本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及可用于處理人和/或動物的益生菌和包含益生菌的組合物。
背景技術(shù)：
：初生動物以及尤其是(密集)養(yǎng)殖的初生動物易于被細菌和其它感染，例如病毒感染。這些感染可導致與體重減輕相關(guān)的腹瀉，在嚴重情況下甚至導致初生動物死亡。例如，幾年前，西班牙不同地理位置的豬農(nóng)場中已描述了初生小豬的腹瀉病例。認為所述腹瀉是這些動物的癥狀，然而，所述癥狀的誘發(fā)因素有時很難查找。在許多例如初生豬中的腹瀉情況下，可以分離到單獨的或者與clostridiumperfringens或clostridiumdifficile聯(lián)合的可能不利的/不期望的細菌菌株(例如escherichiacoli)，但腹瀉通常在出生后不久發(fā)現(xiàn)且常規(guī)治療和預防程序常常無效。在其它情況下，腹瀉由例如病毒感染(例如由輪狀病毒、冠狀病毒、諾如病毒、腺病毒和/或星狀病毒引起的感染)引起。不希望受限于任何特定理論，認為菌態(tài)不平衡(也被稱為菌群失調(diào))可以是誘發(fā)因素。菌態(tài)不平衡指的是身體上或身體內(nèi)微生物失衡的狀態(tài)。在養(yǎng)殖動物(尤其是豬)中，菌態(tài)不平衡可由在母豬喂養(yǎng)期間濫用抗生素，從而使初生小豬的腸道菌群改變引起。鑒于使用抗生素的這些缺點，建議減少在畜牧業(yè)中使用抗生素。另一方面，如此則將需要處理初生動物的替代性方法來替代通常使用的抗生素。因為eu從2005年開始建議減少使用抗生素作為養(yǎng)豬業(yè)的生長促進劑(被2005年3月4日的規(guī)章(ec)編號378/2005修正)，所以動物飼養(yǎng)者需要能夠改善(農(nóng)場)動物(尤其在生命早期)的一般健康狀況的替代物。本發(fā)明人提供了這個問題的解決方案，所述解決方案將在下文中被描述。因此，本發(fā)明解決了一些由現(xiàn)有技術(shù)方法引起的問題，其有利效果將在下文詳述。發(fā)明概述在第一方面，本發(fā)明涉及組合物，其至少包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。此外，本發(fā)明涉及用于處理人或動物的方法中的組合物，所述組合物包含屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物的混合物，并任選地包含至少一種屬于lactobacillus(優(yōu)選地，除了屬于lactobacillusfermentum和lactobacillusmucosae種的微生物之外；優(yōu)選地，這些微生物分別為cect8347(aqsynj12)和cect8349(aqsynj55))、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。lactobacillusfermentumcect8347(aqsynj12)和lactobacillusmucosaecect8349(aqsynj55)由阿曲龍cyl有限公司于2013年5月16日保藏在cect(西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心,coleccióndecultivostipo(cect),巴倫西亞大學，巴倫西亞大學科學園,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙))。在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物包含兩種乳酸菌，其為cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)，其由阿曲龍cyl有限公司保藏在cect(coleccióndecultivostipo(cect),巴倫西亞大學，巴倫西亞大學科學園,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙))。在一個實施方式中，本發(fā)明組合物中的每種菌株至少滿足下述條件a.，優(yōu)選地條件a.和b.二者，最優(yōu)選地全部條件a.、b.和c.：a.顯示出由至少1種下述抑制區(qū)(inhibitionzone)證明的抗微生物活性：(i)對于salmonella，10mm或更大，例如13mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，9mm或更大，優(yōu)選地10mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，9mm或更大，優(yōu)選地10mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，10mm或更大，例如18mm或更大；b.在ph＝3.5或者ph＝2.5下孵育3小時期間能夠基本保持相同的生存力(viability)；c.在0.45％膽汁提取物的存在下優(yōu)選地在ph＝8下孵育4小時期間能夠基本保持相同的生存力。“有生存力的生物體”可被定義為活的生物體及其任何生命階段。因此，“能夠保持基本相同的生存力”的菌株可表示在某些條件下能夠存活并保持活力的菌株，例如，暴露于某些條件(例如在ph＝3.5下或者在ph＝2.5下孵育3小時，和/或在0.45％膽汁提取物的存在下優(yōu)選地在ph＝8下孵育4小時)之后，50％或更多cfu，例如50％或60％或70％或75％或80％或95％、99％或更多cfu、例如100％cfu有活力(有生存力)。本發(fā)明組合物的任何變體均可用于處理人或動物的方法中，例如用于治療或預防腹瀉的方法中。在這種情況下，腹瀉可由細菌感染引起。此外，腹瀉可由病毒感染引起。另外或替代性地，用于治療人或動物的方法中的本發(fā)明組合物的任何變體可用于增加初生哺乳動物(優(yōu)選小豬)的重量。所述組合物可以施用至哺乳動物，優(yōu)選地施用至初生哺乳動物，優(yōu)選地施用至初生動物，更優(yōu)選地施用至小豬。本發(fā)明還提供微生物，優(yōu)選細菌，更優(yōu)選乳酸菌。本發(fā)明所提供的微生物是菌株cect8700(aqsynrmh69)，其由阿曲龍cyl有限公司于2014年9月10日保藏在cect(西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心,coleccióndecultivostipo(cect),巴倫西亞大學，巴倫西亞大學科學園,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙))。可以與每種菌株同義使用的括號中的aqsyn編號由本發(fā)明的發(fā)明人分配給菌株。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物包含菌株cect8700(aqsynrmh69)和至少一種其它菌株。優(yōu)選地，所述至少一種其它菌株選自屬于lactobacillus(優(yōu)選地，除了屬于lactobacillusfermentum和lactobacillusmucosae種的微生物之外；優(yōu)選地，這些微生物分別為cect8347(aqsynj12)和cect8349(aqsynj55))、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的菌株。在一種優(yōu)選的實施方式中，組合物包含至少以下菌株或者由至少以下菌株組成：cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)。任選地，組合物可包含其它菌株。優(yōu)選地，組合物不包含任何其它菌株。因此，優(yōu)選的組合物包含由cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)組成的微生物(即組合物包含以下微生物：cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)，并且其可以包含不是微生物的其它組分)。優(yōu)選地，如下文更詳細描述的那樣，本發(fā)明的組合物中所含的微生物具有抗生素抗性。在任何一種情況下，“包含”可被任選地理解為：存在其它細菌菌株，或不存在其它細菌菌株。即使不存在其它細菌菌株，“包含”可任選地表示：存在其它成分，即不同于細菌的任何成分。菌株cect8350(aqsynj59)由阿曲龍cyl有限公司于2013年5月16日保藏在cect(西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心,coleccióndecultivostipo(cect),阿曲龍cyl有限公司,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙))。術(shù)語“治療”或“療法”包括治療疾病的預防方法和治愈方法二者，因為二者都是旨在維持或恢復健康。不考慮疼痛、不適或機能不全的起因，通過施用適當?shù)乃巹?，其緩解?yīng)被視為本申請上下文中使用的療法或治療用途。在一些實施方式中，本發(fā)明的組合物(在任何所述實施方式中)可用于例如處理人或動物的方法中，例如用于增加初生哺乳動物的重量和/或治療或預防腹瀉的方法中和/或用于促進初生哺乳動物生長的方法中。優(yōu)選地，組合物可用于處理動物的方法中，例如用于增加初生哺乳動物的重量和/或治療或預防腹瀉的方法中和/或用于促進初生哺乳動物生長的方法中，所述初生哺乳動物為例如初生小豬。腹瀉可由細菌感染和/或病毒感染引起(即，細菌感染和/或病毒感染可以是初生哺乳動物腹瀉的原因)。本發(fā)明的組合物特別適用于治療或預防如上所述的哺乳動物中的病癥，例如腹瀉和/或感染，例如細菌感染和/或病毒感染。在一些實施方式中，所述病癥可選自由細菌感染(包括大腸桿菌癥)引起的腹瀉、clostridiumdifficile初生腹瀉、clostridiumperfringensa和c型。在一些實施方式中，所述病癥可選自由病毒感染引起的腹瀉，所述病毒感染例如輪狀病毒感染、冠狀病毒感染、諾如病毒感染、腺病毒感染和/或星狀病毒感染，優(yōu)選輪狀病毒感染和/或冠狀病毒感染。還可以向患腹瀉的動物施用所述組合物，即使(尚)未證明(細菌和/或病毒)感染是所述腹瀉的誘發(fā)因素。也可以在動物具有任何腹瀉和/或感染之前施用本發(fā)明的組合物，以防止腹瀉和/或感染。附圖簡述圖1：抑制區(qū)，示例性實例。圖2：呈現(xiàn)腹瀉的窩的％。圖3：經(jīng)處理窩的％。發(fā)明的詳細公開內(nèi)容以下詳細描述公開了本發(fā)明各特征的特定和/或優(yōu)選變化形式。本發(fā)明還考慮了作為特別優(yōu)選的實施方式的通過組合關(guān)于本發(fā)明的兩種或更多種特征描述的兩種或更多種特定和/或優(yōu)選變化形式而產(chǎn)生的那些實施方式。除非另外清楚指出，術(shù)語“包含”在本文件的語境中被用來表示：除了通過“包含”被引入的成員列表之外，其它成員可任選地存在。然而，作為本發(fā)明的一個特定實施方式考慮，術(shù)語“包含”涵蓋其它成員不存在的可能性，即，為了這個實施方式的目的，“包含”應(yīng)被理解為具有“由……組成”的含義。除非另外清楚指出，本申請中的所有相對量表示均基于重量/重量。由通用術(shù)語表征的組分的相對量表示意指由所述通用術(shù)語涵蓋的所有具體變化形式或成員的總量。如果由通用術(shù)語界定的某一組分被指定以某一相對量存在，且如果這種組分還被表征為所述通用術(shù)語涵蓋的具體變化形式或成員，那么這表示：不額外存在所述通用術(shù)語涵蓋的其它變化形式或成員以至于所述通用術(shù)語涵蓋的組分的總相對量超過指定的相對量；更優(yōu)選地根本不存在所述通用術(shù)語涵蓋的其它變化形式或成員。在本文中使用時，術(shù)語“約”表示其值的指示值±1％，或者術(shù)語“約”表示其值的指示值±2％，或者術(shù)語“約”表示其值的指示值±5％，術(shù)語“約”表示其值的指定值±10％，或者術(shù)語“約”表示其值的指示值±20％，或術(shù)語“約”表示其值的指示值±30％；優(yōu)選地，術(shù)語“約”精確地表示指示值(±0％)。本發(fā)明整合了益生菌和益生元的概念，從而提供合生元(synbiotics)。本發(fā)明人打開了具有免疫調(diào)節(jié)劑效果的細菌和組合物的新的治療窗。本發(fā)明的微生物或組合物可在動物(例如小豬)的生命早期階段被施用。因此，本發(fā)明涉及可有益于畜牧業(yè)的產(chǎn)品和組合物。由實施例證明的真正重要的觀察為：在生產(chǎn)力方面，與抗生素處理相比，益生菌處理至少同樣有效，并極可能更好(與標準抗生素處理相比)。由于處理的總成本以及法律壓力和環(huán)境影響二者，本發(fā)明人的貢獻具有巨大經(jīng)濟效益。根據(jù)本發(fā)明可被使用的微生物(優(yōu)選地細菌)是具有有益效果的微生物。它們優(yōu)選地是乳酸菌。根據(jù)本發(fā)明甚至可使用非細菌的微生物物種，只要它們符合下列選擇標準a.到c.。例如，已知一些酵母也可具有益生性能。雖然本文所述功能參數(shù)是最重要的選擇標準，但就所涉及的微生物物種而言，乳酸菌是優(yōu)選的。乳酸菌(lab)包含革蘭氏陽性耐酸細菌的進化枝，它們因它們的共有代謝和生理特征相關(guān)。這些細菌被天然地發(fā)現(xiàn)于分解的植物和乳產(chǎn)品以及動物排泄物中，它們產(chǎn)生乳酸作為碳水化合物發(fā)酵的主要代謝終產(chǎn)物。由于乳酸菌在食物中的普遍存在以及它們對哺乳動物黏膜表面的健康微生物群落的貢獻，它們通常被認為是安全的(gras狀態(tài))。乳酸菌優(yōu)選地選自lactobacillus,leuconostoc,pediococcus,lactococcus,streptococcusaerococcus,carnobacterium,enterococcus,oenococcus,sporolactobacillus,tetragenococcus,vagococcus,和weisella屬。lactobacillus和/或enterococcus可以是優(yōu)選的。lactobacillus是優(yōu)選的。在本發(fā)明的一種實施方式中，屬于lactobacillusfermentum和lactobacillusmucosae種的微生物可不存在于本發(fā)明的組合物中。特別地，在本發(fā)明的一種實施方式中，屬于lactobacillusfermentumcect8347(aqsynj12)和lactobacillusmucosaecect8349(aqsynj55)的微生物可不存在于本發(fā)明的組合物中。本文中優(yōu)選的細菌優(yōu)選地為革蘭氏陽性和過氧化氫酶陰性。可根據(jù)本領(lǐng)域已知的標準技術(shù)檢測細菌是否為革蘭氏陽性。革蘭氏染色法包括連續(xù)地用不同“著色劑”(染色劑)染色并洗滌樣品以檢查其為陽性或陰性。如下所述檢測細菌是否為過氧化氫酶陰性：過氧化氫酶試驗涉及將過氧化氫加入到培養(yǎng)樣品或瓊脂斜面上。如果目標細菌產(chǎn)生過氧化氫酶，那么它們將轉(zhuǎn)變過氧化氫并將產(chǎn)生氧氣。氣體的產(chǎn)生導致形成泡沫，這些泡沫是陽性試驗的指示(過氧化氫酶陽性細菌)。本文中優(yōu)選的乳酸菌優(yōu)選地能夠在mrs(manrogosasharpe)培養(yǎng)基，更優(yōu)選地在酸化mrs瓊脂中生長，如下所述。mrs培養(yǎng)基被創(chuàng)造以促進乳酸菌，尤其是lactobacillussp.的生長。其被認為不利于絕大部分革蘭氏陰性細菌的生長。然而，不同于乳酸菌的其它細菌可最終在mrs上生長，因此建議或甚至必須核實菌落屬于革蘭氏陽性和為過氧化氫酶陰性細菌。本文中優(yōu)選的乳酸菌可以是益生細菌?！耙嫔弊钇毡榻邮艿亩x在1998年由füller給出，füller將它描述為“通過改善宿主動物的腸道微生物平衡有益影響宿主動物的活的微生物飼料補充物”。益生菌通常是活的微生物。認為不同益生菌在腸中具有不同作用，因此不同益生菌可一起作用從而提供有益效果。其它來源將益生菌定義為對人類或動物的健康益處已被證明的那些微生物。"reportofajointfaowhoexpertconsultationonevaluationofhealthandnutritionalpropertiesofprobioticsinfoodincludingpowdermilkwithlivelacticacidbacteria",聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織,2001,科多巴,阿根廷中公開了益生菌的選擇標準。使用活細菌的優(yōu)點已被廣泛描述。近些年，“益生元”的概念被引入；益生元是不可消化的食物組分，其增強胃腸道中特定微生物的生長?！昂仙笔前辽?種益生菌和至少1種益生元的組合物。這種組合物被理解為促進有益細菌(例如益生菌)的生長。作為示例性實例，發(fā)酵的乳制品常常被認為是合生元，因為它們含有活細菌以及活細菌需要的食物來源。雖然與益生元和益生菌相關(guān)的益處是有利的，但研究者對于得出一般性結(jié)論很謹慎，因為益處因攝入的益生菌和益生元的類型和量以及特定益生菌與特定益生元的特定組合而異。因此，強效合生元基于特定益生細菌菌株與仔細選擇的益生元的組合。它們能夠?qū)Σ溉閯游锂a(chǎn)生重要的健康益處。特定益生菌、益生元和合生元已被建議供人類使用，益生菌的選擇標準在例如"reportofajointfao/whoexpertconsultationonevaluationofhealthandnutritionalpropertiesofprobioticsinfoodincludingpowdermilkwithlivelacticacidbacteria",聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織,2001,科多巴,阿根廷中被公開。本發(fā)明使用微生物，尤其是細菌，其具有顯示出對動物(尤其是農(nóng)場動物)的健康益處的能力。優(yōu)選地，動物是馴養(yǎng)的、家養(yǎng)的動物或其本身不是馴養(yǎng)的或家養(yǎng)的(即野生的)但屬于馴養(yǎng)動物的相同物種或?qū)俚膭游?。例如，野生豬會被包括在這個定義中，因為它屬于馴養(yǎng)豬的相同物種?？杀惶幚淼鸟Z養(yǎng)動物的一些實例包括但不限于狗、貓和其它寵物、馬、牛、雞和其它禽類、豬、綿羊、山羊。優(yōu)選地，動物是農(nóng)場動物，農(nóng)場動物包括但不限于馬、牛、雞和其它禽類、豬、綿羊、山羊。更優(yōu)選地，動物來源于suina亞目。suina亞目(也被稱為suiformes)是哺乳動物的品系，其包括suidae和tayassuidae科的豬和野豬。野生的或馴養(yǎng)的豬可以是特別優(yōu)選的?？扇缦滤鲨b定適用于本發(fā)明的菌株(即，可包含在本發(fā)明組合物中的菌株)。獲得本發(fā)明菌株的第一步：分離單菌株在第一步中，分離含微生物(優(yōu)選地細菌)的樣品。任何微生物來源可以是合適的，最廣義地說，其可以是任何來源于自然的未經(jīng)滅菌的樣品。所述來源可以來自(馴養(yǎng))動物，例如來自生命頭30天的年幼動物，或者來自它們的母親?；蛘撸瑏碓纯蓙碜砸吧鷦游?例如野生野豬)，例如從捕獲的野生野豬收集的樣品。合適的來源包括來自母親動物(例如母豬)的初乳，來自初生動物(例如小豬)的胎便樣品、來自馴養(yǎng)或野生動物的腸壁洗滌物或天然腸乳酸菌?？墒箻悠分兴奈⑸?例如細菌)在本領(lǐng)域公知適合腸道微生物生長的生長培養(yǎng)基(例如mrs培養(yǎng)基)上生長?？蓪⑽⑸飫澗€，這將能夠分離單菌落。可挑取單菌落并使各個菌株在合適的生長培養(yǎng)基(例如與最初使用的培養(yǎng)基相同)上進一步繁殖。任選地，通過本領(lǐng)域已知方法利用革蘭氏染色檢驗這些單菌落的菌株(并選擇革蘭氏陽性菌株)，和/或如上所述檢驗過氧化氫酶活性的存在(并選擇過氧化氫酶陰性菌株)。獲得本發(fā)明菌株的第二步：體外試驗為了被選擇為對本發(fā)明有用，微生物菌株(優(yōu)選地來源于上述第一步)必須滿足下述標準中的至少一種，所述標準先在此處列出并將在下文詳述：a.抗不期望細菌的活性；b.耐酸性；c.膽汁鹽耐受性；項目a.到c.代表優(yōu)先性；即最期望的是滿足標準a.，第二最期望的是滿足標準a.和b.，最優(yōu)選的是滿足標準a.到c.全部。下文詳述了選擇標準。a.抗不期望細菌的活性進行抗不期望細菌的體外篩選。“不期望”的是選擇下列一種或更多種的細菌：salmonellasp.,listeriamonocytogenes,staphyloccocusaureus和escherichiacoli。優(yōu)選地，salmonella物種是salmonellaenterica，更優(yōu)選地salmonellaenterica血清型typhimurium。根據(jù)下述菌苔斑點試驗(spotonlawntest)檢驗抗不期望細菌的活性。將待被檢驗的每種菌株的液體過夜培養(yǎng)物(mrs)在mrs瓊脂上涂布為10μl的單個斑點并在厭氧條件下在30℃孵育24小時。孵育之后，用7ml接種有一種不期望細菌(1％；100ml培養(yǎng)基中1ml過夜培養(yǎng)物)的半固體bhi瓊脂(0.7％)覆蓋平板。含一種待被檢驗的特定菌株的不同平板分別被一種不期望的細菌物種覆蓋。每個這種試驗一式三份進行。在處于或者接近不期望細菌的最佳生長溫度(本文中涉及的每種不期望細菌的最佳生長溫度在本領(lǐng)域已知)下孵育24小時之后，檢驗樣品的抑制證據(jù)。為了達到這個目的，首先核實是否存在抑制區(qū)。如果存在，則光學測量抑制區(qū)的直徑。如果抑制區(qū)顯示為不精確的圓形，那么按照測量抑制區(qū)的最短直徑的規(guī)則來進行抑制區(qū)的測量。最后，確定一式三份實驗的算術(shù)平均值并核實其是否滿足下述標準。標準：為了被選擇為陽性，菌株必須滿足下述條件[(i),(ii),(iii),(iv)]中的至少一種：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大，例如13mm或更大。(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大，例如10mm或更大。(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大，例如10mm或更大。(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大，例如18mm或更大。9mm或更大包括10mm或更大，11mm或更大，12mm或更大，13mm或更大，14mm或更大，15mm或更大，16mm或更大，17mm或更大，18mm或更大，19mm或更大，20mm或更大，21mm或更大，22mm或更大，23mm或更大，24mm或更大，25mm或更大，26mm或更大，27mm或更大，28mm或更大，29mm或更大，30mm或更大，31mm或更大，32mm或更大，33mm或更大，34mm或更大，35mm或更大。10mm或更大包括11mm或更大，12mm或更大，13mm或更大，14mm或更大，15mm或更大，16mm或更大，17mm或更大，18mm或更大，19mm或更大，20mm或更大，21mm或更大，22mm或更大，23mm或更大，24mm或更大，25mm或更大，26mm或更大，27mm或更大，28mm或更大，29mm或更大，30mm或更大，35mm或更大。13mm或更大包括14mm或更大，15mm或更大，16mm或更大，17mm或更大，18mm或更大，19mm或更大，20mm或更大，19mm或更大，20mm或更大，25mm或更大，30mm或更大。18mm或更大包括19mm或更大，20mm或更大，21mm或更大，22mm或更大，23mm或更大，24mm或更大，25mm或更大，26mm或更大，27mm或更大，28mm或更大，29mm或更大，30mm或更大，35mm或更大。也可以根據(jù)上述標準檢驗含若干菌株的組合物，為了被選擇為適合本文所述的任意用途，這種組合物必須滿足標準[(i),(ii),(iii),(iv)]中的至少一種、更優(yōu)選地全部。還可以預期：可通過組合每種均滿足標準(i),(ii),(iii),(iv)中的至少一種的單個微生物菌株來合適地制備這種組合物；但必須通過實驗檢驗情況是否確實如此?；蛘撸墒褂铆傊讛U散試驗(agarwelldiffusionassay)來測定抑制區(qū)。這個方法消除任何痕量乳酸，所述乳酸可產(chǎn)生于低葡萄糖mrs培養(yǎng)液中，其通過中和無細胞上清液進行。通過離心(5000g/20分鐘/4℃)收獲在厭氧條件下生長的待被檢驗的穩(wěn)定期物種培養(yǎng)物，然后用1mnaoh將無細胞上清液的ph調(diào)節(jié)至6.5。將上清液過濾滅菌(0.20mm；millipore有限公司，hertfordshire，英國)。將無細胞上清液(30μl)加入到在瓊脂平板中切出的7mm直徑孔中，其中接種有[約]105菌落形成單位(cfu)/ml的(i),(ii),(iii),(iv)中所列出的不期望細菌。然后在30℃下孵育瓊脂平板24小時。測量孔周圍的抑制區(qū)的直徑，選擇標準如上文(i),(ii),(iii),(iv)中所示，將被選擇為陽性的菌株必須滿足其中的至少一種。供參考的是：上述試驗基于kawai等人,2004.appliedandenvironmentalmicrobiology70(5):2906-2911；dortu等人2008.lettersinappliedmicrobiology,47:581-586；hata等人,2009.internationaljournaloffoodmicrobiology,37:94-99,awaisheh2009.foodpathogensanddisease6(9):1125-1132.)已描述的內(nèi)容。b.耐酸性酸可被視為模仿胃液，可如下所述檢驗對其的耐受性。將100μl6-8×108cfu/ml的每種菌株在mrs中的初始懸浮物懸浮在通過加入恰當量的12nhcl被酸化的酸化mrs(ph＝3.5，或者ph＝2.5)中，并在110rpm攪拌條件下在37℃孵育。在0小時、3小時和6小時時通過菌落計數(shù)(cfu/ml)檢驗樣品?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的檢驗?zāi)退嵝缘娜魏纹渌椒?。標準：在所述培養(yǎng)基中的3小時孵育期間，菌株必須能夠保持基本相同的生存力(與試驗之前相比，試驗之后至少50％，或至少55％，或至少60％，或至少70％，或至少75％，或至少80％，或至少95％的cfu，最優(yōu)選地與試驗之前相比，試驗之后至少50％的cfu)。供參考的是：huang等人,internationaljournaloffoodmicrobiology91:253-260簡述了類似的實驗流程。c.膽汁鹽耐受性模擬哺乳動物的天然小腸條件?？扇缦滤鰴z驗?zāi)懼}耐受性：將100μl6-8×108cfu/ml的細菌菌株在mrs中的初始懸浮物懸浮在模擬的小腸溶液(例如ph＝8的mrs(通過加入naoh來調(diào)節(jié)ph)和0.45％膽汁提取物(膽汁提取物，豬.b8631-100g.sigma-aldrich))中，并在110rpm攪拌條件下在37℃孵育。在1小時、2小時和4小時時通過菌落計數(shù)(cfu/ml)檢驗樣品?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的檢驗?zāi)懼}耐受性的任何其它方法。標準：暴露于模擬的小腸液(0.45％膽汁鹽，任選地ph＝8)4小時之后，不損失生存力(或基本不損失生存力，即優(yōu)選地50％或更多cfu，例如50％，或60％，或70％，或75％，或80％，或95％或更多cfu)。huang等人,internationaljournaloffoodmicrobiology91:253-260簡述了類似的實驗流程。任選地，還可以檢驗根據(jù)以上標準a.到c.已被鑒定為陽性的菌株對上皮表面的粘附性和在動物(例如豬)胃腸道中的持久性。認為具有良好粘附性的菌株將表現(xiàn)最好。任選地，額外檢驗根據(jù)以上標準a.到c.已被鑒定為陽性的菌株的抗生素抗性譜，例如通過最低抗生素濃度試驗(vetmic微孔板試驗)和/或通過對不同抗性基因進行pcr來進行的基因型抗性試驗(等人,2010.antonievanleeuwenhoek97:189-200)。認為無抗生素抗性的細菌(抗性基因不存在或失活/功能丟失)最適合應(yīng)用于農(nóng)場動物。在一種優(yōu)選的實施方式中，組合物中包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株滿足如上所述的所有標準a.到c.。另外，關(guān)于標準a.，組合物中包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的所有下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。本發(fā)明提供組合物，其至少包含由阿曲龍cyl有限公司于2014年9月10日保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心,coleccióndecultivostipo(cect),巴倫西亞大學,巴倫西亞大學科學園,,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙)的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。本發(fā)明的組合物可另外包含至少一種微生物菌株，例如至少一種，或至少兩種，或至少三種，或至少四種，或至少五種，或至少六種，或至少七種，或至少八種等等，其中每種另外的菌株均具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的至少一種下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。組合物中包含的所述至少一種另外的菌株優(yōu)選地可選自以下菌株，所述菌株屬于選自lactobacillus(優(yōu)選地除了lactobacillusfermentum(優(yōu)選地cect8347(aqsynj12)和lactobacillusmucosae(優(yōu)選地cect8349(aqsynj55)之外))、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella的屬。例如，組合物包含cect8700(aqsynrmh69)和至少一種、優(yōu)選地一種選自cect8163(aqsyn04)；cect8165(aqsyn06)；cect8164(aqsyn09)；cect8166(aqsyn10)，cect8347(aqsynj12)；cect8348(aqsynj17)；cect8349(aqsynj55)和cect8350(aqsynj59)的另外的菌株；或者組合物由上述組成。cect8163(aqsyn04)；cect8165(aqsyn06)；cect8164(aqsyn09)；cect8166(aqsyn10)，cect8347(aqsynj12)；cect8348(aqsynj17)；cect8349(aqsynj55)和cect8350(aqsynj59)均由阿曲龍cyl有限公司保藏在cect(西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心,coleccióndecultivostipo(cect),巴倫西亞大學,巴倫西亞大學科學園,,catedráticoagustínescardino,9,46980巴特納(巴倫西亞,西班牙))。cect8163(aqsyn04)；cect8165(aqsyn06)；cect8164(aqsyn09)和cect8166(aqsyn10)于2012年6月20日保藏。cect8347(aqsynj12)；cect8348(aqsynj17)；cect8349(aqsynj55)和cect8350(aqsynj59)于2013年5月16日保藏。cect8700(aqsynrmh69):lactobacillusreutericect8163(aqsyn04):lactobacillusreutericect8165(aqsyn06):lactobacillusreutericect8164(aqsyn09):enterococcusfaeciumcect8166(aqsyn10):enterococcusfaeciumcect8347(aqsynj12):lactobacillusfermentumcect8348(aqsynj17):lactobacillusreutericect8349(aqsynj55):lactobacillusmucosaecect8350(aqsynj59):lactobacillusplantarum例如，在一種優(yōu)選的實施方式中，包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株的本發(fā)明組合物還包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株。所述組合物可以不包含任何另外的菌株。在一種更優(yōu)選的實施方式中，組合物包含兩種微生物菌株。優(yōu)選地，一種菌株是cect8700(aqsynrmh69)。甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物包含兩種微生物(例如兩種菌株)或者由兩種微生物(例如兩種菌株)組成。優(yōu)選地，所述兩種微生物是保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株和保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心、保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株。在這種實施方式中，組合物可另外包含不是微生物的其它組分，即組合物可包含其它組分(例如下文所述的組分)，但優(yōu)選地組合物不包含除cect8350(aqsynj59)和cect8700(aqsynrmh69)之外的其它菌株。因此，本發(fā)明的組合物可以包含微生物的混合物，其中所述微生物屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種。任選地，本發(fā)明的組合物可另外包括至少一種屬于lactobacillus(優(yōu)選地，除了lactobacillusfermentumcect8347(aqsynj12)和lactobacillusmucosaecect8349(aqsynj55)之外)、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。任選地，本發(fā)明的組合物可另外包括至少一種屬于lactobacillus(優(yōu)選地，除了屬于lactobacillusfermentum和lactobacillusmucosae種的微生物之外)、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物包含微生物的混合物，其中所述混合物由至少一種lactobacillusplantarum菌株和至少一種lactobacillusreuteri菌株組成。在一個更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物包含微生物的混合物，其中所述混合物由一種lactobacillusplantarum菌株和一種lactobacillusreuteri菌株組成。一種優(yōu)選的lactobacillusplantarum菌株是cect8350(aqsynj59)。一種優(yōu)選的lactobacillusreuteri菌株是cect8700(aqsynrmh69)。在一個甚至更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物包含微生物的混合物，其中所述混合物由cect8350(aqsynj59)和cect8700(aqsynrmh69)組成。認為不同菌株在腸中可具有不同功能，因此不同菌株可一起作用從而提供有益效果。在本發(fā)明的一個實施方式中，本發(fā)明組合物中所包含的至少1種菌株(例如組合物中所包含的1種和/或2種和/或3種和/或4種和/或5種和/或6種和/或7種和/或8種菌株)以及優(yōu)選地組合物中所包含的全部菌株無抗生素抗性，即它們在暴露于恰當?shù)臉藴士股靥幚砗蟛荒艽婊?。例如，在一個實施方式中，組合物包含無抗生素抗性的cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)，或者由無抗生素抗性的cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)組成。為了辨別敏感菌株的抗性，歐洲食品安全局(efsa)動物飼料添加劑和產(chǎn)品或物質(zhì)小組(feedap)定義了微生物截取值。通過研究選擇的抗微生物劑在屬于單個分類學單元(物種或?qū)?的細菌群體中的mic分布來設(shè)置微生物截取值。明顯偏離正常敏感群體的群體部分被歸類為有抗性。"guidanceontheassessmentofbacterialsusceptibilitytoantimicrobialsofhumanandveterinaryimportance",efsa動物飼料添加劑和產(chǎn)品或物質(zhì)小組(feedap),歐洲食品安全局(efsa),帕爾馬,意大利.efsajournal2012；10(6):2740中定義了可被用于評估本發(fā)明所述菌株的抗生素抗性的微生物截取值。可對所有建議菌株進行旨在評估抗生素抗性的最低抑制濃度(mic)體外試驗。被評估的抗生素可以是下列抗生素：氨芐青霉素、萬古霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素和氯霉素?？纱嬖谟诒景l(fā)明組合物中的一種或多種其它成分不以任何方式被限制。在一個優(yōu)選的方面，至少一種益生元化合物被包含在本發(fā)明的組合物中，即作為其它成分。在一個非常寬泛的概念中，益生元是所有可被益生菌代謝的那些食物來源。優(yōu)選地，益生元不可或不良地被哺乳動物消化。因此，被哺乳動物攝入之后，不可消化的益生元能夠通過小腸并進入大腸從而刺激這個區(qū)域中益生菌的生長。因此，益生元可擔當益生菌的食物來源。認為其中許多是不可消化碳水化合物的益生元促進腸內(nèi)益生菌的生長。益生元被天然地發(fā)現(xiàn)于例如洋蔥、全谷類、香蕉、蒜、蜂蜜、韭蔥、洋薊、強化食品和飲料、以及膳食補充劑中。益生元在本領(lǐng)域眾所周知，當在本發(fā)明中使用時，沒有對益生元本身的特別限制。然而，在一些優(yōu)選的實施方式中，組合物中的至少一種益生元產(chǎn)品選自下列化合物和組合物：不可消化的碳水化合物、β-葡聚糖、甘露寡糖、菊粉、寡果糖、半乳寡糖(gos)、乳果糖、低聚乳果糖、半乳三糖、果寡糖(fos)、纖維二糖、纖維糊精、環(huán)糊精、麥芽糖醇、乳糖醇、葡糖基蔗糖、維生素e或其變體(其中所述變體選自α、β、γ、δ-生育酚、生育三烯酚和生育單烯酚)。任選地，甘露寡糖和/或菊粉可以是優(yōu)選的。任選地，甘露寡糖、β-葡聚糖和/或菊粉可以是優(yōu)選的。例如，本發(fā)明的組合物可另外包含增稠劑和/或補充飼料/營養(yǎng)物質(zhì)。例如，本發(fā)明的組合物可以包含一種或多種增稠劑(稠化劑，即可以增加液體粘度但基本上不改變其其它性質(zhì)的物質(zhì)，并且其可以改善其它成分或乳液的懸浮，這提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性)，例如多糖(果膠、植物膠和/或淀粉)或蛋白質(zhì)。例如，本發(fā)明的組合物還包含植物膠，例如褐藻膠、槐豆膠、黃原膠和/或瓜爾膠，優(yōu)選黃原膠和/或瓜爾膠。例如，所述組合物可以包含量為約0.1-0.5w/v％、優(yōu)選地約0.3w/v％(100ml中0.3克增稠劑(例如，植物膠，諸如黃原膠和瓜爾膠))的植物膠，例如黃原膠和瓜爾膠。此外，本發(fā)明的組合物可以包含補充飼料(營養(yǎng)物質(zhì))，例如乳制品、糖等。組合物可以包含量為約0.5-2w/v％、優(yōu)選地約1w/v％的脫脂乳粉。組合物還可包含量為約0.1w/v％至1w/v％、優(yōu)選地約0.5w/v％的糖(優(yōu)選蔗糖)。此外，本發(fā)明的組合物還可包含輸注溶液，例如鹽水(含有nacl的水)。例如，組合物可以包含含有約0.9w/v％nacl的水作為輸注溶液。在一個實施方式中，本發(fā)明的組合物包含以下物質(zhì)或者由以下物質(zhì)組成：就可包含不同菌株的本發(fā)明組合物而言，任何混合比例是可以的。以菌落形成單位(cfu)表示混合比例，cfu在混合各菌株之前被適當?shù)販y定。在一個實施方式中，菌株比例可相等或可不相等，例如對于包含2種菌株的組合物為1：(0.1-1)；對于包含3種菌株的組合物為1：(0.1-10)：(0.1-10)；對于包含4種菌株的組合物為1：(0.1-10)：(0.1-10)：(0.1-10)，等等。例如，包含2種菌株的組合物中的比例可以為1:2至2:1。在另一個實施方式中，菌株比例可大致或基本相等，例如對于包含兩種菌株的組合物為1：1，對于包含3種菌株的組合物為1：1：1，對于包含4種菌株的組合物為1：1：1：1，等等?？赏ㄟ^混合待被并入組合物的每種菌株的相應(yīng)細菌量(通過菌落計數(shù)所測定的)來制備組合物。待并入的菌株可以作為各菌株的原種(stock)提供，其中的每一種例如呈凍干物的形式。如果不同的原種具有不同的濃度(cfu/g)，則使用合適量(g)的每一種，以使得期望的組合物具有每種菌株的期望cfu。其實例如下所示。在一種優(yōu)選的實施方式中，其中組合物包含兩種菌株或者由兩種菌株組成，菌株的比例大致或基本相等，例如1:1。例如，本發(fā)明的組合物可以包含比例為1:1的菌株aqsynj59–lactobacillusplantarum和菌株aqsynrmh69-lactobacillusreuteri，例如多于或約5x108cfu的每種上述菌株(例如，組合物中總共多于或約109cfu)，或者由上述組成。本發(fā)明還提供本發(fā)明組合物在治療人和/或動物的方法中的用途。因此，本發(fā)明的組合物可以用于治療性處理(在疾病的臨床表現(xiàn)(例如腹瀉)之后)和/或預防性處理(在疾病的臨床表現(xiàn)(例如腹瀉)之前)的方法中。處理動物、哺乳動物和/或尤其是馴養(yǎng)動物可以是優(yōu)選的。優(yōu)選地，動物是非人的動物，更優(yōu)選地其來源于suina亞目(suina亞目(又名suiformes)是哺乳動物的品系，其包括suidae和tayassuidae科的豬和野豬)。野生的或馴養(yǎng)的豬可以是特別優(yōu)選的。這還包括居住在半野生條件下的豬，即一年中大部分時間居住在戶外并自己尋找它們的食物的馴養(yǎng)豬。所述組合物可以是包含至少一種上述被保藏菌株的組合物。在另一種實施方式中，本發(fā)明的組合物可以施用至人。如上所述，本發(fā)明的組合物可用于處理人或動物的方法中。處理人或動物的這種方法可以是增加初生哺乳動物重量的方法，所述初生哺乳動物優(yōu)選地是小豬。另外和/或替代性地，處理人或動物的方法可以是促進初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬生長的方法。另外和/或替代性地，處理人或動物的方法可以是治療或預防初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬的腹瀉的方法。腹瀉可以是由細菌感染引起的。腹瀉可以是由于非細菌感染，例如病毒感染和/或寄生蟲。處理人或動物的方法可以是治療或預防感染(例如，細菌感染和/或病毒感染)的方法。此外，本發(fā)明的組合物可以在檢測到任何癥狀之前施用，以預防人和/或動物的病癥，例如腹瀉和/或感染，例如細菌感染和/或病毒感染。本發(fā)明的組合物可優(yōu)選用于處理動物的方法中。優(yōu)選地，動物是農(nóng)場動物，農(nóng)場動物包括但不限于馬、牛、雞和其它禽類、豬、綿羊、山羊。更優(yōu)選地，動物來源于suina亞目、甚至更優(yōu)選地小豬。這種處理動物的方法可以是增加初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬的重量的方法。另外和/或替代性地，處理動物的方法可以是促進初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬生長的方法。另外和/或替代性地，處理動物的方法可以是治療或預防初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬的腹瀉的方法。腹瀉可以是由細菌感染引起的。腹瀉可以是由病毒感染或任何其它原因引起的。此外，本發(fā)明的組合物可以在檢測到任何癥狀之前施用，以預防動物的病癥，例如腹瀉和/或感染，例如細菌感染和/或病毒感染。即使(尚)未發(fā)生疾病(例如腹瀉)的臨床表現(xiàn)，也可將本發(fā)明的組合物有益地施用至初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬。例如，可將本發(fā)明的組合物有益地施用至健康的初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬。可將本發(fā)明的組合物施用至初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬，所述初生哺乳動物、優(yōu)選地小豬：-顯示出腹瀉的臨床表現(xiàn)；-(尚)未顯示出腹瀉的臨床表現(xiàn)，但被可能引起腹瀉的細菌感染和/或病毒感染；-是健康的。優(yōu)選地，用本發(fā)明的組合物處理的人和/或動物不經(jīng)受任何其它處理；優(yōu)選地，人和/或動物不用抗生素處理?？股厥怯糜谥委熀?或預防感染(例如，細菌感染)的藥物。在一種優(yōu)選的實施方式中，在出生后的早期，即出生后的頭30天內(nèi)，優(yōu)選地在出生后的頭21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2天內(nèi)，最優(yōu)選地在出生后的頭2天(48小時)內(nèi)或在出生后的頭1天(24小時)內(nèi)，向初生的人和/或動物(優(yōu)選小豬)施用本發(fā)明的組合物。優(yōu)選施用至少三次，例如兩次或一次。優(yōu)選地，在出生后的頭48小時內(nèi)，施用本發(fā)明的組合物至少一次(例如一次)。優(yōu)選地，在出生后的頭48小時內(nèi)，甚至更優(yōu)選地在出生后的頭24小時內(nèi)，例如出生后馬上(立刻)施用本發(fā)明的組合物一次。可以施用兩次本發(fā)明的組合物：一次在出生后的第一天內(nèi)，第二次在出生后的第二天內(nèi)。如上所述，本發(fā)明的組合物中包含至少1種(例如1種)，例如至少2個(例如2種)，例如至少3種，例如4種或多于4種(最優(yōu)選地，2種)不同的根據(jù)如上所述的標準a.到c.中的至少一個、優(yōu)選地所有三個選擇的微生物(優(yōu)選地細菌、更優(yōu)選地乳酸菌)菌株。如上所述，在用于處理人和/或動物的方法中的組合物的情況下，每種微生物(優(yōu)選地細菌、更優(yōu)選地乳酸菌)必須滿足如上所述的標準a.到c.(抗不期望細菌的活性；耐酸性；膽汁鹽耐受性)中的至少一個。就標準a.而言，優(yōu)選地地觀察到對所有不期望細菌(i)到(iv)的上文提及的最小抑制區(qū)。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物中所包含的微生物(優(yōu)選地細菌、更優(yōu)選地乳酸菌)應(yīng)該滿足上述標準(a.到c.)中的多個(例如a.和b.)，優(yōu)選地滿足全部。此外，優(yōu)選地，(適用于處理人和/或動物的方法中的)本發(fā)明組合物中所包含的至少1種(例如1種)，例如至少2個(例如2種)，例如至少3種，例如4種或多于4種(最優(yōu)選地，2種)不同的微生物(優(yōu)選地細菌、更優(yōu)選地乳酸菌)菌株無抗生素抗性，即它們在暴露于恰當?shù)臉藴士股靥幚砗蟛荒艽婊?。益生菌組合物或合生元組合物可被用于所述處理人和/或動物的方法中(即包含至少一種益生元化合物)。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含活的微生物，優(yōu)選地細菌。本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)：在適當?shù)臅r間(即，如上所述，出生后的早期階段)施用本發(fā)明組合物的任何變體對于初生的人或動物(優(yōu)選小豬)能夠控制源自不同病因?qū)W的菌態(tài)不平衡具有顯著效果。例如，為了使組合物在處理人和/或動物方面(例如在治療或預防腹瀉方面)具有更好的效果，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)：應(yīng)當優(yōu)選地在出生后的早期，例如在出生后的頭30天內(nèi)(更優(yōu)選地在出生后的頭21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2天內(nèi)，最優(yōu)選地在出生后的頭2天內(nèi)或在出生后的頭1天(24小時)內(nèi))，施用所述組合物。甚至更優(yōu)選地，在出生后的頭2天內(nèi)施用本發(fā)明的組合物，例如在出生后的頭48小時內(nèi)，和/或例如在出生后的第一天(24小時)和/或在出生后的第二天施用1次?？?任選地，另外)在出生后的第三天施用組合物。優(yōu)選地，在出生后的頭48小時內(nèi)，甚至更優(yōu)選地在出生后的頭24小時內(nèi)，例如在出生后馬上施用本發(fā)明的組合物一次。任選地，特別是如果在動物和/或人中觀察到腹瀉和/或感染癥狀，則在第一劑的益生菌組合物后24小時施用第二劑的益生菌組合物。任何施用途徑都是合適的，但經(jīng)口施用可以是優(yōu)選的。最典型地，直接向每個動物的口中給予劑量以確保動物咽下所述劑量。或者，組合物還可以被提供為食物補充劑，即被加入到動物每天的飼料中。組合物可以是任何形式，例如凍干的，液體或霧狀形式。例如，如果使用凍干細菌來制造組合物，那么可例如利用無菌等滲鹽水溶液或利用無菌水或利用無菌生長培養(yǎng)基將所述凍干細菌的初步組合物再水化，以至于可獲得具有期望的總濃度(cfu/ml)的最終組合物。為了使得便于使用，組合物可以為劑量形式(dosedform)。例如，每劑量可包含107或更多，108或更多，109或更多，1010或更多，1011或更多微生物(優(yōu)選細菌)菌落形成單位(cfu)；109或更多的劑量可以是優(yōu)選的。劑量體積可在0.1-100ml，優(yōu)選地0.2-50ml，更優(yōu)選地0.5-20ml，更優(yōu)選地1.0-10ml，更優(yōu)選地1.5-5ml，甚至更優(yōu)選地(基本上)2ml的范圍內(nèi)。具有109或更多cfu的2ml劑量可以是特別優(yōu)選的。在組合物包含兩種菌株的情況下，2ml劑量優(yōu)選地包含5×108cfu的每種菌株(即每劑量總共109cfu)?？墒┯萌魏蝿┝繑?shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)各個農(nóng)場的需要選擇處理長度。在一個具體實施方式中，向動物施用的總劑量數(shù)為10或更少，例如選自下列的任何數(shù)字：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，或者組合任何一個這些數(shù)字(除了10)和任何一個這些數(shù)字的任何范圍，前提條件是第二個數(shù)字更高(例如1-3劑量)。例如，在出生后的頭48小時內(nèi)向動物施用至少單次劑量。例如，在出生后的頭48小時內(nèi)向動物施用單次劑量。例如，在出生后馬上(在出生后的頭24小時內(nèi))向動物施用單次劑量。任選地，優(yōu)選地如果動物顯示出腹瀉和/或感染的癥狀，則在第一劑后24小時向動物施用第二劑。任選地，可以在第二劑后24小時隨后施用第三劑，以此類推。每個動物共2個劑量可以是優(yōu)選的。在一個優(yōu)選的實施方式中，在出生后的頭24小時(出生后的第一天)內(nèi)施用第一劑并在隨后的24小時(出生后的第二天)內(nèi)施用第二劑。任選地，這些是僅有的2劑。在另一個選項中，接下來施用更多劑，例如出生后第三天的第三劑，和/或出生后第四天的第四劑，以此類推。優(yōu)選地，每劑包含至少兩種菌株。優(yōu)選地，所述兩種菌株是cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)，并且在出生后的頭48小時內(nèi)(例如在出生后的頭24小時內(nèi)，優(yōu)選地在出生后馬上)以2ml的劑量施用，所述劑量包含5×108cfu的每種菌株(即以菌落形成單位(cfu)表示的菌株比例為1：1)?？扇芜x地在出生后的頭48小時內(nèi)和/或在出生后第三天施用第二劑和/或第三劑。例如，可以在出生后馬上(在頭24小時內(nèi))施用一劑，任選地在第一劑后24小時(即出生后第二天)施用第二劑，特別是如果觀察到腹瀉和/或感染的癥狀?？梢匀芜x地在出生后的第三天施用第三劑。它們優(yōu)選施用至哺乳動物、優(yōu)選地施用至初生小豬。優(yōu)選地，每劑包含至少兩種菌株。優(yōu)選地，所述兩種菌株是cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)，并且在出生后的第一天和第二天以2ml的劑量施用，所述劑量包含5×108cfu的每種菌株(即以菌落形成單位(cfu)表示的菌株比例為1：1)?？梢匀芜x地在出生后的第三天施用第三劑。它們優(yōu)選施用至哺乳動物、優(yōu)選地施用至初生小豬。如上所述，本發(fā)明所述組合物特別適用于治療或預防人和/或動物(優(yōu)選地，初生哺乳動物)中的病癥，例如腹瀉、細菌感染、病毒感染或菌態(tài)不平衡。感染可以是或者包括消化道感染。這種感染可由任何細菌(例如escherichiacoli)單獨或與clostridiumperfringens或clostridiumdifficile相組合引起。其它誘發(fā)因素可包括salmonella,listeriamonocytogenes,staphyloccocusaureus。在一些實施方式中，所述病癥可選自由細菌感染(包括大腸桿菌癥)引起的腹瀉、clostridiumdifficile初生腹瀉、clostridiumperfringensa和c型。還可以治療鏈球菌性腦膜炎。感染可以由任何病毒引起，例如輪狀病毒、冠狀病毒、諾如病毒、腺病毒和/或星狀病毒，優(yōu)選地由輪狀病毒和/或冠狀病毒引起。還可以向患腹瀉或有患腹瀉風險的動物施用所述組合物，即使(尚)未證明(細菌和/或病毒)感染是所述腹瀉的誘發(fā)因素。有患腹瀉風險的動物可被視為那些居住在(或出生在)最近12個月、6個月、3個月或1個月期間已觀察到腹瀉的地區(qū)的動物。還可以在人和/或動物具有腹瀉和/或任何感染的任何癥狀之前施用本發(fā)明的組合物，以預防腹瀉和/或感染。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠檢測人和/或動物的腹瀉和/或任何感染的癥狀。例如，所述癥狀可以是水樣腹瀉、水樣/稀(糊狀)糞便、疼痛、輕度全身病征例如發(fā)熱、厭食和/或嗜睡、虛弱、一般身體狀況變差/惡化、體重減輕等。指示異常行為的任何其他癥狀可指示腹瀉和/或感染。如果人和/或動物沒有腹瀉和/或感染的癥狀，即健康的人和/或動物，也可以施用本發(fā)明的組合物。在一種優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物包含cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)或者由cect8700(aqsynrmh69)和cect8350(aqsynj59)組成，并且以包含5×108cfu每種菌株的2ml劑量向初生動物、優(yōu)選地初生小豬施用2次，一次在出生后的第一天，另一次在出生后的第二天(例如，施用第一劑后24小時)。組合物可用于治療初生小豬的方法中，特別是用于治療和/或預防腹瀉的方法中，腹瀉優(yōu)選地由感染(例如，細菌感染和/或病毒感染)引起。組合物還可以施用至健康的初生小豬(即沒有腹瀉和/或感染的癥狀的小豬)。此外，組合物還可以用于增加初生動物、優(yōu)選地初生小豬的體重和/或促進其生長的方法中。本發(fā)明人的結(jié)果證實了使用本發(fā)明所述產(chǎn)品和組合物的有利效果。如以下概念性實施例中的證據(jù)所示，死亡率百分比明顯低于僅使用常規(guī)抗生素管理的其它周(參見實施例)。因此，優(yōu)選地，本發(fā)明所述組合物被施用至同時未利用抗生素處理的動物。本發(fā)明還提供微生物，菌株cect8700(aqsynrmh69)。認為這種菌株具有益生性能，因此其在本文中可被稱為益生菌。本發(fā)明的發(fā)明人根據(jù)上述選擇標準分離了菌株。cect指的是西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心，而括號內(nèi)的aqsyn編號可被同義地用于每種菌株，其是由本發(fā)明的發(fā)明人分配給菌株的。檢驗了細菌并發(fā)現(xiàn)它們滿足上述標準a.到c.中的至少一種。當尋找具有根據(jù)本發(fā)明的有益性能的其它菌株時，任何菌株為了被選擇為適合本發(fā)明，滿足上述標準a.到c.中的至少一種就可以是足夠的。本發(fā)明還提供組合物，其包含至少1種(例如1種)，優(yōu)選地至少2種(例如2種)，更優(yōu)選地至少3種(例如3種)，更優(yōu)選地至少4種(例如4種)，或者至少5種(例如5種)，或者至少6種(例如6種)，或者至少7種(例如7種)，或者至少8種(例如8種)這些菌株。認為不同菌株在腸中有不同功能，因此不同菌株可一起作用從而提供有益效果。本發(fā)明的項目(i)1.組合物，其至少包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。2.根據(jù)項目1所述的組合物，其另外包含至少一種微生物菌株，其中每種另外的菌株均具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的至少一種下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。3.根據(jù)項目1-2之任一所述的組合物，其中所述至少一種另外的菌株選自屬于lactobacillus、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的菌株。4.根據(jù)項目1-3之任一所述的組合物，其中所述組合物另外包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株。5.根據(jù)項目4所述的組合物，其中所述組合物包含兩種微生物菌株，且其中所述兩種微生物由保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株和保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株組成。6.根據(jù)項目2-5之任一所述的組合物，其中兩種菌株在所述組合物中以約1:2-2:1的以菌落形成單位(cfu)表示的比例存在。7.根據(jù)項目6所述的組合物，其中兩種菌株在所述組合物中以約1:1的以菌落形成單位(cfu)表示的比例存在。8.根據(jù)項目1-7之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株無抗生素抗性。9.根據(jù)項目1-8之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在ph＝3.5下孵育3小時期間能夠基本保持相同的生存力。10.根據(jù)項目1-9之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在0.45％膽汁提取物存在下孵育4小時期間能夠基本保持相同的生存力。11.根據(jù)項目1-10之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的所有下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。12.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物，其用于處理人和/或動物的方法中。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其用于處理動物的方法中。14.用于處理人或動物的方法中的組合物，所述組合物包含屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物的混合物，并任選地包含至少一種屬于lactobacillus、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。15.用于處理人或動物的方法中的組合物，所述組合物包含屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物的混合物，并任選地包含至少一種屬于lactobacillus(除了以下微生物：cect8347(aqsynj12)和cect8349(aqsynj55)之外)、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。16.用于處理人或動物的方法中的組合物，所述組合物包含屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物的混合物，并任選地包含至少一種屬于lactobacillus(除了屬于lactobacillusfermentum和lactobacillusmucosaei種的微生物之外)、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。17.根據(jù)權(quán)利要求12-16之任一使用的組合物，其中所述微生物的混合物由屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物組成。18.根據(jù)項目12-17之任一使用的組合物，其中至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的至少一種下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。19.根據(jù)項目12-18之任一使用的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株無抗生素抗性。20.根據(jù)項目12-19之任一使用的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在ph3.5下孵育3小時期間能夠基本保持相同的生存力。21.根據(jù)項目12-20之任一使用的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在0.45％膽汁提取物存在下孵育4小時期間能夠基本保持相同的生存力。22.根據(jù)項目12-21之任一使用的組合物，其中在出生后的頭30天內(nèi)向人或動物施用所述組合物。23.根據(jù)項目22使用的組合物，其中在出生后的頭14天內(nèi)向人或動物施用所述組合物。24.根據(jù)項目23使用的組合物，其中在出生后的頭7天內(nèi)向人或動物施用所述組合物。25.根據(jù)項目24使用的組合物，其中在出生后的頭2天內(nèi)向人或動物施用所述組合物。26.根據(jù)項目12-25之任一使用的組合物，其中所述方法用于治療或預防腹瀉。27.根據(jù)項目26使用的組合物，其中所述腹瀉是由感染，例如細菌感染和/或病毒感染引起的，優(yōu)選地是由細菌感染引起的。28.根據(jù)項目12-27之任一使用的組合物，其中所述方法用于處理suina亞目的動物、狗、貓、馬、牛、禽類、綿羊和/或山羊。29.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-28之任一使用的組合物，其中所述組合物額外包含至少一種益生元產(chǎn)品。30.根據(jù)項目29所述的組合物，其中所述至少一種益生元產(chǎn)品選自下列化合物和組合物：β-葡聚糖、甘露寡糖、菊粉、寡果糖、半乳寡糖(gos)、乳果糖、低聚乳果糖、半乳三糖、果寡糖(fos)、纖維二糖、纖維糊精、環(huán)糊精、麥芽糖醇、乳糖醇、葡糖基蔗糖、維生素e或其變體(其中所述變體選自α、β、γ、δ-生育酚、生育三烯酚和生育單烯酚)，其中甘露寡糖、β-葡聚糖和/或菊粉是優(yōu)選的。31.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-30之任一使用的組合物，其中所述組合物用于經(jīng)口施用。32.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-31之任一使用的組合物，其中所述組合物是凍干的、液體的或霧狀形式。33.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-32之任一使用的組合物，其中所述組合物以劑量形式被提供，其中每劑包含約109個菌落形成單位(cfu)。34.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-33之任一使用的組合物，其中所述組合物以一個單劑量被施用。35.根據(jù)項目34所述的組合物，其中在出生后的頭48小時內(nèi)施用所述組合物。36.根據(jù)項目35所述的組合物，其中在出生后的頭24小時內(nèi)施用所述組合物。37.根據(jù)項目36所述的組合物，其中在出生后馬上施用所述組合物。38.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-33之任一使用的組合物，其中所述組合物以2個劑量被施用。39.根據(jù)項目38所述的組合物，其中在出生后的頭24小時內(nèi)施用第一劑且在隨后的24小時內(nèi)施用第二劑。40.根據(jù)項目39所述的組合物，其中只有動物和/或人顯示出腹瀉和/或感染癥狀(例如，水樣腹瀉、水樣/稀(糊狀)糞便、疼痛和/或輕度全身病征例如發(fā)熱、厭食和/或嗜睡、虛弱、一般身體狀況變差/惡化、體重減輕等)時才施用所述第二劑。41.根據(jù)項目1-11之任一所述的組合物或者根據(jù)項目12-40之任一使用的組合物，其中所述組合物被用于治療或預防細菌感染，例如由細菌感染(包括大腸桿菌癥)引起的腹瀉，clostridiumdifficile初生腹瀉，clostridiumperfringensa和c型。42.保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。本發(fā)明的項目(ii)1.組合物，其至少包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。2.根據(jù)項目1所述的組合物，其另外包含至少一種微生物菌株，其中每種另外的菌株均具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的至少一種下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。3.根據(jù)項目2所述的組合物，其中所述至少一種另外的菌株選自屬于lactobacillus、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的菌株。4.根據(jù)項目1-3之任一所述的組合物，其中所述組合物另外包含保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株。5.根據(jù)項目4所述的組合物，其中所述組合物包含兩種微生物菌株，且其中所述兩種微生物為保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株和保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8350(aqsynj59)的菌株。6.根據(jù)項目5所述的組合物，其中兩種菌株在所述組合物中以2:1-1:2的比例(以菌落形成單位(cfu)表示)存在。7.根據(jù)項目1-6之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株無抗生素抗性。8.根據(jù)項目1-7之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在ph3.5下孵育3小時期間能夠基本保持相同的生存力。9.根據(jù)項目1-8之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株在0.45％膽汁提取物存在下孵育4小時期間能夠基本保持相同的生存力。10.根據(jù)項目1-9之任一所述的組合物，其中所述組合物中所包含的至少一種菌株、優(yōu)選地所有菌株具有由通過菌苔斑點試驗所測定的抑制區(qū)證明的所有下述抗微生物活性：(i)對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；(ii)對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；(iii)對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；(iv)對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。11.根據(jù)項目1-10之任一所述的組合物，其用于處理動物和/或人的方法中。12.用于處理動物和/或人的方法中的組合物，所述組合物包含屬于lactobacillusplantarum和lactobacillusreuteri種的微生物的混合物，并任選地包含至少一種屬于lactobacillus(除了微生物lactobacillusfermentumcect8347(aqsynj12)和lactobacillusmucosaecect8349(aqsynj55)之外)、leuconostoc、pediococcus、lactococcus、streptococcusaerococcus、carnobacterium、enterococcus、oenococcus、sporolactobacillus、tetragenococcus、vagococcus和/或weisella屬的微生物。13.根據(jù)項目11-12之任一使用的組合物，其中所述方法用于治療或預防腹瀉。14.根據(jù)項目1-10之任一所述的組合物或者根據(jù)項目11-13之任一使用的組合物，其中在出生后的頭48小時內(nèi)施用至少一劑所述組合物。15.保藏在西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為cect8700(aqsynrmh69)的菌株。實施例實施例1材料和方法mrs培養(yǎng)基：根據(jù)如下的獲自西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心(cect；www.cect.org)的配方制備mrs培養(yǎng)基配方：蛋白胨10.0g，牛肉提取物10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20.0g，檸檬酸銨2.00g，乙酸鈉5.00g，mgso4.7h2o0.20g，mnso4.h2o0.05g，k2hpo42.00g，[瓊脂粉末(僅用于固體培養(yǎng)基)15g]，蒸餾水1l。bhi(腦心浸液)：根據(jù)如下的獲自西班牙典型培養(yǎng)物保藏中心(cect；www.cect.org)的配方制備培養(yǎng)基配方：牛腦浸出物固體12.5g，牛心浸出物固體5.0g，示蛋白胨10.0g，葡萄糖2.0g，nacl5.0g，hna2po42.5g，蒸餾水1l，[瓊脂粉末(僅用于固體培養(yǎng)基)15g]?？股靥幚恚旱湫偷?，每個豬場用抗生素和可能地鐵補充劑處理初生小豬。每個豬場對它們的動物一般有不同的“標準”處理(它們通常在出生時注射抗生素劑和鐵補充劑)。在下述實驗中，使用各個農(nóng)場的標準處理。偶爾出現(xiàn)腹瀉、跛行、呼吸系統(tǒng)癥狀和許多其它事實時通常還每天使用抗生素，這在小豬中沒有完全確立的流程。實施例1a:菌株來源如下所述分離和鑒定細菌菌株。從小豬腸道的腸壁洗滌物中分離cect8350(aqsynj59)和cect8700(aqsynrmh69)細菌菌株。使樣品在deman,rogosa,sharpe(mrs)瓊脂平板上在37℃下有氧和厭氧生長24小時，分離革蘭氏陽性且過氧化氫酶陰性的不同形態(tài)學菌落。所有菌落都屬于細菌菌株。如berthier和ehrlich,1998.femsmicrobiologyletters161:97-106所述，使用靶向16s/23srrna間隔區(qū)的pcr引物，通過pcr擴增每種分離的菌株。擴增和電泳之后，純化并測序明顯區(qū)分的條帶。通過測序，菌株被分配到細菌物種。1.1表征并選擇菌株1.lactobacillusplantarum(aqsynj59)2.lactobacillusreuteri(aqsynrmh69)遵循上述“體外選擇試驗”下的標準a.到c.的體外試驗揭示出2種具有特別有益性能的菌株。a.對不同病原體的抑制：所選擇的菌株顯示出通過以下抑制區(qū)中的至少一種證明的抗微生物活性：對于salmonella，抑制區(qū)為10mm或更大；對于listeriamonocytogenes，抑制區(qū)為9mm或更大；對于staphyloccocusaureus，抑制區(qū)為9mm或更大；對于escherichiacoli，抑制區(qū)為10mm或更大。aqsynj59和aqsynrmh69的結(jié)果列舉如下。從上表中可以看出：來自小豬腸道的所選菌株滿足上述選擇標準a.到c.。b.ph耐受性：兩種菌株在ph＝3.5下孵育3小時期間均能夠基本保持相同的生存力。c.膽汁鹽耐受性：兩種菌株在0.45％膽汁提取物存在下孵育4小時期間均能夠基本保持相同的生存力。此外，以上鑒定的菌株均無抗生素抗性。對以上菌株(aqsynj59和aqsynrmh69)進行旨在評估抗生素抗性的最低抑制濃度(mic)體外試驗。被評估的抗生素如下：氨芐青霉素、萬古霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、克林霉素、四環(huán)素和氯霉素。被用于評估本發(fā)明所述菌株的抗生素抗性的微生物截取值在"guidanceontheassessmentofbacterialsusceptibilitytoantimicrobialsofhumanandveterinaryimportance",efsa動物飼料添加劑和產(chǎn)品或物質(zhì)小組(feedap),歐洲食品安全局(efsa),帕爾馬,意大利.efsajournal2012；10(6):2740中被定義。每種細菌的mic結(jié)果與efsa截取值抗生素抗性的比較*：敏感**：耐受lsm＝由調(diào)節(jié)至ph6.7的mrs培養(yǎng)液(10％)和ist(oxoid實驗室)培養(yǎng)液(90％)的混合物組成的lab敏感性試驗培養(yǎng)基。這兩種菌株均可被視為不耐受efsa推薦的抗生素，因此它們可被用作“食品生產(chǎn)”動物飼料的添加劑。實施例1b:制備根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物如說明書中所述并且如上文所證明的滿足標準a.到c.的菌株cect8350(aqsynj59)和cect8700(aqsynrmh69)被包含在益生菌組合物中，并在田間試驗中進行檢測。通過發(fā)酵使菌株aqsynj59和aqsynrmh69中的每一種在mrs培養(yǎng)液中生長，收獲并凍干。通過菌落計數(shù)核實終產(chǎn)物的生存力。制備含這些菌株中全部2種的組合物。制備下列組合物：組合物：(2ml中5×108cfu每種菌株)組分每2ml劑的量aqsynj59:lactobacillusplantarum0.0024gaqsynrmh69:lactobacillusreuteri0.0052g所有菌株均以凍干形式被使用。通過混合相同細菌量(通過菌落計數(shù)所測定(以上顯示以g計的各個值))的將被并入組合物中的每種菌株來制備組合物，然后用等滲鹽水溶液將由此獲得的組合物再水化，從而獲得2ml劑中含109cfu(其中所含所有菌株的總數(shù))的最終組合物。實施例1c:田間試驗在西班牙北部的養(yǎng)豬場發(fā)現(xiàn)了初生小豬的腹瀉，其中對兩種菌株產(chǎn)品進行檢測。農(nóng)場基本生產(chǎn)單位是“出生單位”。每個出生單位由24窩組成。在實驗中，在標準農(nóng)場條件下處理12窩(對照組，需要使用抗生素和營養(yǎng)組合物來處理窩中已顯示腹瀉跡象的小豬)。另外12窩用單獨的阿曲龍益生菌組合物處理，在腹瀉情況下不另外使用抗生素(所有小豬均在出生后的第一天(在出生后馬上)經(jīng)口施用一劑上述組合物(2ml)。在出生后的第二天(施用第一劑24小時后)僅向那些顯示腹瀉癥狀的組的動物施用第二劑(2ml)組合物))。接受益生菌組合物的動物在任何時候都不接受抗生素(但如果它們顯示腹瀉癥狀，它們確實接受了與標準處理動物(對照組)相同的飲食中加入營養(yǎng)物的處理)。動物從出生到生命的第二20天受到控制。該試驗中使用的益生菌組合物是如上所述的含有109cfu/2ml劑量(5x108cfu每種菌株)的兩種lactobacillus菌株aqsynj59:lactobacillusplantarum和aqsynrmh69:lactobacillusreuteri的混合物。對照組的處理是使用抗生素，即肌內(nèi)注射阿莫西林，劑量為5mg/kg，在癥狀觀察期間注射。這種對照組中的腹瀉小豬在顯示腹瀉期間每天接受一次這種處理，而接受阿曲龍益生菌組合物(如上所述)的組中的腹瀉動物在任何時候都不用抗生素處理。實驗設(shè)計a.每窩的活產(chǎn)數(shù)b.出生后死亡數(shù)c.腹瀉：以每窩為基礎(chǔ)計數(shù)，利用以下標準進行評分：0.-少于<25％的動物被感染：肛周區(qū)域沒有不干凈動物的明顯跡象，且在地板和墻壁上沒有觀察到軟便。1.-一些腹瀉：偶爾在窩中觀察到一些不干凈的動物，地板上有一些軟便。2.-大多數(shù)動物(>75％)顯示出腹瀉和改變的身體狀態(tài)，不干凈的動物和地板上的軟便。d.處理：每窩的小豬及其接受處理的天數(shù)(抗生素、營養(yǎng)物、碳、補液等)。結(jié)果總結(jié)*每窩處理指數(shù)＝(處理的窩×處理天數(shù)/12)結(jié)論：所檢測的組合物在用于預防和治療小豬腹瀉方面比標準實踐要好：a)完全替代了對抗生素的需要b)減少了對非抗生素輔助治療的需要c)降低了總體腹瀉的發(fā)病率d)降低了嚴重腹瀉的發(fā)病率e)降低了由腹瀉引起的死亡發(fā)生率f)提高了斷奶時的平均重量g)以非常顯著的方式降低了商業(yè)開發(fā)中標準管理條件下腹瀉流行病的經(jīng)濟影響(每只動物的公斤數(shù)增加、死亡減少、治療成本降低、環(huán)境影響減小、處理時間減少)。實施例2實施例2的材料和方法以及菌株來源與以上在實施例1(“材料和方法”和“實施例1a：菌株來源”)中所述的相同。實施例2a:制備根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物如說明書中所述并且如上文所證明(在“實施例1a：菌株來源”中)的滿足標準a.到c.的菌株cect8350(aqsynj59)和cect8700(aqsynrmh69)被包含在益生菌組合物中，并在田間試驗中進行檢測。通過發(fā)酵使菌株aqsynj59和aqsynrmh69中的每一種在mrs培養(yǎng)液中生長，收獲并凍干。通過菌落計數(shù)核實終產(chǎn)物的生存力。制備含這些菌株中全部2種的組合物。制備下列組合物(“aq1202-piglife”或“piglife”或“aq1202”)：補充飼料：產(chǎn)品(被命名為“aq1202-piglife”，也稱為“piglife”或“aq1202”)由兩種酸性乳酸菌和不同飼料物質(zhì)的凍干混合物組成，以限定初生小豬的經(jīng)口懸浮液。在阿曲龍設(shè)備中混合產(chǎn)品，然后包裝在100毫升小瓶中。這種制品旨在于臨使用前在100ml輸注溶液中洗脫。通過混合相同細菌量(通過菌落計數(shù)所測定(以上顯示以cfu計的各個值))的將被并入組合物中的每種菌株來制備組合物，然后用等滲鹽水溶液將由此獲得的各種組合物再水化，從而獲得2ml劑中含109cfu(其中所含所有菌株的總數(shù))的最終組合物。實施例2b:田間試驗該實施例的目的是評估：當出生后的小豬特別容易發(fā)生菌態(tài)不平衡和腹瀉時，根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物在所述小豬中的用途。在具有各種(已知或未知)病因的腹瀉散發(fā)性發(fā)作的商業(yè)農(nóng)場(共5個)中檢測兩種菌株產(chǎn)品(“aq1202-piglife”或“piglife”)。商業(yè)農(nóng)場位于西班牙的不同位置(aragón、castillayleón、)。它們均具有集約化養(yǎng)豬系統(tǒng)，包括授精程序、懷孕母豬的管理、產(chǎn)小豬和斷奶單元。其中一些包括動物被轉(zhuǎn)移到肥育單元前的過渡畜欄。實驗經(jīng)官方許可進行，包括在田間試驗中使用實驗性畜牧學添加劑。動物組：·益生菌處理組(aq1202-piglife)·對照組(無處理-無操作)。產(chǎn)小豬之后(生命第一天)，處理組中的所有小豬均經(jīng)口接受2ml劑量的益生菌組合物aq1202-piglife(aq1202)。從產(chǎn)小豬到第20天記錄數(shù)據(jù)。評估以下內(nèi)容：·評估畜牧學參數(shù)-出生小豬的數(shù)目：總出生和出生存活(死亡率-斷奶小豬)-小豬重量(如有可能)-糞便評估·0：正常糞便·1：輕度腹瀉；窩中出現(xiàn)一些腹瀉病例·2：嚴重腹瀉；大多數(shù)小豬受腹瀉影響-處理評估：記錄處理的窩和母豬。農(nóng)場1-4農(nóng)場觀察的窩總和農(nóng)場124農(nóng)場238農(nóng)場3.158農(nóng)場3.258農(nóng)場461在農(nóng)場3中，觀察到兩批不同的產(chǎn)小豬窩：實驗1：2014年10月(農(nóng)場3.1)實驗2：2015年5月(農(nóng)場3.2)這些研究中記錄了135個對照和104個經(jīng)piglife處理的窩的數(shù)據(jù)。從產(chǎn)小豬至第20天，共觀察到了1710個對照和1136只經(jīng)處理的小豬。在農(nóng)場1-4中，發(fā)現(xiàn)腹瀉響應(yīng)抗生素，即細菌來源的腹瀉。-死亡率(％)(總死亡率，包括腹瀉和擠死的(crushed)小豬)-腹瀉(參見圖2)*僅一窩具有長達兩天的腹瀉-處理農(nóng)場1用阿莫西林+林可霉素(lincomicin)、對因治療(母體)和泰妙菌素+粘菌素(colimutina，spveterinaria)+經(jīng)口輸液、在小豬中對癥治療來處理受影響的窩。農(nóng)場2對于母體(恩氟沙星通過乳釋放到小豬)、小豬或者二者使用的抗生素是恩氟沙星。向受影響的小豬施用經(jīng)口補液和礦物碳。農(nóng)場3在窩內(nèi)的腹瀉病例中，用恩氟沙星(alsir，norvet)處理受影響的小豬。用馬波沙星(marbofloxacin)(marbocyl，vétoquinol)處理母體?？吕顾?colimicin)+輸注溶液用于有癥狀的小豬。農(nóng)場4用恩氟沙星處理呈現(xiàn)腹瀉的窩中的母豬。如果有必要，處理可以持續(xù)三天。作為預防，在生命的第一天，向該農(nóng)場中的所有小豬應(yīng)用一劑頭孢噻呋(naxcel，zoetis)。施用劑量如下：阿莫西林：15mg/kg，肌內(nèi)(im)注射林可霉素：飲用水中5-10mg/kg恩氟沙星：2.5mg/kg肌內(nèi)注射馬波沙星：2mg/kg肌內(nèi)注射柯利霉素：0.5克/窩(飲用水)頭孢噻呋：5mg/kg，肌內(nèi)注射colimutina：0.156mg粘菌素甲磺酸鈉+12.35mg延胡索酸泰妙菌素/kg；0.1ml/kg肌內(nèi)注射。結(jié)果示于下表和圖3中：*僅一窩被處理一次農(nóng)場1-4的結(jié)論從上表和圖2可以看出：根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物(aq1202)降低了具有持續(xù)性腹瀉發(fā)作(在農(nóng)場1-4中由細菌感染引起)的農(nóng)場中的死亡率。這種組合物的施用減少了對處理(包括抗生素)的需要。上表和圖3顯示了采用根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物(aq1202)處理的窩(包括用抗生素處理)的百分比降低。農(nóng)場5在農(nóng)場5，腹瀉沒有細菌來源。腹瀉不響應(yīng)抗生素處理。最后，根據(jù)農(nóng)場主所報告的診斷，診斷出輪狀病毒感染是初生小豬腹瀉的原因。該實驗在位于aragón(西班牙)的具有750頭種母豬群體的商業(yè)豬場進行。自2014年1月初以來，農(nóng)場受到持續(xù)發(fā)作的初生小豬腹瀉的影響，截止該年5月份受影響窩的比率達到95％。死亡率不斷增加直至影響超過35％的活產(chǎn)小豬。大量使用針對enterobacteriaceae和clostridium的抗生素處理持續(xù)超過6個月，但幾乎沒有結(jié)果。傳染性胃腸炎和流行性豬腹瀉(豬流行性腹瀉，冠狀病毒)被排除為腹瀉病因之后，臨床診斷為豬輪狀病毒。因此，農(nóng)場5中的腹瀉是由病毒感染(豬輪狀病毒感染)引起的。通過外部診斷實驗室(gsp實驗室，加泰羅尼亞，西班牙)的pcr診斷證實了輪狀病毒感染。由于在畜群中觀察到高腹瀉率且第一次處理的成功率低，因此農(nóng)場主決定從2014年5月至12月向所有小豬系統(tǒng)地施用所述產(chǎn)品(根據(jù)本發(fā)明的組合物，aq1202)。自引入所述處理之后，死亡率降至5％，腹瀉發(fā)病率降至窩的20％。結(jié)果如下所示。處理：在腹瀉的情況下：·carbovet(產(chǎn)品是由專門選擇的法國橡木制成的熱結(jié)構(gòu)(非活性)植物炭)。·sueromin(腹膜內(nèi)補液與高滲輸注；組合物：25g葡萄糖，25g果糖，2.62g氯化物，1.57g鈉，80mg鉀，20mg鎂，40mg鈣；適量賦形劑，1000ml)對所有動物：·aq1202-piglife1/5-30/6：每只小豬1-2劑1/7-31/12：每只小豬3劑·鐵：在生命第3-8天中的任一天，每只小豬1劑(約150mg，肌內(nèi))。該研究中報告了從2014年5月至12月對983窩(從2014年5月至12月)的觀察結(jié)果(見下表)。用aq1202-piglife(根據(jù)本發(fā)明的組合物)處理每窩中的所有小豬。*carbovet和/或sueromin**一次處理＝1劑carbovet和/或sueromincarbovet：10g/動物，經(jīng)口sueromin：20-80ml/kg，經(jīng)腹膜內(nèi)或皮下向窩內(nèi)的所有小豬施用益生菌組合物。經(jīng)處理窩的百分比與在動物中觀察到的腹瀉直接相關(guān)，在連續(xù)施用根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物(aq1202-piglife)期間，其從95％降至5％。僅向虛弱和腹瀉動物施用carbovet和sueromin(對癥治療)。觀察到斷奶小豬的百分比呈上升趨勢。農(nóng)場主觀察到：自施用益生菌組合物以來，每窩多出約0.7％斷奶小豬。當前第1頁12