本發(fā)明涉及包含歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)和白藜蘆醇的均相制劑以用于口服給藥，其中白藜蘆醇在包含歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)或其烷基醇和離子型乳化劑的溶劑系統(tǒng)中溶解。具體地，本發(fā)明涉及上述的均相制劑在用于預(yù)防或治療由脂代謝混亂和血小板凝集增加導(dǎo)致的心血管疾病移和由自由基導(dǎo)致的損傷和/或病毒性疾病的用途。
背景技術(shù)：
：在工業(yè)化國家，經(jīng)常出現(xiàn)涉及脂代謝異常的心血管疾病。例如，根據(jù)世界衛(wèi)生組織2011年4月公布的數(shù)據(jù)，在意大利，心血管疾病的死亡人數(shù)達(dá)到總體死亡人數(shù)的18.65％。我們對于白藜蘆醇和冠心病之間關(guān)系的了解來自過去幾年進(jìn)行的流行病學(xué)研究。這些研究得到的結(jié)論表明重度冠狀動脈粥樣硬化和冠心病的病情發(fā)展與血清膽固醇水平密切相關(guān)(Breuer，H.W.M.；《歐洲心臟病學(xué)》(EuropeanCardiology)，2005；1-6)。血小板在心血管疾病中發(fā)揮重要、但經(jīng)常未被足夠意識到的作用。例如，通過增加親凝集刺激或減少疏凝集作用物質(zhì)，可改變血小板的正常反應(yīng)，從而得到出現(xiàn)于基于慢性(例如穩(wěn)定型心絞痛)和急性(例如急性心肌梗塞)的心血管疾病狀態(tài)下血小板活化/凝集增加的條件。另外，血小板高聚性也和冠狀動脈疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素(例如吸煙、高血壓和血膽脂醇過多)相關(guān)。最后，利用疏血小板療法對上述疾病進(jìn)行管理的范圍有所增加，這種增加還強(qiáng)調(diào)血小板在心血管疾病發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵作用。最近發(fā)表的文獻(xiàn)提供了對血小板在維持體內(nèi)平衡中正常生理作用、促進(jìn)心血管疾病中血小板功能異常的病理生理學(xué)過程和疏血小板治療相關(guān)作用和益處的全面概述(Kottke-MarchantK.：《克利夫蘭診所醫(yī)學(xué)雜志》(ClevelandClinicJournalofMedicine)，2009年4月；76(1)：1-7)。關(guān)于大多數(shù)折磨人類的退化性疾病源自有毒自由基反應(yīng)的證據(jù)在不斷積累。這些疾病包括動脈粥樣硬化、癌癥、炎性關(guān)節(jié)疾病、哮喘、糖尿病、老年性癡呆和退化性眼疾。生物老化過程也可能基于自由基。大多數(shù)對細(xì)胞的自由基損傷包括氧自由基或更普遍的，包括諸如單線態(tài)氧和過氧化氫以及自由基的非自由基種類的活性氧種類(AOS)。AOS可損傷遺傳物質(zhì)、導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化以及使膜結(jié)合酶失活。我們的飲食需要抗補(bǔ)充氧化劑以保證老年人群更加健康(AustNZJ《眼科雜志》(Ophthalmol).1995年2月；23(1)：3-7)。歐米茄-3多不包含脂肪酸(n-3PUFA)可能通過抗炎、抗血栓形成和抗心律失常機(jī)理的手段(SethiS.等人；《血液》(Blood)2002：100：-1340-6；BillmanGE等人.；《循環(huán)》(Circulation)31999：99：2452-7)表現(xiàn)出預(yù)防心血管情形的有益效果(AarsetoeyH.等人；《心臟病研究和實(shí)踐》(CardiologyResearchandPractice)卷2012：1-16)。由于首先觀察到是降脂效果，所以起初這些藥物是用于治療血脂異常的，而抗炎、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化和抗致心律失常性的效果是后來發(fā)現(xiàn)的。GISSI-預(yù)防試驗(yàn)(《柳葉刀》(Lancet)1999年354：447-55)是第一個試驗(yàn)證實(shí)n-3PUFA在患有心肌梗塞后遺癥的患者中的療效性和耐受性。根據(jù)文獻(xiàn)中的證據(jù)，現(xiàn)在n-3PUFA表明其可初級和次級預(yù)防缺血性心臟病和心臟性猝死(SCD)(MoriTA,BeilinLJ.“長鏈-歐米茄-3脂肪酸,血脂和降低心血管風(fēng)險(xiǎn)”，《血脂學(xué)時論轉(zhuǎn)錄》(Curr.Opin.Lipidol)2001年；12：11-7)。2011年9月14日公開的《營養(yǎng)和膳食補(bǔ)充劑》(NutritionandDietarySupplements)93-100頁中描述了n-3系列多不飽和脂肪酸預(yù)防心血管疾病的作用。白藜蘆醇(反-3,4',5-三羥基芪)是位于黑葡皮上的多元酚分子。已知它作為血小板凝集抑制劑具有保護(hù)心臟的作用。(SzmitkoPE等人.《循環(huán)》(Circulation)2005年1月，111(2)p10-11；DasDK等人?！氨Ｗo(hù)心臟的白藜蘆醇：非傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的治療希望"；《分子介入》(Mol.Interv.)，2006，6(1)：36–47)。它也作為抗氧化劑和皮膚保護(hù)劑(Afaq,Farrukh等人"可防止光致癌和光老化的植物性抗氧化劑”；《試驗(yàn)皮膚病學(xué)》(ExperimentalDermatology)2006年，15(9)：67884)。近年來關(guān)于紅葡萄酒和紅葡萄酒作為基本成分之一物質(zhì)的已知有益性能，對白藜蘆醇進(jìn)行了大量研究(生命科學(xué)(LifeSci.)71，2145-52，2002)。許多研究表明白藜蘆醇具有抗致癌物活性，其作用機(jī)理可做如下分類：抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活性，它可調(diào)節(jié)涉及炎性和致癌性過程的不同基因表達(dá)(《柳葉刀》(Lancet)341，1103-1104，1993；《科學(xué)》(Science)，275，218.220，1997；《美國科學(xué)院院報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sc.)94，14138-14143，1997；《生命科學(xué)》(LifeScience)61，2103-2110，1997；《英國藥物學(xué)雜志》(Brit.J.Pharm.)126，673-680，1999；《免疫學(xué)雜志》(J.Imm.)164，6509-6519，2000)；抑制不同蛋白質(zhì)，包括蛋白酶C(Stewart，J.R.，Ward，N.E.，Ioannides，C.G.和O'Brian，C.A.，“白藜蘆醇通過新的機(jī)理優(yōu)選地阻止輔因子依耐性、富精氨酸蛋白基質(zhì)的蛋白酶C-催化的磷酸化作用”《生物化學(xué)》1999，38，13244-13251)，核苷酸還原酶(《歐洲生物化學(xué)聯(lián)合會雜志》(FEBSLett.)，421，277-279，1998)和哺乳動物上皮細(xì)胞的環(huán)加氧酶-2(COX-2)(SteinmetzKL，TysonCK，MeierhenryEF，SpaldingJW，MirsalisJC.“體內(nèi)或體外暴露于美沙吡林后檢查干細(xì)胞基因毒性、毒力和形態(tài)變性”《致癌作用》(Carcinogenesis)1988年1月；9(6)：959–963))；活化半胱氨酸蛋白酶2，3，6和9(《美國試驗(yàn)生物學(xué)會雜志》(FASEBJ.)1613-1615，2000)和調(diào)節(jié)基因p53(是已知的腫瘤抑制基因)(SoleasGJ，GoldbergDM，GrassL，LevesqueM，DiamandisEP.“葡萄酒多酚可調(diào)節(jié)p53基因在人類癌癥細(xì)胞系中的表達(dá)？”《臨床生物化學(xué)》(ClinBiochem)2001；34：415-420)。2000年公布的《自由基研究》(FreeRadic.Res.)卷33，105到114頁描述了白藜蘆醇的抗氧化活性及其消除不同物質(zhì)產(chǎn)生的損害效果和/或?qū)е录?xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激條件的能力。EP1567137B1描述了白藜蘆醇治療流感病毒疾病的用途。WO2011161501描述了粉末或顆粒固體組合物，其中活性試劑在水中不溶或難溶于水和/或熱不穩(wěn)定和/或具有令人不快的感官特性。描述的方法是在包含甘油三酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐和抗壞血酸棕櫚酸酯的脂基質(zhì)中的分散體。專利申請WO2011120530公開了包含多孔氧化硅(二氧化硅)和可裝載藥用油(魚油是其中之一)的釋放促進(jìn)劑的固體多孔惰性載體組合物。EP2517697描述了包含n-3PUFA并且結(jié)合一個或更多活性成分的組合物的制備示例。具體地，描述了包括一個或更多n-3PUFA烷基酯他丁類的微囊懸浮劑，其中他丁類利用可輕易在胃腸介質(zhì)中分解的高分子膜分離而不和n-3PUFA烷基酯接觸。所屬領(lǐng)域已知的大多數(shù)方法可用于制備包括白藜蘆醇和n-3PUFA的組合物，包括耗時和昂貴的微型膠囊化技術(shù)或涂覆工藝。這些研究集中于發(fā)現(xiàn)釋放油相內(nèi)單劑量白藜蘆醇的合適方法。所屬領(lǐng)域還不知道將白藜蘆醇溶解于n-3PUFA的方法。實(shí)際上，雖然作為防止或減少n-3PUFA降解的穩(wěn)定劑，白藜蘆醇保持了非常好的品質(zhì)，但是它在大多數(shù)油相(用于制備藥物和營養(yǎng)物質(zhì)的方案)中不溶解。即使加入特定乳化劑和/或助表面活性劑也不能有效地獲得所希望的目的?？紤]到白藜蘆醇和n-3PUFA脂肪酸結(jié)合用于藥物或營養(yǎng)物質(zhì)的優(yōu)勢，愈來愈而需要一種將白藜蘆醇溶解在油相中的有效方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：現(xiàn)在驚奇地發(fā)現(xiàn)，利用包含離子型乳化劑(脫脂富含卵磷脂的磷脂酰膽堿)和歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)的溶劑系統(tǒng)，可以將大量白藜蘆醇完全地溶解于所述溶劑系統(tǒng)中。因此，本發(fā)明的目的是組合物，該組合物包括：(1)溶劑系統(tǒng)，包括：歐米茄-3多不飽和脂肪酸或其烷基酯；從富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿，或含有多于92％磷脂酰膽堿的富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿或EpikuronTM200構(gòu)成的組中選出的離子型乳化劑；以及(2)白藜蘆醇或包含白藜蘆醇的天然提取物；其中，白藜蘆醇完全溶解于溶劑系統(tǒng)中以獲得均相組合物。本發(fā)明的另一目的是指上述的組合物，其中以重量計(jì)算，n-3PUFA于40℃、3個月后的回收率至少是94％，于30℃、3個月后的回收率至少是96％，于25℃、3個月后的回收率至少是98％，于5℃、3個月后的回收率至少是99％。本發(fā)明的另一目的是指上述的組合物中，其中以重量計(jì)算，白藜蘆醇于40℃、3個月后的回收率至少是85％，于30℃、3個月后的回收率至少是94％，于25℃、3個月后的回收率至少是97％，于5℃、3個月后的回收率至少是99％。本發(fā)明的一個實(shí)施例中，歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)從由二十碳五烯酸(EPA),二十二碳六烯酸(DHA)或它們的烷基酯以及它們的混合物構(gòu)成的組中選出；歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)的烷基酯從由乙基、甲基和丙基酯構(gòu)成的組中選出。進(jìn)一步地，本發(fā)明的歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)是脂肪酸的混合物，所述脂肪酸的混合物含有按重量計(jì)算的占總體脂肪酸重量的75％到95％之間的EPA和DHA含量，優(yōu)選至少占總體脂肪酸重量的85％的EPA和DHA含量，其中n-3PUFA的總含量至少占總脂肪酸重量的90％；并且二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸之間的比例在0.5到2之間。本發(fā)明的另一個實(shí)施例中，歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)是EPA和DHA(比例為0.9到1.5之間)的乙基酯混合物，所述EPA和DHA的乙基酯的比例在0.9到1.5之間，以重量計(jì)算，EPA乙基酯含量占總體脂肪酸重量的40％到51％之間，DHA乙基酯含量占總體脂肪酸重量的34％到45％之間。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的是組合物，該組合物包括：(1)溶劑系統(tǒng)，包括：歐米茄-3多不飽和脂肪酸或其烷基酯；從由富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿或，或含有多于92％磷脂酰膽堿的富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿或EpikuronTM200構(gòu)成的組中選出的離子型乳化劑；以及(2)白藜蘆醇或包含白藜蘆醇的天然提取物；其中，白藜蘆醇完全溶解于溶劑系統(tǒng)中以獲得飲食或營養(yǎng)補(bǔ)充品或口服藥物形式的均相組合物。在本發(fā)明上述組合物中進(jìn)一步的實(shí)施例中，歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)含量在0.5到1.0g之間，優(yōu)選在0.8到0.9g之間，更優(yōu)選地為0.9g。進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施例，上述組合物還可包括一個或更多維生素、礦物、輔酶、抗氧化劑和/或植物提取物。進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施例，上述組合物還可包括至少一種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施例，上述組合物的特征在于其被軟明膠膠囊密封，可選地具有腸溶衣，以供口服給藥。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的是上述組合物在用于預(yù)防或治療由脂代謝混亂和/或血小板凝集的增加導(dǎo)致的心血管疾病和由自由基(從動脈粥樣硬化、癌癥、炎性關(guān)節(jié)疾病、哮喘、糖尿病、老年性癡呆和退化性眼疾構(gòu)成的組中選出)導(dǎo)致的損傷和/或病毒性疾病中的用途。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的是上述組合物可選地還包括二乙二醇乙醚(2-2-ethoxyethoxy)ethanol)。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“大量”意指在1ml溶劑系統(tǒng)中，大于或等于5mg的白藜蘆醇的量是完全溶解的。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“均相”意指相沒有分離，沒有離子懸浮，沒有固體沉淀，并且溶質(zhì)(白藜蘆醇)完全溶解于溶劑系統(tǒng)中。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的是制備本發(fā)明組合物的方法，該方法包括：制備包括富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿和n-3PUFA的溶劑系統(tǒng)溶液；將白藜蘆醇加入到溶劑系統(tǒng)；得到“均相”溶液，其中白藜蘆醇完全溶解于溶液中，該“均相”溶液通過實(shí)驗(yàn)部分示例性地展示。根據(jù)本發(fā)明的組合也可包括其他有用的元素而不實(shí)質(zhì)上損害活性。根據(jù)本發(fā)明，有用元素的非限制性示例包括一個或更多維生素、礦物、輔酶、抗氧化劑和/或植物提取物。進(jìn)一步地，本發(fā)明的目的是包含上述元素的組合物，可選為具有一個或更多藥學(xué)可接受載體和/或賦形劑的混合物。根據(jù)本發(fā)明，適合使用的藥學(xué)組合物通常包括至少一種藥學(xué)可接受載體和/或一種溶劑和/或一種表面活性劑和/或一種增稠劑和/或一種粘合劑和/或潤滑劑和/或一種芳香劑和/或一種染色劑和/或一種穩(wěn)定劑等等，它們可容易地被所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員選擇。本發(fā)明的組合物和常規(guī)使用的助劑，載體，溶劑或賦形劑一起可制備為藥學(xué)組合物和其單位劑量的形式，并且這樣的形式可用作固體，例如藥片或填注膠囊，或液體，例如溶液、懸浮液、乳化劑、酏劑，或以相同物質(zhì)填充的膠囊，都用作口服?？诜o藥的組合物可采取散裝液體溶液或懸浮液或塊狀粉末的形式。然而，更常見的是，組合物的形式是單位劑量以有利于準(zhǔn)確服藥。術(shù)語“單位劑量形式”意指適合用作人類對象和其他哺乳動物的單一劑量的有形獨(dú)立的單元，每個單元包括預(yù)定量的活性成分，以及適合的藥物賦形劑，其中所述活性成分的預(yù)定量是通過計(jì)算可產(chǎn)生理想治療效果而得。適合口服給藥的液體可包括合適的水溶性或非水溶性的載體，它具有緩沖劑，懸浮或分散劑、染色劑、香料及其類似物。上述的口服組合物僅為代表性的。進(jìn)一步的物料和加工技術(shù)等等在《雷明頓藥物科學(xué)》(第20版，2000，默克出版社，伊斯頓，賓夕法尼亞)的第5部分陳述，它通過引用并入本文。根據(jù)本發(fā)明的組合物也可配制為食品補(bǔ)充劑或膳食補(bǔ)充劑，它構(gòu)成本發(fā)明另一個目的。根據(jù)本發(fā)明的組合物包括所屬領(lǐng)域已知并且已在臨床實(shí)踐中使用的活性成分。因此，它們很容易獲得，因?yàn)樗鼈兪且呀?jīng)市售一段時間的產(chǎn)品并且具有適合人類或動物服用的等級。白藜蘆醇(3,5,4'-三羥基-反-二苯基乙烯)是芪類，是一種天然多酚和由幾種植物自然地產(chǎn)生(受到諸如細(xì)菌或真菌的病原體襲擊時)的植物抗毒素。術(shù)語“歐米茄-3多不飽和脂肪酸”(此處縮寫為“n-3PUFA”)涉及長鏈多不飽和脂肪酸族，通常是C16-C24，具體為具有C20-C22鏈并且通常在n-3位置具有碳-碳雙鍵(即脂肪酸甲基末端開始的第三個鍵)的那些。最優(yōu)選的是全部-順式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)和全部-順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的n-3PUFA是脂肪酸的混合物，該脂肪酸具有高含量的EPA和DHA，例如，以重量計(jì)算，EPA和DHA占總脂肪酸重量的含量高于25％，優(yōu)選占總脂肪酸重量的大約30％到大約100％，具體占總脂肪酸重量的75％到95％之間，更優(yōu)選占總脂肪酸重量的85％。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的總含量n-3PUFA是脂肪酸的混合物，以重量計(jì)算并且基于總脂肪酸重量，它至少具有90％的n-3PUFA。如本文使用的，術(shù)語“PUFA”和“n-3PUFA”意指包括其對應(yīng)的C1-C3烷基酯，優(yōu)選為乙基酯(ethylester)和/或他們的鹽(具有藥學(xué)可接受的堿，例如氫氧化鈉、賴氨酸、精氨酸或諸如膽堿的氨基醇)。根據(jù)本發(fā)明，乙基酯是最廣泛應(yīng)用和優(yōu)選的。本發(fā)明的組合物是口服給藥的，具體地以軟明膠膠囊方式口服給藥。為了口服，單位劑量通常包括100-1000mg歐米茄-3系列的多不飽和脂肪酸，優(yōu)選500-1000mg或300-500mg，總劑量通常是每天大約0.1-3.0g，優(yōu)選是每天0.3-2.0g，最優(yōu)選是每天1.0g。作為活性成分并且能根據(jù)本發(fā)明而使用以及包含能滿足上述技術(shù)參數(shù)的n-3PUFA的特定藥物已經(jīng)能在市場上買到。為了達(dá)到需要的血液水平，這種數(shù)量的產(chǎn)品可采取幾種日常分開的劑量或優(yōu)選單一劑量的形式服用。當(dāng)然，臨床醫(yī)生可根據(jù)患者病情、年齡和體重改變施用產(chǎn)品(或具有另一種治療劑的混合物)的數(shù)量?？诜苿┑钠渌愋鸵策m合于本發(fā)明的目的，例如硬膠囊或藥片，其中多不飽和脂肪酸吸附在固相支持物上。根據(jù)所屬領(lǐng)域的專家評估并且基于病理學(xué)嚴(yán)重程度，也可以使用乳化劑、分散賦形劑中的顆粒、糖漿劑、液滴等等以及可保證藥物系統(tǒng)吸收的其他服用方式，例如適合胃腸外使用的無菌溶液或乳化劑等等?！稓W洲藥典2000》(EuropeanPharmacopoiea2000(EuPh.2000))圖解的組合物含量大于或等于90wt％的歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)和不飽和脂肪酸乙基酯，EPA和DHA乙基酯代表了其大于或等于80wt％的含量，因而也適合于本發(fā)明的目的。EPA和DHA最優(yōu)選的比例是大約0.6-1.1/1.3-1.8，具體為0.9到1.5之間。優(yōu)選EPA(作為乙基酯)的含量以重量計(jì)算，占總脂肪酸重量的40％到51％之間并且DHA(作為乙基酯)的含量以重量計(jì)算，占總脂肪酸重量的34％到45％之間。磷脂酰膽堿(PC)是一類將膽堿并為頭基的磷脂質(zhì)。它們是生物膜的主要成分并且可從諸如蛋黃或大豆的多種來源(利用己烷機(jī)械提取或化學(xué)提取)中容易地獲得。它們也是卵磷脂族(出現(xiàn)在動物和植物組織中的黃褐色脂肪物質(zhì))成員之一。為了本發(fā)明的目的，離子型乳化劑是富含至少92％的磷脂酰膽堿(例如EpikuronTM200)的脫脂和純化的大豆卵磷脂。所屬領(lǐng)域已知的是大豆卵磷脂天然具有抗膽甾醇血活性。因此，本發(fā)明的另一個優(yōu)勢是所述大豆卵磷脂與n-3PUFA和白藜蘆醇結(jié)合，以加合物的方式，升高本發(fā)明組合物的藥學(xué)活性。根據(jù)本發(fā)明的卵磷脂的非限制性示例為商品名為“EpikuronTM200”出售的一種卵磷脂。本發(fā)明組合物的另一個實(shí)施例具有單一形式，其中活性成分呈現(xiàn)為單一藥學(xué)形式，具體為吸附在惰性支持物上?？蛇x地，根據(jù)本發(fā)明的組合物和活性成分一起，包括至少一種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明根據(jù)下述示例，但不限制于這些示例而進(jìn)行，從而顯示其實(shí)質(zhì)優(yōu)勢和意料不到的效果。具體實(shí)施方式示例物料和方法：為了本發(fā)明的目的，使用了下述物料：·歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)是多不飽和脂肪酸的乙基酯的混合物，它是SPA(Pronova,挪威)生產(chǎn)的產(chǎn)品，該多不飽和脂肪酸EPA和DHA含量大于85％，EPA/DHA比例在0.9到1.5之間；·白藜蘆醇由Royalmount制藥公司(加拿大，蒙特利爾)提供；·丙三基和聚乙二醇的混合物，也是已知的商品由GATTEFOSSE'，意大利S.r.l(米蘭，意大利)提供；·丙二醇單月桂酸酯，也是已知的Lauroglycol90TM由GATTEFOSSE'，意大利S.r.l(米蘭，意大利)提供；·聚乙二醇丙三醇三羥基硬脂酸鹽，也是已知的CremophorRH由BASF意大利S.r.l提供；·聚乙二醇(20)失水山梨醇單油酸酯，也是已知的Tween由Sigma-Aldrich提供；以及·富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿，也是已知的EpikuronTM200，由Cargill提供。HPLC分析：所有第一眼看著是澄清溶液的制劑中都使用相同的方法。待分析的溶液進(jìn)行機(jī)械離心分離，隨后上層清液通過聚四氟乙烯(PTFE)過濾紙(孔徑0.22μm)分離，并且利用ColumnIntersilODS-34.6x250mm、以CH3CN/H2O70/30+0.1％的CF3COOH作為洗脫劑、流速是1ml/min并且使用UV/VIS檢測器(λ＝311nm)進(jìn)行HPLC分析。穩(wěn)定性分析：制劑分為4組；每個組分別放置3個月：于5℃和60％RH(相對濕度)下，于25℃和60％RH下，于30℃和60％RH下和于40℃和70％RH下。隨后，采用10ml試樣并且利用HPLC通過上述方法分析了合適試樣量。所檢測到的EPA、DHA和白藜蘆醇的含量的百分?jǐn)?shù)以重量的％表示。制劑1500mg聚乙二醇(20)失水山梨醇單油酸酯(Tween)加入到4.5gn-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌3小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。制劑2500mg聚乙二醇丙三醇三羥基硬脂酸鹽(CremophorRH)加入到4.5g的n-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌3小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。制劑3500mg丙三基和聚乙二醇酯加入到4.5g的n-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌3小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。制劑4500mg丙二醇單月桂酸酯(Lauroglycol90TM)加入到4.5g的n-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌3小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。制劑5500mg多庫酯鈉加入到4.5g的n-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌18小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。制劑6500mg富含卵磷脂的脫脂磷脂酰膽堿(EpikuronTM200)加入到4.5g的n-3PUFA，然后溶液于22℃、60％RH下、600rpm的速度機(jī)械攪拌18小時；觀察到乳白色溶液。取出2ml的試樣，加入50mg白藜蘆醇；獲得的混合物于22℃和600rpm的速度機(jī)械攪拌24小時。然后，溶液通過上述方法進(jìn)行HPLC分析。也測試這種制劑的穩(wěn)定性。首先測量EPA、DHA和白藜蘆醇的百分含量，然后溶液分為4個試樣，每個于不同溫度放置6個月。試樣隨后進(jìn)行HPLC分析。下述表格中報(bào)道了結(jié)果；于40℃、70％RH下6個月后組合物中至少保留了初次測量時85％的白藜蘆醇。表1溫度(℃)EPA回收率(％)DHA回收率(％)白藜蘆醇回收率(％)5999999259898973097969440959485為了更容易參照，所有之前制劑獲得結(jié)果在表2中概括，它們代表加入了乳化劑的歐米茄-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)中白藜蘆醇的最大溶解度。表2結(jié)果討論：本申請報(bào)道的試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示使用的溶劑系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了完全溶解大量白藜蘆醇，它本來在n-3PUFA中難以溶解。從表2中結(jié)果可見，僅PUFA中白藜蘆醇的溶解度(0.25mg/ml)增加了72倍，在含有EpikuronTM200的制劑中達(dá)到18mg/ml的最大值。制劑6顯示的穩(wěn)定性使得白藜蘆醇溶解在歐米茄-3脂肪酸中對輕易制備口服組合物、用作預(yù)防或治療由脂代謝異常和/或血小板凝集增加導(dǎo)致的心血管疾病，由自由基導(dǎo)致的損傷和/或病毒性疾病非常有利。包含白藜蘆醇的組合物和由歐米茄-3脂肪酸和EpikuronTM200構(gòu)成的溶劑系統(tǒng)也可容易地用來進(jìn)一步溶解和釋放其他有用的元素。進(jìn)一步地，制備本組合物的工藝簡單并且特別適合于工業(yè)應(yīng)用。當(dāng)前第1頁1 2 3