相關(guān)申請的交叉引用本申請要求申請日為2014年2月14日的美國臨時專利申請no.61/940,041的申請日權(quán)益，其公開內(nèi)容通過提述并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本文公開了用于預(yù)防和治療血吸蟲病的包含多不飽和脂肪酸和治療劑的組合物。本文還公開了用于預(yù)防和治療血吸蟲病的方法、賦予針對血吸蟲病的抗性的方法和預(yù)防血吸蟲病復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括施用多不飽和脂肪酸和治療劑。發(fā)明背景血吸蟲病(schistosomiasis)(也稱為裂體吸蟲病(bilharzias)、裂體吸蟲病(bilharziosis)、或腹足熱(snailfever))是一種嚴(yán)重的寄生蟲病，其由血吸蟲屬的吸蟲(fluke)的數(shù)個種引起。該疾病主要見于亞洲、非洲和南美洲，尤其是在有水的區(qū)域，所述水含有攜帶寄生蟲的腹足類動物。其是僅次于瘧疾的第二常見的寄生蟲病，并且主要影響兒童。血吸蟲病由血吸蟲屬(schistosoma)的扁形蟲(platyhelminthworm)引起，其是一種生活在人和動物的血流中的吸蟲。三個種(曼氏血吸蟲(schistosomamansoni)、埃及血吸蟲(schistosomahaematobium)和日本血吸蟲(schistosomajaponicum))占了絕大多數(shù)的感染。血吸蟲與血流方向反向遷移至它們的長期寄居處，其中曼氏血吸蟲(s.masoni)和日本血吸蟲(s.japonicum)遷移至下方深層靜脈叢(inferiormesoteric)而埃及血吸蟲(s.haematobium)遷移至外周膀胱靜脈叢。血吸蟲在導(dǎo)管(conduit)附近產(chǎn)卵，以便卵通過至外部環(huán)境從而完成生命周期。因此，每天有大量的卵從毛細血管排出至腸或膀胱的內(nèi)腔，由此，其可以通過分析糞便和尿樣來檢測。花生四烯酸(ara)，全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸(all-cis5,8,11,14-eicosatetreanoicacid)，是一種ω-6脂肪酸：20:4(ω-6)，其存在于身體的細胞的膜的磷脂質(zhì)中，并且推測其起殺傷雌雄曼氏血吸蟲和埃及血吸蟲幼蟲和成蟲的作用。吡喹酮(pzq)是目前僅有的用于治療血吸蟲病(尤其是曼氏血吸蟲)的藥物。然而，其在兒童中治療后的治療失敗率與高強度的感染一直是相關(guān)的，需要重復(fù)治療且加速了致使血吸蟲對該藥物產(chǎn)生抗性的威脅。此外，未顯示pzq賦予針對血吸蟲的抗性。因此，需要一種單獨或與pzq組合的組合物，其用于治療和/或預(yù)防血吸蟲病，及賦予針對血吸蟲病的抗性和/或預(yù)防血吸蟲病的復(fù)發(fā)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療血吸蟲病的組合物和方法。本發(fā)明還涉及賦予針對血吸蟲病的抗性和/或預(yù)防血吸蟲病的復(fù)發(fā)的方法。在優(yōu)選的實施方案中，組合物包含多不飽和脂肪酸(pufa)和治療劑。優(yōu)選地，所述組合物包含的pufa是ω-6脂肪酸。更優(yōu)選地，所述組合物包含的pufa是ω-6脂肪酸，其為全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也稱為花生四烯酸(ara)。在優(yōu)選的實施方案中，所述治療劑是2-(環(huán)己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氫-4h-吡嗪并[2,1-a]異喹啉-4-酮，也稱為吡喹酮(pzq)，或其衍生物。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法包括施用多不飽和脂肪酸(pufa)和治療劑。在一個實施方案中，所述pufa以一個劑量施用，而所述治療劑以第二劑量施用。在另一個實施方案中，所述pufa和治療劑以相同劑量施用。優(yōu)選地，所述pufa是ω-6脂肪酸。更優(yōu)選地，所述pufa是ω-6脂肪酸，其為全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也稱為花生四烯酸(ara)。在優(yōu)選的實施方案中，所述治療劑是2-(環(huán)己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氫-4h-吡嗪并[2,1-a]異喹啉-4-酮，也稱為吡喹酮(pzq)，或其衍生物。發(fā)明詳述本文公開了用于預(yù)防和/或治療血吸蟲病的組合物，其包含多不飽和脂肪酸和治療劑。本文還公開了用于預(yù)防和/或治療血吸蟲病的方法、賦予針對血吸蟲病的抗性的方法和預(yù)防血吸蟲病復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括以治療有效量施用多不飽和脂肪酸和治療劑。本發(fā)明的特征和優(yōu)點可通過閱讀下文的詳細說明而更容易地為本來普通技術(shù)人員所理解。應(yīng)當(dāng)了解，本發(fā)明出于清楚目的而在上下文中的分離的實施方案所描述的某些特征，也可以組合在一起從而獲得其亞組合。本文示例性地鑒定的實施方案意在說明而非限制。術(shù)語“約”意在涵蓋所述數(shù)字之上和之下的變化，所述變化能達到與所述數(shù)字基本相同的效果。脂肪酸基于碳鏈的長度和飽和度特征來分類。微生物油中存在的脂肪酸可具有4-28個碳原子且基于鏈中存在的碳原子數(shù)目而被稱為短鏈、中鏈、或長鏈脂肪酸。當(dāng)碳原子之間不存在雙鍵時則將該脂肪酸稱為飽和脂肪酸，當(dāng)存在雙鏈時則稱為不飽和脂肪酸。當(dāng)不飽和長鏈脂肪酸中僅存在一個雙鍵時，其是單不飽和的，當(dāng)存在多于一個雙鍵時，其是多不飽和的。多不飽和脂肪酸(pufa)基于其第一個雙鍵距脂肪酸的甲基末端的位置而加以分類；ω-3(n-3)脂肪酸含有的第一個雙鍵位于第3個碳處，而ω-6(n-6)脂肪酸含有的第一個雙鍵位于第6個碳處。例如，二十二碳六烯酸(dha)是一種ω-3長鏈多不飽和脂肪酸(lc-pufa)，其具有22個碳的鏈長及6個雙鍵，常表示為“22:6n-3”。在一個實施方案中，pufa選自ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸，或其混合物。在另一個實施方案中，pufa選自長鏈多不飽和脂肪酸(lc-pufa)。在更進一步的實施方案中，pufa選自二十二碳六烯酸(dha)、二十碳五烯酸(epa)、二十二碳五烯酸(dpa)、花生四烯酸(ara)、γ-亞麻酸(gla)、二高-γ-亞麻酸(dgla)、十八碳四烯酸(sda)，及其混合物。在另一個實施方案中，pufa選自dha、ara，及其混合物。在又一個的實施方案中，pufa為dha。在又一個的實施方案中，pufa為ara。lc-pufa是含有至少3個雙鍵且具有18個或更多個碳或20個或更多個碳的鏈長的脂肪酸。ω-6系列的lc-pufa包括但不限于二-高-γ亞油酸(c20:3n-6)、花生四烯酸(c20:4n-6)("ara")、二十二碳四烯酸或腎上腺酸(c22:4n-6)、和二十二碳五烯酸(c22:5n-6)("dpan-6")。ω-3系列的lc-pufa包括但不限于二十碳三烯酸(c20:3n-3)、二十碳四烯酸(c20:4n-3)、二十碳五烯酸(c20:5n-3)("epa")、二十二碳五烯酸(c22:5n-3)、和二十二碳六烯酸(c22:6n-3)。lc-pufa還包括大于22個碳及4個或更多個雙鍵的脂肪酸，包括但不限于c24:6(n-3)和c28:8(n-3)。pufa可以呈游離脂肪酸、鹽、脂肪酸酯(例如甲酯或乙酯)、單酰甘油(mag)、二酰甘油(dag)、三酰甘油(tag)和/或磷脂(pl)的形式。任何pufa來源均可用于本發(fā)明的組合物和方法中，包括，例如動物、植物和微生物來源。優(yōu)選的多不飽和脂肪酸(pufa)來源可以是適于在本發(fā)明中使用的任何pufa來源。動物來源的例子包括水生動物(例如魚、海洋哺乳動物、甲殼類、輪蟲類等等)。示例性的植物來源包括微藻、亞麻籽、油菜籽、谷物/玉米、月見草(primrose)和玻璃苣(borage)。微生物的例子包括微藻、原生生物、細菌和真菌(包括酵母)。微生物來源(如微藻)的使用能提供感官優(yōu)勢。根據(jù)本發(fā)明，用于本文所述組合物中的多不飽和脂肪酸呈多種形式，例如包括但不限于如下的形式：包含pufa的高度純化的藻類油、包含pufa的植物油、包含pufa的甘油三酯油、包含pufa的磷脂、包含pufa的蛋白質(zhì)與磷脂質(zhì)的組合、包含pufa的干燥的海洋微藻類、包含pufa的鞘脂類、pufa的酯類、游離脂肪酸、pufa與另一生物活性分子的綴合物，及它們的綴合物。在一個實施方案中，所述組合物包含多不飽和脂肪酸(pufa)及治療劑。優(yōu)選地，所述組合物包含的pufa是ω-6脂肪酸。更優(yōu)選地，所述組合物包含的pufa是ω-6脂肪酸，其為全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也稱為花生四烯酸(ara)。在一個實施方案中，所述組合物包含的治療劑是殺吸蟲劑。優(yōu)選地，所述組合物包含的治療劑是殺吸蟲劑，其為2-(環(huán)己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氫-4h-吡嗪并[2,1-a]異喹啉-4-酮，也稱為吡喹酮(pzq)，或其衍生物。在一些實施方案中，所述pufa以一個劑量施用，而所述治療化合物以第二劑量施用。在一些實施方案中，pufa以約5mg/kg體重/天、約7mg/kg體重/天、約10mg/kg體重/天、約12mg/kg體重/天、約15mg/kg體重/天、或約5至約15mg/kg體重/天、約7至約12mg/kg體重/天、約9至約11mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，pufa以約10mg/kg體重/天的量施用。在一些實施方案中，pufa以約10mg/kg體重/天至約600mg/kg體重/天、約20mg/kg體重/天至約550mg/kg體重/天、約40mg/kg體重/天至約500mg/kg體重/天、約50mg/kg體重/天至約450mg/kg體重/天、約60mg/kg體重/天至約400mg/kg體重/天、約70mg/kg體重/天至約350mg/kg體重/天、約80mg/kg體重/天至約300mg/kg體重/天、約90mg/kg體重/天至約250mg/kg體重/天、約100mg/kg體重/天至約200mg/kg體重/天、約110mg/kg體重/天至約150mg/kg體重/天、約10mg/kg體重/天約20mg/kg體重/天、約30mg/kg體重/天、約40mg/kg體重/天、約50mg/kg體重/天、約60mg/kg體重/天、約70mg/kg體重/天、約80mg/kg體重/天、約90mg/kg體重/天、約100mg/kg體重/天、約110mg/kg體重/天、約120mg/kg體重/天、約130mg/kg體重/天、約140mg/kg體重/天、約150mg/kg體重/天、約160mg/kg體重/天、約170mg/kg體重/天、約180mg/kg體重/天、約190mg/kg體重/天、約200mg/kg體重/天、約250mg/kg體重/天、約300mg/kg體重/天、約350mg/kg體重/天、約400mg/kg體重/天、約450mg/kg體重/天、約500mg/kg體重/天、約550mg/kg體重/天、約600mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，pufa以約150mg/kg體重/天的量施用。在一些實施方案中，pufa以單劑或多劑施用。在一些實施方案中，pufa在約30天、約20天、約15天、約10天、約5天、或約1至30天、約1至20天、約1至15天、約1至10天、約1至5天施用。在一些實施方案中治療劑以約20mg/kg體重/天的量、約25mg/kg體重/天的量、約30mg/kg體重/天的量、約35mg/kg體重/天的量、約40mg/kg體重/天的量、約45mg/kg體重/天的量、約50mg/kg體重/天的量、約55mg/kg體重/天的量、約60mg/kg體重/天的量、約20至約60mg/kg體重/天的量、約25至約55mg/kg體重/天的量、約30至約50mg/kg體重/天的量、約35至約45mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，治療劑以約40mg/kg體重/天的量施用。在一些實施方案中，所述血吸蟲病是曼氏血吸蟲、埃及血吸蟲和日本血吸蟲。在一些實施方案中，所述血吸蟲病是曼氏血吸蟲。在一個實施方案中，本文公開的方法包括施用多不飽和脂肪酸(pufa)和用于治療或預(yù)防血吸蟲病的治療劑。在另一個實施方案中，本文公開的方法包括施用多不飽和脂肪酸和治療劑以賦予針對血吸蟲病的抗性。在另一個實施方案中，本文公開的方法包括施用多不飽和脂肪酸和治療劑以預(yù)防血吸蟲病的復(fù)發(fā)。在一些實施方案中，pufa是ω-6脂肪酸。更優(yōu)選地，pufa是ω-6脂肪酸，其為全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也稱為花生四烯酸(ara)。在一些實施方案中，治療劑是殺吸蟲劑。優(yōu)選地，治療劑是殺吸蟲劑，其為2-(環(huán)己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氫-4h-吡嗪并[2,1-a]異喹啉-4-酮，也稱為吡喹酮(pzq)，或其衍生物。在一些實施方案中，pufa以一個劑量施用，而所述治療化合物以第二劑量施用。在一些實施方案中，pufa以約5mg/kg體重/天、約7mg/kg體重/天、約10mg/kg體重/天、約12mg/kg體重/天、約15mg/kg體重/天或約5至約15mg/kg體重/天、約7至約12mg/kg體重/天、約9至約11mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，pufa以約10mg/kg體重/天的量施用。在一些實施方案中，pufa以約10mg/kg體重/天至約600mg/kg體重/天、約20mg/kg體重/天至約550mg/kg體重/天、約40mg/kg體重/天至約500mg/kg體重/天、約50mg/kg體重/天至約450mg/kg體重/天、約60mg/kg體重/天至約400mg/kg體重/天、約70mg/kg體重/天至約350mg/kg體重/天、約80mg/kg體重/天至約300mg/kg體重/天、約90mg/kg體重/天至約250mg/kg體重/天、約100mg/kg體重/天至約200mg/kg體重/天、約110mg/kg體重/天至約150mg/kg體重/天、約10mg/kg體重/天約20mg/kg體重/天、約30mg/kg體重/天、約40mg/kg體重/天、約50mg/kg體重/天、約60mg/kg體重/天、約70mg/kg體重/天、約80mg/kg體重/天、約90mg/kg體重/天、約100mg/kg體重/天、約110mg/kg體重/天、約120mg/kg體重/天、約130mg/kg體重/天、約140mg/kg體重/天、約150mg/kg體重/天、約160mg/kg體重/天、約170mg/kg體重/天、約180mg/kg體重/天、約190mg/kg體重/天、約200mg/kg體重/天、約250mg/kg體重/天、約300mg/kg體重/天、約350mg/kg體重/天、約400mg/kg體重/天、約450mg/kg體重/天、約500mg/kg體重/天、約550mg/kg體重/天、約600mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，pufa以約150mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，pufa以單劑或多劑施用。在一些實施方案中，pufa在約30天、約20天、約15天、約10天、約5天、約1至30天、約1至20天、約1至15天、約1至10天、約1至5天施用。在一些實施方案中，治療劑以約20mg/kg體重/天的量、約25mg/kg體重/天的量、約30mg/kg體重/天的量、約35mg/kg體重/天的量、約40mg/kg體重/天的量、約45mg/kg體重/天的量、約50mg/kg體重/天的量、約55mg/kg體重/天的量、約60mg/kg體重/天的量、約20至約60mg/kg體重/天的量、約25至約55mg/kg體重/天的量、約30至約50mg/kg體重/天的量、約35至約45mg/kg體重/天的量施用。在一個實施方案中，治療劑以40mg/kg體重/天的量施用。在一些實施方案中，所述血吸蟲病是曼氏血吸蟲、埃及血吸蟲和日本血吸蟲。在一些實施方案中，所述血吸蟲病是曼氏血吸蟲。實施例實施例1受試者對埃及開羅北邊約100公里處的姆努菲亞(menoufiya)省中三個地區(qū)的村莊中約2000名學(xué)齡兒童進行了篩選。對每個兒童連續(xù)3天通過kato-katz方法檢查了糞便樣品的兩個顯微鏡載玻片，并記錄了每克卵計數(shù)(epg)。篩選出了66名兒童作為測試受試者，44名男性和22名女性，6-15周歲(均值±sd＝11.7±1.6)，其體重范圍為25-52kg(均值±sd＝37.8±8.6)，epg為24-384。用20名性別、年齡、和社會條件匹配的無寄生蟲兒童作為對照。治療將66名兒童隨機分入3組，其中在治療第一天對第一組的20名兒童給予單口服劑的吡喹酮(pzq)(40mg/kg體重)，并在隨后3周給予安慰劑(5劑/周)(“pzq-安慰劑治療”)。所述pzq為distocide(epico,el-asher-men-ramadancity,egypt)。所述安慰劑為1gvegcap，其含有谷物/玉米-大豆(dsmnutritionalproducts,columbia,maryland)。第二組的23名兒童在3周(5天/周)接受了15天的ara(10mg/kg體重/天)(“ara治療”)。所述ara為1gvegcap(dsm)，其含有約395mgara/膠囊。第三組的23名兒童在治療第一天被給予了吡喹酮(40mg/kg體重)然后接受了15劑的ara(10mg/kg/天；5劑/周)(“pzq+ara治療”)。研究設(shè)計在治療開始前2-3天和ara(或ara+pzq)治療結(jié)束后3天(其對應(yīng)于僅pzq治療后18天)從每個兒童獲得約10ml血液。在ara治療結(jié)束后1周(對應(yīng)于僅pzq治療后4周)和ara治療結(jié)束后6周(對應(yīng)于僅pzq治療后9周)，在連續(xù)3天從每個兒童獲得糞便樣品。在每個糞便樣品上評估epg。生化及血液學(xué)參數(shù)將用于生化分析的樣品置于光管(plaintube)并允許其凝結(jié)至少60分鐘，離心，并收集血清。將2ml血樣分裝于含有edta的管中并通過自動血液學(xué)分析儀(xt1800i,sysmexcorporation)進行分析。血漿白細胞介素-10(il-10)及干擾素-γ(ifn-γ)在以400g離心20分鐘后，從肝素化的血液恢復(fù)血漿，并儲存于-76℃，直至根據(jù)制造商的實驗方案通過捕獲酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)來測定其的il-10和ifn-γ水平(elisamaxtmset,biolegend,sandiego,california)。針對寄生蟲抗原的全血細胞因子響應(yīng)將肝素化的全血細胞以1:4稀釋于roswellparkmemorialinstitute(rpmi)-1640培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基補充有200u/ml青霉素、200μg/ml鏈霉素、50ng/ml兩性霉素和20μg/ml多粘菌素b(sigma)作為抗原的任何殘余脂多糖污染的抑制劑。在無菌圓底孔微量滴定板的重復(fù)的孔中將200μl稀釋的血液與50μl的培養(yǎng)基溫育，所述培養(yǎng)基含有0或40μg/ml的重組曼氏血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶(rsg3pdh)。于37℃/3％co2將全血培養(yǎng)物溫育72小時，然后于400g離心10分鐘。將無細胞上清液轉(zhuǎn)移至無菌平板的孔中，并儲存在-76℃直至根據(jù)制造商的實驗方案通過捕獲elisa來測定其釋放的il-4、il-17和ifn-γ水平(elisamaxtmset,biolegend,sandiego,california)。結(jié)果將具有<100的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有低度感染。將具有>100但<400的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有中度感染。將具有>400的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有高度感染。所有治療組在中度感染組中的％治愈率低于低度感染組。pzq-安慰劑中度和高度感染組的％治愈為67％，相比之下低度感染組為71％。ara中度和高度感染組的％治愈為50％，相比之下低度感染組為77％。pzq-ara中度和高度感染組的％治愈率為71％，相比之下低度感染組為94％。pzq-ara治療組相比于pzq-安慰劑治療組或ara治療組，對于低度感染組產(chǎn)生了較高的％治愈率(分別為94％、71％和77％)。pzq-ara的％治愈率相比于pzq-安慰劑治療組或ara治療組，對于中度和高度感染組產(chǎn)生了較高的％治愈率(分別為71％、67％和50％)。pzq-安慰劑治療的效力表1：pzq-安慰劑治療具有初始基線epg<100的受試者如表1中所示，pzq-安慰劑治療對具有低度感染的兒童產(chǎn)生了71％治愈率(10/14的兒童在9周后呈現(xiàn)0epg)。表2：pzq-安慰劑治療具有初始基線epg>100的受試者受試者編號基線epg第4周處epg第9周處epg221200102519216028120----303116800433312----05119200如表2所示，pzq-安慰劑對于具有中度和高度感染的兒童產(chǎn)生了67％治愈率(4/6兒童在9周后呈現(xiàn)0epg)。ara治療的效力表3：ara治療具有初始基線epg<100的受試者如表3所示，ara治療對于具有低度感染的兒童產(chǎn)生了77％治愈率(10/13兒童在第9周后呈現(xiàn)0epg)。表4：ara治療具有初始基線epg>100的受試者受試者編號基線epg第4周后epg第9周后epg2144964820192482823192602026168961522938424003831296044912749052286216108551928406212000如表4所示，ara治療組對具有中度和高度感染的兒童產(chǎn)生了50％治愈率(5/10)。pzq-ara治療的效力表5：pzq-ara治療具有初始基線epg<100的受試者如表5所示，pzq-ara治療對具有低度感染的兒童產(chǎn)生了94％治愈率(15/16兒童在第9周后呈現(xiàn)0epg)。表6：pzq-ara治療具有初始基線epg>100的受試者受試者編號基線epg第4周后epg第9周后epg1538424801819288024192002718001024030672004228801045120290如表6所示，pzq-ara治療對于具有中度和高度感染內(nèi)的兒童產(chǎn)生了71％治愈率(5/7兒童在第9周后呈現(xiàn)0epg)。實施例2受試者對來自elkafrsheikh的學(xué)齡兒童進行了類似于上文實施例1中的那些學(xué)齡兒童的篩選。治療將兒童隨機分入三組，其中第一組的兒童在治療第一天被給予口服劑的吡喹酮(40mg/kg體重)，并在隨后3周被給予安慰劑(5劑/周)(“pzq-安慰劑治療”)。所述pzq為distocide(epico,el-asher-men-ramadancity,egypt)。所述安慰劑為1gvegcap，其含有谷物/玉米-大豆(dsmnutritionalproducts,columbia,maryland)。第二組的23名兒童在3周(5天/周)接受了15天的ara(10mg/kg體重/天)(“ara治療”)。所述ara為1gvegcap(dsm)，其含有約395mgara/膠囊。第三組的23名兒童在治療第一天被給予了吡喹酮(40mg/kg體重)然后接受了15劑的ara(10mg/kg/天；5劑/周)(“pzq+ara治療”)。研究設(shè)計在治療開始前2-3天和ara(或ara+pzq)治療結(jié)束后3天(其對應(yīng)于僅pzq治療后18天)從每個兒童獲取約10ml血液。在ara治療結(jié)束后1周(對應(yīng)于僅pzq治療后4周)和ara治療結(jié)束后6周(對應(yīng)于僅pzq治療后9周)，在連續(xù)3天從每個兒童獲取糞便樣品。在每個糞便樣品上評估epg。生化及血液學(xué)參數(shù)將用于生化分析的樣品置于光管并允許其凝結(jié)至少60分鐘，離心，并收集血清。將2ml血樣分裝于含有edta的管中并通過自動血液學(xué)分析儀(xt1800i,sysmexcorporation)進行分析。血漿白細胞介素-10(il-10)及干擾素-γ(ifn-γ)在以400g離心20分鐘后，從肝素化的血液恢復(fù)血漿，并儲存于-76℃，直至根據(jù)制造商的實驗方案通過捕獲酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)來測定其的il-10和ifn-γ水平(elisamaxtmset,biolegend,sandiego,california)。針對寄生蟲抗原的全血細胞因子響應(yīng)將肝素化的全血細胞以1:4稀釋于roswellparkmemorialinstitute(rpmi)-1640培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基補充有200u/ml青霉素、200μg/ml鏈霉素、50ng/ml兩性霉素和20μg/ml多粘菌素b(sigma)作為抗原的任何殘余脂多糖污染的抑制劑。在無菌圓底孔微量滴定板的重復(fù)的孔中將200μl稀釋的血液與50μl的培養(yǎng)基溫育，所述培養(yǎng)基含有0或40μg/ml的重組曼氏血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶(rsg3pdh)。于37℃/3％co2將全血培養(yǎng)物溫育72小時，然后于400g離心10分鐘。將無細胞上清液轉(zhuǎn)移至無菌平板的孔中，并儲存在-76℃直至根據(jù)制造商的實驗方案通過捕獲elisa來測定其釋放的il-4、il-17和ifn-γ水平(elisamaxtmset,biolegend,sandiego,california)。結(jié)果將具有<100的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有低度感染。將具有>100但<400的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有中度感染。將具有>400的初始基線epg計數(shù)的受試者分類為具有高度感染。所有治療組在高度感染組中的％治愈率低于中度感染組或低度感染組。所有治療組在中度感染組中的％治愈率低于低度感染組。pzq-ara治療組的％治愈率相比于pzq-安慰劑治療組或ara治療組，對于低度感染組產(chǎn)生了較高的％治愈率(分別為74％、57％和50％)。參見表7。pzq-ara治療組的％治愈率相比于pzq-安慰劑治療組或ara治療組，對于中度感染組產(chǎn)生了較高的％治愈率(分別為73％、70％和49％)。參見表8。pzq-ara治療組的％治愈率相比于pzq-安慰劑治療組或ara治療組，對于高度感染組產(chǎn)生了較高的％治愈率(分別為84％、81％和65％)。參見表9。在所有治療組中顯示了降低的循環(huán)il-10和ifn-γ水平。單獨用ara或與pzq組合的治療在使兒童的免疫響應(yīng)改變?yōu)橼呄驕p少的il-10和ifn-γ產(chǎn)生方面是更有效的。這些免疫抑制性il-10和ifn-γ水平的顯著降低指示針對血吸蟲再感染的抗性。參見表10和11。表7：用pzq、ara或pzq+ara的治療的效果具有初始基線epg<100的受試者治療兒童數(shù)量基線均值epg治愈的％％epg降低*pzq3538.757(20/35)50ara4334.250(22/43)-2.6pzq+ara3941.374(29/39)52*％epg降低＝((均值基線epg–治療后6周的均值)/均值基線epg)*100表8：用pzq、ara或pzq+ara的治療的效果具有初始基線epg>100且<400的受試者治療兒童數(shù)量基線均值epg治愈的％％epg降低*pzq23226.143(10/23)70ara29195.628(4/19)49pzq+ara26215.873(19/26)73*％epg降低＝((均值基線epg–治療后6周的均值)/均值基線epg)*100表9：用pzq、ara或pzq+ara的治療的效果具有初始基線epg>400epg的受試者治療兒童數(shù)量基線均值epg治愈的％％epg降低*pzq26979.530(8/26)81ara19961.321(8/29)65pzq+ara22805.668(15/22)84*％epg降低＝((均值基線epg–治療后6周的均值)/均值基線epg)*100表10：用pzq、ara或pzq+ara對il-10水平的治療效果表11：用pzq、ara或pzq+ara對ifn-γ水平的治療效果當(dāng)前第1頁12