取代的4?苯基哌啶及其制備和用途的制作方法
本申請(qǐng)要求于2014年4月30日提交的第61/986,578號(hào)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。
在本申請(qǐng)中，某些出版物在括號(hào)中引用。這些出版物的完整引用可以在權(quán)利要求之前找到。這些出版物的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本申請(qǐng)，以便更充分地描述本發(fā)明所涉及的現(xiàn)有技術(shù)。
本發(fā)明由在國(guó)立衛(wèi)生研究院資助的基金號(hào)NS067594和NS074476的政府支持下進(jìn)行。政府對(duì)本發(fā)明有一定的權(quán)利。
背景技術(shù)：
年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是發(fā)達(dá)國(guó)家中失明的主要原因。據(jù)估計(jì)，全世界有6290萬(wàn)人患有最普遍的萎縮性(干性)AMD；其中800萬(wàn)是美國(guó)人。由于預(yù)期壽命延長(zhǎng)和目前的人口增長(zhǎng)，到2020年，這一數(shù)字預(yù)計(jì)將增長(zhǎng)三倍。目前沒(méi)有FDA批準(zhǔn)的干性AMD療法?？紤]到治療的缺乏和高流行性，用于干性AMD的藥物的開(kāi)發(fā)是非常重要的。臨床上，萎縮性AMD代表緩慢進(jìn)展的神經(jīng)退行性病癥，其中專門(mén)的神經(jīng)元(視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞)在稱為黃斑的視網(wǎng)膜的中心部分死亡(1)。組織病理學(xué)和臨床成像研究表明，干性AMD中的光感受器變性是由位于光感受器下方并為這些光感受神經(jīng)元細(xì)胞提供關(guān)鍵的代謝支持的視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)中的異常情況所引發(fā)。實(shí)驗(yàn)和臨床數(shù)據(jù)表明，RPE中細(xì)胞毒性自發(fā)熒光的脂質(zhì)-蛋白-類視黃醇聚集體(脂褐質(zhì))的過(guò)度累積是干性AMD的主要觸發(fā)因素(2-9)。除了AMD之外，脂褐素的顯著累積是斯特格氏病(STGD)的標(biāo)志，斯特格氏病是遺傳性青少年期發(fā)作的黃斑變性。RPE脂褐質(zhì)的主要細(xì)胞毒性成分是雙視黃酸吡啶鎓A2E(圖1)。其他細(xì)胞毒性的雙視黃酸類為isoA2E、atRAL di-PE和A2-DHP-PE(40,41)。A2E和其他脂褐質(zhì)雙視黃酸類(例如A2-DHP-PE，即A2-二氫吡啶-磷脂酰乙醇胺，atRALdi-PE，即全反式視黃醛二聚體-磷脂酰乙醇胺)的形成在感光細(xì)胞中以非酶促方式開(kāi)始，并被認(rèn)為是正常運(yùn)行的視循環(huán)的副產(chǎn)物。
A2E是全反式視黃醛與磷脂酰乙醇胺的縮合產(chǎn)物，并且如圖4所示，可以被認(rèn)為是正常運(yùn)行的視循環(huán)的副產(chǎn)物，所述縮合以非酶促的方式發(fā)生于視網(wǎng)膜中(10)。光誘導(dǎo)的11-順式視黃醛向其全反式形式的異構(gòu)化是介導(dǎo)光感知的信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一步。視循環(huán)是暴光后一連串的再生視色素(與視蛋白結(jié)合的11-順式視黃醛)的生化反應(yīng)。
由于細(xì)胞毒性雙視黃酸類在正常運(yùn)行的視循環(huán)過(guò)程中形成，所以對(duì)視循環(huán)的部分藥理學(xué)抑制可能提供一種治療干性AMD和以脂褐質(zhì)過(guò)度累積為特征的其他疾病的策略(25-27,40,41)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地為H、鹵素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的兩個(gè)或更多個(gè)不是H；
R6是H、OH或鹵素；且
B是取代或未取代的雜雙環(huán)，
其中當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為H、R2為CF3、R3為H、R4為CF3、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為H、R3為H、R4為F、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，則B不是
附圖說(shuō)明
圖1為一種視網(wǎng)膜脂褐質(zhì)的細(xì)胞毒性成分—雙視黃酸A2E的結(jié)構(gòu)。
圖2為一種視網(wǎng)膜脂褐質(zhì)的細(xì)胞毒性成分—雙視黃酸atRAL di-PE(全反式視黃醛二聚體-磷脂酰乙醇胺)的結(jié)構(gòu)。R1和R2是指各種脂肪酸組分。
圖3為一種視網(wǎng)膜脂褐質(zhì)的細(xì)胞毒性成分—雙視黃酸A2-DHP-PE的結(jié)構(gòu)。
圖4為視循環(huán)和A2E的生物合成。當(dāng)全反式視黃醛的一部分逃離視循環(huán)(黃色框)并與磷脂酰乙醇胺進(jìn)行非酶促反應(yīng)形成A2E前體(即A2-PE)時(shí)，A2E生物合成開(kāi)始。該循環(huán)是通過(guò)將血清視黃醇攝取到RPE(灰色框)得以保持。
圖5為RBP4-TTR-視黃醇復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)。四聚體的TTR顯示為藍(lán)色、淺藍(lán)色、綠色和黃色(大的畫(huà)框區(qū)域)。RBP顯示為紅色(未畫(huà)框區(qū)域)，視黃醇顯示為灰色(小的畫(huà)框區(qū)域)(28)。
圖6為一種視黃酸RBP4拮抗劑芬維A胺(即[N-(4-羥基-苯基)視黃酰胺，4HRP])的結(jié)構(gòu)。
圖7為用于表征破壞視黃醇誘導(dǎo)的RBP4-TTR相互作用的RBP4拮抗劑的基于HTRF的測(cè)定形式示意圖。
圖8為化合物81對(duì)Abca4-/-小鼠眼睛中雙視黃酸累積的治療效果(P＝0.006；非成對(duì)t-檢驗(yàn))。
圖9為化合物81處理的和溶媒處理的Abca4-/-小鼠中的血清RBP4水平。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了具有以下結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地為H、鹵素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的兩個(gè)或更多個(gè)不是H；
R6是H、OH或鹵素；且
B是取代或未取代的雜雙環(huán)，
其中當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為H、R2為CF3、R3為H、R4為CF3、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為H、R3為H、R4為F、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，則B不是
本發(fā)明還提供了具有以下結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中：
R1、R2、R3、R4和R5各自獨(dú)立地為H、鹵素、CF3或C1-C4烷基，
其中R1、R2、R3、R4或R5中的兩個(gè)或更多個(gè)不是H；
R6是H、OH或鹵素；且
B是取代或未取代的雜雙環(huán)，
其中當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為H、R2為CF3、R3為H、R4為CF3、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為H、R3為H、R4為F、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，則B不是
在一些實(shí)施方式中，所述化合物
其中當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為H、R2為CF3、R3為H、R4為CF3、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為H、R3為H、R4為F、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，則B不是
在一些實(shí)施方式中，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為H、R2為CF3、R3為H、R4為CF3、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為H、R3為H、R4為F、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為H、R3為F、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為CF3、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，或當(dāng)R1為Cl、R2為F、R3為H、R4為H、且R5為H時(shí)，則B不是
在一些實(shí)施方式中，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)：
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中
R1、R2、R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立地為H、Cl、F或CF3。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中
R1為CF3，R2為F，R3為F，R4為H，且R5為H；或
R1為CF3，R2為F，R3為H，R4為H，且R5為H；或
R1為CF3，R2為F，R3為H，R4為F，且R5為H；或
R1為CF3，R2為H，R3為F，R4為F，且R5為H；或
R1為CF3，R2為H，R3為H，R4為H，且R5為F；或
R1為CF3，R2為H，R3為F，R4為H，且R5為H；或
R1為CF3，R2為H，R3為H，R4為Cl，且R5為H；或
R1為CF3，R2為Cl，R3為H，R4為H，且R5為H；或
R1為H，R2為CF3，R3為H，R4為CF3，且R5為H；或
R1為Cl，R2為H，R3為H，R4為F，且R5為H；或
R1為Cl，R2為F，R3為H，R4為H，且R5為H。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下的結(jié)構(gòu)：
其中
α、β、χ和δ各自獨(dú)立地不存在或存在，并且當(dāng)存在時(shí)每個(gè)都是鍵；
X是C或N；
Z1是N；
Z2是N或NR7，
其中R7是H、C1-C4烷基或氧雜環(huán)丁烷；
Q是取代或未取代的5、6或7元環(huán)結(jié)構(gòu)。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中當(dāng)α存在時(shí)，那么Z1和Z2為N，X為N，β存在，且χ和δ不存在；以及
當(dāng)α不存在時(shí)，那么Z1為N，Z2為N-R7，X為C，β和δ存在，且χ不存在。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中
n是0-2的整數(shù)；
α、β、χ、δ和各自獨(dú)立地不存在或存在，并且當(dāng)存在時(shí)各自是鍵；
Z1是N；
Z2是N或N-R7，
其中R7是H、C1-C10烷基或氧雜環(huán)丁烷；
X是C或N；和
Y1、Y2、Y3和每次出現(xiàn)的Y4各自獨(dú)立地為CR8、CH2或N-R9，
其中
R8是H、鹵素、OCH3、CN或CF3；以及
R9是H、CN、氧雜環(huán)丁烷、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6環(huán)烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6雜芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中
n為0；
R7是H、C1-C4烷基或氧雜環(huán)丁烷；
Y1和Y3各自為CH2；以及
Y2是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧雜環(huán)丁烷、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6環(huán)烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6雜芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中
n為1；
R7是H、C1-C4烷基或氧雜環(huán)丁烷；
Y1、Y2和Y4各自為CH2；且
Y3是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧雜環(huán)丁烷、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6環(huán)烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6雜芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中
n為1；
R7是H、C1-C4烷基或氧雜環(huán)丁烷；
Y1、Y3和Y4各自為CH2；以及
Y2是N-R9，
其中
R9是H、CN、氧雜環(huán)丁烷、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、(C1-C4烷基)(C3-C6環(huán)烷基)、(C1-C6烷基)-OCH3、(C1-C6烷基)-CF3、C(O)-(C1-C6烷基)、C(O)2-(C1-C6烷基)、C(O)-NH2、C(O)NH-(C1-C6烷基)、C(O)-(C6芳基)、C(O)-(C6雜芳基)、C(O)-吡咯烷、C(O)-哌啶、C(O)-哌嗪、(C1-C6烷基)-CO2H、(C1-C6烷基)-CO2(C1-C6烷基)或SO2-(C1-C6烷基)。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中
R9為H、CN、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、t-Bu、CH2CH(CH3)2、CH2C(CH3)3、CH2CF3、CH2CH2CF3、CH2OCH3、CH2CH2OCH3、
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中
R9為SO2-CH3、C(O)-CH3、C(O)-CH2CH3、C(O)-CH2CH2CH3、C(O)-CH(CH3)2、C(O)-CH2CH(CH3)2、C(O)-t-Bu、C(O)-OCH3,C(O)-NHCH3、
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中
R7為H、CH3、CH2CH3、CH(CH3)2或
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
其中
Y1、Y2、Y3和Y4各自獨(dú)立地為CR8或N，
其中每個(gè)R8獨(dú)立地為H、鹵素、OCH3、CN或CF3。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中B具有以下結(jié)構(gòu)：
在一些實(shí)施方式中，所述化合物中每個(gè)R8為CN或OCH3。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物下述結(jié)構(gòu)：
或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)：
或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
在一些實(shí)施方式中，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)：
或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明提供了包含任何一種上述化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種治療患有以視網(wǎng)膜過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病的受試者的方法，所述方法包括給予所述受試者有效量的任何一種上述化合物。
本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種治療患有以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病的受試者的方法，所述方法包括給予所述受試者有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明的組合物。
在一些實(shí)施方案中，所述疾病的進(jìn)一步特征在于雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性。
在一些實(shí)施方案中，化合物的量為有效降低受試者的RBP4的血清濃度。
在一些實(shí)施方案中，化合物的量可以有效降低受試者的脂褐質(zhì)中雙視黃酸的視網(wǎng)膜濃度。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸是A2E。在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸是isoA2E。在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸是A2-DHP-PE。在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸是atRALdi-PE。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是年齡相關(guān)性黃斑變性。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是干性(萎縮性)年齡相關(guān)性黃斑變性。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是斯特格氏病(Stargardt disease)。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是Best病。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是成人卵黃樣黃斑病變。
在一些實(shí)施方案中，以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是類似斯特格氏病的黃斑營(yíng)養(yǎng)不良。
在一些實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人。
在一些實(shí)施方案中，R9為H、C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、(C1-C4烷基)-CF3、(C1-C4烷基)-OCH3、(C1-C4烷基)-鹵素、SO2-(C1-C4烷基)、SO2-(C1-C4烷基)-CF3、SO2-(C1-C4烷基)-OCH3、SO2-(C1-C4烷基)-鹵素、C(O)-(C1-C4烷基)、C(O)-(C1-C4烷基)-CF3、C(O)-(C1-C4烷基)-OCH3、C(O)-(C1-C4烷基)-鹵素、C(O)-NH-(C1-C4烷基)、C(O)-N(C1-C4烷基)2、(C1-C4烷基)-C(O)OH、C(O)-NH2或氧雜環(huán)丁烷。
在一些實(shí)施方案中，R9為H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、t-Bu、CH2OCH3、CH2CF3、CH2Cl、CH2F、CH2CH2OCH3、CH2CH2CF3、CH2CH2Cl、CH2CH2F或
在一些實(shí)施方案中，R9為SO2-CH3、SO2-CH2CH3、SO2-CH2CH2CH3、SO2-CH(CH3)2、SO2-CH2CH(CH3)2、SO2-t-Bu、SO2-CH2OCH3、SO2-CH2CF3、SO2-CH2Cl、SO2-CH2F、SO2-CH2CH2OCH3、SO2-CH2CH2CF3、SO2-CH2CH2Cl、SO2-CH2CH2F或
在一些實(shí)施方案中，R9為C(O)-CH3、C(O)-CH2CH3、C(O)-CH2CH2CH3、C(O)-CH(CH3)2、C(O)-CH2CH(CH3)2、C(O)-t-Bu、C(O)-CH2OCH3、C(O)-CH2CF3、C(O)-CH2Cl、C(O)-CH2F、C(O)-CH2CH2OCH3、C(O)-CH2CH2CF3、C(O)-CH2CH2Cl、C(O)-CH2CH2F、
在一些實(shí)施方案中，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)：
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一些實(shí)施方案中，B具有以下結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明提供了包含本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明提供了用于治療患有以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病的哺乳動(dòng)物的方法，其包括給哺乳動(dòng)物施用有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明的組合物。
在所述方法的一些實(shí)施方式中，其中所述疾病的進(jìn)一步特征在于雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述化合物的量可以有效降低哺乳動(dòng)物中RBP4的血清濃度。
在所述方法的一些實(shí)施方案中，其中所述化合物的量可以有效降低哺乳動(dòng)物脂褐質(zhì)中雙視黃酸的視網(wǎng)膜濃度。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中雙視黃酸是A2E。在該方法的一些實(shí)施方案中，其中雙視黃酸是isoA2E。在該方法的一些實(shí)施方案中，其中雙視黃酸是A2-DHP-PE。在該方法的一些實(shí)施方案中，其中雙視黃酸是atRAL di-PE。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是年齡相關(guān)性黃斑變性。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是干性(萎縮性)年齡相關(guān)性黃斑變性。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是斯特格氏病。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是Best病。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是成人卵黃樣黃斑病變。
在該方法的一些實(shí)施方案中，其中所述以視網(wǎng)膜中過(guò)量累積脂褐質(zhì)為特征的疾病是類似斯特格氏病的黃斑營(yíng)養(yǎng)不良。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是年齡相關(guān)性黃斑變性或斯特格氏病。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是年齡相關(guān)性黃斑變性。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是干性(萎縮性)年齡相關(guān)性黃斑變性。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是斯特格氏病。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是Best病。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是成人卵黃樣黃斑病變。
在一些實(shí)施方案中，雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性是類似斯特格氏病的黃斑營(yíng)養(yǎng)不良。
雙視黃酸介導(dǎo)的黃斑變性可以包括脂褐質(zhì)沉積物在視網(wǎng)膜色素上皮中的累積。
本文所用的“雙視黃酸脂褐質(zhì)”是含有細(xì)胞毒性雙視黃酸的脂褐質(zhì)。細(xì)胞毒性雙視黃酸包括但不限于A2E、isoA2E、atRALdi-PE和A2-DHP-PE(圖1、2和3)。
本發(fā)明提供了包含3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基部分的非視黃醇哌啶化合物。該特征顯著增加了效力并改善了分子的藥代動(dòng)力學(xué)特性。
本發(fā)明提供了包含3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基部分的非視黃醇哌啶化合物。該特征顯著增加了效力并改善了分子的藥代動(dòng)力學(xué)特性。
本發(fā)明提供了包含二取代或三取代的苯基部分的非視黃醇哌啶化合物。該特征顯著增加了效力并改善了分子的藥代動(dòng)力學(xué)特性。
除非另有說(shuō)明，當(dāng)本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)包括不對(duì)稱碳原子時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解該化合物以外消旋體、外消旋混合物和分離的單一對(duì)映體形式存在。這些化合物的所有這些異構(gòu)形式明確地包括在本發(fā)明中。除非另有說(shuō)明，每個(gè)立體碳可以是R或S構(gòu)型。因此應(yīng)當(dāng)理解，除非另有說(shuō)明，由這種不對(duì)稱性產(chǎn)生的異構(gòu)體(例如，所有對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這樣的異構(gòu)體可以通過(guò)經(jīng)典的分離技術(shù)和通過(guò)立體化學(xué)控制的合成(例如"Enantiomers,Racemates and Resolutions",J.Jacques,A.Collet,S.Wilen,Pub.John Wiley&Sons,NY,1981中所述的那些技術(shù))以基本上純的形式獲得。例如，可以通過(guò)手性柱上的制備型色譜法進(jìn)行解析。
本發(fā)明還旨在包括存在于本文公開(kāi)的化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序數(shù)但質(zhì)量數(shù)不同的那些原子。舉例來(lái)說(shuō)，但不用于限制，氫的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和C-14。
應(yīng)當(dāng)注意，當(dāng)遍及本申請(qǐng)的結(jié)構(gòu)中的碳的任何符號(hào)在沒(méi)有進(jìn)一步注釋的情況下使用時(shí)，其旨在表示碳的所有同位素，例如12C、13C或14C。此外，任何含有13C或14C的化合物可以具體地具有本文公開(kāi)的任何化合物的結(jié)構(gòu)。
還應(yīng)注意的是，當(dāng)遍及本申請(qǐng)的結(jié)構(gòu)中的氫的任何符號(hào)在沒(méi)有進(jìn)一步注釋的情況下使用時(shí)，旨在表示氫的所有同位素，例如1H、2H或3H。此外，任何含有2H或3H的化合物可以具體地具有本文公開(kāi)的任何化合物的結(jié)構(gòu)。
同位素標(biāo)記的化合物通?？梢允褂煤线m的同位素標(biāo)記試劑代替所用的非標(biāo)記的試劑并通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)來(lái)制備。
術(shù)語(yǔ)“取代”、“取代的”和“取代基”是指如上所述的官能團(tuán)，其中包含的連接到氫原子的一個(gè)或多個(gè)鍵被連接到非氫原子或非碳原子的鍵所代替，而條件是保持正常效價(jià)，并且所述取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。被取代的基團(tuán)還包括其中與碳原子或氫原子連接的一個(gè)或多個(gè)鍵被一個(gè)或多個(gè)連接到雜原子的鍵(包括雙鍵或三鍵)代替的基團(tuán)。取代基的實(shí)例包括上述官能團(tuán)和鹵素(即F、Cl、Br和I)、烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基和三氟甲基)、羥基、烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧基)、芳氧基(例如苯氧基)、芳基烷氧基(例如芐氧基(即苯基甲氧基)和對(duì)三氟甲基芐氧基(即4-三氟甲基苯基甲氧基)、雜芳氧基、磺?；?例如三氟甲磺?；?、甲磺?；蛯?duì)甲苯磺酰基)、硝基、亞硝?；?、巰基、硫烷基(例如甲基硫烷基、乙基硫烷基和丙基硫烷基)、氰基、氨基(例如氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基和二乙基氨基)和羧基。當(dāng)公開(kāi)或要求保護(hù)多個(gè)取代基部分時(shí)，取代的化合物可以獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)公開(kāi)的或要求保護(hù)的取代基部分單取代或多取代。獨(dú)立取代的是指(兩個(gè)或更多個(gè))取代基可以相同或不同。
在本發(fā)明方法所使用的化合物中，除非另有具體定義，取代基可以是取代的或未取代的。
在本發(fā)明方法所使用的化合物中，烷基、雜烷基、單環(huán)、雙環(huán)、芳基、雜芳基和雜環(huán)基團(tuán)可以通過(guò)采用可供選擇的非氫基團(tuán)代替一個(gè)或多個(gè)氫原子而被進(jìn)一步取代。這些可供選擇的非氫基團(tuán)包括但不限于鹵素、羥基、巰基、氨基、羧基、氰基和氨基甲?；?/p>
應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以選擇本發(fā)明方法所使用的化合物上的取代基和取代模式，以提供化學(xué)上穩(wěn)定的且可以由易得的起始材料通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)易于合成的化合物。如果取代基本身被多于一個(gè)基團(tuán)取代，應(yīng)當(dāng)理解只要能得到穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，這些多個(gè)基團(tuán)可以在相同的碳上或不同的碳上。
在選擇用于本發(fā)明方法中的化合物時(shí)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，根據(jù)公知的化學(xué)結(jié)構(gòu)連接原則來(lái)選擇各種取代基，即R1、R2等。
本文中所用的“烷基”旨在包括具有指定碳原子數(shù)的支鏈和直鏈飽和脂肪族烴基。因此，如在“C1-Cn烷基”中的C1-Cn被定義為包括具有1、2...、n-1或n個(gè)成直線或分支排列的碳原子，具體包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、異丙基、異丁基、仲丁基等。一個(gè)具體實(shí)施方式可以為C1-C12烷基、C2-C12烷基、C3-C12烷基、C4-C12烷基等。一個(gè)具體實(shí)施方式可以為C1-C8烷基、C2-C8烷基、C3-C8烷基、C4-C8烷基等。“烷氧基”表示通過(guò)氧橋連接的上述烷基。
術(shù)語(yǔ)“烯基”是指含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵和至多可能存在的最大數(shù)目的非芳香碳碳雙鍵的直鏈或支鏈非芳香烴基。因此，C2-Cn烯基被定義為包括具有1、2...、n-1或n個(gè)碳的基團(tuán)。例如，C2-C6烯基的意思是分別具有2、3、4、5或6個(gè)碳原子以及至少一個(gè)碳-碳雙鍵和例如在C6烯基的情況下至多3個(gè)碳-碳雙鍵的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基和環(huán)己烯基。如以上關(guān)于烷基的部分所述，烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可能含有雙鍵，并且如果指明為取代的烯基，則烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可能被取代。一個(gè)實(shí)施方式可以為C2-C12烯基或C2-C8烯基。
術(shù)語(yǔ)“炔基”是指含有至少一個(gè)碳-碳三鍵和至多可能存在的最大數(shù)目的非芳香碳碳三鍵的直鏈或支鏈烴基。因此，C2-Cn炔基被定義為包括具有1、2...n-1或n個(gè)碳的基團(tuán)。例如，C2-C6炔基的意思是具有2或3個(gè)碳原子和1個(gè)碳-碳三鍵、或具有4或5個(gè)碳原子和至多2個(gè)碳-碳三鍵、或具有6個(gè)碳原子和至多3個(gè)碳-碳三鍵的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基和丁炔基。如以上關(guān)于烷基的部分所述的，炔基的直鏈或支鏈部分可能含有三鍵，并且如果指明為取代的炔基，則炔基的直鏈或支鏈部分可能被取代。一個(gè)實(shí)施方式可以為C2-C12炔基或C3-C8炔基。
烷基可以是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基包括但不限于鹵素、烷氧基、烷硫基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基和羥基。
本文所用的“C1-C4烷基”包括支鏈和直鏈C1-C4烷基。
本文所用的“雜烷基”包括在主鏈或支鏈中具有至少1個(gè)雜原子的支鏈和直鏈飽和脂肪族烴基。
本文所用的“環(huán)烷基”包括三至八個(gè)總碳原子或這個(gè)范圍內(nèi)的任何數(shù)目的碳原子的烷烴環(huán)(即環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基)。
本文所用的“雜環(huán)烷基”是指含有1-4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5-10元非芳香環(huán)，并且包括雙環(huán)基團(tuán)。因此，“雜環(huán)基”包括但不限于以下基團(tuán)：咪唑基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基、二氫哌啶基、四氫噻吩基等。如果雜環(huán)含有氮，則應(yīng)理解其相應(yīng)的N-氧化物也包括在該定義中。
如本文所用，“芳基”旨在表示在每個(gè)環(huán)中至多10個(gè)原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)、雙環(huán)或多環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香族的，并且可以是未取代的或取代的。這種芳基元素的實(shí)例包括但不限于：苯基、對(duì)甲苯基(4-甲基苯基)、萘基、四氫萘基、茚滿基、菲基、蒽基或苊基。在芳基取代基是雙環(huán)并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)的情況下，應(yīng)當(dāng)理解連接是通過(guò)芳香環(huán)完成的。
術(shù)語(yǔ)“烷基芳基”是指如上所述的烷基，其中包含的一個(gè)或多個(gè)與氫連接的鍵被如上所述的與芳基連接的鍵替代。應(yīng)當(dāng)理解，“烷基芳基”通過(guò)來(lái)自烷基的鍵與核心分子連接，并且芳基作為烷基上的取代基。芳烷基部分的實(shí)例包括但不限于芐基(苯基甲基)、對(duì)三氟甲基芐基(4-三氟甲基苯基甲基)、1-苯基乙基、2-苯基乙基、3-苯基丙基、2-苯基丙基等。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示每個(gè)環(huán)中具有最多10個(gè)原子的穩(wěn)定的單環(huán)、雙環(huán)或在多環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)且含有選自由O、N和S構(gòu)成的組中的1～4個(gè)雜原子。雙環(huán)芳香雜芳基包括但不限于(a)稠合到具有一個(gè)氮原子的6元芳香(不飽和)雜環(huán)的苯基、吡啶、嘧啶或噠嗪(pyridizine)環(huán)；(b)稠合到具有兩個(gè)氮原子的5元或6元芳香(不飽和)雜環(huán)的苯基、吡啶、嘧啶或噠嗪環(huán)；(c)稠合到具有一個(gè)氮原子以及一個(gè)氧原子與一個(gè)硫原子二者之一的5元芳香(不飽和)雜環(huán)的苯基、吡啶、嘧啶或噠嗪環(huán)；或(d)稠合到具有選自O(shè)、N或S的一個(gè)雜原子的5元芳香(不飽和)雜環(huán)。這一定義范圍之內(nèi)的雜芳基包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、二氫吲哚基、吲哚基、吲嗪基(indolazinyl)、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、萘吡啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噁唑啉、氧雜環(huán)丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丙烷基、1,4-二氧己環(huán)基、六氫氮雜環(huán)庚三烯基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異惡唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲二氧基苯甲?；⑺臍溥秽?、四氫噻吩基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、吲哚基、吡嗪基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氫喹啉。在雜芳取代基是雙環(huán)并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)或者不包含雜原子的情況下，應(yīng)當(dāng)理解，連接是分別通過(guò)芳香環(huán)或通過(guò)含雜原子的環(huán)完成的。如果雜芳基含有氮原子，應(yīng)理解其相應(yīng)的N-氧化物也包括在該定義中。
本文所用的“單環(huán)”包括至多10個(gè)原子的任何穩(wěn)定的多環(huán)碳環(huán)，并且其可以是未取代或取代的。這種非芳香單環(huán)成分的實(shí)例包括但不限于：環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。這種芳香單環(huán)成分的實(shí)例包括但不限于苯基。本文所用的“雜單環(huán)”包括含有至少一個(gè)雜原子的任何單環(huán)。
本文所用的“雙環(huán)”包括至多10個(gè)原子的稠合至多達(dá)10個(gè)原子的多環(huán)碳環(huán)的任何穩(wěn)定的多環(huán)碳環(huán)，其中每個(gè)環(huán)獨(dú)立地為未取代或取代的。這種非芳香雙環(huán)成分的實(shí)例包括但不限于十氫萘。這種芳族雙環(huán)成分的實(shí)例包括但不限于萘。本文所用的“雜雙環(huán)”包括含有至少一個(gè)雜原子的任何雙環(huán)。
術(shù)語(yǔ)“苯基”旨在表示含有六個(gè)碳的芳族六元環(huán)及其任何取代的衍生物。
術(shù)語(yǔ)“芐基”旨在表示直接連接到苯環(huán)的亞甲基。芐基是一個(gè)氫被苯基取代的甲基及其任何取代的衍生物。
術(shù)語(yǔ)“吡啶”旨在表示具有包含5個(gè)碳原子和1個(gè)氮原子的六元環(huán)的雜芳基及其任何取代的衍生物。
術(shù)語(yǔ)“吡唑”旨在表示具有包含三個(gè)碳原子和彼此相鄰的兩個(gè)氮原子的五元環(huán)的雜芳基及其任何取代的衍生物。
術(shù)語(yǔ)“吲哚”旨在表示具有與苯環(huán)稠合的五元環(huán)的雜芳基，其中五元環(huán)含有直接連接到苯環(huán)的1個(gè)氮原子。
術(shù)語(yǔ)“氧雜環(huán)丁烷”旨在表示含有三個(gè)碳原子和一個(gè)氧原子的非芳香四元環(huán)及其任何取代的衍生物。
本發(fā)明方法中使用的化合物可以通過(guò)有機(jī)合成中公知的且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉的技術(shù)制備。然而，這些可能不是合成或獲得所需化合物的唯一方法。
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry,A.I.Vogel,A.R.Tatchell,B.S.Furnis,A.J.Hannaford,P.W.G.Smith,(Prentice Hall)5th Edition(1996)、March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,Michael B.Smith,Jerry March,(Wiley-Interscience)5thEdition(2007)和其中的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)制備，上述資料通過(guò)引用并入本文。然而，這些可能不是合成或獲得所需化合物的唯一方法。
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)本文所述的技術(shù)制備。用于制備實(shí)施例1-103的合成方法用于制備在本文實(shí)施方案中描述的另外的哌啶化合物。
連接到本文公開(kāi)的化合物的芳香環(huán)的各種R基團(tuán)可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法，例如在Advanced Organic Chemistry:Part B:Reaction and Synthesis,Francis Carey and Richard Sundberg,(Springer)5th ed.Edition.(2007)中所述的那些方法，加入到環(huán)中，上述文獻(xiàn)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。
本發(fā)明的另一方面包括作為藥物組合物的本發(fā)明化合物。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“藥物活性劑”是指適于施用于受試者并在疾病的治療、治愈、緩解、診斷或預(yù)防中提供生物活性或其他直接效果或影響受試者的結(jié)構(gòu)或任何功能的任何物質(zhì)或化合物。藥物活性劑包括但不限于Physicians’Desk Reference(PDR Network,LLC；64th edition；November 15,2009)和“Approved Drug Products with Therapeutic Equivalence Evaluations”(U.S.Department Of Health And Human Services,30thedition,2010)中描述的物質(zhì)和化合物，上述文獻(xiàn)通過(guò)引用并入本文。具有羧酸側(cè)基的藥物活性劑可以根據(jù)本發(fā)明使用標(biāo)準(zhǔn)酯化反應(yīng)和現(xiàn)成的且化學(xué)合成領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行修飾。當(dāng)藥物活性劑不具有羧酸基團(tuán)時(shí)，普通技術(shù)人員應(yīng)能夠設(shè)計(jì)并將羧酸基團(tuán)引入藥物活性劑中，只要酯化不干擾藥物活性劑的生物活性或效果，隨后就可以進(jìn)行酯化。
本發(fā)明的化合物可以是鹽的形式。本文所用的“鹽”是本發(fā)明化合物的鹽，其已經(jīng)通過(guò)制備化合物的酸式鹽或堿式鹽而被改性。在用于治療疾病的化合物的情況下，所述鹽是藥學(xué)上可接受的。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括但不限于堿性殘基(例如胺)的無(wú)機(jī)酸鹽或有機(jī)酸鹽、酸性殘基(如苯酚)的堿金屬鹽或的有機(jī)鹽。鹽可以使用有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸制備。這樣的酸式鹽為氯化物、溴化物、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磺酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等。酚鹽是堿土金屬鹽、鈉鹽、鉀鹽或鋰鹽。在這方面，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明化合物與無(wú)機(jī)和有機(jī)酸或堿的相對(duì)無(wú)毒的加成鹽。這些鹽可以在本發(fā)明化合物的最終分離和純化期間原位制備，或者通過(guò)使游離堿或游離酸形式的純化的本發(fā)明化合物與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸或堿單獨(dú)反應(yīng)并分離由此形成的鹽來(lái)制備。代表性的鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘二甲酸鹽(napthylate)、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽和月桂基磺酸鹽等。(參見(jiàn)例如Berge et al.(1977)"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66:1-19)。
本文公開(kāi)的所有化合物包括鹽或藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明任何上述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或鹽。
本文中所用的“治療”是指預(yù)防、減緩、停止或逆轉(zhuǎn)疾病或感染的進(jìn)展。治療也具有改善疾病或感染的一種或多種癥狀的意思。
本發(fā)明的化合物可以以各種形式施用，本文詳述的那些形式也包括在內(nèi)。采用所述化合物的治療可以是聯(lián)合療法或輔助療法的一個(gè)組成部分，即對(duì)需要藥物的受試者或患者采用另一種用于該疾病的藥物與一種或多種本發(fā)明化合物進(jìn)行聯(lián)合治療，或同時(shí)給予需要藥物的受試者或患者一種或多種本發(fā)明化合物和另一種用于該疾病的藥物。該聯(lián)合療法可以是順序療法，其中首先用一種藥物治療患者，然后施用另一種藥物或同時(shí)施用兩種藥物。根據(jù)所使用的劑型，這些藥物可以通過(guò)相同的途徑或通過(guò)兩種或更多種不同的施用途徑獨(dú)立地施用。
本文所用的“藥學(xué)上可接受的載體”是用于將本發(fā)明化合物遞送至動(dòng)物或人的藥學(xué)上可接受的溶劑、懸浮劑或溶媒。載體可以是液體或固體，并且根據(jù)計(jì)劃的給藥方式進(jìn)行選擇。脂質(zhì)體也是藥學(xué)上可接受的載體。
在治療中施用的化合物的劑量應(yīng)根據(jù)諸如特定化療劑的藥效學(xué)特征及其施用模式和途徑，接受者的年齡、性別、代謝率、吸收效率、健康和體重，癥狀的性質(zhì)和程度，所施用的同時(shí)治療的種類，治療頻率和所需的治療效果的因素變化。
用于本發(fā)明方法的化合物的劑量單位可以包括單一化合物或與其他試劑的混合物。化合物可以以口服劑型給藥，如片劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸劑、糖漿劑和乳劑?；衔镞€可以以靜脈內(nèi)(推注或輸注)、腹膜內(nèi)、皮下或肌內(nèi)形式給藥，或通過(guò)例如注射、局部施用或其他方法直接引入到感染部位內(nèi)或感染部位上，所有均使用藥學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的劑型。
用于本發(fā)明方法的化合物可以與合適的藥物稀釋劑、增量劑、賦形劑或載體(本文中統(tǒng)稱為藥學(xué)上可接受的載體)混合施用，所述藥學(xué)上可接受的載體根據(jù)預(yù)期的給藥形式和常規(guī)藥物實(shí)踐進(jìn)行適當(dāng)選擇。該單位的形式適于口服、直腸、局部、靜脈內(nèi)或直接注射或腸胃外給藥?；衔锟梢詥为?dú)施用或與藥學(xué)上可接受的載體混合施用。該載體可以是固體或液體，并且載體的類型通?；谒褂玫慕o藥類型來(lái)選擇?；钚詣┛梢砸云瑒┗蚰z囊、作為團(tuán)聚粉末的脂質(zhì)體或液體形式共同給藥。合適的固體載體的實(shí)例包括乳糖、蔗糖、明膠和瓊脂。膠囊或片劑易于配制并且可以容易地吞咽或咀嚼；其他固體形式包括顆粒和散裝粉末。片劑可以含有合適的粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、流動(dòng)誘導(dǎo)劑和熔化劑。合適的液體劑型的實(shí)例包括水、藥學(xué)上可接受的油脂、醇或其他有機(jī)溶劑(包括酯)中的溶液或懸浮液，乳液，糖漿或酏劑，懸浮液、溶液和/或由非泡騰顆粒重構(gòu)的懸浮液以及由泡騰顆粒重構(gòu)的泡騰制劑。這種液體劑型可以含有例如合適的溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增稠劑和熔化劑?？诜┬腿芜x地含有調(diào)味劑和著色劑。腸胃外和靜脈內(nèi)形式還可以包括礦物質(zhì)和其他材料以使所述形式與注射或所選擇的遞送系統(tǒng)的類型相容。
用于制備可用于本發(fā)明的劑型的技術(shù)和組合物描述于以下參考文獻(xiàn)中：7Modern Pharmaceutics,Chapters 9and 10(Banker&Rhodes,Editors,1979)；Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets(Lieberman et al.,1981)；Ansel,Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition(1976)；Remington's Pharmaceutical Sciences,17th ed.(Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985)；Advances in Pharmaceutical Sciences(David Ganderton,Trevor Jones,Eds.,1992)；Advances in Pharmaceutical Sciences Vol.7.(David Ganderton,Trevor Jones,James McGinity,Eds.,1995)；Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms(Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Series 36(James McGinity,Ed.,1989)；Pharmaceutical Particulate Carriers:Therapeutic Applications:Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Vol 61(Alain Rolland,Ed.,1993)；Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract(Ellis Horwood Books in the Biological Sciences.Series in Pharmaceutical Technology；J.G.Hardy,S.S.Davis,Clive G.Wilson,Eds.)；Modem Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences,Vol 40(Gilbert S.Banker,Christopher T.Rhodes,Eds.)。所有上述出版物通過(guò)引用并入本文。
片劑可以含有合適的粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、流動(dòng)誘導(dǎo)劑和熔化劑。例如，對(duì)于片劑或膠囊劑量單位形式的口服給藥，活性藥物組分可以與口服、無(wú)毒、藥學(xué)上可接受的惰性載體結(jié)合，例如乳糖、明膠、瓊脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、硫酸鈣、甘露醇、山梨醇等。合適的粘結(jié)劑包括淀粉、明膠、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味劑、天然和合成樹(shù)膠(如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中使用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。
用于本發(fā)明方法的化合物也可以以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的形式施用，例如小單層囊泡、大單層囊泡和多層囊泡。脂質(zhì)體可以由多種磷脂形成，例如膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿。化合物可以作為組織靶向乳劑的組分施用。
本發(fā)明方法中使用的化合物也可以偶聯(lián)至作為可靶向藥物載體或作為前藥的可溶性聚合物。這樣的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥乙基天門(mén)冬酰胺酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或用棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷-聚賴氨酸。此外，化合物可以與一類用于實(shí)現(xiàn)藥物控制釋放的生物可降解聚合物偶聯(lián)，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基?；锖退z的交聯(lián)或兩親嵌段共聚物。
明膠膠囊可以含有活性成分化合物和粉末狀載體，例如乳糖、淀粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等。類似的稀釋劑可用于制備壓制片劑。片劑和膠囊都可以制成速釋產(chǎn)品或緩釋產(chǎn)品以使藥物在數(shù)小時(shí)內(nèi)連續(xù)釋放。壓制片劑可以具有糖衣或膜包衣以掩蓋任何不愉快的味道并保護(hù)片劑免受空氣的影響，或者具有腸溶包衣以在胃腸道中選擇性崩解。
對(duì)于液體劑型的口服給藥，口服藥物組分與任何口服、無(wú)毒、藥學(xué)上可接受的惰性載體如乙醇、甘油、水等組合。合適的液體劑型的實(shí)例包括水、藥學(xué)上可接受的油脂、醇或其他有機(jī)溶劑(包括酯)中的溶液或懸浮液，乳液，糖漿或酏劑，懸浮液、溶液和/或由非泡騰顆粒重構(gòu)的懸浮液以及由泡騰顆粒重構(gòu)的泡騰制劑。這種液體劑型可以含有例如合適的溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增稠劑和熔化劑。
用于口服給藥的液體劑型可以含有著色劑和調(diào)味劑以增加患者的接受性。通常，水、合適的油、鹽水、葡萄糖水溶液和相關(guān)的糖溶液和二醇如丙二醇或聚乙二醇是用于胃腸外溶液的合適的載體。用于腸胃外給藥的溶液優(yōu)選含有活性成分的水溶性鹽、合適的穩(wěn)定劑以及緩沖物質(zhì)(如果需要)。抗氧化劑例如單獨(dú)的亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸或其組合是合適的穩(wěn)定劑。還使用檸檬酸及其鹽和EDTA鈉。此外，腸胃外溶液可以含有防腐劑，例如苯扎氯銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯和氯丁醇。合適的藥物載體在本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company中進(jìn)行了描述。
用于本發(fā)明方法的化合物還可以通過(guò)使用合適的鼻內(nèi)媒介物以鼻內(nèi)形式施用，或者使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的那些形式的經(jīng)皮皮膚貼劑通過(guò)經(jīng)皮途徑施用。為了以經(jīng)皮遞送系統(tǒng)的形式施用，在整個(gè)給藥方案中，劑量施用通常是連續(xù)的而不是間斷的。
腸胃外和靜脈內(nèi)形式還可以包括礦物質(zhì)和其他材料，以使所述形式與注射類型或所選擇的遞送系統(tǒng)的類型相容。
本文公開(kāi)的每個(gè)實(shí)施例被預(yù)期為適用于每個(gè)其他公開(kāi)的實(shí)施例。因此，本文所述的各種要素的所有組合都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
通過(guò)參考下面的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)會(huì)更好地理解本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)容易地理解，詳細(xì)的具體實(shí)驗(yàn)僅僅是對(duì)權(quán)利要求中更充分地描述的本發(fā)明的說(shuō)明。
實(shí)驗(yàn)詳情
材料和方法
用于視黃醇誘導(dǎo)的RBP4-TTR相互作用的TR-FRET測(cè)定
所需RBP4拮抗劑的結(jié)合替代視黃醇并誘導(dǎo)對(duì)RBP4-TTR相互作用的阻礙，導(dǎo)致FRET信號(hào)的減少(圖7)。在該測(cè)定中使用細(xì)菌表達(dá)的MBP-RBP4和未標(biāo)記的TTR。為了用于TR-FRET測(cè)定，使用pMAL-c4x載體在Gold(DE3)pLysS大腸桿菌菌株(Stratagene)中表達(dá)麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)標(biāo)記的人RBP4片段(氨基酸19-201)。細(xì)胞裂解后，使用配備有5ml MBP Trap HP柱的ACTA FPLC系統(tǒng)(GE Healthcare)從可溶性級(jí)分中純化重組RBP4。人類未標(biāo)記的TTR購(gòu)自Calbiochem。使用CisBio生產(chǎn)的HTRF Cryptate Labeling試劑盒并根據(jù)制造商的建議直接采用Eu3+穴狀化合物-NHS來(lái)標(biāo)記未標(biāo)記的TTR。在白色低容量384孔板(Greiner-Bio)中進(jìn)行HTRF測(cè)定，最終測(cè)定體積為16μl/孔。反應(yīng)緩沖液含有10mM Tris-HCl pH7.5、1mM DTT、0.05％NP-40、0.05％Prionex、6％甘油和400mM KF。每個(gè)反應(yīng)含有60nM MBP-RBP4和2nM TTR-Eu以及與d2(Cisbio)綴合的26.7nM抗MBP抗體。該測(cè)定中測(cè)試化合物的滴定是在1μM視黃醇存在下進(jìn)行的。所有反應(yīng)在黑暗中在昏暗的紅光下組裝并包裹于鋁箔中在+4℃孵育過(guò)夜。在SpectraMax M5e Multimode Plate Reader(Molecular Device)中測(cè)量TR-FRET信號(hào)。在337nm處激發(fā)熒光并且每孔讀取兩個(gè)讀數(shù)：讀數(shù)1是針對(duì)從Eu(K)到d2(337nm激發(fā)，668nm發(fā)射，計(jì)數(shù)延遲75微秒，計(jì)數(shù)窗口100微秒)的時(shí)間門(mén)控能量轉(zhuǎn)移，讀數(shù)2是針對(duì)Eu(K)時(shí)間門(mén)控?zé)晒?337nm激發(fā)，620nm發(fā)射，計(jì)數(shù)延遲400微秒，計(jì)數(shù)窗口400微秒)。TR-FRET信號(hào)表示為熒光強(qiáng)度比率：Flu665/Flu620×10000。
閃爍親近RBP4結(jié)合測(cè)定
從管狀蛋白尿患者的尿中純化的未標(biāo)記的人RBP4購(gòu)自Fitzgerald Industries International。使用來(lái)自Pierce的EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotinylatio試劑盒根據(jù)制造商的建議將未標(biāo)記的人RBP4生物素化。在96孔板(OptiPlate，PerkinElmer)和SPA緩沖液(1X PBS，pH 7.4，1mM EDTA，0.1％BSA，0.5％CHAPS)中進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)，最終測(cè)定體積為每孔100μl。反應(yīng)混合物含有10nM 3H-視黃醇(48.7Ci/mmol；PerkinElmer)、0.3mg/孔鏈霉親和素-PVT珠、50nM生物素化的RBP4和測(cè)試化合物。在20μM未標(biāo)記的視黃醇存在下測(cè)定非特異性結(jié)合。在黑暗中在昏暗的紅光下組裝反應(yīng)混合物。將板用透明膠帶(TopSeal-A：96孔微板，PerkinElmer)密封，包裹在鋁箔中，并使其在室溫下平衡6小時(shí)，接著在+4℃下孵育過(guò)夜。使用TopCount NXT計(jì)數(shù)器(Packard Instrument Company)測(cè)量放射性計(jì)數(shù)。
制備用于合成哌啶化合物的中間體的一般方法(GP)
條件：A1)羧酸、HBTU、Et3N、DMF；A2)羧酸、EDCI、HOBt、i-Pr2NEt、DMF；A3)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A1)：將胺I(1當(dāng)量)、所需羧酸(1當(dāng)量)、三乙胺(Et3N)(3當(dāng)量)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)(1.5當(dāng)量)在DMF(0.25M)中的混合物在室溫下攪拌，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺II。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A2)：將胺I(1當(dāng)量)、所需羧酸(1當(dāng)量)、N,N-二異丙基乙胺(i-Pr2NEt)(3當(dāng)量)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDCI)(1.5當(dāng)量)和羥基苯并三唑(HOBt)(1.5當(dāng)量)在DMF(0.25M)中的混合物在室溫下攪拌，直至通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺II。通過(guò)1HNMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-A3)：將胺I(1當(dāng)量)、Et3N(3當(dāng)量)和酰氯(1當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌，直至通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺II。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮甲酰胺IV的一般方法
條件：B)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-B)：將胺III(1當(dāng)量)、所需酰氯(1當(dāng)量)和三乙胺(Et3N)(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺IV。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮磺酰胺V的一般方法
條件：C)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-C)：將胺III(1當(dāng)量)、所需磺酰氯(1當(dāng)量)和i-Pr2NET(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的磺酰胺V。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮VI的一般方法
條件：D)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-D)：將胺III(1當(dāng)量)、所需醛或酮(1.5當(dāng)量)和HOAc(6當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。向其中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)3)，將混合物在室溫下攪拌，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)?；旌衔镉蔑柡蚇aHCO3水溶液稀釋，并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的胺VI。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮羧酰胺VIII的一般方法
條件：E)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-E)：將胺VII(1當(dāng)量)、所需酰氯(1當(dāng)量)和三乙胺(Et3N)(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺VIII。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮磺酰胺IX的一般方法
條件：F)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-F)：將胺VII(1當(dāng)量)、所需磺酰氯(1當(dāng)量)和i-Pr2NET(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的磺酰胺IX。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮X的一般方法
條件：G)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-G)：將胺VII(1當(dāng)量)、所需醛或酮(1.5當(dāng)量)和HOAc(6當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。向其中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)3)，將混合物在室溫下攪拌直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)?；旌衔镉蔑柡蚇aHCO3水溶液稀釋，并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的胺X。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮羧酰胺XII的一般方法
條件：H)酰氯、Et3N、CH2Cl2。
用于羧酰胺形成的一般方法(GP-H)：將胺XI(1當(dāng)量)、所需酰氯(1當(dāng)量)和三乙胺(Et3N)(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的羧酰胺XII。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮磺酰胺XIII的一般方法
條件：I)磺酰氯、i-Pr2NET、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-I)：將胺XI(1當(dāng)量)、所需磺酰氯(1當(dāng)量)和i-Pr2NET(3當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物從0℃攪拌至室溫，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)。將混合物用H2O稀釋并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的磺酰胺XIII。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
制備烷基化(4-苯基哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮XIV
條件：J)醛或酮、NaBH(OAc)3、CH2Cl2。
用于磺酰胺形成的一般方法(GP-J)：將胺XI(1當(dāng)量)、所需醛或酮(1.5當(dāng)量)和HOAc(6當(dāng)量)在CH2Cl2(0.25M)中的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。向其中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)3)，將混合物在室溫下攪拌，直到通過(guò)LC-MS完成反應(yīng)?；旌衔镉蔑柡蚇aHCO3水溶液稀釋，并用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)提取物用H2O、鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物通過(guò)硅膠層析法(典型洗脫液包括己烷與EtOAc的混合物或者CH2Cl2與CH2Cl2/CH3OH/濃NH4OH的90:9:1混合物的混合物)純化，得到所需的胺XIV。通過(guò)1H NMR和質(zhì)量分析驗(yàn)證產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(5)的制備
步驟A：將4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1,1.0g,5.02mmol)在THF(30mL)中的溶液冷卻至-78℃。在30分鐘內(nèi)滴加LiHMDS(1.0M的THF溶液，6.52mL)。將反應(yīng)在-78℃下攪拌1小時(shí)，然后在30分鐘內(nèi)滴加N-苯基雙(三氟甲烷磺酰亞胺)(2.52g,7.05mmol)在THF(5.0mL)中的溶液。將混合物在0℃下攪拌3小時(shí)，然后在減壓下濃縮。將殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，24g Redisep柱，0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到淺黃色油狀物4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2)(1.50g,90％)：1H NMR(300MHz,CDCl3)5.75(br s,1H),4.05–4.02(m,2H),3.64–3.60(m,2H),2.44–2.42(m,2H),1.46(s,9H)。
步驟B：將DME(120mL)中4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,3.50g,10.6mmol)、3-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(2.19g,10.6mmol)、Pd(PPh3)4(1.22g,1.06mmol)和2M Na2CO3(62mL)的混合物加熱至80℃并保持6小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度，并用5％LiCl水溶液(100mL)稀釋。混合物用EtOAc(3×50mL)萃取，合并的有機(jī)提取物用鹽水(2×50mL)洗滌，并減壓濃縮。將殘余物在CH2Cl2(100mL)中稀釋，并通過(guò)300mL硅膠塞，用10％EtOAc的己烷溶液(800mL)洗脫。將所得濾液減壓濃縮，并在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，80gRedisep柱，0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到淺黃色油狀物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3)(2.39g,69％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.75–7.61(m,1H),7.49–7.36(m,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),5.63–5.54(m,1H),3.97–3.86(m,2H),3.57–3.45(m,2H),2.31–2.18(m,2H),1.42(s,9H)。
步驟C：將EtOH(100mL)中4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(3,4.7g,13.6mmol)和10％Pd/C(1.0g)的混合物在H2(30psi)氣氛中、于環(huán)境溫度下放置18小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液減壓濃縮得到透明油狀物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4)(4.80g,>99％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.72–7.60(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(dd,J＝12.3,8.1Hz,1H),4.18–4.00(m,2H),3.11–2.95(m,1H),2.92–2.64(m,2H),1.76–1.51(m,4H),1.42(s,9H)。
步驟D：向4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4,4.70g,13.6mmol)的CH2Cl2(40mL)溶液中加入2N HCl(2.0M的Et2O溶液,40mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)，并用Et2O(100mL)稀釋。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到白色粉末4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(5,3.69g,96％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)9.09–8.80(m,2H),7.83–7.70(m,1H),7.44–7.29(m,2H),3.42–3.31(m,2H),3.29–3.15(m,1H),3.14–2.95(m,2H),2.11–1.91(m,2H),1.89,1.76(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶(8)的制備
步驟A：將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6,57.4g,185mmol)、1-溴-3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯(48.5g,185mmol)、Pd(PPh3)4(21.5g,18.5mmol)和2M的Na2CO3(150mL)在DME(500mL)中的混合物加熱至80℃保持16小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度，并用5％LiCl水溶液(100mL)稀釋。將混合物用EtOAc(3×200mL)萃取，合并的有機(jī)提取物用鹽水(2×200mL)洗滌并減壓濃縮。將殘余物在CH2Cl2(100mL)中稀釋，并通過(guò)300mL硅膠塞，采用10％EtOAc的己烷溶液(800mL)洗脫。將所得濾液減壓濃縮，并在硅膠上層析(IscoCombiFlash Rf裝置，3×330g Redisep柱，0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(7)(59.0g,92％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.34–7.28(m,1H),6.93(m,1H),5.55(br,1H),4.01(br,2H),3.60(m,2H),2.30(m,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H–C4H8]+。
步驟B：將4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(7,59.0g,162.3mmol)和10％Pd/C(5.0g)在EtOH(200mL)中的混合物在H2(30psi)氣氛中環(huán)境溫度下放置72小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液在減壓下濃縮得到白色固體4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8)(57.9g,97％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.36–7.28(m,1H),7.12(m,1H),4.24(br,2H),3.06(m,1H),2.80(m,2H),1.78–1.52(m,4H),1.48(s,9H)；MS(ESI+)m/z 310[M+H–C4H8]+。
4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(11)的制備
步驟A：將4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g,3.32mmol)、5-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(0.69g,3.32mmol)、Pd(PPh3)4(0.384g,0.332mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物加熱至80℃并保持6小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾除去產(chǎn)生的固體。將濾液用鹽水溶液(4×50mL)洗滌并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上進(jìn)行層析(Isco CombiFlash Rf裝置，40g Redisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)得到透明油狀物4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.542g,48％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6).7.80(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),7.42–7.27(m,2H),5.62(br s,1H),3.97–3.87(m,2H),3.51(t,J＝5.7Hz,2H),2.34–2.23(m,2H),1.42(s,9H)。
步驟B：將4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(9,0.542g,1.58mmol)和HCl(2N的Et2O溶液，10mL)在CH2Cl2(20mL)中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(30mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到白色固體4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(10)(0.393g,88％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.26–9.00(m,2H),7.84(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.46–7.36(m,1H),7.24(dd,J＝9.3,2.4Hz,1H),5.67(br s,1H),3.76–3.64(m,2H),3.27(t,J＝5.1Hz,2H),2.70–2.40(m,2H)。
步驟C：將4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(10,0.393g,1.41mmol)和PtO2(0.095mg,0.42mmol)在EtOAc(14mL)中的混合物在環(huán)境溫度下并使用H2氣囊通入氫氣的情況下攪拌18小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液減壓濃縮并溶解在CH2Cl2(4mL)中。向該溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,4.0mL)，將產(chǎn)生的混合物在環(huán)境溫度下攪拌20分鐘。將所得懸浮液用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集固體，得到白色固體4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(11)(309mg,78％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6).8.81(br s,2H),7.80(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),7.39–7.26(m,2H),3.43–3.30(m,1H,與H2O重合),3.24–2.97(m,3H),2.11–1.90(m,2H),1.88–1.75(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(14)的制備
步驟A：將4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.18g,3.56mmol)、2-氯-3-氟苯基硼酸(0.621g,3.56mmol)、Pd(PPh3)4(0.411g,0.356mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加熱6小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾除去產(chǎn)生的固體。將濾液用鹽水溶液(4×50mL)洗滌并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，40g Redisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油狀物4-(2-氯-3-氟苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)羧酸叔丁酯(12)(0.579g,52％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6).7.43–7.31(m,2H),7.16–7.10(m,1H),5.81–5.72(m,1H),4.03–3.93(m,2H),3.53(t,J＝5.7Hz,2H),2.41–2.31(m,2H),1.43(s,9H)。
步驟B：將4-(2-氯-3-氟苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(12,0.488g，1.41mmol)和PtO2(0.109g,0.48mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物在環(huán)境溫度下并使用H2氣囊通入氫氣的情況下攪拌18小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液減壓濃縮并溶于CH2Cl2(4mL)中。向該溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液，4.0mL)，將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌20分鐘。將所得懸浮液用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集固體，得到透明半固體4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13)(0.471g，95％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)7.43–7.19(m,3H),4.17–4.01(m,2H),3.20–3.03(m,1H),2.95–2.68(m,2H),1.79–1.65(m,2H),1.58–1.45(m,2H),1.41(s,9H)。
步驟C：在N2氣氛下，向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13,0.520g，1.66mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,10mL)，將溶液在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。用Et2O(20mL)稀釋反應(yīng)混合物。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀并用Et2O洗滌，得到白色固體4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(14)(309mg,74％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.81–8.55(m,2H),7.47–7.37(m,1H),7.36–7.27(m,1H),7.21–7.13(m,1H),3.43–3.20,(m,3H),3.17–2.97(m,2H),2.00–1.73(m,4H)。
4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(17)的制備
步驟A：將4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g，3.3mmol)、2-氯-5-氟苯基硼酸(0.58g,3.3mmol)、Pd(PPh3)4(0.38g,0.33mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加熱6小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾除去產(chǎn)生的固體。將濾液用鹽水溶液(4×50mL)洗滌并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，40g Redisep柱，0％-80％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油狀物4-(2-氯-5-氟苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)羧酸叔丁酯(15)(0.57g,55％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)7.53–7.46(m,1H),7.23–7.14(m,2H),5.79–5.74(m,1H),4.00–3.92(m,2H),3.52(t,J＝5.7Hz,2H),2.40–2.32(m,2H),1.43(s,9H)。
步驟B：向4-(2-氯-5-氟苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(15,0.573g,1.84mmol)的CH2Cl2(11mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,11.0mL)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(30mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到白色固體4-(2-氯-5-氟苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(16)(0.267g,80％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.15(br s,2H),7.54(dd,J＝9.0,5.4Hz,1H),7.29–7.17(m,1H),7.14(dd,J＝9.3,3.0Hz,1H),5.84–5.79(m,1H),3.76–3.68(m,2H),3.28(t,J＝5.7Hz,2H),2.62–2.53(m,2H)；ESI MS m/z 212[M+H]+。
步驟C：將4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(16,0.310g,1.31mmol)、PtO2(0.085g,0.37mmol)和HOAc(71μL,1.31mmol)在EtOAc(12mL)中的混合物在環(huán)境溫度下H2(1atm)氣氛中攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用EtOAc(50mL)和CH3OH(5mL)稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液減壓濃縮并溶于CH2Cl2(5mL)。向該溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,2.0mL)，將混合物在環(huán)境溫度下攪拌5分鐘。所得懸浮液用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集固體得到灰白色固體4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(17)(215mg,48％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.93–8.20(m,2H),7.58–7.48(m,1H),7.22–7.12(m,1H),7.11–7.01(m,1H),3.43–3.30(m,2H),3.29–3.16(m,1H),3.14–2.89(m,2H),2.01–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 214[M+H]+。
4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20)的制備
步驟A：將4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.10g,3.32mmol)和(3,5-雙三氟甲基)苯基)硼酸(1.42g,3.32mmol)、Pd(PPh3)4(0.38g,0.33mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(50mL)中的混合物在80℃加熱6小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾除去產(chǎn)生的固體。將濾液用鹽水溶液(4×50mL)洗滌并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，40gRedisep柱，0％至80％EtOAc的己烷溶液)，得到黃色油狀物4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(18)(0.891g,68％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6).8.09–8.04(m,2H),8.00–7.96(m,1H),6.53–6.42(m,1H),4.09–4.00(m,2H),3.55(t,J＝5.7Hz,2H),2.60–2.52(m,2H),1.43(s,9H)。
步驟B：向4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(18,0.891g,2.25mmol)的CH2Cl2(11mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液，11.0mL)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(30mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到白色固體4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(19)(0.452g,60％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.34(br s,2H),8.14–8.09(m,2H),8.08–8.04(m,1H),6.59–6.53(m,1H),3.83–3.74(m,2H),3.38–3.25(m,2H),2.83–2.71(m,2H)；ESI MS m/z 296[M+H]+。
步驟C：將4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(19,452mg,1.37mmol)、甲酸銨(0.863g,13.7mmol)和10％Pd/C(0.332g)在CH3OH(10mL)中的混合物加熱回流7小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度，并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濃縮濾液，將所得殘余物在CH2Cl2(8mL)和CH3OH(2mL)中稀釋。向該溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液，6mL)。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體，得到白色固體4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20)(376mg,82％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.05–8.58(m,2H),8.03–7.97(m,1H),7.95–7.87(m,2H),3.44–3.29(m,2H,與H2O重合),3.19–2.88(m,3H),2.09–1.80(m,4H)；ESI MS m/z 298[M+H]+。
4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(23)的制備
步驟A：將4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2,1.20g,3.62mmol)和6-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(0.528g,2.53mmol)、Pd(PPh3)4(0.292g,0.253mmol)和2M Na2CO3(20mL)在DME(30mL)中的混合物在80℃加熱4小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度，用EtOAc(50mL)稀釋，并通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。有機(jī)濾液用飽和碳酸氫鈉溶液(2×30mL)、H2O(30ml)洗滌并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Companion裝置，40g Redisep柱，0％至10％EtOAc的己烷溶液)，得到透明油狀物4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(21)(0.479g,39％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.66–7.51(m,3H),5.68(s,1H),4.04–3.82(m,2H),3.67–3.39(m,2H),2.39–2.02(m,2H),1.43(s,9H)。
步驟B：將4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(21,0.479g,1.41mmol)和PtO2(0.095g,0.42mmol)在EtOAc(15mL)中的混合物以及HOAc(82μL,1.4mmol)在H2(1atm)氣氛中、于環(huán)境溫度下攪拌72小時(shí)。將混合物用EtOAc(50mL)稀釋并經(jīng)硅藻土過(guò)濾。濃縮濾液，殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Companion裝置，24g Redisep柱，0％至15％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(22)(0.219g,45％)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6).7.62–7.48(m,3H),4.15–3.94(m,1H),3.10–2.94(m,2H),2.93–2.67(m,2H),2.00–1.79(m,2H),1.67–1.55(m,2H),1.42(s,9H)。
步驟C：向4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(22,0.219g,0.63mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液中加入2N HCl(2.0N的Et2O溶液,4mL)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)。用Et2O(50mL)稀釋反應(yīng)混合物。通過(guò)過(guò)濾收集固體，得到灰白色固體4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(23)(158mg,88％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).8.82(br s,1H),8.50(br s,1H),7.66–7.48(m,3H),3.42–3.33(m,2H),3.24–2.95(m,3H),2.35–2.15(m,2H),1.87–1.74(m,2H)；ESI MS m/z 248[M+H]+。
4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(28)的制備
步驟A：將3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯胺(24,1.0g,5.07mmol)在48％HBr水溶液(8mL)和H2O(8mL)中的懸浮液在-5℃下攪拌5分鐘。保持-5℃的條件下向所述懸浮液中滴加NaNO2(350mg,5.07mmol)的10mL水溶液。將所得混合物在-5℃下攪拌1小時(shí)，然后分批加入CuBr(1.09g,7.63mmol)，將所得懸浮液升溫至室溫。4小時(shí)后，將所得溶液用己烷(3×75mL)萃取。合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上進(jìn)行層析(40g Redisep柱，純己烷)得到淺黃色液體1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(25)(1.01g,68％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).7.34–7.28(m,1H),6.99–6.85(m,1H)。
步驟B：將1-溴-3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯(25,0.200g,0.76mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.237g,0.76mmol)、Pd(dppf)(0.056g,0.077mmol)和2N Na2CO3(2mL,4mmol)在DME(3mL)中的混合物加熱至85℃并保持5小時(shí)。將混合物用H2O(50mL)稀釋，并用CH2Cl2(3×75mL)萃取。合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥，減壓濃縮，所得殘余物在硅膠上層析(24g Redisep柱，0-25％EtOAc的己烷溶液)得到淡黃色油狀物4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(26)(0.325g,90％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).6.92–6.80(m,1H),6.78–6.68(m,1H),5.58(s,1H),4.06–3.94(m,2H),3.69–3.53(m,2H),2.36–1.24(m,2H),1.50(s,9H)。
步驟C：將4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(26,0.750g,2.11mmol)和10％Pd/C(1.0g)在EtOH(50mL)中的混合物在環(huán)境溫度下H2氣氛中攪拌24小時(shí)。將混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液減壓濃縮得到白色固體4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(27)(535mg,82％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).6.97–6.85(m,1H),6.85–6.69(m,1H),4.37–4.16(m,2H),3.23–3.05(m,2H),2.89–2.71(m,2H),1.86–1.51(m,4H),1.48(s,9H)。
步驟D：將4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(27,0.590g,1.61mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液和HCl(2.0N的Et2O溶液)在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將生成的固體過(guò)濾得到白色固體4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(28)(0.309g,63％)。1H NMR(300MHz,CDCl3).7.01–6.94(m,1H),6.94–6.76(m,1H),3.82–3.60(m,2H),3.42–3.02(m,3H),2.22–1.99(m,4H)。
(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)的制備
步驟A：向4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(5，0.080g,0.28mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.098g,0.67mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.85mmol)的DMF(5.3mL)溶液中加入EDCI(0.065mg,0.34mmol)和HOBt(46mg,0.34mmol)，將混合物在環(huán)境溫度下攪拌24小時(shí)。將混合物用H2O(30mL)稀釋，并用EtOAc(4×30mL)萃取。將合并的有機(jī)提取物用飽和鹽水溶液(4×30mL)洗滌，并減壓濃縮至干。將所得殘余物在硅膠上進(jìn)行層析(Isco CombiFlash Rf裝置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至10％CH3OH的CH2Cl2溶液)，得到白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)羧酸叔丁酯(29)(66mg,47％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.20–12.78(m,1H),7.73–7.59(m,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.37–7.24(m,1H),4.90–4.60(m,2H),4.53–4.43(m,2H),3.60–3.48(m,2H),3.28–2.98(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.65–2.50(m,2H,與溶劑重合),1.87–1.56(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z497[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(29，0.066g，0.13mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2mL，2.0N的Et2O溶液)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)，用Et2O(30mL)稀釋，過(guò)濾收集生成的固體得到白色固體(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)(0.027g,47％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6) .9.46–9.20(m,2H),7.74–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.37–7.25(m,1H),4.70–4.44(m,2H),4.34–4.22(m,2H),3.50–3.10(m,4H),2.93–2.76(m,3H),1.86–1.60(m,4H)；ESI MS m/z 468[M+H]+。
((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)的制備
步驟A：向4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(5，0.080g,0.28mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.098g,0.67mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.85mmol)的DMF(5.3mL)溶液中加入EDCI(0.065mg,0.34mmol)和HOBt(46mg,0.34mmol)，將混合物在環(huán)境溫度下攪拌24小時(shí)。將混合物用H2O(30mL)稀釋，并用EtOAc(4×30mL)萃取。將合并的有機(jī)提取物用飽和鹽水溶液(4×30mL)洗滌，并減壓濃縮至干。將所得殘余物在硅膠上進(jìn)行層析(Isco CombiFlash Rf裝置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至10％CH3OH的CH2Cl2溶液)，得到白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(31)(0.109g,77％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.20–12.78(m,1H),7.73–7.59(m,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.37–7.24(m,1H),4.90–4.60(m,2H),4.53–4.43(m,2H),3.60–3.48(m,2H),3.28–2.98(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.65–2.50(m,2H,與溶劑重合),1.87–1.56(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MSm/z 497[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(31，0.148g,0.30mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2mL,2.0N的Et2O溶液)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)，用Et2O(30mL)稀釋，過(guò)濾收集生成的固體得到白色固體((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)(0.097g,75％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6) .9.46–9.20(m,2H),7.74–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.37–7.25(m,1H),4.70–4.44(m,2H),4.34–4.22(m,2H),3.50–3.10(m,4H),2.93–2.76(m,3H),1.86–1.60(m,4H)；ESI MS m/z 468[M+H]+。
((4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮三氟乙酸鹽(34)的制備
步驟A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,41.1g,113mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入TFA(50mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)，并減壓濃縮。將殘余物溶解于DMF(240mL)中，向此溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(72.4g，560mmol)，接著加入6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸(30.1g，113mmol)和HBTU(74.7g，169mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，用EtOAc(1L)稀釋并用H2O(1.4L)洗滌。有機(jī)層用鹽水(3×600mL)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(30-80％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(33)(41.2g，71％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.47(br,1H),7.37–7.29(m,1H),7.15(m,1H),4.74(br,2H),4.60(s,2H),3.66(br,2H),3.23(m,1H),3.02(br,2H),2.72(m,2H),1.91–1.65(m,4H),1.89–1.66(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 515[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(33，41.2g，80.0mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中加入TFA(70mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，然后減壓濃縮得到灰白色固體((4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)(40.0g,>99％)。該物質(zhì)未經(jīng)光譜表征直接使用。
(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮三氟乙酸鹽(36)的制備
步驟A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,41.1g,113mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液中加入TFA(50mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)，并減壓濃縮。將殘余物溶解于DMF(240mL)中，向此溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(72.4g,560mmol)，接著加入5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-羧酸(30.1g,113mmol)和HBTU(74.7g,169mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，用EtOAc(1L)稀釋并用H2O(1.4L)洗滌。有機(jī)層用鹽水(3×600mL)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(30-80％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(35)(0.068g,80％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.23(br,1H),7.36–7.28(m,1H),7.15(m,1H),4.86(br,2H),4.62(s,2H),3.72(br,2H),3.27–2.74(m,5H),1.90–1.64(m,4H),1.48(s,9H)；MS(ESI+)m/z 515[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(35,41.2g,80.0mmol)在CH2Cl2(150mL)中的混合物加入TFA(70mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，然后減壓濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2中，所得溶液用飽和NaHCO3洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(0-20％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)(0.052g,95％)：1H NMR(300MHz,CDCl3.).7.36–7.27(m,1H),7.14(m,1H),4.92(m,2H),4.04(s,2H),3.27–2.69(m,7H),1.89–1.65(m,4H)；MS(ESI+)m/z415[M+H]+。
(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮鹽酸鹽(38)的制備
步驟A：向4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(9,0.100g,0.27mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入TFA(2mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)，并減壓濃縮。將殘余物溶解于DMF(2mL)中，向該溶液中加入5-(叔丁氧基羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-甲酸(0.073g,0.28mmol)、HBTU(0.191g,0.43mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.11g,0.864mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，并用EtOAc稀釋，鹽水洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(0-90％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(37)(0.132g,91％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).10.39(br,1H),7.38–7.30(m,1H),7.15–7.08(m,1H),4.80–4.26(m,6H),3.26–3.20(m,2H),2.92(br,1H),1.96–1.66(m,4H),1.51(s,9H)；MS(ESI+)m/z 501[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯(37,0.132g,0.26mmol)和CH2Cl2(1mL)的混合物中加入TFA(1mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)，減壓濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2中，溶液用飽和NaHCO3洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮。將所得殘余物在硅膠上層析(0-20％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)(0.070g,66％)：1HNMR(500MHz,CDCl3).7.36–7.31(m,1H),7.12(m,1H),4.82(br,1H),4.38(br,1H),4.11(s,2H),4.09(s,2H),3.24(m,2H),2.89(br,1H),1.93–1.68(m,4H)；MS(ESI+)m/z401[M+H]+。
(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)的制備
步驟A：向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(14，0.796g,3.18mmol)、6-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(0.935g,3.50mmol)和二異丙基乙胺(1.7mL,9.76mmol)在DMF(30mL)中的混合物中加入EDCI(0.853g,4.45mmol)和HOBt(0.601g,4.45mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌120小時(shí)，減壓濃縮，所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlashRf裝置，40g Redisep柱，0％至100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(39)(0.694g,47％)：1H NMR(300MHz,CDCl3).7.24–7.18(m,1H),7.06–7.00(m,2H),4.93–4.42(m,3H),3.67–3.65(m,2H),3.39–3.01(m,3H),2.73–2.70(m,2H),2.14–1.94(m,2H),1.71–1.68(m,2H),1.49–1.44(m,11H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(39,0.694g,1.50mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液中加入2M HCl的Et2O(16mL)溶液。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌6小時(shí)，并用Et2O(30mL)稀釋，產(chǎn)生的固體通過(guò)過(guò)濾收集得到灰白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)(0.509g,94％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).13.18(br s,1H),9.31(br s,2H),7.38–7.23(m,3H),4.69–4.65(m,2H),4.49–4.21(m,2H),3.39–3.11(m,4H),2.99–2.84(m,3H),1.94–1.54(m,4H)；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)的制備
步驟A：向4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(14，90mg,0.36mmol)、5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(96mg,0.36mmol)和二異丙基乙胺(0.19mL,1.08mmol)在DMF(7.8mL)中的混合物中加入EDCI(83mg,0.43mmol)和HOBt(58mg,0.43mmol)。將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集生成的沉淀。將得到的固體在硅膠上層析(Isco CombiFlashRf裝置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色泡狀物3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(41)(139mg,82％)：1HNMR(500MHz,DMSO-d6).13.11–12.91(m,1H),7.39–7.32(m,1H),7.30–7.22(m,2H),5.28–5.13(m,1H),4.75–4.60(m,1H),4.49–4.36(m,2H),3.65–3.53(m,2H),3.33–3.25(m,1H,與H2O重合),3.24–3.08(m,1H),2.91–276(m,1H),2.67(t,J＝5.5Hz,2H),1.91–1.75(m,2H),1.67–1.50(m,2H),1.41(s,9H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)羧酸叔丁酯(41,125mg,0.27mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2.0N的Et2O溶液,2mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體得到白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42,93mg,86％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6).9.37(br s,2H),7.42–7.21(m,3H),5.31–5.13(m,1H),4.74–4.57(m,1H),4.25–4.14(m,2H),3.44–3.14(m,4H,與H2O重合),3.00–2.75(m,3H),1.93–1.77(m,2H),1.70–1.47(m,2H)缺少N-H吡唑；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(44)的制備
步驟A：向4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(11，93mg,0.33mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(88mg,0.33mmol)和二異丙基乙胺(0.17mL,0.99mmol)的DMF(6.0mL)溶液中加入EDCI(76mg,0.40mmol)和HOBt(54mg,0.40mmol)。將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物用H2O(10mL)稀釋并用EtOAc(3×30mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用飽和鹽水溶液(4×20mL)洗滌，并減壓濃縮至干。將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置，12g Redisep柱，含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％MeOH的CH2Cl2溶液)得到白色膜狀物3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(43)(110mg,67％)：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.16–12.76(m,1H),7.82–7.71(m,1H),7.62–7.50(m,1H),7.33–7.18(m,1H),4.92–4.76(m,1H),4.74–4.59(m,1H),4.53–4.39(m,2H),3.54(t,J＝5.7Hz,2H),3.21–3.01(m,2H),2.86–2.69(m,1H),2.66–2.53(m,2H),1.83–1.62(m,4H),1.42(s,9H)；ESIMS m/z 497[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(43,107mg,0.21mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體得到白色固體(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(44)(66mg,71％)：1H NMR(500MHz,DMSO-d6).13.52–13.13(m,1H),9.41(br s,2H),7.77(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.62–7.50(m,1H),7.32–7.21(m,1H),5.00–4.83(m,1H),4.75–4.58(m,1H),4.37–4.19(m,2H),3.41–3.24(m,2H,與H2O重合),3.22–3.04(m,2H),2.94–2.73(m,3H),1.86–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(46)的制備
步驟A：向4-(5-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(11,90mg,0.32mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(85mg,0.32mmol)和二異丙基乙胺(0.17mL,0.96mmol)的DMF(5.8mL)溶液中加入EDCI(74mg,0.38mmol)和HOBt(52mg,0.38mmol)。所得溶液在室溫下攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(10mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(4×20mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色膜狀物3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(45)(120mg,80％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)12.96(br s,1H),7.76(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.61–7.51(m,1H),7.30–7.18(m,1H),5.34–5.16(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.53–4.38(m,2H),3.65–3.52(m,2H),3.22–3.01(m,2H),2.60–2.43(m,3H,與溶劑重合),1.83–1.65(m,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(45,120mg,0.24mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。再加入HCl(2N的Et2O溶液,1mL)并在環(huán)境溫度下攪拌混合物3小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集生產(chǎn)的固體得到白色固體(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(46):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)9.54–9.19(m,2H),7.84(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.60–7.51(m,1H),7.32–7.20(m,1H),5.32–5.12(m,1H),4.78–4.60(m,1H),4.29–4.16(m,2H),3.43–3.30(m,2H,與H2O重合),3.26–3.06(m,2H),2.95(t,J＝5.4Hz,2H),2.89–2.72(m,1H),1.84–1.65(m,4H)缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(48)的制備
步驟A：向4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(17,70mg,0.28mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(104mg,0.39mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.84mmol)的DMF(5.4mL)溶液中加入EDCI(65mg,0.34mmol)和HOBt(45mg,0.34mmol)。所得溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(20mL)稀釋并用EtOAc萃取(4×20mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(9×20mL)、H2O(2×20mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％to 100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(47)(57mg,44％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.16–12.78(m,1H),7.48(dd,J＝9.0,5.7Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.3Hz,1H),7.17–7.05(m,1H),4.90–4.59(m,2H),4.53–4.40(m,2H),3.62–3.48(m,2H),3.28–3.07(m,2H),2.92–2.73(m,1H),2.64–2.50(m,2H,與溶劑重合),1.93–1.69(m,2H),1.68–1.49(m,2H),1.42(S,9H)；ESI MS m/z 463[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(47,57mg,0.12mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物減壓濃縮得到白色固體(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(48)(43mg,87％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.42(br s,2H),7.49(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.28(dd,J＝10.2,3.0Hz,1H),7.16–7.07(m,1H),4.71–4.43(m,2H),4.32–4.23(m,2H),3.38–3.14(m,4H,與H2O重合),2.91–2.72(m,3H),1.89–1.73(m,2H),1.69–1.50(m,2H),缺少N-H pryazole；ESI MS m/z 363[M+H]+。
(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(50)的制備
步驟A：向4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(17,70mg,0.28mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(89mg,0.34mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.84mmol)的DMF(5.4mL)溶液中加入EDCI(64mg,0.34mmol)和HOBt(45mg,0.34mmol)。所得溶液在室溫下攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(20mL)稀釋并用EtOAc萃取(4×20mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(8×20mL)、H2O(20mL)洗滌,并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12gRedisep柱,0％to100％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固體3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(49)(78mg,60％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),7.48(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.34–7.21(m,1H),7.16–7.06(m,1H),5.28–5.11(m,1H),4.77–4.57(m,1H),4.53–4.38(m,2H),3.66–3.52(m,2H),3.30–3.04(m,2H,與H2O重合),2.92–2.61(m,3H),1.92–1.74(m,2H),1.69–1.49(m,2H),1.41(s,9H)；ESI MS m/z 462[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(49,78mg,0.17mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,2mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物減壓濃縮得到白色固體(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(50)(64mg,94％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.19(br s,2H),7.49(dd,J＝8.7,5.4Hz,1H),7.27(dd,J＝10.2,3.0Hz,1H),7.17–7.07(m,1H),5.34–5.05(m,1H),4.79–4.56(m,1H),4.38–4.19(m,2H),3.44–3.07(m,4H,與H2O重合),3.01–2.76(m,3H),1.92–1.73(m,2H),1.71–1.50(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 363[M+H]+。
((4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)的制備
步驟A：向4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20,100mg,0.31mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(96mg,0.36mmol)和二異丙基乙胺(0.16mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(4×30mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色膜狀物3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(51)(76mg,45％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.13–12.77(m,1H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.91(m,1H),4.91–4.59(m,2H),4.53–4.41(m,2H),3.60–3.46(m,2H),3.21–3.03(m,2H),2.85–2.69(m,1H),2.63–2.54(m,2H,與溶劑重合),1.97–1.78(m,2H),1.77–1.58(m,2H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 547[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(51,75mg,0.14mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液中加入HCl(2N的Et2O溶液,1mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(50mL)稀釋并濃縮得到黃色固體(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)(79mg,>99％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.37(br s,2H),8.05–7.86(m,3H),4.75–4.44(m,2H),4.39–4.18(m,2H),3.42–3.25(m,2H,與H2O重合),3.20–3.03(m,2H),2.95–2.75(m,3H),2.03–1.80(m,2H),1.79–1.62(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(54)的制備
步驟A：向4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20,100mg,0.30mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(81mg,0.30mmol)和二異丙基乙胺(0.18mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋。通過(guò)過(guò)濾收集生成的沉淀得到白色固體3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53)(142mg,86％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.95–7.90(m,1H),5.31–5.13(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.52–4.39(m,2H),3.64–3.53(m,2H),3.20–3.03(m,2H),2.87–2.61(m,3H),1.97–1.81(m,2H),1.78–1.58(m,2H),1.41(s,9H)；ESIMS m/z 547[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53,142mg,0.26mmol)在1:1MeOH/CH2Cl2(2mL)的溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集生成的固體得到灰白色固體(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(54)(127mg,>99％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.28(br s,2H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.92(m,1H),5.30–5.09(m,1H),4.78–4.55(m,1H),4.28–4.14(m,2H),3.43–3.28(m,2H,與H2O重合),3.26–3.07(m,2H),3.02–2.90(m,2H),2.89–2.75(m,1H),2.00–1.82(m,2H),1.80–1.61(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(56)的制備
步驟A：向4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20,83mg,0.29mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(78mg,0.29mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.88mmol)的DMF(6.3mL)溶液中加入EDCI(67mg,0.35mmol)和HOBt(47mg,0.35mmol)。所得溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集生成的固體。所得固體在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％至5％MeOH的CH2Cl2溶液)得到透明膜狀物3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(55)(95mg,65％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.27–12.72(m,1H),7.63–7.45(m,3H),4.86–4.56(m,2H),4.55–4.38(m,2H),3.63–3.43(m,2H),3.27–3.00(m,2H),2.92–2.41(m,3H,與溶劑重合),2.13–1.84(m,2H),1.80–1.61(m,2H),1.42(s,9H)；ESI MSm/z496[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(55,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2N in Et2O,3mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，并減壓濃縮所得混合物得到白色固體(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(56)(80mg,97％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)9.39–9.26(m,2H),7.63–7.47(m,3H),4.76–4.40(m,1H),4.35–4.25(m,2H),3.78–3.39(m,4H),3.25–3.08(m,2H),2.91–2.78(m,3H),2.11–1.88(m,2H),1.81–1.66(m,2H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(58)的制備
步驟A：向4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20,100mg,0.30mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(81mg,0.30mmol)和二異丙基乙胺(0.18mL,0.90mmol)的DMF(5.6mL)溶液中加入EDCI(69mg,0.36mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到白色固體3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53)(142mg,86％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.95–7.90(m,1H),5.31–5.13(m,1H),4.76–4.58(m,1H),4.52–4.39(m,2H),3.64–3.53(m,2H),3.20–3.03(m,2H),2.87–2.61(m,3H),1.97–1.81(m,2H),1.78–1.58(m,2H),1.41(s,9H)；ESIMS m/z 547[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(53,142mg,0.26mmol)在1:1MeOH/CH2Cl2(2mL)的溶液中加入HCl(2N in Et2O,2mL)。混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀得到灰白色固體(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(54)(127mg,>99％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)9.28(br s,2H),8.02–7.98(m,2H),7.96–7.92(m,1H),5.30–5.09(m,1H),4.78–4.55(m,1H),4.28–4.14(m,2H),3.43–3.28(m,2H,與H2O重合),3.26–3.07(m,2H),3.02–2.90(m,2H),2.89–2.75(m,1H),2.00–1.82(m,2H),1.80–1.61(m,2H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 447[M+H]+。
(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(60)的制備
步驟A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(28,500mg,1.66mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(443mg,1.66mmol)和二異丙基乙胺(36μL,2.04mmol)的DMF(5mL)懸浮液中加入HBTU(1.10g,2.49mmol)。將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)用H2O(50mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×75mL)。合并的有機(jī)提取物用Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(40gRedisep柱,0–100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(59)(200mg,23％).1H NMR(300MHz,CDCl3)7.017–6.876(m,1H),6.876–6.741(m,1H),5.306(s,1H),4.632(s,2H),3.776–3.581(m,2H),2.762–2.631(m,2H),1.986–1.653(m,4H),1.500(s,9H),1.399–1.189(m,4H)。
步驟B：向3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸鹽(59,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2.0N HCl的Et2O溶液,3mL)。混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，將所得混合物減壓濃縮得到白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(60)(80mg,97％)。
(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(62)的制備
步驟A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(28,500mg,1.66mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(443mg,1.66mmol)和二異丙基乙胺(36μL,2.04mmol)的DMF(5mL)懸浮液中加入HBTU(1.10g,2.49mmol)。將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)用H2O(50mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×75mL)。合并的有機(jī)提取物用Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(40gRedisep柱,0–100％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(61)(200mg,23％)。
步驟B：向3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(61,94mg,0.19mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入HCl(2.0N HCl的Et2O溶液,3mL)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用Et2O(20mL)稀釋，用飽和NaHCO3溶液洗滌，并減壓濃縮得到白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(62)(80mg,97％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.73(s,1H),7.487–7.336(m,2H),5.193–5.008(m,1H),4.76–4.58(br s,1H),3.75(s,2H),3.25–3.04(m,2H),2.94–2.84(m,1H),2.84–2.71(br s,1H),2.60–2.53(m,2H),1.89–1.58(m,4H)；ESI MS m/z 415.1[M+H]+。
實(shí)施例1：1-(3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(63)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(20mg,73％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.18–12.83(m,1H),7.73–7.60(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.35–7.26(m,1H),4.91–4.49(m,4H),3.71–3.57(m,2H),3.25–3.06(m,2H),2.85–2.48(m,3H,與溶劑重合),2.12–2.05(m,3H),1.83–1.66(m,4H)；ESIMS m/z 439[M+H]+。
實(shí)施例2：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(64)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和甲烷磺酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(23mg,41％):mp243–246℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(br s,1H),7.69–7.60(m,1H),7.46(d,J＝7.5Hz,1H),7.33–7.26(m,1H),5.30–5.21(m,1H),4.72–4.62(m,1H),4.41–4.24(m,2H),3.52–3.39(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.95(s,3H),2.85–2.74(m,3H),1.85–1.61(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
實(shí)施例3：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(65)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(75mg,0.28mmol)的THF(2.3mL)溶液中加入LiOH·H2O(23mg,0.56mmol)的H2O(1.5mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘并用2N HCl中和。減壓濃縮所述混合物。所得殘余物在N2氣氛下用DMF(3.0mL)稀釋。向此混合物中加入4-(3-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(5,78mg,0.28mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(245mg,0.556mmol)和二異丙基乙胺(107mg,0.834mmol)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。所得混合物用H2O(20mL)稀釋?；旌衔镉肊tOAc(4×30mL)萃取。將合并的有機(jī)層用5％氯化鋰溶液(4×20mL)洗滌并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc的己烷溶液)得到橙色膜狀物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(87mg,66％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.13–9.10(m,1H),7.75–7.62(m,2H),7.52–7.46(m,1H),7.38–7.25(m,1H),5.30–5.17(m,1H),4.78–4.64(m,1H),3.42–3.28(m,3H,與H2O重合),3.11–2.92(m,1H),1.98–1.70(m,4H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
步驟B：向(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(87mg,0.19mmol)和氰化鋅(43mg,037mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar氣10分鐘。向該溶液中加入Pd(PPh3)4(21mg,0.019mmol)，密封容器，并微波加熱至130℃保持30分鐘?；旌衔镉蔑柡吞妓釟溻c溶液(30mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×30mL)。將合并的有機(jī)提取物減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％至70％EtOAc的己烷溶液)并冷凍干燥得到白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(52mg,67％):mp 188–190℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.51(m,1H),8.13(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.71–7.65(m,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.17–5.09(m,1H),4.78–4.70(m,1H),3.44–3.28(m,2H,與H2O重合),3.09–3.00(m,1H),1.97–1.75(m,4H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
實(shí)施例4：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(66)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E2，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(32mg,41％):mp165–170℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03–12.85(m,1H),7.70–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝12.0,8.0Hz,1H),6.58–6.49(m,1H),5.19–5.06(m,2H),4.76–4.62(m,2H),3.63–3.50(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.64(t,J＝5.5Hz,2H),2.59–2.54(m,3H),1.84–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 454[M+H]+。
實(shí)施例5：(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(67)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(2.5mg,2％):1H NMR(500MHz,CD3OD)7.64–7.53(m,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.13(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),4.90–4.72(m,2H,與H2O重合),3.62(br s,2H),3.34–3.17(m,2H,與溶劑重合),2.92–2.78(m,5H),2.68(q,J＝7.0Hz,2H),1.96–1.74(m,4H),1.20(t,J＝7.5Hz,3H),缺失NH-吡唑；ESI MS m/z 425[M+H]+。
實(shí)施例6：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(68)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B1，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(62mg,60％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.11–12.94(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.33–5.16(m,1H),4.74–4.60(m,1H),4.56–4.41(m,2H),3.68–3.58(m,5H),3.26–3.08(m,2H),2.85–2.74(m,1H),2.70(t,J＝5.5Hz,2H),1.85–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 455[M+H]+。
實(shí)施例7：(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(69)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(33mg,81％):1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.92–12.73(m,1H),7.69–7.61(m,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),5.13–5.00(m,1H),4.73–4.60(m,1H),3.60–3.46(m,2H),3.25–3.03(m,2H),2.83–2.64(m,5H),2.41–2.33(m,2H),1.85–1.59(m,4H),0.94–0.83(m,1H),0.52–0.44(m,2H),0.14–0.08(m,2H)；ESI MS m/z 451[M+H]+。
實(shí)施例8：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(70)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和溴化氫轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(35mg,70％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.26–13.05(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(dd,J＝12.5,8.5Hz,1H),5.32–5.20(m,1H),4.71–4.61(m,1H),4.44–4.29(m,2H),3.46(t,J＝5.5Hz,2H),3.27–3.09(m,2H),2.87–2.73(m,3H),1.85–1.59(m,4H)；ESI MS m/z422[M+H]+。
實(shí)施例9：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(71)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(71mg,64％):mp 144–151℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.99–12.81(m,1H),7.68–7.61(m,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.38–7.26(m,1H),5.20–5.08(m,1H),4.69–4.61(m,1H),3.82–3.69(m,2H),3.50–3.30(m,2H,與H2O重合),3.24–3.06(m,2H),2.92(t,J＝6.5Hz,2H),2.83–2.73(m,1H),2.70(t,J＝5.5Hz,2H),1.86–1.58(m,4H)；ESI MS m/z 479[M+H]+。
實(shí)施例10：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(72)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(26mg,32％):mp152–159℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.93–12.75(m,1H),7.69–7.61(m,1H),7.47–7.43(m,1H),7.29(dd,J＝12.0,8.5Hz,1H),5.11–5.00(m,1H),4.71–4.62(m,1H),3.58–3.44(m,2H),3.25–3.06(m,2H),2.83–2.61(m,7H),2.58–2.46(m,1H,與溶劑重合),1.84–1.59(m,4H)；ESIMS m/z 493[M+H]+。
實(shí)施例11：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-3aH-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(73)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和溴代乙基甲基醚轉(zhuǎn)化為灰白色固體4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-3aH-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,56％):mp147–151℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.82(br s,1H),7.65–7.27(m,3H),5.18–5.09(m,1H),4.75–4.60(m,1H),3.51–3.45(m,2H),3.27–3.11(m,6H),2.84–2.70(m,8H),1.87–1.63(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
實(shí)施例12：4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(74)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和3-氧雜環(huán)丁烷轉(zhuǎn)化為白色泡沫狀物4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(30mg,29％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.04(br s,1H),7.48–7.42(m,1H),7.20–7.17(m,1H),7.06–7.02(m,1H),5.22–4.81(m,2H),4.74(d,J＝6.6Hz,4H),3.89–3.81(m,1H),3.62(br s,2H),3.31–3.24(m,1H),3.21–2.68(m,5H),1.91–1.72(m,5H)；ESI MS m/z 453[M+H]+。
實(shí)施例13：(6-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(75)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(6-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(21mg,31％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.48–7.27(m,2H),4.92–4.63(m,2H),3.68–3.04(m,4H),2.90–2.39(m,7H),1.74–1.55(m,4H),1.18–1.02(m,3H)；ESI MS m/z 425[M+H]+。
實(shí)施例14：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(76)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和溴代三氟甲基丙烷轉(zhuǎn)化為白色固體4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(19mg,15％):mp 162–166℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.78(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.48–7.27(m,2H),4.92–4.63(m,2H),3.57–3.53(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.88–2.39(m,9H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 493[M+H]+。
實(shí)施例15：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-3aH-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(77)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和溴代乙基甲基醚轉(zhuǎn)化為白色固體4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-3aH-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(23mg,30％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(br s,1H),7.67–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.33–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),3.57–3.48(m,4H),3.27–3.05(m,5H),2.81–2.49(m,7H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 455[M+H]+。
實(shí)施例16：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(78)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(38mg,53％):mp 194–198℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(br s,1H),7.68–7.65(m,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),4.48–4.40(m,2H),3.43–3.38(m,2H),3.27–3.05(m,2H),2.88–2.71(m,3H),1.77–1.72(m,4H)；ESI MS m/z422[M+H]+。
實(shí)施例17：(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(79)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3-氟-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)(6-氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(30mg,39％):mp148–151℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.77(br s,1H),7.70–7.63(m,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.66(m,1H),3.47–3.34(m,2H),3.28–3.06(m,2H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,2H),1.91–1.78(m,2H),1.89–1.55(m,4H)；ESI MS m/z 453[M+H]+。
實(shí)施例18：(6-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將((4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(30)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(6-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(23mg,34％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(br s,1H),7.72–7.65(m,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),4.92–4.63(m,2H),3.59–3.53(m,2H),3.32–3.09(m,2H),2.90–2.39(m,7H),1.81–1.62(m,4H),0.92–0.85(m,1H),0.52–0.48(m,2H),0.14–0.10(m,2H)；ESI MS m/z 451[M+H]+。
實(shí)施例19：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(81)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(29.2g,80％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.59(br,1H),7.36–7.29(m,1H),7.15(m,1H),4.81(br,2H),4.77and 4.65(s,2H),3.85(br,1H),3.68(m,1H),3.26–2.69(m,5H),2.21and2.19(s,3H),1.89–1.73(m,4H)MS(ESI+)m/z 457[M+H]+。
實(shí)施例20：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙酮(82)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-基)乙酮(0.046g,85％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.15(br,1H),7.36–7.27(m,1H),7.15(m,1H),5.33–4.72(m,4H),3.90–3.73(m,2H),3.30–2.76(m,5H),2.20(s,3H),1.89–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z 457[M+H]+。
實(shí)施例21：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)乙酮(83)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)乙酮(0.045g,72％):1H NMR(500MHz,CDCl3)10.92(br,1H),7.37–7.32(m,1H),7.12(m,1H),4.81–4.21(m,6H),3.29–2.88(m,3H),2.18and2.16(s,3H),1.97–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z 443[M+H]+。
實(shí)施例22：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)丙烷-1-酮(84)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和丙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)丙烷-1-酮(37mg,51％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.38–7.30(m,1H),7.13–7.10(m,1H),4.99–4.61(m,5.5H),4.46–4.19(m,0.5H),3.46–2.72(m,3H),2.42–2.35(m,2H),1.99–1.92(m,2H),1.82–1.57(m,2H),1.35–1.16(m,3H),缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 457[M+H]+。
實(shí)施例23：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-2-甲基丙烷-1-酮(85)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和異丁酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-2-甲基丙烷-1-酮(29mg,38％):mp 249–253℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.21,(br s,1H),7.81–7.68(m,1H),7.57–7.47(m,1H),4.83–3.65(m,6H),3.29–2.67(m,4H),1.82–1.61(m,4H),1.05(d,J＝9Hz,6H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
實(shí)施例24：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-3-甲基丁烷-1-酮(86)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和異戊酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H,4H,6H)-基)-3-甲基丁烷-1-酮(42mg,54％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.37–7.28(m,1H),7.17–7.08(m,1H),4.95–4.53(m,5.5H),4.43–3.90(m,0.5H),3.34–2.70(m,3H),2.30–2.19(m,3H),1.98–1.89(m,2H),1.80–1.58(m,2H),1.05–0.94(m,6H)缺失N-H吡唑；ESI MS m/z 485[M+H]+。
實(shí)施例25：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(87)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(35mg,36％):mp 185–190℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.793(s,1H),7.903–7.609(m,1H),7.60–7.40(m,1H),5.24–4.93(m,1H),4.85–4.49(m,1H),3.45(s,2H),3.13(s,2H),2.96–2.71(m,1H),2.61(s,4H),2.58–2.52(m,1H),1.84–1.57(br s,4H),1.19–0.97(t,3H)；ESI MS m/z 433.1[M+H]+。
實(shí)施例26：(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(88)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(38mg,37％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),7.80–7.66(m,1H),7.54–7.45(m,1H),5.19–5.03(br s,1H),4.73–4.58(m,1H),3.66–3.46(br s,1H),3.22–3.05(br s,2H),2.85–2.63(m,4H),1.83–1.59(br s,4H),0.99–0.82(br s,1H),0.58–0.43(m,2H),0.21–0.07(br s,2H)；ESI MS m/z469.2[M+H]+。
實(shí)施例27：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(89)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,27％):mp212–215℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.847(s,1H),7.796–7.684(m,1H),7.546–7.458(m,1H),5.151(d,1H),4.737–4.554(m,3H),4.554–4.423(m,2H),3.755–3.600(m,1H),3.379(s,2H),3.222–3.050(br s,2H),2.844–2.643(m,3H),1.898–1.515(br s,4H)；ESI MS m/z 471.2[M H]+。
實(shí)施例28：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(90)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和特戊醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(11mg,10％):mp 203–210℃；
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.789(s,1H),7.821–7.681(m,1H),7.553–7.424(m,1H),5.216–5.064(br s,1H),4.755–4.579(br s,1H),3.686–3.546(m,2H),3.172–3.070(m,2H),2.845–2.710(m,1H),2.249(s,2H),1.799–1.612(m,4H),0.864(s,9H)；ESIMS m/z 485.2[M H]+。
實(shí)施例29：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(91)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(21mg,20％):mp 248–252℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.924(s,1H),7.763–7.692(m,1H),7.540–7.472(m,1H),5.358–5.152(br s,1H),4.754–4.605(br s,1H),4.650–4.418(m,2H),3.705–3.581(m,6H),3.119–3.100(m,3H),2.860–2.731(m,4H),1.296–1.237(m,6H)；ESI MS m/z473.1[M+H]+。
實(shí)施例30：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(92)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(28mg,36％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.895(s,1H),7.780–7.692(m,1H),7.538–7.472(m,1H),6.579–6.490(m,1H),5.202–5.086(m,1H),4.743–4.622(m,1H),4.465–4.332(m,2H),3.630–3.499(m,2H),3.209–3.095(m,2H),2.849–2.730(m,1H),2.673–2.602(m,2H),2.602–2.542(m,3H),1.912–1.588(m,5H)；ESI MS m/z 472.2[M+H]+。
實(shí)施例31：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(93)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和1,1,1-三氟-3-溴丙烷轉(zhuǎn)化白色固體為(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(24mg,21％):mp 190–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.939–12.764(m,1H),7.847–7.665(m,1H),7.591–7.417(m,1H),5.213–4.965(m,1H),4.729–4.555(m,1H),3.637–3.456(m,2H),3.223–3.039(br s,2H),2.853–2.698(m,5H),2.698–2.623(m,2H),2.596–2.522(m,1H),1.859–1.589(m,4H)；ESI MS m/z 511.1[M+H]+。
實(shí)施例32：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(94)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和2-甲氧基溴代乙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(24mg,23％):mp179–182℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.805(s,1H),7.824–7.654(m,1H),7.563–7.438(m,1H),5.085(s,1H),4.660(s,1H),3.517(s,4H),3.268(s,3H),3.187–3.063(m,2H),2.906–2.604(m,6H),1.885–1.550(m,4H)；ESI MSm/z 473.2[M+H]+。
實(shí)施例33：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(95)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(95mg,quant.):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.115(s,1H),7.833–7.627(m,1H),7.627–7.409(m,1H),5.188–5.067(m,1H),4.558–4.469(m,1H),4.374(s,2H),3.538–3.404(m,2H),3.074–2.98(br s,2H),2.877–2.805(m,2H),1.801–1.694(br s,4H)；ESI MS m/z 440[M+H]+。
實(shí)施例34：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(96)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(36mg,76％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.140–12.832(m,1H),7.879–7.669(m,1H),7.669–7.408(m,1H),5.271–3.901(m,2H),3.901–3.559(m,4H),3.216–3.013(m,2H),2.960–2.684(m,3H),1.854–1.569(m,4H),1.162–1.005(m,3H)；ESI MS m/z 429.2[M+H]+。
實(shí)施例35：(5-(環(huán)丙基甲基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(97)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體((5-(環(huán)丙基甲基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(36mg,76％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.101–12.818(m,1H),7.887–7.665(m,1H),7.665–7.423(m,1H),5.223–3.923(m,2H),3.923–3.594(m,4H),3.258–3.667(m,3H),2.667–2.533(m,2H),1.827–1.606(m,4H),0.988–0.793(m,1H),0.598–0.417(m,2H),0.235–0.087(m,2H)；ESI MS m/z 455.1[M+H]+。
實(shí)施例36：(5-(環(huán)丙基甲基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(98)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(39mg,74％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.105–12.925(m,1H),7.874–7.651(m,1H),7.602–7.442(m,1H),5.250–4.509(m,1H),4.245–3.601(m,5H),3.221–3.074(m,1H),3.016–2.723(m,3H),2.596–2.518(m,2H),1.854–1.610(m,4H)；ESI MS m/z 457.1[M+H]+。
實(shí)施例37：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(99)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和特戊醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-新戊基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(25mg,46％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.060–12.840(m,1H),7.840–7.440(m,2H),5.315–4.473(m,1H),4.210–3.642(m,5H),3.272–2.728(m,3H),2.555(s,2H),1.867–1.597(m,4H),0.905(s,9H)；ESI MS m/z 471.2[M+H]+。
實(shí)施例38：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-甲酰胺(100)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)甲酰胺(55mg,53％):mp>260℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.449–12.960(m,1H),7.719–7.620(m,1H),7.620–7.379(m,1H),6.272(s,1H),5.454–3.850(m,6H),3.240–2.737(m,3H),2.623(s,3H),1.979–1.523(m,4H；ESI MS m/z 458.1[M+H]+。
實(shí)施例39：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸甲酯(101)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸甲酯(30mg,55％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.503–13.110(br s,1H),7.310–7.721(m,1H),7.587–7.471(m,1H),4.808–4.531(br s,1H),4.531–4.370(m,4H),3.673(s,3H),3.277–3.102(m,2H),3.012–2.722(br s,1H),1.851–1.621(m,4H)；ESI MS m/z 459.2[M+H]+。
實(shí)施例40：(5-苯甲酰-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(102)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和苯甲酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(5-苯甲酰-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(30mg,55％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.697–13.007(m,1H),7.867–7.668(m,1H),7.668–7.545(m,2H),7.545–7.384(m,4H),5.416–3.891(m,6H),3.248–2.620(m,3H),1.923–1.524(m,4H)；ESI MS m/z 505[M+H]+。
實(shí)施例41：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(α-吡啶甲?；?-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(103)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和α-吡啶甲酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(α-吡啶甲酰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,22％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)13.632–13.061(m,1H),8.722–8.139(m,1H),8.140–7.908(m,1H),7.908–7.684(m,2H),7.684–7.398(m,2H),5.115–4.428(m,5H),3.316–2.598(m,3H),1.927–1.133(m,5H)；ESI MS m/z 506.1[M+H]+。
實(shí)施例42：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-煙?；?1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(104)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和煙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-煙?；?1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(34mg,59％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.589–13.123(br s,1H),8.807(s,1H),8.140–7.991(m,1H),7.843–7.678(m,1H),7.628–7.364(m,2H),5.433–3.721(m,6H),3.257–2.701(m,3H),1.933–1.522(m,4H)；ESI MS m/z506.1[M+H]+。
實(shí)施例43：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-異煙酰基-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(105)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和異煙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-異煙?；?1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(14mg,24％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.420–13.120(m,1H),8.770–8.620(m,2H),7.833–7.679(m,1H),7.612–7.369(m,3H),5.410–3.820(m,6H),3.240–3.060(m,2H),1.860–1.530(m,4H),1.290–1.190(m,1H)；ESI MS m/z506.1[M+H]+。
實(shí)施例44：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(106)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和1-吡咯胺基甲酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(22mg,38％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.389–13.022(m,1H),7.858–7.407(m,2H),5.439–3.846(m,6H),3.412–3.326(m,4H),3.253–2.742(m,3H),1.868–1.638(m,8H)；ESI MS m/z 498.2[M+H]+。
實(shí)施例45：4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(107)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(16mg,28％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.274–12.902(m,1H),7.343–7.681(m,1H),7.601–7.441(m,1H),5.368–3.811(m,6H),3.695–3.520(m,2H),3.273–2.71(m,3H),1.906–1.571(m,4H)；ESI MS m/z 483.1[M+H]+。
實(shí)施例46：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(108)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和1,1,1-三氟-3-溴丙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-1,4,5,6-四氫-吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,22％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.091–12.860(m,1H),7.837–7.651(m,1H),7.638–7.430(m,1H),5.271–4.038(m,7H),3.899–3.673(m,4H),3.210–3.059(m,2H),2.955–2.681(br s,1H),1.869–1.558(m,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
實(shí)施例47：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(109)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和2-甲氧基-溴乙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(14mg,22％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.070–12.860(m,1H),7.852–7.648(m,1H),7.616–7.449(m,1H),5.365–3.596(m,6H),3.560–3.413(m,2H),3.298–3.219(m,4H),3.219–3.047(m,2H),2.937–2.832(m,3H),1.843–1.576(m,5H)；ESIMS m/z 459.2[M+H]+。
實(shí)施例48：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-腈(110)的制備
步驟A：按照一般方法GP-J2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-腈(23mg,79％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.623–13.172(m,1H),7.850–7.664(m,1H),7.664–7.470(m,1H),5.552–3.846(m,6H),3.271–2.652(m,3H),2.042–1.503(m,4H)；ESI MS m/z 426[M+H]+。
實(shí)施例49：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(111)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(13mg,21％):mp 207–210℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.90(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.87–4.85(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.48–3.45(m,2H),3.14–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.61–2.55(m,6H,與DMSO峰部分融合),1.76–1.70(m,4H),1.07(t,J＝7.0Hz,3H)；ESI MS m/z443[M+H]+。
實(shí)施例50：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺(112)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為灰白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺(6mg,27％):mp220–225℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.05(br s,0.25H),12.85(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),6.61–6.60(m,0.75H),6.55–6.54(m,0.25H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.65(m,1H),4.47–4.42(m,2H),3.54–3.50(m,2H),3.14–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.59–2.56(m,5H,partialy merged with DMSO peak),1.76–1.67(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]。
實(shí)施例51：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(113)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(18mg,55％):mp 210–211℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.91(br s,0.25H),12.72(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.88–4.86(m,1H),4.67–4.65(m,1H),3.43–3.40(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.77–2.76(m,1H),2.65–2.60(m,4H),2.36(s,3H),1.76–1.69(m,4H)；ESI MS m/z429[M+H]+。
實(shí)施例52：3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(114)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(32)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(32mg,41％):mp 165–170℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03–12.85(m,1H),7.70–7.62(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝12.0,8.0Hz,1H),6.58–6.49(m,1H),5.19–5.06(m,2H),4.76–4.62(m,2H),3.63–3.50(m,2H),3.27–3.09(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.64(t,J＝5.5Hz,2H),2.59–2.54(m,3H),1.84–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 454[M+H]+。
實(shí)施例53：2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸(115)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和2-溴乙酸叔丁酯轉(zhuǎn)化為透明玻璃狀固體2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸叔丁酯(55mg,69％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.37–7.33(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.67–3.63(m,2H),3.34–3.30(m,2H,與H2O峰部分融合),3.14–3.13(m,2H),2.59–2.58(m,3H),2.59–2.50(m,2H,與DMSO峰部分融合),1.76–1.70(m,4H),1.43(s,9H)；ESI MS m/z 529[M+H]+。
步驟B：將2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸叔丁酯(53mg,0.10mmol)的無(wú)水CH2Cl2(3mL)溶液用TFA(3mL)處理，并在室溫下N2氣氛中攪拌8小時(shí)。之后，混合物減壓濃縮至干，并用CH2Cl2(10mL)進(jìn)行溶劑交換。殘余物用無(wú)水CH2Cl2(10mL)稀釋，用MP-碳酸酯(0.50g)處理，并在室溫下攪拌15分鐘。隨后，過(guò)濾溶液并用CH2Cl2(2×10mL)洗滌殘余物。濾液減壓濃縮至干，得到灰白色固體2-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙酸(40mg,85％):mp151–153℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.29(br s,0.25H),12.89(br s,0.75H),7.56–7.55(m,1H),7.51–7.50(m,1H),4.87–4.86(m,1H),4.66–4.64(m,1H),4.04–4.02(m,2H),3.76–3.72(m,2H),3.34–3.32(m,2H,與H2O峰部分融合),3.15–3.11(m,4H),2.76–2.74(m,2H),1.76–1.70(m,4H)；ESI MS m/z473[M+H]+。
實(shí)施例54：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(116)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為淺橙色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(30mg,60％):mp238–240℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.13(br s,0.25H),12.86(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),4.82–4.80(m,1H),4.67–4.65(m,1H),4.54(s,1.5H),4.50(s,0.5H),3.64(s,3H),3.60–3.57(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.78(m,1H),2.64–2.59(m,2H),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例55：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(117)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為灰白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(32mg,50％):mp 206–207℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.96(br s,0.25H),12.76(br s,0.75H),7.80–7.70(m,1H),7.51–7.50(m,1H),4.86–4.84(m,1H),4.68–4.65(m,1H),4.60(可見(jiàn)t,J＝6.5Hz,2H),4.50(可見(jiàn)t,J＝6.0Hz,2H),3.71–3.64(m,1H),3.43–3.38(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.78–2.77(m,1H),2.64–2.60(m,2H),1.79–1.68(m,4H),CH2被溶劑峰掩蓋；ESI MS m/z 471[M+H]+。
實(shí)施例56：(6-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(118)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(6-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(30mg,58％):mp184–185℃；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.53(dd,J＝17.5,9.0Hz,1H),7.39(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.83–4.82(m,1H,與H2O峰部分融合),4.65–4.63(m,1H),3.94–3.92(m,2H),3.29–3.26(m,2H,與CH3OH峰部分融合),3.05–3.03(m,2H),2.90–2.84(m,3H),2.69–2.67(m,2H),1.89–1.81(m,4H),1.04–1.02(m,1H),0.65(d,J＝7.0Hz,2H),0.29–0.27(m,2H),未觀察到NH質(zhì)子；ESI MS m/z469[M+H]+。
實(shí)施例57：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(119)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和3,3,3-三氟丙醛轉(zhuǎn)化為灰白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(18mg,36％):mp 194–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(br s,0.25H),12.76(brs,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.49(m,1H),4.87–4.85(m,1H),4.68–4.66(m,1H),3.57–3.53(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.75(t,J＝7.5Hz,2H),2.69–2.67(m,2H),2.58–2.50(m,5H,與DMSO峰部分融合),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 511[M+H]+。
實(shí)施例58：3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-腈(120)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-腈(36mg,83％):mp 248–250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26(br s,0.25H),12.97(br s,0.75H),7.78–7.75(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.85(可見(jiàn)d,J＝8.0Hz,1H),4.68–4.66(m,1H),4.47–4.40(m,2H),3.43–3.40(m,2H),3.16–3.14(m,2H),2.77–2.72(m,3H),1.77–1.71(m,4H)；ESI MSm/z 440[M+H]+。
實(shí)施例59：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(121)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和異丁酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H吡唑并[3,4-c]pyridin-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(29mg,62％):mp228–229℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.12(br s,0.25H),12.87(br s,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.50–7.48(m,1H),4.88–4.86(m,1H),4.68–4.56(m,3H),3.70(s,2H),3.15–3.13(m,2H),2.99–2.97(m,1H),2.79–2.77(m,1H),2.70–2.64(m,2H),1.76–1.68(m,4H),1.04–1.01(m,6H)；ESI MS m/z 485[M+H]+。
實(shí)施例60：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)丙烷-1-酮(122)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和丙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)丙烷-1-酮(35mg,63％):mp182–187℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)13.15–13.10(m,0.25H),12.87(br s,0.75H),7.76–7.72(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.85–4.83(m,1H),4.68–4.57(m,3H),3.69(s,0.5H),3.63(s,1.5H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.68–2.55(m,2H,與DMSO峰部分融合),2.46–2.38(m,2H),1.76–1.71(m,4H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)；ESI MS m/z 471[M+H]+。
實(shí)施例61：1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-3-甲基丁烷-1-酮(123)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和3-甲基丁酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)-3-甲基丁烷-1-酮(37mg,63％):mp184–188℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.13–13.11(m,0.25H),12.87–12.84(m,0.75H),7.79–7.70(m,1H),7.51–7.49(m,1H),4.89–4.86(m,1H),4.67–4.57(m,3H),3.67–3.64(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.68–2.64(m,2H),2.55–2.51(m,1H,與DMSO峰部分重合),2.02(pent,J＝7.0Hz,1H),1.76–1.70(m,4H),1.26(t,J＝7.0Hz,1H),0.92–0.90(m,6H)；ESI MS m/z 499[M+H]+。
實(shí)施例62：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(124)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和1-溴-2-甲氧基乙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(33mg,48％):mp 171–173℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.91(br s,0.25H),12.71(br s,0.75H),7.78–7.70(m,1H),7.51–7.48(m,1H),4.85(可見(jiàn)d,J＝11.0Hz,1H),4.66(可見(jiàn)d,J＝11.0Hz,1H),3.57–3.49(m,4H),3.25(s,3H),3.16–3.11(m,2H),2.77–2.58(m,7H),1.76–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例63:(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(125)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯轉(zhuǎn)化為灰白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(39mg,72％):mp 192–193℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.00(brs,0.25H),12.76(br s,0.75H),7.80–7.70(m,1H),7.50–7.48(m,1H),4.85(可見(jiàn)d,J＝11.0Hz,1H),4.66(可見(jiàn)d,J＝11.0Hz,1H),3.79(s,1.5H),3.75(s,0.5H),3.42–3.35(m,2H),3.15–3.13(m,2H),2.87(t,J＝6.0Hz,2H),2.78–2.76(m,1H),2.64–2.62(m,2H),1.79–1.68(m,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
實(shí)施例64：(4-(3,4-二氟-2(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-新戊基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(126)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮TFA鹽(34)和特戊醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-新戊基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(28mg,49％):mp218–220℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)12.90(br s,0.25H),12.67(br s,0.75H),7.75–7.70(m,1H),7.49(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),4.88(可見(jiàn)d,J＝12.0Hz,1H),4.67(可見(jiàn)d,J＝10.0Hz,1H),3.61(s,1.5H),3.59(s,0.5H),3.15–3.13(m,2H),2.78–2.76(m,1H),2.71(t,J＝5.5Hz,2H),2.64–2.58(m,2H),2.25(s,2H),1.79–1.68(m,4H),0.88(s,9H)；ESI MS m/z485[M+H]+。
實(shí)施例65：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(127)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(60)和溴乙基甲基醚轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(32mg,41％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.85(m,1H),7.48(m,2H),5.12(m,1H),4.67(m,1H),3.50(m,4H),3.01–3.32(m,5H),2.73(m,7H),3.63–3.50(m,2H),1.62(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例66：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌啶-1-羰基)-1,4,5,6四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(128)的制備
步驟A：按照一般方法GP-H2，將(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(38)和哌啶-1-甲酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(45mg,77％):mp 236–237℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26(br s,0.6H),13.06(br s,0.4H),7.79–7.70(m,1H),7.56–7.50(m,1H),5.25–5.23(m,0.4H),4.65–4.62(m,0.6H),4.57(s,2H),4.47(s,2H),4.17–3.91(m,1H),3.26–3.03(m,6H),3.01–2.73(m,1H),1.80–1.71(m,4H),1.53–1.49(m,6H)；ESI MS m/z 512[M+H]+。
實(shí)施例67：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(129)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(60)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(41mg,51％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.83(m,1H),7.43(m,2H),5.12(m,1H),4.67(m,1H),3.53(m,2H),2.50–3.12(m,11H),1.68(m,4H)；ESI MS m/z511[M+H]+。
實(shí)施例68：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(130)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E2，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為灰白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,7-四氫-6H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸甲酯(7mg,20％):mp253–254℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.12(br s,0.25H),12.86(brs,0.75H),7.45–7.38(m,2H),4.84–4.82(m,1H),4.68–4.66(m,1H),4.54–4.51(m,2H),3.64(s,3H),3.60–3.58(m,2H),3.20–3.13(m,2H),2.79–2.77(m,1H),2.65–2.62(m,2H),1.76–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例69：1-(3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(131)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(0.087g,41％):1H NMR(300MHz,CDCl3)11.01(br,1H),6.93(m,1H),6.78(m,1H),4.84–4.66(m,4H),3.85–3.67(m,2H),3.34–2.68(m,5H),2.22and 2.19(s,3H),1.89–1.66(m,4H)；MS(ESI+)m/z 457[M+H]+.77(m,1H),2.65–2.62(m,2H),1.76–1.72(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例70：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(132)的制備
步驟A：向4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.246g,0.675mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入HCl(2M HCl的乙醚溶液,10mL)。攪拌混合物6小時(shí)，蒸發(fā)，將得到的固體溶于DMF(4mL)。在單獨(dú)的燒瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.182g,0.675mmol)的THF(5mL)溶液中加入氫氧化鋰水合物(0.028g,0.675mmol)的水(2mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘，用2N HCl酸化至pH6，并蒸發(fā)至干。向該殘余物中加入苯并三唑-1-基-氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(0.448g,1.01mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.349g,2.70mmol)和由第一個(gè)反應(yīng)中得到的DMF溶液。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)，然后倒入水中。混合物用乙酸乙酯提取，有機(jī)層用鹽水洗滌3次，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾，并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到灰白色固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.115g,34％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.37(m,1H),7.79(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.50(dd,J＝9.6,1.7Hz,1H),6.96(d,J＝9.7Hz,1H),6.84–6.77(m,1H),5.77–5.72(m,1H),5.00–4.95(m,1H),3.44–3.29(m,2H),3.01–2.92(m,1H),2.01–1.69(m,4H)；MS(ESI+)m/z489[M+H]+。
步驟B：將(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.115g,0.235mmol)、氰化鋅(0.055g,0.470mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.027g,0.0235mmol)和DMF(4mL)的混合物在130℃微波輻射加熱30分鐘。冷卻至環(huán)境溫度后，將混合物用水(80mL)稀釋并用EtOAc(80mL)萃取。提取物用鹽水(2×80mL)洗滌,干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.050g,49％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.71(m,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.51(dd,J＝9.5,1.6Hz,1H),6.95(d,J＝9.5Hz,1H),6.84–6.77(m,1H),5.76(m,1H),5.01–4.96(m,1H),3.46–3.31(m,2H),3.03–2.94(m,1H),2.07–1.70(m,4H)；MS(ESI+)m/z436[M+H]+。
實(shí)施例71：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(133)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(29mg,67％):mp 149–155℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.766(s,1H),7.481–7.353(m,1H),5.196–5.049(m,1H),4.765–4.569(m,1H),3.558–3.378(m,2H),3.263–3.048(m,2H),2.850–2.715(m,1H),2.664(s,4H),2.575–2.515(m,2H),1.858–1.606(br s,4H),1.121–1.018(m,4H)；ESIMS m/z 443.2[M+H]+。
實(shí)施例72：(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(134)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和環(huán)丙基乙醛轉(zhuǎn)化為白色固體(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(29mg,67％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.764(s,1H),7.522–7.347(m,2H),5.225–5.016(br s,1H),4.766–4.580(br s,1H),3.673–3.444(m,2H),3.258–3.034(m,2H),2.868–2.601(m,5H),2.443–2.334(m,2H),1.858–1.620(br s,4H),0.995–0.829(m,1H),0.551–0.410(m,2H),0.195–0.075(m,2H)；ESI MS m/z 469.1[M+H]+。
實(shí)施例73：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(135)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(35mg,67％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.843(s,1H),7.483–7.346(m,1H),5.234–5.065(br s,1H),4.731–4.627(br s,1H),4.627–4.562(m,2H),4.562–4.452(m,2H),3.714–3.643(m,1H),3.473–3.337(br s,2H),3.260–3.058(m,2H),2.850–2.724(m,1H),2.724–2.658(m,2H),2.582–2.516(m,2H),1.876–1.586(br s,4H)；ESI MS m/z471[M+H]+。
實(shí)施例74：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(136)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-腈(16mg,55％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.146–13.060(m,1H),7.508–7.356(m,2H),5.402–4.584(m,2H),4.433–4.327(m,2H),3.536–3.412(m,2H),3.261–3.092(m,2H),2.905–2.728(m,3H),1.884–1.608(m,4H)；ESI MS m/z440[M+H]+。
實(shí)施例75：(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(137)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(16mg,55％):沒(méi)有觀察到透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.033–12.768(m,1H),7.506–7.333(m,2H),5.290–4.578(m,2H),3.894–3.657(m,2H),3.447–3.320(m,2H),3.256–3.037(m,2H),2.937(s,2H),2.709(s,3H),1.906–1.605(brs,4H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
實(shí)施例76：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(138)的制備
步驟A：按照一般方法GP-B2，將(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(60)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸甲酯(16mg,55％):1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.11–12.93(m,1H),7.56–7.32(m,2H),5.40–5.16(m,1H),4.81–4.59(m,1H),4.59–4.40(m,2H),3.64(s,5H),3.28–3.03(br s,2H),2.89–2.62(m,3H),1.94–1.61(br s,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
實(shí)施例77：3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(139)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E2，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和異氰酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(3,5-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-N-甲基-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酰胺(16mg,55％):無(wú)透明熔化物；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.043–12.777(m,1H),7.523–7.348(m,2H),6.536(s,1H),5.275–4.595(m,2H),4.536–4.296(m,2H),3.561(s,2H),3.273–3.076(m,2H),2.891–2.706(br s,1H),2.706–2.614(m,2H),2.576(s,3H),1.906–1.585(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
實(shí)施例78：1-(3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(140)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(44)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(27mg,41％):mp 190–195℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.17–12.85(m,1H),7.79–7.73(m,1H),7.57–7.52(m,1H),7.30–7.22(m,1H),4.94–4.77(m,1H),4.74-4.63(m,1H),4.62–4.51(m,2H),3.73–3.56(m,2H),3.19–3.06(m,2H),2.83–2.53(m,3H),2.14–2.05(m,3H),1.80–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
實(shí)施例79：(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺酰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(141)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(46)和甲烷磺酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(105mg,60％):mp>260℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),7.76(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.55(dd,J＝10.5,2.5Hz,1H),7.28–7.21(m,1H),5.34–5.23(m,1H),4.72–4.64(m,1H),4.43–4.26(m,2H),3.54–3.39(m,2H),3.22–3.09(m,2H),2.94(s,3H),2.86–2.72(m,3H),1.83–1.67(m,4H)；ESI MS m/z 475[M+H]+。
實(shí)施例80：3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(142)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(85mg,0.32mmol)的THF(2.6mL)溶液中加入LiOH一水合物(15mg,0.35mmol)的水(1.8mL)溶液。攪拌混合物20分鐘并用2N HCl中和。將混合物減壓濃縮。所得殘余物用DMF(3.0mL)在N2氣氛中稀釋。向所得混合物中加入4-(5-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(11,89mg,0.32mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(280mg,0.63mmol)和二異丙基乙胺(0.17mL,0.95mmol)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。所得混合物用H2O(20mL)稀釋。溶液用EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有機(jī)層用飽和的鹽水溶液(3×20mL)洗滌并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc在己烷中的溶液)得到白色固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲(97mg,65％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.16–9.14(m,1H),7.98(dd,J＝10.0,1.0Hz,1H),7.77(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),7.72(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.52(dd,J＝11.0,3.5Hz,1H),7.29–7.23(m,1H),5.31–5.24(m,1H),4.76–4.70(m,1H),3.42–3.32(m,1H),3.27–3.19(m,1H),3.06–2.96(m,1H),1.98–1.75(m,4H)。
步驟B：向(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(97mg,0.21mmol)的DMF(2.2mL)溶液中通入Ar氣20分鐘。加入氰化鋅(48mg,0.41mmol)，向溶液中通入Ar氣10min。向溶液中加入Pd(PPh3)4(24mg,0.021mmol)，將容器密封，微波加熱至130℃保持30分鐘?；旌衔镉蔑柡吞妓釟溻c(10mL)稀釋，并用EtOAc(4×30mL)提取。合并的有機(jī)提取物減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(IscoCombiFlash Rf裝置，12g Redisep柱,0％to 50％EtOAc的己烷溶液)并冷凍干燥得到白色固體3-(4-(5-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(35mg,41％):mp 190–197℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.53(m,1H),8.14(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.82(d,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.78(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.56(dd,J＝10.5,2.5Hz,1H),7.30–7.24(m,1H),5.20–5.10(m,1H),4.73–4.71(m,1H),3.43–3.34(m,1H),3.29–3.20(m,1H),3.08–3.00(m,1H),1.99–1.77(m,4H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
實(shí)施例81：1-(3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(143)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將((4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(48)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(27mg,63％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.99–12.18(m,1H),7.48(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.72(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.15–7.08(m,1H),4.90–4.74(m,1H),4.73–4.53(m,3H),3.71–3.55(m,2H),3.28–3.10(m,2H),2.87–2.50(m,3H,與溶劑重合),2.12–2.04(m,3H),1.91–1.71(m,2H),1.66–1.52(m,2H)；ESI MS m/z 405[M+H]+。
實(shí)施例82：(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(144)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(50)和甲烷磺酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36mg,51％):mp 260–267℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),7.48(dd,J＝8.5,5.0Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.13–7.08(m,1H),5.30–5.20(m,1H),4.72–4.63(m,1H),4.41–4.24(m,2H),3.53–3.40(m,2H),3.28–3.13
(m,2H),2.93(s,3H),2.89–2.73(m,3H),1.90–1.74(m,2H),1.70–1.51(m,2H)；ESI MSm/z 441[M+H]+。
實(shí)施例83：3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(145)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(73mg,0.27mmol)的THF(2.2mL)溶液中加入LiOH一水合物(13mg,0.30mmol)的水(1.5mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘，用2N HCl中和，并減壓濃縮。所得殘余物在N2氣氛中采用DMF(2.9mL)稀釋。向此混合物中加入4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(17,68mg,0.27mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(240mg,0.54mmol)和二異丙基乙胺(0.14mL,0.81mmol)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。產(chǎn)生的混合物用H2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀。所得固體在硅膠上層析(IscoCombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(50mg,42％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.13–9.11(m,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.71(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.28(dd,J＝25,3.0Hz,1H),7.15–7.10(m,1H),5.28–5.20(m,1H),4.76–4.70(m,1H),3.42–3.29(m,2H,與H2O重合),3.07–2.98(m,1H),1.96–1.65(m,4H)。
步驟B：向含有氰化鋅(48mg,0.41mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(50mg,0.21mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar氣20分鐘。向溶液中加入Pd(PPh3)4(13mg,0.011mmol)，密封容器，并微波加熱至130℃保持30分鐘。所得混合物用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)稀釋，并用EtOAc萃取(4×30mL)。將合并的有機(jī)提取物減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)并冷凍干燥得白色固體3-(4-(2-氯-5-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(21mg,54％):mp 211–214℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.52–9.50(m,1H),8.13(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.28(dd,J＝10.5,3.5Hz,1H),7.16–7.11(m,1H),5.16–5.11(m,1H),4.78–4.71(m,1H),3.46–3.30(m,2H,與H2O重合),3.11–3.01(m,1H),1.99–1.70(m,4H)；ESI MS m/z 384[M+H]+。
實(shí)施例84：(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(146)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和環(huán)丙烷甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(21mg,36％):mp 187–191℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)12.74(br s,1H),7.38–7.24(m,3H),4.96–4.55(m,2H),3.57(s,2H),3.28–3.17(m,2H),2.91–2.38(m,7H),1.91–1.79(m,2H),1.64–1.56(m,2H),0.92–0.85(m,1H),0.52–0.48(m,2H),0.16–0.08(m,2H)；ESI MS m/z 417[M+H]+。
實(shí)施例85：3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸甲酯(147)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和氯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸甲酯(30mg,65％):mp 182–185℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.88(br s,1H),7.39–7.24(m,3H),4.85–4.61(m,2H),4.54–4.49(m,2H),3.64–3.56(m,5H),3.28–3.12(m,2H),2.93–2.75(m,1H),2.61–2.55(m,2H),1.91–1.78(m,2H),1.64–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 421[M+H]+。
實(shí)施例86：3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(148)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G2，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和溴化氰轉(zhuǎn)化為白色固體3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-腈(19mg,35％):mp 182–185℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.98(br s,1H),7.37–7.24(m,3H),4.91–4.65(m,2H),4.47–4.40(m,2H),3.43–3.12(m,4H),2.93–2.69(m,3H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 388[M+H]+。
實(shí)施例87：(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(149)的制備
步驟A：按照一般方法GP-G1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-(氟苯基)哌啶-1-基)(6-氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮(17mg,31％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.77(br s,1H),7.37–7.24(m,3H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.61(m,1H),3.47–3.12(m,4H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,4H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
實(shí)施例88：1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(150)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(14mg,25％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.18–12.83(m,1H),7.41–7.31(m,1H),7.30–7.22(m,2H),4.87–4.74(m,1H),4.73–4.63(m,1H),4.62–4.53(m,2H),3.71–3.58(m,2H),3.31–3.24(m,1H,與H2O重合),3.20–3.12(m,1H),2.90–2.76(m,1H),2.74–2.52(m,2H),2.11–2.07(m,3H),1.89–1.72(m,2H),1.65–1.52(m,2H)；ESI MSm/z 405[M+H]+；HPLC>99％純度(方法H).(m,3H),4.91–4.47(m,6H),3.71–3.61(m,1H),3.47–3.12(m,4H),2.93–2.78(m,1H),2.74–2.53(m,4H),1.91–1.78(m,2H),1.76–1.55(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
實(shí)施例89：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基甲酮(151)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將((4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(40)和甲烷磺酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基甲酮(21mg,34％):mp 247–253℃decomp.；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.03(br s,1H),7.39–7.31(m,1H),7.29–7.22(m,2H),5.28–5.19(m,1H),4.72–4.63(m,1H),4.39–4.28(m,2H),3.50–3.14(m,7H,與H2O重合),2.86–2.79(m,3H),1.91–1.76(m,2H),1.69–1.53(m,2H)；ESI MS m/z 441[M+H]+。
實(shí)施例90：(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(152)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(102mg,0.38mmol)的THF(3.1mL)溶液中加入LiOH一水合物(16mg,0.38mmol)的H2O(2.0mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘并用2N HCl中和?；旌衔餃p壓濃縮。所得殘余物在N2氣氛中用DMF(4.0mL)稀釋。向所得混合物中加入4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶鹽酸鹽(14,94mg,0.38mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(334mg,0.76mmol)和二異丙基乙胺(0.20mL,1.1mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將產(chǎn)生的混合物用H2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的沉淀。所得固體在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,48％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.11(br s,1H),8.03–7.95(m,1H),7.71(dd,J＝9.6,1.8Hz,1H),7.43–7.23(m,3H),5.27–5.17(m,1H),4.80–4.69(m,1H),3.48–3.34(m,2H),3.12–2.96(m,1H),2.02–1.59(m,4H)；ESI MS m/z 438[M+H]+。
步驟B：向含有氰化鋅(43mg,0.65mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,0.18mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar氣20分鐘。向溶液中加入Pd(PPh3)4(21mg,0.018mmol)，密封容器，微波加熱至130℃保持30min。所得混合物用H2O(10mL)稀釋并用EtOAc(4×30mL)萃取。合并的有機(jī)提取物減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-60％EtOAc的己烷溶液)并冷凍干燥得到白色固體3-(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(38mg,55％):mp158–163℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.51–9.50(m,1H),8.12(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.81(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),7.41–7.34(m,1H),7.31–7.24(m,2H),5.16–5.09(m,1H),4.78–4.71(m,1H),3.47–3.37(m,2H),3.12–3.03(m,1H),2.00–1.64(m,4H)；ESI MS m/z 384[M+H]+。
實(shí)施例91：1-(3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(153)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(33mg,50％):mp 204–205℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.13–12.82(m,1H),8.01–7.97(m,2H),7.96–7.90(m,1H),4.92–4.79(m,1H),4.75–4.63(m,1H),4.62–4.53(m,2H),3.72–3.58(m,2H),3.18–3.05(m,2H),2.84–2.48(m,3H,與溶劑重合),2.12–2.05(m,3H),1.97–1.78(m,2H),1.76–1.61(m,2H)；ESI MS m/z 489[M+H]+。
實(shí)施例92：(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(154)的制備
步驟A：按照一般方法GP-C，將(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(52)和甲烷磺酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基-(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(25mg,37％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.02(s,1H),8.01–7.98(m,2H),7.94–7.91(m,1H),5.31–5.24(m,1H),4.73–4.63(m,1H),4.40–4.26(m,2H),3.51–3.41(m,2H),3.21–3.06(m,2H),2.93(s,3H),2.85–2.74(m,3H),1.96–1.80(m,2H),1.79–1.64(m,2H)；ESI MS m/z 525[M+H]+。
實(shí)施例93：(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(155)的制備
步驟A：向6-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(66mg,0.30mmol)的THF(2.5mL)溶液中加入LiOH一水合物(25mg,0.60mmol)的H2O(1.6mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘并用2N HCl中和。將混合物減壓濃縮。所得殘余物用在N2氣氛中用DMF(3.3mL)稀釋。向該混合物中加入4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(20,100mg,0.30mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(266mg,0.60mmol)和二異丙基乙胺(0.16mL,0.90mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。產(chǎn)生的混合物用H2O(20mL)稀釋并用EtOAc萃取(4×30mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(3×30ml)洗滌并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,24g Redisep柱,含有0.1％NH4OH的CH2Cl2溶液的0％-2％MeOH的CH2Cl2溶液)。所得殘余物溶于CH2Cl2(10mL)和己烷(100mL)中。將溶液部分濃縮，通過(guò)過(guò)濾收集生成的固體得到灰白色固體(4-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(6-甲氧基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)甲酮(80mg,56％):mp146–149℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(s,2H),7.95–7.89(m,2H),7.38(dd,J＝10,2.5Hz,1H),5.40–5.33(m,1H),4.81–4.73(m,1H),3.85(s,3H),3.39–3.31(m,1H,與H2O重合),3.26–3.16(m,1H),3.02–2.93(m,1H),2.03–1.77(m,4H)；ESI MS m/z 473[M+H]+。
實(shí)施例94：1-(3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(156)的制備
步驟A：按照一般方法GP-E1，將(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(56)和乙酰氯轉(zhuǎn)化為白色固體1-(3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(33mg,43％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.26–12.80(m,1H),7.61–7.56(m,1H),7.56–7.47(m,2H),4.87–4.49(m,4H),3.72–3.56(m,2H),3.25–3.04(m,2H),2.84–2.53(m,3H),2.07–1.89(m,5H),1.79–1.64(m,2H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
實(shí)施例95：3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(157)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(72mg,0.27mmol)的THF(2.2mL)溶液中加入LiOH一水合物(12mg,0.29mmol)的H2O(1.5mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘并用2N HCl中和。將混合物減壓濃縮。所得殘余物在N2氣氛中用DMF(2.8mL)稀釋。向混合物中加入4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(23,75mg,0.27mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(236mg,0.53mmol)和二異丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。生成的混合物用H2O(20mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(30mL)洗滌并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12gRedisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到淺橙色膜狀物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,64％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.12–9.10(m,1H),8.00–7.95(m,1H),7.74–7.68(m,1H),7.65–7.50(m,3H),5.29–5.15(m,1H),4.82–4.68(m,1H),3.41–3.19(m,2H,與H2O重合),3.07–2.97(m,1H),2.34–2.19(m,1H),2.15–2.02(m,1H),1.93–1.75(m,2H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
步驟B：向含有氰化鋅(40mg,0.34mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(80mg,0.17mmol)的DMF(2.0mL)溶液中通入Ar氣15分鐘。向溶液中加入Pd(PPh3)4(19mg,0.017mmol)，密封容器，并微波加熱至130℃保持30min(分鐘)?；旌衔镉蔑柡吞妓釟溻c溶液(20mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×30mL)。合并的有機(jī)提取物用飽和的鹽水溶液(2×30mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12gRedisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)，然后進(jìn)行HPLC(Phenomenex Luna C18(2),250.0×50.0mm,15微米,含有0.05％TFA的H2O和含有0.05％TFA的CH3CN)，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，并冷凍干燥得到白色固體3-(4-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(23mg,33％):1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54–9.52(m,1H),8.14–8.11(m,1H),7.82–7.78(m,1H),7.64–7.59(m,1H),7.57–7.50(m,2H),5.17–5.10(m,1H),4.79–4.72(m,1H),3.40–3.24(m,2H,與H2O重合),3.07–2.98127(m,1H),2.30–2.19(m,1H),2.14–2.03(m,1H),1.91–1.79(m,2H)；ESI MS m/z 418[M+H]+。
實(shí)施例96：1-(3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(158)的制備
步驟A：向4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.50g,4.53mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(25mL)溶液中通入N2氣30分鐘。加入4-氟-(2-三氟甲基)苯基硼酸(1.13g,5.43mmol)，然后加入2M碳酸鈉溶液(2.9mL)。向所得混合物中通入N2氣10分鐘。加入Pd(PPh3)4(260mg,0.225mmol)，將所得混合物在N2氣氛下加熱至80℃。72小時(shí)后,將所得溶液冷卻至環(huán)境溫度并用5％氯化鋁溶液(100mL)稀釋。用EtOAc(3×50mL)提取溶液。合并的有機(jī)提取物用飽和鹽水(2×50mL)洗滌并減壓濃縮至干。殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,24g Redisep柱,0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到棕色油狀物4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.29g,83％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37–7.08(m,3H),5.57(br s,1H),4.02–3.99(m,2H),3.62–3.58(m,2H),2.32(br s,2H),1.46(s,9H)。
步驟B：向4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.29g,3.74mmol)的乙酸乙酯(20mL)和乙酸(0.22mL)溶液中通入N2。加入二氧化鉑(84mg)，向所得懸浮液中通入N2氣5分鐘。將混合物置于1atm的H2氣氛中。18小時(shí)后，向反應(yīng)中通入N2氣15分鐘，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，再次加入二氧化鉑(100mg)并在1atm的氫氣氛中攪拌。在接下來(lái)的64小時(shí)中重復(fù)過(guò)濾和二氧化鉑的再次加入三次。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾。所得濾液用碳酸氫鈉溶液洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮。殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,24g Redisep柱,0％-100％EtOAc的己烷溶液)得到黃色油狀物4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.813g,63％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37–7.20(m,3H),4.27–4.22(m,2H),3.07–2.99(m,1H),2.85–2.75(m,2H),2.04–1.46(m,13H)。
步驟C：向4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.813g,2.34mmol)的乙醚(6mL)溶液中加入2M HCl的乙醚(10mL)。所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘余物用乙醚(10mL)研磨。通過(guò)過(guò)濾收集固體得到白色固體4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(0.244g,37％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.79(br s,1H),7.59–7.54(m,1H),7.37–7.24(m,2H),3.68–3.64(m,2H),3.27–3.03(m,4H),2.39–2.27(m,2H),2.01–1.96(m,2H)；ESI MS m/z248[M+H]+。
步驟D：在N2氣氛下，向4-(4-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(75mg,0.26mmol)、6-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸(75mg,0.29mmol)和二異丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)的DMF(3mL)溶液中加入EDC(70mg,0.37mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌24h。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋并用EtOAc(3×10mL)提取。合并的有機(jī)提取物用鹽水(1×20mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(75mg,58％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.04(br s,1H),7.72–7.68(m,1H),7.57–7.49(m,2H),4.84–4.64(m,1H),4.49–4.45(m,2H),3.56–3.53(m,2H),3.08(br s,2H),2.78–2.50(m,4H),1.75(br s,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步驟E：向3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯(74mg,0.15mmol)的CH2Cl2(3mL)和甲醇(1mL)溶液中加入2N HCl(2mL,2M HCl的Et2O溶液)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(30mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體得到白色固體(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(64mg,98％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.14(s,1H),9.16(br s,2H),7.73–7.68(m,1H),7.59–7.50(m,2H),4.84–4.69(m,1H),4.32–4.25(m,2H),3.26–3.03(m,2H),2.89–2.81(m,2H),2.68–2.48(m,4H),1.73(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
步驟F：向(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(63mg,0.15mmol)和二異丙基乙胺(70μL,0.40mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入乙醛(11μL,0.15mmol)。將混合物攪拌16小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物用H2O(10mL)稀釋并用EtOAc(2×10mL)提取。合并的有機(jī)提取物用飽和鹽水(1×20mL)洗滌，Na2SO4干燥并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(IscoCombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-100％(含有0.01％NH4OH的10％CH3OH的CH2Cl2溶液)的CH2Cl2溶液)并進(jìn)一步通過(guò)反相色譜純化(Isco CombiFlash Rf裝置，12g Redisep c18金色譜柱(gold column),0％-100％乙腈水溶液)得到白色固體1-(3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-基)乙酮(20mg,94％):mp 176–180℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),7.71–7.68(m,1H),7.56–7.49(m,2H),4.94–4.55(m,3H),3.66–3.62(m,2H),3.10(br s,2H),2.85–2.48(m,4H),2.10–2.08(m,3H),1.73(m,4H)；ESI MS m/z 439[M+H]+。
實(shí)施例97：(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(159)的制備
步驟A：在N2氣氛下，向4-(4-氟-2-三氟甲基)苯基哌啶鹽酸鹽(75mg,0.26mmol)、5-(叔丁氧羰基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(75mg,0.29mmol)和二異丙基乙胺(0.14mL,0.80mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入EDCI(70mg,0.37mmol)和HOBt(49mg,0.36mmol)。所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物用H2O(30mL)稀釋并用EtOAc(3×30mL)提取。合并的有機(jī)提取物用鹽水(1×30mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12gRedisep柱,0％-100％乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-6,7-二氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(109mg,77％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),7.70–7.68(m,1H),7.57–7.49(m,2H),5.32–5.13(m,1H),4.74–4.64(m,1H),4.47–4.45(m,2H),3.59(br s,2H),3.22–3.10(m,2H),2.82–2.50(m,3H),1.73(brs,4H),1.42(s,9H)；ESI MS m/z 497[M+H]+。
步驟B：向3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基苯基)哌啶-1-羰基)-4,5-二氫-1H-吡唑并[3,4-c]-吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯(85mg,0.17mmol)的CH2Cl2(3mL)和甲醇(1mL)溶液中加入2N HCl(2mL,2M in Et2O)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物用Et2O(30mL)稀釋，并通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)生的固體得到灰白色固體(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(78mg,>99％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.14(br s,1H),9.13(br s,2H),7.73–7.67(m,1H),7.58–7.50(m,2H),5.32–4.69(m,3H),4.24(s,2H),3.38(br s,2H),3.21 3.07(m,2H),2.96–2.72(m,3H),1.75(m,4H)；ESI MS m/z 397[M+H]+。
步驟C：向(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(38mg,0.088mmol)和二異丙基乙胺(35μL,0.20mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入甲烷磺酰氯(9μL,0.12mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物用H2O(10mL)稀釋并用乙酸乙酯(3×10mL)提取。合并的有機(jī)提取物被干燥(Na2SO4)并減壓濃縮。將所得固體在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-100％(含有0.01％NH4OH的10％CH3OH的CH2Cl2溶液)的CH2Cl2溶液)并冷凍干燥得到白色固體(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(甲磺?；?-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(4mg,10％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.05(s,1H),7.73–7.69(m,1H),7.57–7.46(m,2H),5.28–5.24(m,1H),4.70–4.65(m,1H),4.38–4.33(m,2H),3.51–3.45(m,2H),3.22–3.10(m,2H),2.94(s,3H),2.84–2.70(m,3H),1.73(br s,4H)；ESIMS m/z 475[M+H]+。
實(shí)施例98：3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(160)的制備
步驟A：向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(81mg,0.30mmol)的THF(2.5mL)溶液中加入LiOH一水合物(14mg,0.30mmol)的H2O(1.7mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘并用2N HCl中和。減壓濃縮該混合物。在N2氣氛中將所得殘余物用DMF(3.2mL)稀釋。向此混合物中加入4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶鹽酸鹽(85mg,0.30mmol)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽(267mg,0.60mmol)和二異丙基乙胺(0.15mL,0.91mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌混合物18小時(shí)。所得混合物用H2O(20mL)稀釋，通過(guò)過(guò)濾收集生成的沉淀。所得固體在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0-50％EtOAc的己烷溶液)得到橙色膜狀物(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(92mg,64％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.13(dd,J＝1.7,0.9Hz 1H),7.98(dd,J＝10,0.9Hz,1H),7.77–7.69(m,2H),7.60–7.47(m,2H),5.30–5.18(m,1H),4.77–4.68(m,1H),3.43–3.34(m,1H),3.28–3.12(m,1H),3.11–2.90(m,1H),1.97–1.69(m,4H)；ESI MS m/z 472[M+H]+。
步驟B：向含有氰化鋅(45mg,0.38mmol)的(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(90mg,0.19mmol)的DMF(2.2mL)溶液中通入Ar氣15分鐘。向此溶液中加入Pd(PPh3)4(22mg,0.019mmol)，密封容器并微波加熱至130℃保持30min。混合物用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)稀釋并用EtOAc萃取(3×20mL)。合并的有機(jī)提取物飽和的鹽水溶液(30mL)洗滌并減壓濃縮至干。所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep柱,0％-50％EtOAc的己烷溶液)，接著進(jìn)行HPLC(Phenomenex Luna C18(2),250.0×50.0mm,15微米,含有0.05％TFA的H2O和含有0.05％TFA的CH3CN)，用飽和碳酸氫鈉溶液(3×30mL)洗滌，然后冷凍干燥得到白色固體3-(4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(32mg,40％):mp 158–162℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),8.14(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.82(dd,J＝9.6,1.5Hz,1H),7.77–7.67(m,1H),7.61–7.47(m,2H),5.19–5.04(m,1H),4.80–4.67(m,1H),3.46–3.14(m,2H,與H2O重合),3.12–2.94(m,1H),2.02–1.70(m,4H)；ESIMS m/z 418[M+H]+。
實(shí)施例99：3-(3-(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(161)的制備
步驟A：將(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)硼酸(0.453g,2.02mmol)、4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.669g,2.02mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.117g,0.1mmol)、碳酸鈉(2M,5mL)和1,2-二甲氧基乙烷(10mL)的混合物在80℃微波輻照下加熱1.5小時(shí)。冷卻至環(huán)境溫度后，混合物用水(80mL)稀釋并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用鹽水(2×50mL)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-25％EtOAc的己烷溶液)得到無(wú)色油狀物4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.614g,84％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.37–7.22(m,1H),7.22(d,J＝1.68Hz,1H),5.60(br.1H),4.02(br,2H),3.61(br,2H),2.34(br,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 306[M+H]+。
步驟B：用H2氣囊氫化4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.614g,1.70mmol)、氧化鉑(0.200g,0.881mmol)、乙酸(1mL)和乙酸乙酯(15mL)的混合物16小時(shí)并過(guò)濾。濃縮后，殘余物在硅膠上層析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到無(wú)色稠油狀物4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.302g,48％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.38(s,1H),7.29(d,J＝1.3Hz,1H),4.26(br,2H),3.04(m,1H),2.80(m,2H),1.80–1.55(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H]+。
步驟C：向4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.302g,0.830mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入HCl溶液(2M HCl的乙醚醚溶液,5mL)。將混合物攪拌4小時(shí)并蒸發(fā)，所得固體溶于DMF(8mL)中。在單獨(dú)的燒瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.224g,0.830mmol)的THF(5mL)溶液中加入氫氧化鋰水合物(0.035g,0.830mmol)的水(2mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘,用2N HCl酸化至PH 6并蒸發(fā)至干。向殘余物中加入苯并三唑-1-基-氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(0.550g,1.25mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.646g,5.00mmol)和第一個(gè)反應(yīng)中的到的DMF溶液。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后倒入水中。用乙酸乙酯提取所得混合物，將有機(jī)層用鹽水洗滌三次，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.205g,50％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.38(m,1H),7.79(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.50(dd,J＝9.6,1.7Hz,1H),7.42(d,J＝1.4Hz,1H),7.31(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),5.76–5.71(m,1H),5.01–4.95(m,1H),3.38–3.26(m,2H),3.02–2.92(m,1H),2.01–1.82(m,4H)；MS(ESI+)m/z 489[M+H]+。
步驟D：將(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.205g,0.42mmol)、氰化鋅(0.099g,0.840mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.048g,0.042mmol)和DMF(4mL)的混合物在130℃微波輻照下加熱30分鐘。冷卻至室溫后，混合物用水(80mL)稀釋并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用鹽水(2×80mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-60％EtOAc的己烷溶液)的到白色固體3-(4-(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.115g,63％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.72(s,1H),7.98(dd,J＝9.5,1.1Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(dd,J＝9.5,1.6Hz,1H),7.41(s,1H),7.31(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),5.77–5.72(m,1H),5.02–4.96(m,1H),3.40(m,2H),3.04–2.94(m,1H),2.06–1.80(m,4H)；MS(ESI+)m/z 434[M+H]+。
實(shí)施例100：3-(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(162)的制備
步驟A：將(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)硼酸(0.453g,2.02mmol)、4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.669g,2.02mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.117g,0.1mmol)、碳酸鈉(2M,5mL)和1,2-二甲氧基乙烷(10mL)的混合物在80℃微波輻照下加熱1小時(shí)。冷卻至環(huán)境溫度后，混合物用水(80mL)稀釋并用乙酸乙酯(80mL)提取。提取物用鹽水(2×50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到無(wú)色油狀物4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.438g,60％):1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.44–7.34(m,2H),7.09(m,1H),5.49(br。1H),4.01(br,2H),3.60(br,2H),2.30(br,2H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 306[M+H]+。
步驟B：使用氣囊將4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.438g,1.21mmol)、氧化鉑(0.082g,0.363mmol)、乙酸(0.073g,1.21mmol)和乙酸乙酯(20mL)的混合物氫化20小時(shí)并過(guò)濾。所得物質(zhì)在80℃下再次氫化16小時(shí)并過(guò)濾。濃縮后，殘余物在硅膠上層析(0-30％EtOAc的己烷溶液)得到無(wú)色稠油狀物4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.115g,26％):1H NMR(300MHz,CDCl3)7.42–7.30(m,3H),4.25(br,2H),3.21(m,1H),2.81(m,2H),1.80–1.60(m,4H),1.49(s,9H)；MS(ESI+)m/z 308[M+H]+。
步驟C：向4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.115g,0.316mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入HCl(2M HCl的乙醚溶液,3mL)。將混合物攪拌3小時(shí)并蒸發(fā)，所得固體溶于DMF(3mL)中。在單獨(dú)的燒瓶中，向6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-羧酸乙酯(0.094g,0.348mmol)的THF(3mL)溶液中加入氫氧化鋰水合物(0.015g,0.348mmol)的water(1mL)溶液。將混合物攪拌20分鐘，用2N HCl酸化至PH 6并蒸發(fā)。向殘余物中加入苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(0.210g,0.474mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.163g,1.26mmol)和第一個(gè)反應(yīng)中所得的DMF溶液。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后倒入水中。用乙酸乙酯提取混合物，有機(jī)層用鹽水洗滌三次，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到固體(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.076g,49％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.36(m,1H),7.78(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),7.50–7.34(m,4H),5.73–5.68(m,1H),5.00–4.94(m,1H),3.52–3.28(m,2H),2.97(m,1H),2.01–1.74(m,4H)；MS(ESI+)m/z 489[M+H]+。
步驟D：將(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)甲酮(0.076g,0.156mmol)、氰化鋅(0.037g,0.312mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.018g,0.0156mmol)和DMF(2mL)的混合物在130℃微波輻照下加熱30分鐘。冷卻至室溫后，將混合物用水(50mL)稀釋并用乙酸乙酯(50mL)提取。提取物用鹽水(2×50mL)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。所得殘余物在硅膠上層析(0-60％EtOAc的己烷溶液)得到白色固體3-(4-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-腈(0.026g,38％):1H NMR(300MHz,CDCl3)9.70(s,1H),7.97(dd,J＝9.5,1.0Hz,1H),7.52–7.32(m,4H),5.74–5.69(m,1H),5.00–4.95(m,1H),3.52–3.31(m,2H),2.99(m,1H),2.06–1.75(m,4H)；MS(ESI+)m/z 434[M+H]+。
實(shí)施例101：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(163)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-乙基-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(25mg,32％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.93(m,1H),7.56–7.32(m,3H),5.16(m,1H),4.81(m,1H),2.61-3.42(m,9H),1.94–1.61(m,4H)；ESI MS m/z 391[M+H]+。
實(shí)施例102：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(164)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和環(huán)丙基甲醛轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(環(huán)丙基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(41mg,65％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.85(m,1H),3.53(m,2H),3.12(m,1H),2.62-2.35(m,5H),2.43(m,2H),1.87(m,2H),1.63(m,2H),0.98(m,1H),0.55(m,2H),0.021(m,2H)；ESI MS m/z 417[M+H]+。
實(shí)施例103：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(165)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D1，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和3-氧雜環(huán)丁酮轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(53mg,62％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52-4.85(m,5H),3.53(m,1H),3.12-3.40(m,3H),2.82-265(m,3H),1.72(m,2H),1.53(m,2H)；ESI MS m/z 419[M+H]+。
實(shí)施例104：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(166)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2,2,2-三氟乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(56mg,62％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.91(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.73(m,1H),3.82(m,2H),3.32(m,1H),2.89(m,2H),2.65(m,2H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MS m/z 445[M+H]+。
實(shí)施例105：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(167)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和3-溴-1,1,1-三氟丙烷轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(3,3,3-三氟丙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(36mg,43％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.01(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52(m,2H),3.41(m,2H),2.82(m,3H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MSm/z 459[M+H]+。
實(shí)施例106：(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮(168)的制備
步驟A：按照一般方法GP-D2，將(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮鹽酸鹽(42)和溴乙基甲基醚轉(zhuǎn)化為白色固體(4-(2-氯-3-氟苯基)哌啶-1-基)(5-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)甲酮as a(53mg,45％):1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.89(m,1H),7.56–7.39(m,3H),5.15(m,1H),4.52(m,2H),3.51(m,4H),3.23(m,4H),2.72(m,6H),1.89(m,2H),1.56(m,2H)；ESI MS m/z 421[M+H]+。
實(shí)施例107：(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌嗪-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(169)的制備
步驟A：將哌嗪-1-羧酸叔丁酯(210mg,1.13mmol)和吡啶(137mg,1.73mmol)的無(wú)水CH2Cl2(2mL)溶液在N2氣氛下冷卻至0℃，用三光氣(402mg,1.35mmol)的無(wú)水CH2Cl2(2mL)溶液處理并在0℃下攪拌1小時(shí)。除去冷卻浴，將反應(yīng)在室溫下再攪拌1小時(shí)。之后，采用1M鹽酸(25mL)稀釋混合物并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。合并的有機(jī)提取物用鹽水(20mL)洗滌，Na2SO4干燥，并過(guò)濾除去干燥劑。將濾液減壓濃縮至干得到白色固體4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280mg,100％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.76(br s,1H),7.33(dd,J＝17.0,9.0Hz,1H),7.11(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.88–4.52(m,2H),4.69(br s,2H),4.62(s,2H),3.49(可見(jiàn)t,J＝4.5Hz,4H),3.32(可見(jiàn)t,J＝4.5Hz,4H),3.25(可見(jiàn)t,J＝12.5Hz,1H),3.14–2.88(m,2H),1.94(d,J＝12.5Hz,2H),1.72–1.66(m,2H),1.48(s,9H)。
步驟B：在N2氣氛中將4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮鹽酸鹽(50mg,0.11mmol)、N,N,N-二異丙基乙胺(0.05mL,0.3mmol)和DMAP(0.5mg,0.004mmol)的無(wú)水CH2Cl2(1mL)溶液冷卻至0℃，采用4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.12mmol)處理并在0℃下攪拌1小時(shí)。除去冷卻浴，將反應(yīng)在室溫下再攪拌4小時(shí)。之后，混合物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,12g Redisep金色譜柱,0％-10％CH3OH的CH2Cl2溶液)得到白色固體4-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(48mg,71％):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.76(br s,1H),7.33(dd,J＝17.0,9.0Hz,1H),7.11(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),4.88–4.52(m,2H),4.69(br s,2H),4.62(s,2H),3.49(可見(jiàn)t,J＝4.5Hz,4H),3.32(可見(jiàn)t,J＝4.5Hz,4H),3.25(可見(jiàn)t,J＝12.5Hz,1H),3.14–2.88(m,2H),1.94(d,J＝12.5Hz,2H),1.72–1.66(m,2H),1.48(s,9H)。
步驟C：在N2氣氛中將4-(3-(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-羰基)-1,4,5,6-四氫-吡咯并[3,4-c]吡唑-5-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(47mg,0.077mmol)的無(wú)水CH2Cl2(1.5mL)溶液冷卻至0℃并用TFA(1.5mL)處理。加入完成后，除去冷卻浴并在室溫下攪拌反應(yīng)1h。之后，將混合物減壓濃縮至干，用CH2Cl2(100mL)稀釋，并用2M無(wú)水NaOH(2×50mL)洗滌。有機(jī)層用Na2SO4干燥，然后過(guò)濾除去干燥劑。濾液減壓濃縮至干，并將所得殘余物在硅膠上層析(Isco CombiFlash Rf裝置,120gRedisep柱,0％-40％CH3OH的CH2Cl2溶液)。將合并的柱級(jí)分減壓濃縮至干，發(fā)現(xiàn)其含有殘余的TFA(～17％)。所得殘余物(21mg)用CH2Cl2(5mL)和CH3OH(1mL)的混合物稀釋，用MP-碳酸酯(大孔甲基聚苯乙烯碳酸三乙銨)處理，并在室溫下攪拌2小時(shí)。之后，過(guò)濾混合物并將濾液減壓濃縮至干得到白色固體(4-(3,4-二氟-2-(三氟甲基)苯基)哌啶-1-基)(5-(哌嗪-1-羰基)-1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑-3-基)甲酮(13mg,33％):mp153–155℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.20(br s,1H),7.75(dd,J＝18.0,9.0Hz,1H),7.55–7.52(m,1H),4.65–4.51(m,6H),3.24–3.22(m,2H),3.14(t,J＝5.0Hz,4H),2.96–2.80(m,1H),2.70–2.68(m,3H),2.32–2.22(m,1H),1.79–1.70(m,4H),1個(gè)不容易觀察到的質(zhì)子；ESI MS m/z 513[M+H]+。
實(shí)施例108：取代哌啶化合物的RPB4結(jié)合
通過(guò)兩種體外測(cè)定、RBP4結(jié)合(SPA)和視黃醇依賴性RBP4-TTR相互作用(HTRF)測(cè)試表1中列出的化合物?；衔锝Y(jié)合RBP4和/或拮抗視黃醇依賴性RBP4-TTR相互作用(表2)。該活性表明化合物降低血清RBP4和視黃醇的水平。
表1
表2
實(shí)施例109：另外的取代哌啶化合物的RPB4結(jié)合
本發(fā)明的另一方面提供了具有RBP4拮抗劑活性的表1的化合物的類似物。這些類似物含有位于哌啶核心4-位的二取代或三取代的苯環(huán)。本文描述的化合物63-162的類似物類似地結(jié)合RBP4并拮抗視黃醇依賴性RBP4-TTR相互作用。
通過(guò)兩種體外測(cè)定即RBP4結(jié)合(SPA)和視黃醇依賴性RBP4-TTR相互作用(HTRF)測(cè)試作為表1中所描述化合物的類似物的另外的哌啶化合物。這些哌啶化合物結(jié)合RBP4并拮抗視黃醇依賴性RBP4-TTR相互作用。該活性表明化合物降低血清RBP4和視黃醇的水平。
實(shí)施例110：哺乳動(dòng)物模型中的功效
在野生型小鼠和Abca4-/-小鼠中測(cè)試表1中所列化合物的有效性。Abca4-/-小鼠模型證明了脂褐質(zhì)在RPE中的加速累積，且所述模型被認(rèn)為是減少脂褐質(zhì)累積的藥物的臨床前功效模型?；衔镆?0mg/kg口服劑量給藥3周。在處理的動(dòng)物中血清RBP4水平降低。A2E/isoA2E和其他雙視黃酸的水平在處理的小鼠中減少。A2-DHP-PE和atRAL di-PE的水平也有所降低。
在野生型小鼠和Abca4-/-小鼠中測(cè)試作為表1中所描述化合物的類似物的另外的哌啶化合物的效力。Abca4-/-小鼠模型證明了脂褐質(zhì)在RPE中的加速累積，且所述模型被認(rèn)為是減少脂褐質(zhì)累積的藥物的臨床前功效模型。化合物以30mg/kg口服劑量給藥3周。在處理的動(dòng)物中血清RBP4水平降低。A2E/isoA2E和其他雙視黃酸的水平在處理的小鼠中減少。A2-DHP-PE和atRAL di-PE的水平也有所降低。
實(shí)施例111：化合物81在哺乳動(dòng)物模型中的功效
化合物81抑制Abca4-/-小鼠模型中的雙視黃酸累積。Abca4-/-小鼠在17周齡時(shí)具有～15-19皮摩爾/眼范圍內(nèi)的A2E水平。從17周齡開(kāi)始，小鼠用25mg/kg的化合物81處理12周。與溶媒處理的對(duì)照相比，在化合物81處理的小鼠中，雙視黃酸含量降低53％(圖8)。該數(shù)據(jù)與從給藥方案開(kāi)始就完全阻止雙視黃酸合成的這一事實(shí)一致。減少的雙視黃酸累積導(dǎo)致化合物81處理的小鼠中顯著的血清RBP4減少(圖9)。
實(shí)施例112：其他化合物在哺乳動(dòng)物模型中的功效
化合物34、36和38抑制Abca4-/-小鼠模型中的雙視黃酸累積。從17周齡開(kāi)始，小鼠用25mg/kg的化合物34、36或38處理12周。相對(duì)于溶媒處理的對(duì)照，在上述化合物處理的小鼠中雙視黃酸含量的減少。該數(shù)據(jù)與從給藥方案開(kāi)始就完全阻止雙視黃酸合成的這一事實(shí)一致。減少的雙視黃酸累積導(dǎo)致上述化合物處理的小鼠中顯著的血清RBP4減少。
化合物30、40和42抑制Abca4-/-小鼠模型中的雙視黃酸累積。從17周齡開(kāi)始，小鼠用25mg/kg的化合物30、40或42處理12周。相對(duì)于溶媒處理的對(duì)照，在上述化合物處理的小鼠中存在雙類視黃醇含量的減少。該數(shù)據(jù)與從給藥方案開(kāi)始就完全阻止雙視黃酸合成的這一事實(shí)一致。減少的雙視黃酸累積導(dǎo)致上述化合物處理的小鼠中顯著的血清RBP4減少。
化合物63-80或82-169中的每一個(gè)均抑制Abca4-/-小鼠模型中的雙視黃酸累積。從17周齡開(kāi)始，小鼠用25mg/kg的化合物63-80或82-169中的任一種處理12周。相對(duì)于溶媒處理的對(duì)照，在上述化合物處理的小鼠中存在雙類視黃醇含量的減少。該數(shù)據(jù)與從給藥方案開(kāi)始就完全阻止雙視黃酸合成的這一事實(shí)一致。減少的雙視黃酸累積導(dǎo)致上述化合物處理的小鼠中顯著的血清RBP4減少。
實(shí)施例113：施用于受試者
將一定量的化合物81施用于患有AMD的受試者的眼睛。所述化合物的量可以有效治療受試者。
將一定量的化合物81施用于患有斯特格氏病的受試者的眼睛。所述化合物的量可以有效治療受試者。
將一定量的化合物63-80或82-169中的任一種施用于患有AMD的受試者的眼睛。所述化合物的量可以有效治療受試者。
將一定量的化合物63-80或82-169中的任一種施用于患有斯特格氏病的受試者的眼睛。所述化合物的量可以有效治療受試者。
討論
在發(fā)達(dá)國(guó)家中年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)是失明的主要原因。其患病率高于阿爾茨海默病。沒(méi)有針對(duì)最常見(jiàn)的干性AMD的療法。干性AMD由位于光感受細(xì)胞下方并為這些光感受細(xì)胞提供關(guān)鍵的代謝支持的視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)中的異常所引發(fā)。RPE功能障礙在稱為黃斑的視網(wǎng)膜的中心部分誘導(dǎo)光感受器的繼發(fā)性變性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明萎縮性AMD視網(wǎng)膜中高水平的脂褐質(zhì)誘導(dǎo)RPE和相鄰光感受器的退化。除了AMD，脂褐質(zhì)的顯著累積是斯特格氏病(STGD)的標(biāo)志，斯特格氏病是遺傳性青少年期發(fā)作的黃斑變性。RPE脂褐質(zhì)的主要細(xì)胞毒性成分是雙視黃酸吡啶鎓A2E。A2E以非酶促的方式形成在視網(wǎng)膜中，并且可以被認(rèn)為是正常運(yùn)行的視循環(huán)的副產(chǎn)物。鑒于A2E對(duì)RPE和光感受器的確定的細(xì)胞毒性影響，對(duì)A2E形成的抑制可延遲患有干性AMD和STGD的患者的視力喪失。這表明，小分子視循環(huán)抑制劑可以減少視網(wǎng)膜中A2E的形成，并延長(zhǎng)患有干性AMD和STGD的患者的RPE和光感受器的存活。視網(wǎng)膜中視循環(huán)速率和A2E產(chǎn)生速率取決于全反式視黃醇從血清向RPE的匯集。RPE視黃醇攝取取決于血清視黃醇濃度。血清視黃醇的藥理學(xué)下調(diào)是干性AMD和STGD的有效治療策略。血清視黃醇在循環(huán)中保持為與視黃醇結(jié)合蛋白(RBP4)和轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)結(jié)合的三元復(fù)合物。在沒(méi)有與TTR相互作用的情況下，RBP4-視黃醇復(fù)合物由于腎小球?yàn)V過(guò)而快速清除。視黃醇與RBP4的結(jié)合的是形成RBP4-TTR復(fù)合物所必需的；apo-RBP4不與TTR相互作用。重要的是，RBP4上的視黃醇結(jié)合位點(diǎn)在空間上接近介導(dǎo)RBP4-TTR相互作用的界面。不希望受任何科學(xué)理論的束縛，本文的數(shù)據(jù)顯示，小分子RBP4拮抗劑從RBP4置換視黃醇并破壞RBP4-TTR相互作用，這將降低血清視黃醇濃度，抑制視網(wǎng)膜對(duì)視黃醇的攝取并作為間接視循環(huán)抑制劑來(lái)減少細(xì)胞毒性A2E的形成。
血清RBP4作為藥物靶標(biāo)用于視覺(jué)周期的藥理學(xué)抑制
由于視網(wǎng)膜中視循環(huán)速率和A2E產(chǎn)生速率取決于全反式視黃醇從血清向RPE的匯集(圖4)，已經(jīng)表明血清視黃醇的部分藥理學(xué)下調(diào)可能代表了干性AMD治療目標(biāo)區(qū)域(11)。血清視黃醇結(jié)合視黃醇結(jié)合蛋白(RBP4)，并在循環(huán)中保持為與RBP4和轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)結(jié)合的三元復(fù)合物(圖5)。在沒(méi)有與TTR相互作用的情況下，RBP4-視黃醇復(fù)合物由于腎小球?yàn)V過(guò)而從循環(huán)中快速清除。此外，受體介導(dǎo)的由血清到視網(wǎng)膜的全反式視黃醇攝取需要RBP4-TTR-視黃醇復(fù)合物的形成。
不希望受任何科學(xué)理論的束縛，視循環(huán)抑制劑可減少干性AMD中毒性雙視黃酸的形成并延長(zhǎng)RPE和感光細(xì)胞存活。視循環(huán)速率和A2E產(chǎn)生速率取決于全反式視黃醇從血清向RPE的匯集。由循環(huán)到RPE的視黃醇的攝取需要在血清中形成三元視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)-甲狀腺素蛋白(TTR)-視黃醇復(fù)合物。RBP4上的視黃醇結(jié)合位點(diǎn)在空間上接近介導(dǎo)RBP4-TTR相互作用的界面。與血清視黃醇競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合RBP4同時(shí)阻斷RBP4-TTR相互作用的RBP4拮抗劑將減少血清視黃醇，減緩視循環(huán)，并抑制細(xì)胞毒性雙視黃酸的形成。
RBP4代表了用于間接藥理學(xué)抑制視覺(jué)周期和A2E形成的有吸引力的藥物目標(biāo)。RBP4上的視黃醇結(jié)合位點(diǎn)在空間上接近介導(dǎo)RBP4-TTR相互作用的界面。與血清視黃醇競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合RBP4同時(shí)阻斷RBP4-TTR相互作用的視黃醇拮抗劑將降低血清RBP4和視黃醇水平，這將導(dǎo)致視網(wǎng)膜對(duì)視黃醇的攝取減少。結(jié)果是視循環(huán)抑制和隨后的A2E合成減少。
發(fā)現(xiàn)先前被認(rèn)為是癌癥療法(29)的稱為芬維A胺[N-(4-羥基-苯基)視黃酰胺，4HRP](圖6)的合成視黃酸結(jié)合RBP4，從RBP4置換全反式視黃醇(13)，并破壞RBP4-TTR相互作用(13,14)。
顯示芬維A胺降低血清RBP4和視黃醇(15)，抑制眼部全反式視黃醇攝取并減慢視循環(huán)(11)。重要的是，芬維A胺的施用減少了過(guò)量雙視黃酸累積的動(dòng)物模型(即Abca4-/-小鼠)中A2E的產(chǎn)生(11)。使用芬維A胺的臨床前實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了RBP4作為干性AMD的藥物目標(biāo)。然而，芬維A胺沒(méi)有選擇性且具有毒性。除了其作為視黃醇結(jié)合RBP4的拮抗劑的活性之外，芬維A胺是包括視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(20)在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中非常具有活性的凋亡誘導(dǎo)劑(16-19)。已經(jīng)提出芬維A胺的不良作用由其作為核受體RAR的配體的作用介導(dǎo)(21-24)。此外，與其他視黃酸類似，據(jù)報(bào)道芬維A胺刺激小鼠中血管肉瘤的形成。此外，芬維A胺是致畸的，這使得其在育齡期的斯特格氏病患者中的使用存在問(wèn)題。
由于芬維A胺的安全性可能與具有致盲但不危及生命的病癥的個(gè)體的長(zhǎng)期服用不相容，鑒定新類型的RBP4拮抗劑是非常重要的。本發(fā)明的化合物從RBP4中置換視黃醇，破壞視黃醇誘導(dǎo)的RBP4-TTR相互作用，并降低血清REBP4水平。本發(fā)明的化合物在過(guò)量脂褐質(zhì)形成的Abca4-/-小鼠模型中抑制雙視黃酸積累，這表明其可用于治療干性AMD和斯特格氏病。
本發(fā)明涉及用于治療黃斑變性和斯特格氏病的小分子。本文公開(kāi)了小分子作為非視黃酸RBP4拮抗劑在眼部的應(yīng)用。已表明表2中列出的化合物在體外結(jié)合RBP4和/或在生物學(xué)顯著的濃度下在體外拮抗RBP4-TTR相互作用。本文所述的作為表2中所列化合物的類似物的其他化合物在體外類似地結(jié)合RBP4，并在生物學(xué)顯著的濃度下在體外拮抗RBP4-TTR相互作用。
目前，沒(méi)有FDA批準(zhǔn)的治療影響數(shù)百萬(wàn)患者的干性AMD或斯特格氏病的療法。一個(gè)非處方的、非FDA批準(zhǔn)的抗氧化維生素和鋅的混合物(AREDS配方)被聲稱在干性AMD患者的一個(gè)子集中是有益的。沒(méi)有針對(duì)斯特格氏病的療法。本發(fā)明鑒定了可用于治療干性AMD和以脂褐質(zhì)過(guò)度累積為特征的其他病癥的非視黃酸RBP4拮抗劑。不希望受任何科學(xué)理論的束縛，因?yàn)橹仲|(zhì)的累積似乎是AMD和STGD視網(wǎng)膜中的RPE和光受體死亡的直接原因，因此本文所述的化合物是疾病緩解劑，因?yàn)樗鼈冎苯咏鉀Q這些疾病的根本原因。本發(fā)明提供了新的治療方法，其將保護(hù)AMD和斯特格氏病患者以及患有以脂褐質(zhì)過(guò)度累積為特征的病癥的患者的視力。
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