益生元類囊體組合物的制作方法【專利說(shuō)明】益生元類囊體組合物發(fā)明領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及益生元（prebiotics)領(lǐng)域，并且特別涉及刺激哺乳動(dòng)物消化系統(tǒng)中益生細(xì)菌（probioticbacteria)、典型地是乳酸細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或活性的組合物。[0002]背景[0003]益生細(xì)菌在本領(lǐng)域中是公知的，并且其健康益處也記載于文獻(xiàn)中。為了增加益生細(xì)菌的益處，它們可以補(bǔ)充有促進(jìn)細(xì)菌的益生元物質(zhì)。益生元是對(duì)微生物群（microbiota)具有有益效果的非細(xì)菌產(chǎn)物。它們作用為結(jié)腸微生物群的肥料，由此增強(qiáng)有益的共生生物體，如雙歧桿菌屬（Bifidobacterium)和乳桿菌屬（Lactobacillus)的生長(zhǎng)。益生元典型地是選擇性發(fā)酵的成分，其允許對(duì)宿主舒適和健康有益的胃腸微生物群（也稱為腸道微生物群或共生菌群）的組成和/或活性中的特定變化。[0004]促進(jìn)益生細(xì)菌，如典型地乳酸細(xì)菌，例如，乳桿菌屬和雙歧桿菌屬，可以對(duì)于紊亂的腸道微生物群有關(guān)的疾病的治療有益。例如，抗生素相關(guān)的腹瀉、旅行者腹瀉、小兒腹瀉和腸易激綜合征（irritablebowelsyndrome)是已知與紊亂的腸道微生物群相關(guān)的病癥。此外，益生元試劑的使用已經(jīng)與減少的結(jié)腸直腸癌的危險(xiǎn)有關(guān)。此外，共生菌群的紊亂可能由于多種其他因素而發(fā)生，包括，但不限于，放射療法或偶然輻射，抗生素和其他影響細(xì)菌生長(zhǎng)的藥劑的應(yīng)用，腸道疾病，如谷蛋白不耐受性。此類不需要的變化可能引起疾病和紊亂的免疫功能，并且可以通過(guò)使用益生元而進(jìn)行調(diào)整，以便能夠獲得共生菌群和宿主二者的正常生理學(xué)生長(zhǎng)和功能。[0005]因此，可以通過(guò)促進(jìn)益生細(xì)菌而治療或預(yù)防有益腸道細(xì)菌群紊亂的病癥。[0006]存在龐大種類的潛在的益生元物質(zhì)。例如，EP1056358Bl中描述了口服攝入在益生元食品中的特定的單糖刺激人結(jié)腸中有益細(xì)菌的生長(zhǎng)。然而，需要發(fā)現(xiàn)易于制備并且安全攝入的具有附加益處的新的改善的益生元物質(zhì)。[0007]概述[0008]因此，本發(fā)明優(yōu)選地尋找克服上文指出的本領(lǐng)域中的單個(gè)或任意組合的缺點(diǎn)，并且通過(guò)提供易于制備并且安全攝入的具有附加益處的新的改善的益生元組合物而至少解決上文提及的問(wèn)題。[0009]按照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供給包含分離的、富集的類囊體或其部分的組合物作為益生元試劑的非治療性應(yīng)用。所述應(yīng)用典型地用于促進(jìn)哺乳動(dòng)物腸道（如回腸和盲腸）中的乳酸細(xì)菌，如乳桿菌和雙歧桿菌。[0010]按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供用于治療或預(yù)防與紊亂腸道微生物群相關(guān)的病癥的包含分離的、富集的類囊體或其部分的組合物，其中所述應(yīng)用包括對(duì)哺乳動(dòng)物，如人口服給藥，以促進(jìn)所述哺乳動(dòng)物腸道（如回腸和盲腸，例如回腸）中的乳酸細(xì)菌，如乳桿菌和雙歧桿菌。[0011]按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供包含分離的、富集的類囊體或其部分和益生細(xì)菌的組合物。[0012]按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供治療哺乳動(dòng)物中與紊亂的腸道微生物群相關(guān)的病癥的方法，通過(guò)口服施用包含分離的、富集的類囊體或其部分的組合物進(jìn)行。[0013]本發(fā)明的其他有利特征在從屬權(quán)利要求中定義。另外，在本文公開(kāi)的實(shí)施方案中詳細(xì)描述本發(fā)明的有利特征。[0014]附圖簡(jiǎn)述[0015]通過(guò)下述本發(fā)明的實(shí)施方案的描述，參考附圖，本發(fā)明能夠具有的這些和其他方面、特征和優(yōu)點(diǎn)將是清楚的，并得以闡明，在所述附圖中，[0016]圖1是顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案的血漿胰島素的濃度（pM)的圖表；[0017]圖2和3是顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案的乳桿菌屬存活計(jì)數(shù)（CFU/g組織）的圖表；[0018]圖4是顯示按照實(shí)施方案的細(xì)菌存活計(jì)數(shù)（CFU/g組織）的圖表；和[0019]圖5和6是顯示按照本發(fā)明的實(shí)施方案的T-RFLP數(shù)據(jù)的主要成分分析（PCA)的圖表。[0020]詳述[0021]為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明，以下參考附圖更詳細(xì)地描述本發(fā)明的一些實(shí)施方案。然而，本發(fā)明可以以多種不同的形式體現(xiàn)，并且不應(yīng)該解釋為局限于本文所述的實(shí)施方案。相反，提供這些實(shí)施方案，以使本公開(kāi)內(nèi)容全面和完整，并且將完全向本領(lǐng)域技術(shù)人員傳達(dá)本發(fā)明的范圍。所述實(shí)施方案不限制本發(fā)明，而是本發(fā)明僅受附上的專利權(quán)利要求的限制。此外，在附圖示例的具體的實(shí)施方案的詳細(xì)描述中所用的術(shù)語(yǔ)不意欲限制本發(fā)明。[0022]類囊體可以從綠色葉子的葉綠體膜提取，并且包含蛋白、脂質(zhì)和色素（例如，葉綠素和類胡蘿卜素）。在一些研宄中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其在人和動(dòng)物受試者中都能增加飽食感、減少饑餓信號(hào)并且促進(jìn)體重減輕（參見(jiàn)WO2006/132586和WO2010/008333以及其它文獻(xiàn)）。促進(jìn)飽食感的作用以兩種方式解釋：類囊體與飲食三酰甘油和脂肪酶/共脂肪酶復(fù)合物相互作用，并且結(jié)果引起物理阻礙（physicalhindrance)，由此延長(zhǎng)對(duì)飲食脂肪的消化以及腸壁對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的攝取。[0023]類囊體由機(jī)體消化，因此可以使用它們，而沒(méi)有任何毒性作用。然而，類囊體較其他細(xì)胞區(qū)室（如線粒體）消化更緩慢，這是有利的。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到，益生元試劑是允許對(duì)宿主的舒適和健康賦予益處的胃腸微生物群的組成和/或活性中的特異性變化的成分。[0024]本發(fā)明人在大鼠中研宄了類囊體對(duì)腸道微生物群的作用和葡萄糖耐量測(cè)試后的結(jié)果。他們令人驚訝地發(fā)現(xiàn)類囊體調(diào)節(jié)腸道微生物群（參見(jiàn)圖2-4)，因此作為益生元試劑行使功能。此外，他們發(fā)現(xiàn)類囊體增加胰島素敏感性（參見(jiàn)圖1)。[0025]簡(jiǎn)言之，將Sprague-Dawley大鼠分成兩組，分別喂飼正常大鼠食物的富含類囊體的飲食或?qū)φ诊嬍?0天。10天后，進(jìn)行葡萄糖耐量測(cè)試，與對(duì)照相比，在喂飼類囊體的大鼠中產(chǎn)生顯著更低的胰島素濃度（參見(jiàn)圖1)。細(xì)菌分析表明，添加類囊體誘導(dǎo)了回腸中乳桿菌的顯著增加，這得到了腸道樣品的細(xì)菌培養(yǎng)和qPCR二者的證實(shí)。并且，通過(guò)qPCR分析在類囊體組中觀察到顯著減少量的糞便乳桿菌，這表明在補(bǔ)充類囊體10天后，乳桿菌可能更加粘附腸黏膜。[0026]其他細(xì)菌分析表明，與對(duì)照相比，在類囊體組中，結(jié)腸、盲腸和糞便中革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌顯著減少。當(dāng)比較類囊體和對(duì)照動(dòng)物時(shí)，通過(guò)末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（T-RFLP)的主要成分分析進(jìn)行的糞便微生物群分析證明獨(dú)特的微生物群體。綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)表明類囊體可以調(diào)節(jié)腸道微生物群，由此作為一種益生元試劑行使功能。這又可能對(duì)于體重和代謝病癥的調(diào)節(jié)是重要的。[0027]因此，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)給哺乳動(dòng)物口服施用包含類囊體或其部分的組合物增強(qiáng)腸道益生菌群并且促進(jìn)乳酸細(xì)菌。包含分離的、富集的類囊體的組合物由此可以作為益生元試劑行使功能。此外，已經(jīng)表明不同益生菌菌株，特別是乳桿菌，可用于預(yù)防或治療受損的免疫功能，以及抗生素相關(guān)的腹瀉、旅行者腹瀉、小兒腹瀉和腸易激綜合征。[0028]按照一個(gè)實(shí)施方案，由此提供包含分離的、富集的類囊體或其部分的組合物，以促進(jìn)哺乳動(dòng)物腸道中的乳酸細(xì)菌，如乳桿菌屬和雙歧桿菌屬。所述哺乳動(dòng)物可以是人。典型地，口服施用所述組合物，以到達(dá)腸道。通過(guò)促進(jìn)腸道（尤其是回腸和盲腸，更優(yōu)選是回腸）中的乳酸細(xì)菌，可以預(yù)防或治療與紊亂的腸道微生物群相關(guān)的病癥，包括，但不限于，受損的免疫功能，以及抗生素相關(guān)的腹瀉、旅行者腹瀉、小兒腹瀉和腸易激綜合征。[0029]盡管分離的、富集的類囊體或其部分可以用于調(diào)節(jié)腸道微生物群，但是，按照一個(gè)實(shí)施方案，益生細(xì)菌包含在組合物中。通過(guò)包含益生細(xì)菌，可以提高對(duì)腸道微生物群的作用，并且補(bǔ)充已有的益生細(xì)菌。要包含在所述組合物中的益生細(xì)菌可以是雙歧桿菌屬，例如，嬰兒雙歧桿菌（Bifidobacteriuminfantis)，和乳桿菌屬，例如，胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum)〇[0030]分離和富集類囊體的一般原理在本領(lǐng)域中是已知的（參見(jiàn)PCT/SE2006/000676，W0/SE2009/000327和Emek，SC，SzilagyiA，AkerlundHE，等?（2010)Alargescalemethodforpreparationofplantthylakoidsforuseinbodyweightregulation(用于制備用于體重調(diào)節(jié)的植物類囊體的大規(guī)模方法）Preparbiochem&biotech40(1)，13-27.)〇[0031]典型地，所述組合物的類囊體由綠色葉子或綠藻富集。優(yōu)選地，類囊體由菠菜分離并富集。在將類囊體加入到組合物中之前，可以以某種方式濃縮類囊體，以使所述分離的、富集的類囊體的葉綠素含量為約8mg-150mg葉綠素/g。類囊體在組合物中的含量可以對(duì)應(yīng)于每克組合物lmg-75mg葉綠素的葉綠素含量。[0032]用于促進(jìn)腸道中的乳酸細(xì)菌，如乳桿菌屬和雙歧桿菌屬的組合物可以是食品或藥物。按照一個(gè)實(shí)施方案，所述組合物是口服的藥物或營(yíng)養(yǎng)保健組合物（nutraceuticalcomposition)，其包括含有類囊體的生理學(xué)耐受的水包油乳液。在這樣的實(shí)施方案中，類囊體的量為20-30wt.%，如約25wt.%。此外，油含量可以為20-30wt.%，如約25wt.%。所用的油可以是食品級(jí)的植物油，如油菜籽油、橄欖油、葵花籽油等。[0033]由于所述組合物可以以多種形式施用，所以，要施用的類囊體的每日劑量可能不同。作為指導(dǎo)原則，要施用的組合物的量可以以這樣的方式選擇，以使劑量與2.4mg-240mg類囊體/kg哺乳動(dòng)物體重的每日劑量相關(guān)。<當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 4