(qū)域的血液流動，增加制劑活性部位的生物分配。令人吃驚的是，我們發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪單獨使用或與抗蛇毒血清聯(lián)合使用時，其蛇毒的ic50比以前報道的任何蛇毒或人spla2同種型都要低–當與抗蛇毒血清聯(lián)合使用時，其ic50低至0.05nm，而據(jù)報道，伐瑞拉迪、花生四烯酸和相關化合物的ic50處于較低范圍，通常是3至9nm之間(dennis,edwarda.等."phospholipasea2enzymes:physicalstructure,biologicalfunction,diseaseimplication,chemicalinhibition,andtherapeuticintervention."chemicalreviews111.10(2011):6130-6185)。

在一個優(yōu)選的實施例中，至少一種制劑選自1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特別是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任選卡莫司他(n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯或卡莫司特)和/或加貝酯(乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)；優(yōu)選至少伐瑞拉迪，所述制劑與乙酰膽堿脂酶抑制劑(achl)(如新斯的明、騰喜龍或吡啶斯的明，它們優(yōu)選與阿托品或甘羅溴銨聯(lián)合使用)聯(lián)合施用，提供一種特別有效的通用抗麻痹藥，其顯著的抗-血毒性活性是由伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪、卡莫司他和/或加貝酯賦予的。在一些實施例中，施用的組合物包含有效劑量的至少伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪，甲基伐瑞拉迪代謝為伐瑞拉迪，作為哺乳動物中的前體藥物。

在另一個實施例中，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任選與一種或多種其它pla2抑制劑組合，但優(yōu)選至少伐瑞拉迪，與至少一種金屬蛋白酶抑制劑(如普啉司他、馬馬司他或巴馬司他，優(yōu)選普啉司他)和/或至少一種乙酰膽堿脂酶抑制劑(achel)(如新斯的明和/或阿托品)聯(lián)合施用。在其它一些優(yōu)選實施例中，一種或多種金屬蛋白酶抑制劑及一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑與伐瑞拉迪與/或甲基伐瑞拉迪一起使用，降低遭受毒液蟄入的患者因出血、凝血或麻痹導致死亡或永久性虛弱的可能性。

值得指出的是，本發(fā)明的治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒消除了治療遭受毒液蟄入的受試者對抗蛇毒血清的需求，至少在初始階段(例如，從咬傷后立即到從咬傷后不超過大約24小時或更長時間)，使遭受毒液蟄入的受試者可以前往醫(yī)院或其它患者護理設施，接受進一步診斷和/或接受抗蛇毒血清或抗蛇毒血清-小分子組合(通常是伐瑞拉迪/甲基伐瑞拉迪)?？股叨狙搴涂股叨狙逍》肿咏M合可與mmp抑制劑，如強力霉素、頭孢克肟或普啉司他聯(lián)合使用。令人十分意外的是，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪單獨使用對抑制多種有毒動物(包括蛇和其它爬蟲動物(如蜥蜴)、兩棲動物(有毒蛙)、蝎子、蜘蛛、昆蟲、刺胞動物(亦稱為“腔腸動物”，包括有毒水母和珊瑚)等)咬傷都具有抑制效果。令人十分意外的是，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪單獨使用及與某些金屬蛋白酶抑制劑聯(lián)合使用，可能證明對治療日本主要毒蛇的咬傷都有效。此外，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪與新斯的明或吡啶斯的明一起或不一起使用及任選阿托品或甘羅溴銨聯(lián)合施用將有效地治療美國每種珊瑚蛇咬傷，這是一種具有深遠治療意義的發(fā)現(xiàn)，因為它能夠立即治療威脅生命的癥狀，特別是受害者被毒液蟄入時可以自己開展治療。在其它實施例中，采用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪及任選另一種pla2抑制劑(例如，除花生四烯酸或甲基花生四烯酸外，直接或間接抑制劑–如加貝酯)，及普啉司他、卡莫司他、巴馬司他和馬馬司他中的一種或多種及乙酰膽堿脂酶抑制劑(如新斯的明與/或阿托品)，將提供一種特別有用的組合物，用于治療其中有毒動物通過出血/凝血和麻痹對患者產(chǎn)生影響的毒蟲咬傷患者。

令人十分意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪單獨使用抑制范圍廣泛的各種毒性成分的活性，表明它們中的任一種或兩種對pla2在許多酶類和非酶類毒液成分的活性方面及宿主-介導的反應方面都具有調(diào)節(jié)作用，如果不直接抑制非-pla2蛇毒酶的話，宿主-介導的反應會促進非酶類組織破壞毒素進入宿主細胞。在此之前，科學文獻中對這兩種制劑沒有這方面的描述。此外，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪具有消炎活性，減少血管滲透性和降低毒液擴散能力，而小分子治療劑可以擴散到毒液沉積點。這種讓人吃驚的有益效果組合(伐瑞拉迪及其前體藥物甲基伐瑞拉迪直接抑制毒液)，使它們單獨使用或與其它小分子治療劑和/或抗蛇毒血清聯(lián)合使用時，是蛇咬傷理想的多功能解毒劑候選方案。

值得注意的是，與抗蛇毒血清不同，本發(fā)明的組合物可以擴散或滲透通過毒液蟄入部位的神經(jīng)系統(tǒng)組織、血塊和/或死組織，從而在抗蛇毒血清效果降低或幾乎無效的地方提供有效治療。采用利多卡因和/或布比卡因?qū)λ鲋苿┯袔椭?，一旦施用，使所述制劑更快地到達活性部位，同時可能減輕咬傷部位的痛苦，消除任何腸胃外機制給藥的痛苦，及用于普通鎮(zhèn)痛。

本發(fā)明的治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒不僅可用于治療人類，而且可用于治療本發(fā)明其它地方描述的動物，如家畜、馬或?qū)櫸铩?/p>

本發(fā)明提供治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒，它們使用至少一種活性成分，在某些情況下，至少兩種活性成分，以及在其它一些情況下，不超過兩種活性成分，所述活性成分選自選擇性分泌pla2抑制劑(spla2或pla2抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑或與machr拮抗劑配對的nachr激動劑、nmda受體拮抗劑和擴散因子抑制劑，用于治療遭受毒液蟄入的患者，優(yōu)選在毒蟲，如蛇或無脊椎動物咬傷時，通常在毒液蟄入時并且在毒液蟄入后不超過大約1小時內(nèi)，不超過大約1至大約20分鐘，更經(jīng)常是大約1至大約10分鐘內(nèi)使用。在優(yōu)選的方面，本發(fā)明采用有效劑量的pla2抑制劑(優(yōu)選1h-吲哚-3-乙醛酰胺，特別是伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪或它們的混合物)作為單一制劑或制劑治療遭受毒液蟄入的患者。我們意外地發(fā)現(xiàn)，基伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪表現(xiàn)出有效的pla2抑制性，有時候還表現(xiàn)出有效的金屬蛋白酶與/或絲氨酸蛋白酶抑制性，并且可單獨使用或聯(lián)合使用，在治療毒液蟄入方面具有非常良好的效果。在替代實施例中，本發(fā)明另外還可以包括有效劑量的一種或多種其它制劑，包括一種或多種其它pla2抑制劑(正如本發(fā)明其它地方所述，通常是卡莫司特、加貝酯(使用時))、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑(例如，優(yōu)選新斯的明和/或阿托品)、一種或多種金屬蛋白酶抑制劑(如馬馬司他、萘莫司他或普啉司他)、一種或多種絲氨酸蛋白酶抑制劑(如萘莫司他)、至少一種擴散因子抑制劑和至少一種nmda受體拮抗劑，此外，包括有效劑量的利多卡因和/或布比卡因，提高組合物施用區(qū)域的血液流動，同時減輕痛苦，增加制劑活性部位的生物分配。在某些優(yōu)選實施例中，小分子抑制劑，如伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪與抗蛇毒血清聯(lián)合使用，對毒液蟄入具有令人吃驚的療效。

本發(fā)明提供治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒，它們使用至少一種活性成分，在某些情況下，至少兩種活性成分，在其它一些情況下，不超過兩種活性成分，所述活性成分選自選擇性分泌pla2抑制劑(pla2抑制劑也可以作為有效的金屬蛋白酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑、nmda受體拮抗劑、l-氨基酸氧化酶抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑和擴散因子抑制劑，用于治療遭受毒液蟄入的受試者，優(yōu)選在毒液蟄入，如蛇或無脊椎動物咬傷或螫傷時，通常在毒液蟄入后的幾小時內(nèi)至不超過大約1小時，不超過大約1至大約20分鐘，更經(jīng)常是大約1至大約10分鐘內(nèi)使用。在其它實施例中，特別是一種或多種上述化合物(優(yōu)選小分子)與抗蛇毒血清一起使用時，這些組合物可以在毒液蟄入幾小時后，例如，作為醫(yī)院或其它患者護理設施的毒蛇咬傷一線治療方法。

我們意外地發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪，以及特別值得注意的是甲基伐瑞拉迪表現(xiàn)出有效的蛇毒pla2抑制性，但對蜂毒并不具有高度有效的pla2抑制性，有時候還表現(xiàn)出有效的金屬蛋白酶和/或絲氨酸蛋白酶抑制性，因此，在某些情況下可單獨使用，或聯(lián)合使用以期實現(xiàn)良好的治療毒液蟄入的效果。在替代實施例中，本發(fā)明另外還可以包括有效劑量的一種或多種其它制劑，包括一種或多種其它pla2抑制劑(正如本發(fā)明其它地方所述，通常是卡莫司特或加貝酯，使用時)、一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑(例如，優(yōu)選新斯的明、騰喜龍或吡啶斯的明，與阿托品或甘羅溴銨一起使用)、一種或多種金屬蛋白酶抑制劑(如馬馬司他、普啉司他、坦諾司他、萘莫司他、巴馬司他和抗生素，如強力霉素、頭孢克肟和其它頭孢菌素)、一種或多種絲氨酸蛋白酶抑制劑(如萘莫司他(還對某些毒液具有金屬蛋白酶抑制性)、至少一種擴散因子抑制劑和至少一種nmda受體拮抗劑等，及包括有效劑量的利多卡因與/或布比卡因，提高組合物施用區(qū)域的血液流動，增加制劑活性部位的生物分配。令人意外的是，我們發(fā)現(xiàn)，伐瑞拉迪單獨使用或與抗蛇毒血清一起使用時，其蛇毒的ic50比以前報道的任何蛇毒spla2人同種型都要低–當與抗蛇毒血清一起使用時，其ic50低至0.05nm(與3-9nm相對比)。

在一個優(yōu)選的實施例中，至少一種制劑選自1h-吲哚-3-乙醛酰胺化合物，特別是伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，及任選sp抑制劑，如卡莫司他(n,n-二甲基氨基甲酰甲基,4-4-胍基苯甲酰氧基-苯乙酸酯或卡莫司特)和/或加貝酯(乙基-對[6-胍基己醇氧基]-苯甲酸甲磺酸酯)；優(yōu)選至少伐瑞拉迪，與乙酰膽堿脂酶抑制劑(achl)(如新斯的明、騰喜龍或吡啶斯的明，它們優(yōu)選與阿托品或甘羅溴銨聯(lián)合使用)聯(lián)合施用，提供一種特別有效的通用抗麻痹藥，其顯著的抗-血毒性活性是由伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪、卡莫司他和/或加貝酯賦予的。在某些實施例中，施用的組合物至少包含有效劑量的伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪，甲基伐瑞拉迪代謝為伐瑞拉迪，是哺乳動物中伐瑞拉迪的前體藥物。

在另一個實施例中，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪，任選與一種或多種其它pla2抑制劑組合，但優(yōu)選至少伐瑞拉迪，與至少一種金屬蛋白酶抑制劑(如普啉司他、馬馬司他或巴馬司他，優(yōu)選普啉司他)和/或至少一種乙酰膽堿脂酶抑制劑(achel)(如新斯的明和/或阿托品)聯(lián)合施用。在其它一些優(yōu)選實施例中，一種或多種金屬蛋白酶抑制劑及一種或多種乙酰膽堿脂酶抑制劑與伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪一起使用，降低毒蟲咬傷患者因出血、凝血或麻痹導致死亡或永久性虛弱的可能性。

值得指出的是，本發(fā)明的治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒消除了治療毒液蟄入的受試者對抗蛇毒血清的需求，至少在初始階段(例如，從咬傷后立即到不超過大約24小時或更長時間)，使毒液蟄入的受試者可以趕到醫(yī)院或其它患者護理設施，接受進一步診斷和/或接受抗蛇毒血清或抗蛇毒血清-小分子聯(lián)合治療(通常是伐瑞拉迪/甲基伐瑞拉迪)。抗毒血清和解毒劑小分子組合可與mp抑制劑，如強力霉素或馬馬司他聯(lián)合使用。令人十分意外的是，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪單獨使用對抑制多種有毒動物(包括蛇和其它爬蟲動物(如蜥蜴)、兩棲動物(有毒蛙)、蝎子、蜘蛛、昆蟲、刺胞動物(有毒水母)等)毒液蟄入都具有抑制效果。令人十分意外的是，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪單獨使用及與某些金屬蛋白酶抑制劑聯(lián)合使用，可能證明對治療日本主要毒蛇的咬傷都有效。此外，伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪與新斯的明或吡啶斯的明一起或不一起使用及任選阿托品或甘羅溴銨聯(lián)合施用將有效地治療美國每種珊瑚蛇咬傷，這是一種具有深遠治療意義的發(fā)現(xiàn)，因為它能夠立即治療威脅生命的癥狀，特別是受害者被咬時可以自己開展治療。在其它實施例中，采用伐瑞拉迪和/或甲基伐瑞拉迪及任選另一種pla2抑制劑(例如，卡莫司特與/或加貝酯等)，及普啉司他、卡莫司他、巴馬司他和馬馬司他中的一種或多種及乙酰膽堿脂酶抑制劑(如新斯的明與/或阿托品)，將提供一種特別有用的組合物，用于治療其中有毒動物通過出血/凝血和麻痹對患者產(chǎn)生影響的遭受毒液蟄入的受試者。

令人十分意外的是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪單獨使用抑制范圍廣泛的各種毒性成分的活性，表明它們中的任一種或兩種對pla2在許多酶類和非酶類毒液成分的活性方面及宿主-介導的反應方面都具有調(diào)節(jié)作用，如果不直接抑制非-pla2蛇毒酶的話，宿主-介導的反應會促進非酶類組織破壞毒素進入宿主細胞。在此之前，科學文獻中對這兩種制劑沒有這方面的描述。此外，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪具有消炎活性，減少血管滲透性和降低毒液擴散能力，而小分子治療劑可以擴散到毒液沉積點。這種讓人吃驚的有益效果組合(伐瑞拉迪及其前體藥物甲基伐瑞拉迪直接抑制毒液)，使它們單獨使用或與其它治療劑和/或抗蛇毒血清一起使用時，是蛇咬傷理想的多功能解毒劑候選方案。

值得注意的是，與抗蛇毒血清不同，本發(fā)明的組合物可以擴散或滲透通過毒液蟄入部位的神經(jīng)系統(tǒng)組織、血塊和/或死組織，從而在抗蛇毒血清效果降低或幾乎無效的地方提供有效治療。包含利多卡因和/或布比卡因?qū)λ鲋苿┯袔椭?，一旦施用，使所述制劑更快地到達活性部位，同時可能減輕咬傷部位的痛苦，消除任何腸胃外機制給藥的痛苦，及用于普通鎮(zhèn)痛。

本發(fā)明的治療方法、藥物組合物、系統(tǒng)和試劑盒不僅可用于治療人類，而且可用于治療本發(fā)明其它地方描述的動物，如家畜或?qū)櫸铩?/p>

在下述非限制性實例中進一步說明本發(fā)明。

實例1：體外實驗

概述：采用二庚酰磷脂酰膽堿的1,2-二硫代類似物，進行初步實驗評價spla2的活性，雖然未進行優(yōu)化，但仍然得到令人吃驚的穩(wěn)定結(jié)果，證明了本發(fā)明人更詳細地測試伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的想法。背景。磷脂酶a2(pla2)催化sn-2位磷脂的水解，得到游離脂肪酸和溶血磷脂。人們認為，通過pla從膜磷脂釋放花生四烯酸是控制細胞內(nèi)類花生酸產(chǎn)生的關鍵步驟。蜂毒pla2對照是100μg/ml蜂毒pla2溶液，在試劑盒中作為陽性對照(abcam試劑盒目錄編號ab133089)供應。mp的底物是dq明膠，按照enzchek明膠酶試驗制造商說明開展試驗。在初步實驗中，未對毒液mp活性進行優(yōu)化，但是，由獨立合同實驗室測定實驗期間的反應速率。采用nα-苯甲酰-l-精氨酸-7-酰胺-4-甲基香豆素鹽酸鹽進行sp試驗。這些試劑盒按照規(guī)定在-20℃儲存。除非特別規(guī)定，在我的實驗中，只使用從sigma或miamiserpentarium購買的未加工未分餾凍干毒液。板設置：除非特別規(guī)定，否則遵照制造商的指導(此處轉(zhuǎn)述)。數(shù)據(jù)分析：xcel，按照制造商的推薦。除底物和熒光團不同外，mp和sp試驗按照與pla2試驗相同的方式準備和平板接種。mp和sp試驗采用pbs作為緩沖溶液，并在495nm測定吸光度。mp的底物是dq明膠，并且按照enzchek明膠酶試驗制造商說明開展試驗，但試驗是在非常規(guī)的37℃進行，以估計人體溫度，pla2、mp活性和sp活性的初步實驗并未進行篩選優(yōu)化(例如，采用極高劑量的毒液–由于不知道毒液的質(zhì)量，所有情況都采用10mg/ml儲備液，試驗孔中的最終濃度是0.444mg/ml)。采用nα-苯甲酰-l-精氨酸-7-酰胺-4-甲基香豆素鹽酸鹽(sigma)進行sp試驗。合同實驗室技術的細節(jié)與本發(fā)明人的初步實驗在毒液和底物優(yōu)化、平板規(guī)格(384孔而非96孔)、體積和溫度及其它因素，包括不同操作人員(下文將對此進行描述)都有所不同。開展下述首次先行試驗，隨后由合同實驗室展開。

實例2：小分子篩選和劑量-響應實驗

小分子篩選和劑量-響應實驗在耶魯大學分子發(fā)現(xiàn)中心進行。采用的儀器包括tecanevo(2)、tecanaquarius、matrixplatemateplus(2)、,matrixplatemate2x2液體傳輸機器人及titertekandthermo多分液體分配器(7)、perkinelmerenvision(3)和tecaninfinitem1000(2)酶標儀，靈敏地測定96-孔和384孔板中的吸光度、熒光、熒光偏振和發(fā)光。geincellanalyzer2200成像系統(tǒng)獲取各板的多色熒光和透射光影像。篩選第一階段采用的先行采集由發(fā)明人選擇或從開展有關選定毒液的實驗時可以利用的已知化合物庫和天然產(chǎn)品庫中選擇，這些庫包括：ncc、genplus、pharmakon、生物活性脂類庫、蛋白酶抑制劑庫、采購藥品庫和fda批準藥品庫。microsourcediscoverysystems的genplus(thenindscustomcollection)包含960種化合物。這種已知生物活性化合物的獨特選擇允許同時對市場上數(shù)百種藥物和生化標準進行評價。pharmakon1600庫(microsource)包括全球使用或臨床試驗研究的已知藥物。fda-批準藥品的enzo640化合物庫收集了生物活性、安全性和生物利用性已知的每種代表性藥品。

每個試驗采用中心建立的方法，以類似的方式表征。試驗通常在384-孔微量滴定板中進行。作為標準程序，每個板中加入三個樣本群體；兩個對照群體(384孔板中每個對照占32孔)和1個試驗群體(320孔)將接受化合物。陽性對照(c+)孔將進行處理，以模擬活性小分子的結(jié)果。陰性對照(c-)孔接受dmso溶媒(其中施用化合物)。來自重復陽性對照孔和陰性對照孔的信號用于評價試驗性能，特別是其靈敏度和重現(xiàn)性及hts適合性。統(tǒng)計值、z'因子數(shù)字上代表兩個對照群體之間信號的分離度，及試驗將活性化合物與無活性化合物高概率區(qū)分的能力(j-hzhang,tdychung,kroldenburg,(1999),asimplestatisticalparameterforuseinevaluationandvalidationofhighthroughputscreeningassays,jbiomol.)screen,4,67-73。)。z'因子采用公式z'＝1-[3(σc++σc-)/|μc+-μc-|]，根據(jù)陽性對照和陰性對照的平均信號和每個平板的標準偏差計算。篩選單一化合物的穩(wěn)健試驗的z'-因子始終大于0.5。一般說來，擁有較高區(qū)分能力的hts試驗也具有大于5的較高信背比(陽性對照的平均信號除以陰性對照的平均信號)，以及陽性對照和陰性對照的變異系數(shù)(平均調(diào)整標準偏差)小于15％(ysui,zqu,(2007),alternativestatisticalparameterforhigh-throughputscreeningassayqualityassessment,jbiomolscreen,12,229-34)。

在每種情況中，對多個普通實驗參數(shù)進行經(jīng)驗評估，包括板的類型、試劑稀釋、等分協(xié)議、參考標準、光譜濾光片設置、檢測參數(shù)和二甲亞砜(dmso)靈敏度。在通用協(xié)議中，采用aquarius(tecan)或platemateplus(matrix)液體遞送機器人或multidrop(titertek或thermo)，按順序加入各試劑，在384-孔板中實現(xiàn)總孔體積28μl。采用aquarius或platemateplus上的384-頭帶襯點樣工具，加入化學庫中的化合物，最終濃度大約10μm/孔。信號在酶標儀或配備集成圖像分析算法或cellprofiler腳本的成像系統(tǒng)上量化。采用商業(yè)軟件和數(shù)據(jù)庫包actvitybase(idbs)分析初步篩選數(shù)據(jù)，根據(jù)試驗信號監(jiān)測試驗性能和確定閾值，辨別具有顯著活性的化合物，保證進一步表征。在藥物化學家評估后，將選中的化合物安排到任何孔數(shù)的板內(nèi)，進行確認、人工檢測、在哺乳動物細胞系內(nèi)試驗或開展劑量-響應試驗。正如所指示的那樣，對數(shù)據(jù)作圖，并擬合為模型，從而獲得ic50或ec50值。

實例3：spla2活性試驗

進行篩選毒液spla2、mp和sp的抑制劑。采用濃度10mg/ml的毒液儲備溶液，不進行典型的稀釋，分析spla2、mp和sp的各種抑制劑。試驗中毒液的最終濃度非常高，是0.444mg/ml。令人吃驚的是，盡管對照孔中底物消耗過多，幾種抑制劑都表現(xiàn)出顯著的抑制底物消耗能力。其中最值得注意的是伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪，即使在毒液濃度比優(yōu)化濃度超出10萬倍時，它們也顯示出效果(參見圖4同一試劑盒和方法的毒液濃度對比)。檢查針對毒液儲備溶液開展的三個試驗的數(shù)據(jù)，進一步出乎意料的觀察結(jié)果是，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪對幾種毒液在幾種情況下都顯示出mp和sp抑制性，表明它們是非常有價值的多功能解毒劑，是范圍廣泛的各種蛇和無脊椎動物毒液解毒劑的核心要素。

圖1是存在伐瑞拉迪(100μm)或甲基伐瑞拉迪(100μm)的情況下，蛇毒pla2活性的時間進程。盡管使用過量毒液(最終濃度0.444mg/ml)，伐瑞拉迪抑制所有試驗蛇毒的pla2活性，令人十分吃驚的是，在幾種情況下(最值得注意的是鋸鱗蝰)，它的前體藥物甲基伐瑞拉迪也是如此。箭頭指向伐瑞拉迪，向下的三角形表明前體藥物甲基伐瑞拉迪('met-varespladib')的情況，表明對蛇毒pla2具有明顯令人吃驚的抑制能力。

實例4mp活性試驗

圖2a-2b表明，當毒液(0.444mg/ml)與抑制劑結(jié)合時，抑制了金屬蛋白酶的活性。圖2a表明了毒液(0.444mg/ml)與抑制劑(100um)結(jié)合時，金屬蛋白酶活性的時間進程影響。mp抑制劑巴馬司他和馬馬司他對試驗毒液一致表現(xiàn)出顯著的抑制性。nac、deda和dba也表現(xiàn)出不同的mp抑制性水平。令人意外的是，伐瑞拉迪對幾種蛇毒，其中最顯著的是拉塞爾蝰蛇(russell'sviper)蛇毒，表現(xiàn)出mp活性抑制性。圖2b。該柱狀圖表明，隨著時間推進(x-軸)，100um的馬馬司他、巴馬司他和伐瑞拉迪顯示出可媲美的圓斑蝰毒液抑制性。

據(jù)發(fā)明人了解，伐瑞拉迪對蛇毒mp的抑制活性以前未見報道。這些發(fā)現(xiàn)表明了其mp直接抑制性、對這些關鍵蛇毒成分活性的pla2調(diào)節(jié)作用，或它們兩者。這表明單試劑或僅兩種或三種藥物組合可以成功地治療幾種重要致命蛇的咬傷，不需要抗蛇毒血清，這一想法在實例8中進行了試驗。

實例5sp活性試驗

圖3示出了同一系列的數(shù)據(jù)，其中采用實例1所述方法，采用高濃度毒液(最終濃度0.444mg/ml)試驗spla2、mp和sp活性。體外試驗中，與相同濃度(100μm)的馬馬司他和巴馬司他相比，即使在極高毒液濃度時，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪都對蛇毒絲氨酸蛋白酶表現(xiàn)出令人意外的抑制效果。

實例6：spla2活性試驗

為了確認早期實驗的結(jié)果，其中僅采用高濃度毒液溶液來測定spla2的作用，且底物消耗是在更低濃度條件下進行在更合適的優(yōu)化試驗條件下并遵照制造商的建議進行選擇pla2抑制劑，如伐瑞拉迪和戴拉普迪(darapladib)。該試驗與圖1、2a和3所述的區(qū)別是試驗在25℃進行?？梢钥吹剿鼈儗τ《取八拇笊摺保河《妊坨R蛇、印度環(huán)蛇(和金環(huán)蛇)以及鋸鱗蝰和圓斑蝰蛇毒pla2的抑制性。值得注意的是，伐瑞拉迪或戴拉普迪(darapladib)都未能抑制蜂毒spla2的活性。

圖4表明，伐瑞拉迪而非戴拉普迪(darapladib)(lp-pla2抑制劑)能夠體外抑制蛇毒pla2。令人吃驚的是，伐瑞拉迪或戴拉普迪(darapladib)都未能抑制蜂毒pla2。當伐瑞拉迪和戴拉普迪(darapladib)聯(lián)合使用時，這兩種制劑并未表現(xiàn)出明顯的協(xié)同效應(數(shù)據(jù)未示出)。數(shù)據(jù)針對毒液對照進行歸一化。如實施例1進行試驗，除了在藥物試驗之前，對毒液活性進行優(yōu)化，并且測試更低濃度的伐瑞拉迪，但得到了相同的結(jié)論：有效抑制了蛇毒pla2酶的活性。

圖5a-5r表明，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪體外抑制醫(yī)學上非常重要的幾種蛇毒的spla2活性(實例2的劑量-響應方法)。5a)眼鏡蛇5b)印度環(huán)蛇5c)圓斑蝰5d)鋸鱗蝰5e)太攀蛇和5f)金黃珊瑚蛇5g)。這些圖表明，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪在濃度達到1um時，是效果較差的蜂毒spla2抑制劑，在濃度到達100um時，僅僅是中等效果的抑制劑。5h)黑曼巴蛇5i)南棘蛇5j)極北蝰5k)a.白眉蝮5l)東部菱背響尾蛇5m)銅頭蝮蛇5n)大響尾蛇50)小盾響尾蛇5p)水蝮蛇5q)西部菱斑響尾蛇重復實驗5r)綠色響尾蛇(crotalusscutalatus)重復實驗。伐瑞拉迪(v)和甲基伐瑞拉迪(v-m)對世界各地代表性蛇毒pla2的作用寬度和高效力令人非常吃驚。

實例7：伐瑞拉迪對小鼠和大鼠中的金黃珊瑚蛇蛇毒具有保護作用和治療效果

本實例表明，施用伐瑞拉迪(4mg/kg，除非另外聲明)可以保護注射金黃珊瑚蛇毒毒液蟄入的小鼠(4mg/kg)。

小鼠皮下注射金黃珊瑚蛇蛇毒為ld50的大約4倍(通常估計是1.3mg/kgsc)(0.1mg金黃珊瑚蛇蛇毒/動物，近似劑量是～4mg/kg)。在注射蛇毒10-15分鐘之前，這些動物先通過皮下注射途徑接受總劑量0.1mg的伐瑞拉迪賦形劑(虛假治療)，伐瑞拉迪的計算濃度是4mg/kg。存活動物在實驗結(jié)束后吸入co2處死，觀察期從～12小時至30小時(存活指定為24小時)。令人吃驚的是，僅注射單劑量伐瑞拉迪，許多動物不僅僅延長了生存時間，而且都存活了下來。另外讓人吃驚的是對照動物基本上未出現(xiàn)出血性并發(fā)癥和嚴重溶血。事實上，驗尸結(jié)果表明，接受治療的動物(如6g)基本上未出現(xiàn)嚴重的溶血，幾乎沒有或沒有出現(xiàn)肺動脈出血。蛇毒引發(fā)的pla2上升被伐瑞拉迪抑制，與這些動物的臨床描述和嚴重溶血情況(或未出現(xiàn)嚴重溶血)對應。一般說來，我們發(fā)現(xiàn)，當這些動物接受治療有效劑量的伐瑞拉迪治療時，對這種治療都表現(xiàn)活躍和有響應。在施用高劑量蛇毒之前采用甲基伐瑞拉迪治療小鼠，可以完全免受蛇毒的影響，并表明通過口服制劑立即對咬傷進行現(xiàn)場治療，當病人接受治療時，在關鍵蛇毒成分擴散之前對其進行阻斷，是切實可行的。這些實驗(口服或者腸道外)的一個重要意義在于，適用于一種或多種醫(yī)學上重要蛇毒的單一制劑解毒劑可以減緩蛇毒中神經(jīng)毒性和血毒性成分的影響，拯救生命。由于有些小鼠在僅單次治療(缺少劑量-發(fā)現(xiàn)研究)后死亡，我們考慮，在某些治療方案中，pla2抑制劑(如伐瑞拉迪)可能需要施用不止一次和/或伐瑞拉迪治療之后可以采用其它制劑開展輔助治療。圖6a-h表明了伐瑞拉迪對注射不同濃度，通常是4-8mg/kg金黃珊瑚蛇蛇毒的小鼠或大鼠的治療效果，與接受安慰劑(賦形劑)治療的動物相比，通常采用伐瑞拉迪預治療或治療僅一次即可賦予它們巨大的生存優(yōu)勢。小鼠中：皮下施用4-8mg/kg伐瑞拉迪或口服甲基伐瑞拉迪，隨機選擇。在大鼠中，在皮下施用4或8mg/kg蛇毒后30秒或5分鐘，靜脈施用伐瑞拉迪或賦形劑。按照精確的間隔(基線、30分鐘、1小時和4小時)，從手術植入的頸靜脈導管采集血樣，分析spla2的活性。正是通過這種采樣，首次發(fā)現(xiàn)了伐瑞拉迪防止溶血的作用(6g)。伐瑞拉迪這種出乎意料的效果–防止溶血–表明，基于伐瑞拉迪的治療可以預防或減緩凝血障礙和組織損傷，并不遵從幾種機理。

圖6a表明了皮下注射4mg/kg金黃珊瑚蛇蛇毒的5只小鼠的命運(100％)。對照小鼠因麻痹性和出血性并發(fā)癥很快死亡。在蛇毒注射前幾分鐘接受伐瑞拉迪(4mg/kg)預治療的5只小鼠在8小時內(nèi)沒有一只死亡(0％)。僅一例出現(xiàn)出血癥狀，但其癥狀比對照小鼠少很多。存活小鼠死亡時(5只小鼠中的2只)未出現(xiàn)任何嚴重的凝血或出血證據(jù)。兩只小鼠存活，一只在30小時后僅出現(xiàn)輕微的上瞼下垂，這種癥狀在蛇毒給藥24至30小時后明顯改善?？ㄆ仗m-梅爾生存圖表明了接受伐瑞拉迪治療非常深遠的存活益處。6b小鼠隨意服用放在餅干中的甲基伐瑞拉迪或賦形劑，吃完餅干～5小時后，對其施用高劑量的金黃珊瑚蛇蛇毒(n＝2每組)。接受治療的小鼠均未出現(xiàn)任何毒液蟄入癥狀或體征，并且在整個過程都表現(xiàn)活躍，反應靈敏，施用蛇毒數(shù)分鐘后恢復活動。6c在施用前，將蛇毒和伐瑞拉迪(4mg/kg)或蛇毒和賦形劑混合，皮下注射。5小時時(300分鐘，向下指的箭頭)，存活動物再次接受1/2劑量伐瑞拉迪(2mg/kg)或賦形劑治療。24小時終點(1440分鐘)時，5/5只治療小鼠存活，4/5只對照小鼠最終死亡。6d采用同一協(xié)議的兩個實驗的結(jié)果。小鼠接受蛇毒和安慰劑/賦形劑(n＝7)，蛇毒施用后～30秒至1.5分鐘接受甲基伐瑞拉迪(n＝3)或伐瑞拉迪(n＝7)治療。這個實驗首次證明伐瑞拉迪可以按治療模式給藥，作為單一制劑治療毒液蟄入。6e-h的驗證性實驗和結(jié)果由合同實驗室在大鼠中進行，旨在加大對伐瑞拉迪在治療模式中的作用的了解，并察看靜脈內(nèi)施用的效果是否與皮下施用類似。6e和6f皮下施用金黃珊瑚蛇蛇毒(4mg/kg或8mg/kg)，然后在毒液蟄入后30秒或5分鐘施用賦形劑或伐瑞拉迪8mg/kg。12/12接受治療的動物在24小時后全都存活下來，其中10/12只描述為“歡快、活躍和有響應”，而6/6只對照動物在500分鐘內(nèi)都死亡。所有對照動物的血清樣品都顯示出嚴重的溶血，而接受治療的動物沒有或幾乎看不到溶血(6g–立刻、4小時時間-點；t＝5分鐘采用的樣品)。驗尸時，接受治療的動物沒有或很少出現(xiàn)肺動脈出血，而所有對照動物都出現(xiàn)嚴重的肺動脈出血。6h表明了伐瑞拉迪顯著的spla2活性抑制性，皮下注射高劑量珊瑚蛇蛇毒，8小時內(nèi)小鼠死亡率100％(毒液/賦形劑)，接受治療的動物100％存活(4mg/kg蛇毒n＝6；8mg/kg蛇毒n＝6)。在12只小鼠中，在施用蛇毒30秒或5分鐘后，靜脈內(nèi)注射伐瑞拉迪的小鼠都存活下來。

實例8(圖7)；伐瑞拉迪療法防止響尾蛇毒液中毒引發(fā)的死亡

如圖7所示，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪單獨腸胃外給藥或口服或與mp抑制劑(如普啉司他)，或sp抑制劑聯(lián)合腸胃外給藥或口服是毒蛇咬傷成功藥物療法的基礎。7a。聯(lián)合注射小盾響尾蛇蛇毒和單劑量伐瑞拉迪的小鼠，其存活時間比僅注射蛇毒的對照小鼠更長(對照僅注射蛇毒，皮下(sc)n＝4；蛇毒+伐瑞拉迪scn＝4)。7b.毒液蟄入之前先隨意喂食了甲基伐瑞拉迪+馬馬司他的小鼠，其存活時間比僅注射蛇毒的對照小鼠更長(僅蛇毒scn＝4；蛇毒+po伐瑞拉迪/馬馬司他n＝4)。7c.聯(lián)合注射蛇毒和單劑量伐瑞拉迪+馬馬司他/巴馬司他混合物的小鼠，其存活時間比對照小鼠更長(僅蛇毒sc，n＝3；蛇毒+伐瑞拉迪/mp抑制劑混合物n＝3)。7d.小鼠自由食用用甲基-伐瑞拉迪和普啉司他處理的餅干，3小時后，皮下注射西部菱斑響尾蛇蛇毒，直接觀察每只喂食指定餅干至少一次的小鼠(n＝4每組)，結(jié)果表明，甲基-伐瑞拉迪和普啉司他組合可以防止小鼠死亡。

實例9(圖8)：伐瑞拉迪防止小鼠因圓斑蝰蛇毒而死亡

圓斑蝰是印度的主要殺手，是印度“四大毒蛇”之一。圓斑蝰咬傷最常出現(xiàn)的后果是血液學和神經(jīng)學疾病，出現(xiàn)變化多端的出血和麻痹癥狀，導致神經(jīng)、腎臟和四肢威脅性疾病。這種情況下，伐瑞拉迪能夠阻止周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害、腎臟衰竭和大出血。在注射致命劑量圓斑蝰毒液60-90分鐘前，皮下施用4mg/kg伐瑞拉迪，對小鼠進行預治療，小鼠的存活時間比對照小鼠長，如圖8所示(n＝3每組)。所有小鼠注射部位均出現(xiàn)局部血腫，但是對照小鼠因麻痹而死亡。接受治療的小鼠在24小時時全部存活，但是，在30小時時變得虛弱，并死于可能與蛇毒效應直接或間接有關的不確定原因。

實例10(圖9)：伐瑞拉迪對小鼠體內(nèi)的極北蝰蛇毒具有保護作用和治療效果

如圖9所示，注射致死劑量極北蝰蛇毒的小鼠在蛇毒注射的同時或之后皮下注射伐瑞拉迪(除非另外說明，4或8mg/kg)進行治療，其存活時間更長或完全可以避免死亡。注射蛇毒后接受靜脈注射伐瑞拉迪治療的所有小鼠都存活了24小時。極北蝰是世界上分布最廣泛的蝰蛇，分布范圍遍布歐洲和歐亞大陸，且遠達北極圈。它具有血毒性和神經(jīng)毒性危險，尤其是對兒童、寵物和大型動物(如馬)。9a同時皮下注射蛇毒和伐瑞拉迪，小鼠的存活時間超過對照小鼠(蛇毒+賦形劑)，n＝7每組。9b在皮下注射(sc)伐瑞拉迪之前先注射致死劑量的蛇毒，小鼠的存活時間超過對照小鼠(n＝7每組)。僅注射伐瑞拉迪的小鼠未顯示任何中毒癥狀(n＝2)。9c在注射蛇毒后，尾靜脈皮下或靜脈注射伐瑞拉迪(8mg/kg)，具有顯著的存活益處，接受靜脈注射伐瑞拉迪的小鼠，24小時存活為5/5，而對照動物在7小時后存活情況為0/5。注射蛇毒后接受治療(皮下注射蛇毒后緊接著皮下注射伐瑞拉迪)的5只小鼠中4只小鼠的存活時間超過對照小鼠。

實例11：抗蛇毒血清和伐瑞拉迪組合

該實驗的目的是確定伐瑞拉迪和抗蛇毒血清(響尾蛇科(crotalidae)多價免疫fab(綿羊)抗蛇毒血清；btgpic.)如何相互作用，阻斷關鍵毒性成分pla2。采用實例2描述的方法，測定單獨使用、伐瑞拉迪單獨使用及伐瑞拉迪和聯(lián)合使用時的ic50％。無法預測這兩種組合物是否會彼此干擾或具有加成效果。令人吃驚的是，觀察到協(xié)同效應。

bliss獨立計算(采用cokol等.(2011)systematicexplorationofsynergisticdrugpairs.molecularsystembiology.7:544建立的回歸方法開展分析)。主要的量是第一公式中的“β”。β值小于1表明存在協(xié)同效應，而β值大于1表明存在拮抗效應。分析結(jié)果如下，“p-值”是β值的顯著性水平。β值(括號內(nèi))表明伐瑞拉迪和多價抗響尾蛇蛇毒血清亦即之間存在協(xié)同效應：銅頭蝮蛇(0.86)、西部菱斑響尾蛇(0.848)、東部菱背響尾蛇(0.855)和南棘蛇-一種澳大利亞眼鏡蛇(0.725)。在這四個實例中，每個實例的p-值都<0.0001。該實驗的ic50見下表1。

表1抗毒血清和spla2的小分子抑制劑(伐瑞拉迪)的協(xié)同活性

然后，所選mp抑制劑單獨使用、僅與組合使用及與伐瑞拉迪組合使用，開展上述實驗程序，結(jié)果見表2。表2表明了不同抑制劑和抗蛇毒血清聯(lián)合使用的效果。

在此實例中，得到了抑制50％蛇毒mp活性的濃度，然后，加入其它抑制劑，以確定是否能夠有效中和剩余的50％mp活性。給出了組合使用的數(shù)據(jù)。其中加入伐瑞拉迪(1μm)，這樣做是為了中和背景pla2活性。根據(jù)表1實驗測定的它們中和蛇毒mp的能力，選擇普啉司他、馬馬司他和巴馬司他。加入白眉蝮蛇蛇毒，查看采用并非用于特定蛇的抗蛇毒血清是否能夠因加入一種或多種小分子抑制劑而變得更有效。

表2不同抑制劑與抗蛇毒血清聯(lián)合的效果

說明不同抑制劑對蛇毒金屬蛋白酶的效果。白眉蝮并非抗毒血清指定治療的蛇，但是，在抗蛇毒血清中加入普啉司他或普啉司他+伐瑞拉迪的組合但不使用抗毒血清，表明了在后兩種新的方法(小分子+抗蛇毒血清或小分子，如普啉司他+伐瑞拉迪-分子)中，特異性多價抗蛇毒血清或副特異性抗蛇毒血清可以發(fā)揮效力。

按照上文實例2使用的方法，得到伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪(pla2抑制性)及普啉司他、馬馬司他、巴馬司他、伏立諾他、伊洛馬司他、加貝酯和萘莫司他對表3-8，圖15-20和圖10-14中各種蛇毒的ic50值。這些實驗的結(jié)果在表中及圖中列出。結(jié)果表明，在許多情況下，伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪抑制許多蛇毒的pla2的ic50值都出乎意料的低。普啉司他、馬馬司他和巴馬司他抑制金屬蛋白酶，其ic50值的情況同樣如此。如結(jié)果所示，伏立諾他、加貝酯和萘莫司他的效果在某種程度上略弱，ic50值通常是微摩爾范圍。人們以前并不知道普啉司他對蛇毒具有如此廣泛的抑制效果。

實例13有用的西部菱斑響尾蛇(代表新世界毒蛇)蛇毒mp抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)

按照實例2所述，進行高通量篩選(hts)，以確定可與伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪聯(lián)合使用的響尾蛇蛇毒mp抑制劑，用于治療西部菱斑響尾蛇咬傷和其它新世界毒蛇咬傷。結(jié)果以mp活性的減少百分數(shù)(％)表示。篩選的制劑包括fda批準藥品庫、生物活性脂質(zhì)庫和蛋白酶抑制劑庫(ycmd庫：genplus、fda批準藥品庫、ncc、pharmakon1600、生物活性脂質(zhì)庫和蛋白酶庫)。下述制劑抑制至少1％mp活性。出乎意料的是，加貝酸表現(xiàn)出mp抑制性。加貝酯是一種批準上市的藥物，對炎癥通路具有廣泛的效果，是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑。未預期sp抑制劑也將抑制鋅蛋白酶，如mp家族。cgs27023的抑制效果大于>95％。放線酰胺素的抑制效果是92％，可認為在急性情況時有用。伏立諾他非常顯著，具有42％抑制效果。阿斯巴甜具有6.31％抑制效果，其它人工增甜劑可用作部分抑制劑，同時改善伐瑞拉迪和甲基伐瑞拉迪的味道，后兩者具有輕微苦味，當伐瑞拉迪與碳酸氫鹽及10％葡萄糖混合時(個人觀察)，還有鹽味。

實例14鋸鱗蝰(代表老世界蛇毒)mp抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)

按照實例2所述，進行高通量篩選(hts)，以確定可與伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪聯(lián)合使用的鋸鱗蝰蛇毒mp抑制劑，用于治療鋸鱗蝰和其它舊世界毒蛇毒液蟄入。高通量篩選包括fda批準藥品庫、生物活性脂質(zhì)庫和蛋白酶抑制劑庫(ycmd庫：genplus、fda批準藥品庫、ncc、pharmakon1600、生物活性脂質(zhì)庫和蛋白酶庫)。具有67％抑制效果。頭孢克肟和其它頭孢菌素對鋸鱗蝰mp具有令人吃驚的強大效果，可用于防止毒液蟄入效應、感染和炎癥，特別是與伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪組合使用時及與下述一種或多種制劑組合使用時：具有28％的效果。去甲腎上腺素和其它治療帕金森疾病有用的交感神經(jīng)劑和多巴胺能制劑出乎意料地有用，它們獲得了fda批準，而且容易獲得，其中鋸鱗蝰是本地的。具有28％的效果。萘莫司他和fda批準的絲氨酸蛋白酶抑制劑對太攀蛇蛇毒絲氨酸蛋白酶具有出乎意料的活性，在結(jié)構(gòu)上與具有23％效果的加貝酯類似。阿斯巴甜的效果是6％，與西部菱斑響尾蛇類似，可包括在伐瑞拉迪類治療方法的口服配方中，用于改善味道(本發(fā)明人的觀察)?；诜ト鹄系闹委熍c布比卡因聯(lián)合注射使用時，實現(xiàn)>10％的效果，并可減輕注射疼痛和麻痹淋巴肌肉，減慢蛇毒的擴散。

實例15采用金黃珊瑚蛇蛇毒的眼鏡蛇pla2抑制劑的hts發(fā)現(xiàn)

按照實例1所述，進行高通量篩選(hts)，以確定可與伐瑞拉迪或甲基伐瑞拉迪聯(lián)合使用的金黃珊瑚蛇蛇毒pla2抑制劑，用于治療眼鏡蛇的毒液蟄入。(ycmd庫：genplus、fda批準藥品庫、ncc、pharmakon1600、生物活性脂質(zhì)庫和蛋白酶庫)。神經(jīng)酰胺(ceramine)具有43％效果(％抑制)。還發(fā)現(xiàn)其它制劑有用，以及蘇拉明和其它混合物及它們的組合物，與伐瑞拉迪、甲基伐瑞拉迪、b-維生素、抗生素、花生烯酸和下面提到的其它制劑組合，其中一些也具有有用的mp和sp抑制性。抗寄生蟲藥蘇拉明具有21％的效果，利多卡因11％，托品酰胺>15％及阿托品>20％效果，它們可以與伐瑞拉迪類治療策略聯(lián)合使用，經(jīng)腸胃外、口、鼻和眼睛給藥，特別是與新斯的明、卡巴拉汀和毒扁豆堿一起使用，對眼鏡蛇spla2具有15％至20％抑制效果，非常實用和有效，另外還可中和導致虛弱的突觸后蛇毒α毒素。

實例16：制劑實例–劑量和劑型

a.示例性注射液

本發(fā)明的示例性注射液包括下述(如美國專利申請文件no.20120232031所示的賦形劑)：

1.含水注射液，包括溶于含10％β-羥丙基環(huán)糊精(bhpc)的水中的pla2抑制劑；

2.含水注射液，包括pla2抑制劑(1.0g)、乙醇(0.5ml)、維生素c(0.5g)、氯丁醇(0.1ml)、透明質(zhì)酸鈉(10g)和氯化鈉(0.9％)補足至100ml；

3.含水注射液，包括pla2抑制劑(2.0g)、聚(乳酸)(pla)(1.0g)、檸檬酸鈉(1ml)、林格氏溶液補足至100ml；

4.含水注射液，包括pla2抑制劑(1.5g)、乳酸和羥基乙酸共聚物(plga)(1.5g)、芐醇適量至2％、維生素e1ml、玉米油適量至100ml；含水注射液，包括pla2抑制劑(2.5g)、乳酸和羥基乙酸共聚物(plga)(1.5g)、芐醇適量至2％、維生素e1ml、玉米油適量至100ml。

b.鼻腔噴霧吸入劑

示例性鼻腔噴霧吸入劑包含噴霧劑配方，包括：

(a)金屬蛋白酶抑制劑，如巴馬司他或絲氨酸蛋白酶抑制劑；

(b)磷脂酶a2(pla2)抑制劑，例如，選自埃菲普迪(effipladib)、lilly315920(伐瑞拉迪)、ly311727、bms181162、ym26567、variabilis、sb203347、重組paf-ah、達普拉締等，及包括至少一種磷脂的組合物，所述磷脂選自磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰絲氨酸(ps)、磷脂酰膽堿(pc)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酰甘油(pg)及它們的混合物，所述磷脂與至少一種選自羧甲基纖維素(cmpe、cmc-pe或cme)、透明質(zhì)酸(hype、hype和hyal-pe)、肝磷脂(heppe、heppe、heppe、hepa-pe)、硫酸軟骨素(csape、csape、csape)、聚明膠肽(海脈素)(hempe、hempe)、羥乙基淀粉(hespe、hespe)的化合物及它們的混合物連接(結(jié)合)。

(d)藥學上可接受的分散劑；

其中所述鼻腔噴霧吸入器經(jīng)計量，通過形成包含一劑量的金屬蛋白酶抑制劑或絲氨酸蛋白酶抑制劑和磷脂酶a2(pla2)抑制劑的噴霧，而分散一定量的氣霧劑，所述氣霧劑對治療毒液蟄入有效。

治療毒液蟄入有效的金屬蛋白酶抑制劑和磷脂酶a2(pla2)抑制劑的示例劑量范圍包括大約0.01、0.1、1、10、100和1000mg金屬蛋白酶抑制劑和磷脂酶a2(pla2)抑制劑，或大約分散、溶解或稀釋在藥學上可接受載體中的0.001、0.01、0.1、1、10、20、30、40、50、60、70、80、90至大約100g每種金屬蛋白酶抑制劑和pla2抑制劑，以得到抑制劑的濃度是大約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、230、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725至大約750μm或高達800、850、900、950或1000μm。

實例17：蛇咬傷的反應

受試者已知或懷疑被蛇咬傷，顯示出任何或幾乎沒有(如果有的話)，或在某些情況下，微弱的早期癥狀，形式是眼瞼滯后或其它延髓性麻痹、咬傷部位疼痛或出血，以及知道或不知道蛇有毒或無毒。同伴、醫(yī)生或患者護理人員經(jīng)鼻、經(jīng)口或注射、噴霧或這些給藥途徑組合，或直接采用包含抑制劑的膏藥，施用治療有效劑量的組合物，所述組合物包括至少一種pla2抑制劑，優(yōu)選伐瑞拉迪與/或甲基伐瑞拉迪，及任選，至少一種其它活性成分，所述活性成分選自金屬蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、乙酰膽堿脂酶抑制劑、nachr激動劑(如尼古丁或可鐵寧)(優(yōu)選注射給藥)、毒蕈堿型乙酰膽堿受體(machr)拮抗劑(如甘羅溴銨或阿托品，與選擇的乙酰膽堿脂酶抑制劑的比例適當)、nmda受體拮抗劑(如地佐環(huán)平(mk-801))、擴散因子抑制劑和任選利多卡因和/或布比卡因。然后，受試者顯示出臨床癥狀改善，形式是肌肉功能改善(通過受試者強度、運動性和呼吸容易程度方面的改善確定，或通過定量手段，如肌電圖方法和其它標準化強度測量方法確定)。如果患者的狀況惡化，則按照適當?shù)拈g隔施用其它劑量的前述治療劑，直到患者恢復或恢復更多機能。有利的情況是，與傳統(tǒng)方法相比，前述治療方案可由接受過很少或沒接受過醫(yī)學培訓的人員施用(例如，未接受過醫(yī)學培訓的患者和必須現(xiàn)場自己施用的患者)，包括毒液蟄入患者或受試者本人。

參考文獻

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