本申請要求2014年2月8日提交的美國臨時申請第61/937,472號、2014年3月27日提交的美國臨時申請第61/971,479號、2014年6月10日提交的美國臨時申請第62/010,259號和2014年11月9日提交的美國臨時申請第62/081,992號的權(quán)益，上述申請的內(nèi)容通過引用整體并入本文中。

發(fā)明領(lǐng)域

提供了使用靶向淀粉樣蛋白β的抗體治療罹患輕到中度阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s Disease)的患者的方法。

發(fā)明背景

阿爾茨海默氏病(AD)是癡呆的最常見病因，在美國影響估計450萬個體且在全世界影響2660萬個體(Hebert等人，Arch.Neurol.2003；60:1119-22；Brookmeyer等人，Alzheimers Dement.2007；3:186-91)。該疾病的病理特征在于大腦中細(xì)胞外β淀粉樣蛋白(“Aβ”)斑塊的累積和細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)。通過AD的神經(jīng)病學(xué)和神經(jīng)精神病學(xué)跡象和癥狀的臨床評價并排除癡呆的其它病因進(jìn)行診斷。AD通常通過簡單認(rèn)知篩選檢查(簡易智力狀態(tài)檢查(“MMSE”))分為輕度、中度和嚴(yán)重階段。抑制乙酰膽堿酯酶(“AChE”)活性或拮抗大腦中的N-甲基-D天冬氨酸鹽受體的批準(zhǔn)醫(yī)藥療法可以暫時改善一些患者中的AD癥狀，但不能改變所述疾病的進(jìn)展(Cummings,N.Engl.J.Med.2004；351:56-67)。

現(xiàn)已有文獻(xiàn)充分記錄早發(fā)和晚發(fā)家族性AD的遺傳因子。ApoE4等位基因與晚發(fā)家族性和散發(fā)性AD密切相關(guān)，其中在患有AD的患者中報告等位基因頻率為50％-65％，這大約是普通群體和其它神經(jīng)病癥中的三倍(Saunders等人，Neurology 1993；43:1467-72；Prekumar等人，Am.J.Pathol.1996；148:2083-95)。除AD以外，ApoE4等位基因還涉及其它淀粉樣蛋白形成病癥(包括腦淀粉樣血管病(“CAA“))(Prekumar等人，Am.J.Pathol.1996；148:2083-95)。因此，攜帶ApoE4等位基因的患者可以代表病因?qū)W上不同的AD患者的群體。

細(xì)胞外淀粉樣蛋白斑在大腦中的沉積是AD中的標(biāo)志性病理發(fā)現(xiàn)，首次由Alois Alzheimer在1906年報告。這些淀粉樣蛋白斑主要包含Aβ肽(Haass和Selkoe,Nature 2007；8:656-67)，它是由淀粉樣前體蛋白(“APP”)通過β-和γ-分泌酶活性的相繼裂解生成。Aβ，具體地說它的低聚形式，對神經(jīng)元具有毒性，且據(jù)信是AD的原因。降低大腦中Aβ含量的療法可以減輕認(rèn)知功能障礙，且阻止進(jìn)一步突觸喪失、軸突變性和神經(jīng)元細(xì)胞死亡。Aβ可以主動轉(zhuǎn)運(yùn)穿過血腦屏障(Deane等人，Stroke 2004；35(增刊I):2628-31)。在AD的鼠類模型中，針對Aβ的抗體的全身性遞送增加血漿中的Aβ含量，同時借助若干提出機(jī)制來降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的含量，包括大腦Aβ斑塊的溶解、經(jīng)調(diào)理Aβ的噬菌作用去除和最終由于循環(huán)抗體所致的Aβ平衡移位而使Aβ自大腦流出(Morgan,Neurodegener.Dis.2005；2:261-6)。

重大失敗記錄了用于治療AD的治療抗體的發(fā)展。貝平珠單抗(bapineuzumab)(一種特異性結(jié)合至Aβ的N末端部分的抗體)的大規(guī)模3期臨床試驗因施用藥物未能阻止所治療患者的認(rèn)知衰退而終止(Miles等人，Scientific Reports 2013；3:1-4Johnston&Johnson press，2012年8月6日發(fā)布，標(biāo)題為“Johnson&Johnson Announces Discontinuation of Phase 3Development of Bapineuzumab Intravenous(IV)in Mild-To-Moderate Alzheimer’s Disease”)。顯著地，貝平珠單抗似乎穩(wěn)定斑塊含量，且降低腦脊髓液中的磷酸化tau含量，這表明只有這些生物標(biāo)記物的改善未必能預(yù)測臨床效能(Miles等人，Scientific Reports 2013；3:1-4)。類似地，在蘇蘭珠單抗(solanezumab)(一種特異性針對單體Aβ的在肽的中間部分結(jié)合的抗體)的3期臨床試驗中，未滿足主要認(rèn)知和功能終點(Eli Lilly and Company press，2012年8月24日發(fā)布，“Eli Lilly and Company Aanounces Top-Line Results on Solanezumab Phase 3Clinical Trials in Patients with Alzheimer’s Disease”)。在研究用于AD的某些免疫療法期間，也發(fā)生了安全性問題；例如，在貝平珠單抗的2期臨床試驗中，在藥物治療的患者中，淀粉樣蛋白相關(guān)的成像異常(ARIA-E和ARIA-H)的發(fā)生率超過20％(Sperling等人，The Lancet 2012；11:241-249)。據(jù)估計，在9個年齡超過65歲的人中就有一個患有AD，患有AD的個體和其代表用于健康照護(hù)、長期照護(hù)和臨終關(guān)懷的每年總費(fèi)用在2013年超過$2000億，且估計2050年上升至$1.2萬億(患病個體和其代表)(Alzheimer’s Association 2013Alzheimer’s Disease Facts and Figures,Alzheimer’s and Dementia 9:2)。截至2013年，AD在美國是第六大死亡原因(同上)。目前批準(zhǔn)的療法僅治療AD的一些癥狀，而未能根本地消退。對于用于AD的疾病改善治療存在巨大的未滿足需求。

發(fā)明概要

克雷內(nèi)治單抗(Crenezumab，也稱為MABT5102A)是Aβ的完全人源化的IgG4單克隆抗體，針對其在體外結(jié)合Aβ的單體和低聚物形式的能力進(jìn)行篩選?？死變?nèi)治單抗結(jié)合Aβ1-40和Aβ1-42二者，抑制Aβ聚集，并且促進(jìn)Aβ解聚。因為克雷內(nèi)治單抗是人類IgG4骨架抗體，所以其相比于人類IgG1或IgG2具有降低的Fcγ受體(“FcλR”)結(jié)合親和力，這可以預(yù)測減少的免疫效應(yīng)反應(yīng)。這些性質(zhì)與全身遞送的克雷內(nèi)治單抗在AD的鼠科動物模型中降低AβCNS水平的能力相結(jié)合已經(jīng)表明這種抗Aβ治療方法可以提供臨床療效，同時降低毒性的風(fēng)險，并且可能潛在地能夠改變AD的疾病進(jìn)展并降低潛在有害的副作用(諸如腦血管性水腫或出血)的風(fēng)險，這些副作用之前已見于其它Aβ抗體療法的臨床試驗中。

本文所述的在AD患者中的二期臨床研究的結(jié)果證實：克雷內(nèi)治單抗的確減緩輕到中度AD的疾病進(jìn)展，在ApoE4陽性患者和罹患輕度AD的患者中具有甚至更強(qiáng)的效果，并且在患有最輕度AD的患者中顯示最大的治療益處。此外，在具有通常見于被診斷為AD的患者中的腦淀粉樣蛋白負(fù)荷的患者中觀察到所述效果。另外，結(jié)果表明：這些效果是在無不良事件如ARIA-E和ARIA-H的顯著發(fā)生率的情況下發(fā)生。因此，本申請?zhí)峁┯糜谥委熀捅O(jiān)測被診斷為輕到中度AD(特別是輕度AD)的患者和ApoE4陽性患者，以及具有通常見于被診斷為AD的患者中的腦淀粉樣蛋白累積的患者的方法。如本文所例示，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)：具有特異于淀粉樣蛋白β(Aβ)肽的中間區(qū)域的構(gòu)象表位(即，在氨基酸13-24內(nèi)，如克雷內(nèi)治單抗)的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β抗體能有效治療輕到中度AD，特別是ApoE4陽性患者和患有輕度形式的AD(諸如但不限于輕度AD)的患者，而不增加ARIA-E或ARIA-H的發(fā)生率。因此，本申請?zhí)峁┯糜谡{(diào)節(jié)AD的嚴(yán)重度的治療劑和使用它們的改良方法。

因此，本申請?zhí)峁┲委燁净糀D和其它淀粉樣變性的患者的方法，其包括施用結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(Aβ或Abeta)抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合Aβ的原纖維、低聚物和單體形式。在一些實施方案中，抗體是IgG4抗體。在特定實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含六個高變區(qū)(HVR)，其中HVR-H1是SEQ ID NO:2，HVR-H2是SEQ ID NO:3，HVR-H3是SEQ ID NO:4，HVR-L1是SEQ ID NO:6，HVR-L2是SEQ ID NO:7，且HVR-L3是SEQ ID NO:8。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈(包含重鏈可變區(qū))，和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈(包含輕鏈可變區(qū))。在一個具體實例中，所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

本文所提供的治療方法可以應(yīng)用于罹患AD或如本文進(jìn)一步所述的其它淀粉樣變性的患者。合適的患者包括罹患輕到中度AD的患者、具有18至26的MMSE評分的患者、罹患輕度AD的患者、具有20或以上(例如，20-30、20-26、24-30、21-26、22-26、22-28、23-26、24-26或25-26)的MMSE評分的患者、罹患早期AD的患者(包括具有由AD引起的輕度認(rèn)知障礙的患者和具有臨床前AD的患者)、淀粉樣蛋白陽性患者(或具有與見于被診斷為AD的患者中的腦淀粉樣蛋白負(fù)荷相一致的腦淀粉樣蛋白負(fù)荷的患者)以及罹患輕到中度或輕度AD的ApoE4陽性患者。

在一些方面，本文提供的方法是減少罹患早期、輕度或輕到中度AD的患者中由AD引起的衰退的方法。在一些實施方案中，衰退是下列中的一個或多個：臨床衰退、認(rèn)知衰退和功能衰退。在一些實施方案中，衰退是臨床衰退。在一些實施方案中，衰退是認(rèn)知能力的衰退或認(rèn)知衰退。在一些實施方案中，衰退包括功能能力的衰退或功能衰退。已經(jīng)開發(fā)出各種測試和量表來測量認(rèn)知能力(包括記憶)和/或功能。在各種實施方案中，使用一種或多種測試來測量臨床、功能或認(rèn)知衰退。認(rèn)知能力的標(biāo)準(zhǔn)測量是阿爾茨海默氏病評估量表認(rèn)知(ADAS-Cog)測試，例如12項ADAS-Cog或ADAS-Cog12。因此，在一些實施方案中，使用ADAS-Cog12測試來確定經(jīng)本發(fā)明抗體治療的患者中的認(rèn)知能力衰退(或認(rèn)知衰退)的減少或減緩。ADAS-Cog12評分的增加表明患者病狀的惡化。在一些實施方案中，通過臨床癡呆評定量表/得分總和(CDR-SOB)評分來確定經(jīng)本發(fā)明抗體治療的患者中的認(rèn)知衰退(或認(rèn)知能力的衰退)的減少或減緩。在一些實施方案中，使用工具性日常生活活動(iADL)量表來確定經(jīng)本發(fā)明抗體治療的患者中的功能衰退(或功能能力的衰退)的減少或減緩。在一些實施方案中，評估一種或多種類型的衰退并使用前述測試或量表中的一個或多個來測量衰退的減少或減緩。

本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段是以有效治療AD或如本文所述的其它淀粉樣變性的劑量來施用。合適的劑量描述于本文中并且可以介于約0.3mg/kg至100mg/kg的范圍內(nèi)。在一個示例性實施方案中，劑量是15mg/kg。在另一個示例性實施方案中，劑量是30mg/kg。在另一個示例性實施方案中，劑量是45mg/kg。在一些實施方案中，劑量是在500mg與1000mg之間，例如500mg、700mg、720mg、750mg、800mg、820mg、900mg，或在1000mg與2500mg之間，例如1050mg、1500mg或2100mg。在本文所提供的方法中，預(yù)期了各種劑量方案，包括其中在長期的時間段內(nèi)(例如幾個月至幾年)重復(fù)(例如每周或每月一次)施用所述抗體。

本公開的人源化單克隆抗Aβ抗體提供的另一個益處在于其不增加不良事件如ARIA-E和ARIA-H的發(fā)生率。如本文中所示，相對于安慰劑組，治療組中的這些不良事件沒有增加。因此，本公開進(jìn)一步提供治療罹患輕到中度AD或輕度AD的患者而不增加不良事件如ARIA-E和/或ARIA-H的發(fā)生率的方法。

本公開進(jìn)一步提供適合在本文所公開的治療方法中使用的藥物制劑。所述藥物制劑可以被配制成用于任何方便的施用途徑例如腸胃外或靜脈注射，并且除本公開的抗Aβ以外通常將包括適于所需施用模式的一種或多種可接受的載劑、賦形劑和/或稀釋劑。在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體可以配制來用于靜脈內(nèi)施用。在一些實施方案中，可以在精氨酸緩沖液(例如，精氨酸琥珀酸鹽緩沖液)中配制本發(fā)明的抗體。緩沖液可以包含一種或多種表面活性劑，例如聚山梨醇酯。在某些實施方案中，緩沖液濃度為50mM或更高。在一些實施方案中，pH在4.5和7.0之間，例如pH 5.5。本文描述了另外的實施方案。藥物制劑可以包裝在單位劑型中以便于使用。

用于治療AD或如本文所述的其它淀粉樣變性的抗Aβ抗體治療可以與其它療法(包括除克雷內(nèi)治單抗以外的一個或多個抗Aβ抗體)組合。其它療法的非限制性實例包括神經(jīng)藥物、皮質(zhì)類固醇、抗生素和抗病毒劑。除克雷內(nèi)治單抗以外的抗Aβ抗體的非限制性實例包括蘇蘭珠單抗、貝平珠單抗、阿達(dá)魯單抗(aducanumab)和格特魯單抗(gantenerumab)。

附圖簡述

圖1提供Aβ(1-42)(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列，其中氨基酸13至24加有下劃線。

圖2提供三個重鏈高變區(qū)(分別為HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)的氨基酸序列和三個輕鏈區(qū)(分別為HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3)的氨基酸序列。

圖3提供克雷內(nèi)治單抗的重鏈氨基酸序列(SEQ ID NO:5)，其包含跨越SEQ ID NO:5的氨基酸1至112的重鏈可變區(qū)；和輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO:9)，其包含跨越SEQ ID NO:9的氨基酸1至112的輕鏈可變區(qū)。SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9中的下劃線示出了對應(yīng)于SEQ ID NO:2-4的三個重鏈HVR的氨基酸序列和對應(yīng)于SEQ ID NO:6-8的三個輕鏈HVR的氨基酸序列。

圖4A-B提供了招募在實施例1中所述的臨床試驗中的患者的概要，列出了每個組(治療對安慰劑)中招募的患者的數(shù)量、ApoE4狀態(tài)(ApoE4陰性/ApoE4陽性)、AD的階段(輕度或中度)，以及篩選時的MMSE評分、針對AD癥狀的同步療法(conmed使用)的存在和類型。

圖5提供了描述于實施例1中的臨床試驗的示意圖，其示出了給藥時間表、用量和途徑。

圖6A-B提供了數(shù)據(jù)表，其示出了治療組和安慰劑組中相對于基線的第73周ADAS-Cog12評分的變化。圖6A提供了關(guān)于患有輕到中度AD、輕度AD、中度AD的患者以及ApoE4陽性和陰性患者的數(shù)據(jù)。圖6B根據(jù)MMSE評分提供關(guān)于患者的數(shù)據(jù)。

圖7提供了針對用克雷內(nèi)治單抗(深色實線)或安慰劑(淺色實線)治療的患有輕度AD且MMSE評分在20和26之間的患者的ADAS-Cog12評分的變化的圖表。

圖8提供了針對用克雷內(nèi)治單抗(深色實線)或安慰劑(淺色實線)治療的患有輕到中度AD且MMSE評分在18和26之間的患者的ADAS-Cog12評分的變化的圖表。

圖9提供了針對用克雷內(nèi)治單抗(深色實線)或安慰劑(淺色實線)治療的患有輕到中度AD的ApoE4陽性患者的ADAS-Cog12評分的變化的圖表。

圖10提供了用克雷內(nèi)治單抗(深色實線)或安慰劑(淺色實線)治療的所有ApoE4陽性患者和患有輕度AD的患者的ADAS-Cog12評分的變化的圖表。

圖11提供了針對用克雷內(nèi)治單抗或安慰劑治療的患有輕度AD且MMSE評分在22和26之間的患者的ADAS-Cog12評分的變化的圖表。

圖12A-B提供了數(shù)據(jù)表，其示出了治療組和安慰劑組中相對于基線的第73周CDR-SOB評分的變化。圖12A根據(jù)MMSE評分提供關(guān)于患者的CDR-SOB評分的變化的數(shù)據(jù)。圖12B提供關(guān)于MMSE評分在18-26、20-26和22-26的范圍內(nèi)的患者的CDR-SOB評分以及CDR判斷和問題解決評分和CDR記憶評分的數(shù)據(jù)。

圖13提供了針對用克雷內(nèi)治單抗或指定安慰劑治療的患有輕度AD且MMSE評分為25或26的患者的CDR-SOB評分的變化的圖表。

圖14A-B提供了招募在實施例2中所述的臨床試驗中的患者在基線處和治療后的概要，包括不良事件數(shù)據(jù)(A)和顯示何時在臨床試驗中進(jìn)行PET掃描、MRI掃描和CSF抽樣的時間軸(B)。

圖15A-B提供了顯示接受安慰劑(虛線)或克雷內(nèi)治單抗(實線)的患者中的淀粉樣蛋白水平的圖表，如在接受安慰劑或克雷內(nèi)治單抗的患者中通過PET分析進(jìn)行的florbetapir成像(A)和CSF Aβ水平(B)所測定。

具體實施方式

除非另有規(guī)定，否則本文所使用的技術(shù)和科技術(shù)語具有如本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常所理解的相同含義。Singleton等人，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology第2版，J.Wiley&Sons(New York,N.Y.1994)和March,Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms and Structure第4版，John Wiley&Sons(New York,N.Y.1992)向本領(lǐng)域技術(shù)人員提供關(guān)于在本申請中使用的許多術(shù)語的一般指導(dǎo)。

某些定義和縮寫

為了解釋本說明書的目的，以下定義將適用，并且在任何適當(dāng)?shù)臅r候，以單數(shù)形式使用的術(shù)語還將包括復(fù)數(shù)，且反之亦然。如果下文闡述的任何定義與通過引用并入本文的任何文件有沖突，則以下文闡述的定義為準(zhǔn)。

如在本說明書和隨附權(quán)利要求書中所使用，單數(shù)形式“一”、“一個”和“該”包括復(fù)數(shù)的指示對象，除非上下文另有明確說明。因此，例如，提及“一種蛋白質(zhì)”或一種“抗體”分別包括多種蛋白質(zhì)或抗體；提及“一個細(xì)胞”包括細(xì)胞的混合物等等。

在本說明書和所附權(quán)利要求書中提供的范圍包括兩個端點和端點之間的所有點。因此，例如，2.0到3.0的范圍包括2.0、3.0和2.0與3.0之間的所有點。

如本文所使用，短語“大體上類似的”或“大體上相同的”表示兩個數(shù)值之間具有足夠高的相似程度(通常一個與本發(fā)明的抗體相關(guān)，且另一個與參照/比較抗體相關(guān))，從而使得本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為這兩個值之間的差異在由所述值(例如，Kd值)衡量的生物特性的情況下很少有或沒有生物學(xué)和/或統(tǒng)計顯著性。所述兩個值之間的差異作為參照/比較抗體的值的函數(shù)小于約50％、小于約40％、小于約30％、小于約20％、小于約10％。

如本文中所使用，術(shù)語“樣品”或“測試樣品”是指從目標(biāo)受試者獲得或來源于目標(biāo)受試者的組合物，其含有將要例如基于物理、生化、化學(xué)和/或生理特性來表征和/或鑒別的細(xì)胞和/或其它分子實體。在一個實施方案中，該定義包括血液和生物起源的其它液體樣品以及組織樣品諸如活檢樣本或組織培養(yǎng)物或由其衍生的細(xì)胞。組織樣品的來源可以是來自新鮮、冷凍和/或保存的器官或組織樣品或活組織切片或抽吸物的實體組織；血液或任何血液成分；體液；以及來自受試者的妊娠或發(fā)育中的任何時間的細(xì)胞或血漿。如本文所使用，術(shù)語“生物樣品”包括但不限于血液、血清、血漿、痰、組織活檢物(例如，肺樣品)和鼻腔樣品，包括鼻拭物或鼻息肉。

術(shù)語“樣品”、“生物樣品”或“測試樣品”包括已在其獲得之后以任何方式被操縱的生物樣品，所述操縱是諸如通過用試劑處理、增溶或富集某些組分如蛋白質(zhì)或多核苷酸或嵌入用于切片目的的半固體或固體基質(zhì)中。為了本文中的目的，組織樣品的“切片”意指組織樣品的單個部分或一塊，例如組織薄切片或從組織樣品切除的細(xì)胞。樣品包括但不限于全血、血液源性細(xì)胞、血清、血漿、淋巴液、滑液、細(xì)胞提取物和其組合。在一個實施方案中，樣品為臨床樣品。在另一個實施方案中，樣品被用于診斷分析。

在一個實施方案中，樣品是從經(jīng)過抗Aβ抗體治療之前的受試者或患者獲得。在另一個實施方案中，樣品是從經(jīng)過抗Aβ抗體的至少一種治療后的受試者或患者獲得。

如本文中所使用，“參照樣品”是指用于比較目的的任何樣品、標(biāo)準(zhǔn)或水平。在一個實施方案中，參照樣品是從相同受試者或患者的身體的健康和/或未患病部分(例如，組織或細(xì)胞)獲得。在另一個實施方案中，參照樣品是從相同受試者或患者的身體的未經(jīng)處理的組織或細(xì)胞獲得。在又一個實施方案中，參照樣品是從非受試者或患者的個體的身體的健康和/或未患病部分(例如，組織或細(xì)胞)獲得。在甚至另一個實施方案中，參照樣品是從非受試者或患者的個體的身體的未經(jīng)處理的組織或細(xì)胞部分獲得。

在某些實施方案中，參照樣品是在不同于獲得測試樣品時的一個或多個時間點從相同的受試者或患者獲得的單個樣品或合并的多個樣品。例如，參照樣品是在早于獲得測試樣品時的時間點從相同的受試者或患者獲得。在某些實施方案中，參照樣品包括如在術(shù)語“樣品”下所定義的從一個或多個非受試者或患者的個體獲得的所有類型的生物樣品。在某些實施方案中，參照樣品是從患有淀粉樣變性(例如，阿爾茨海默氏病)的一個或多個非受試者或患者的個體獲得。

在某些實施方案中，參照樣品是來自一個或多個非受試者或患者的健康個體的多個樣品的組合。在某些實施方案中，參照樣品是來自患有疾病或病癥(例如，淀粉樣變性如(例如)阿爾茨海默氏病)的一個或多個非受試者或患者的個體的合并的多個樣品。在某些實施方案中，參照樣品是來自正常組織的匯集RNA樣品或來自一個或多個非受試者或患者的個體的匯集血漿或血清樣品。

術(shù)語“小分子”是指分子量在50道爾頓至2500道爾頓之間的有機(jī)分子。

術(shù)語“抗體”和“免疫球蛋白”(“Ig”)在廣義上可互換使用，且包括但不限于單克隆抗體(例如，全長或完整單克隆抗體)、多克隆抗體、多價抗體、具有多表位特異性的抗體、單鏈抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體、三特異性抗體、四特異性抗體)和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物活性即可。此類抗體可以是嵌合的、人源化的、人的、合成的和/或親和力成熟的。本文更詳細(xì)地描述了此類抗體和生成它們的方法。

“抗體片段”只包含完整抗體的一部分，其中所述部分優(yōu)選保留當(dāng)該部分存在于完整抗體中時通常與其相關(guān)的功能中的至少一種且通常為大多數(shù)或全部。在一個實施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點且因此保留結(jié)合抗原的能力。在另一個實施方案中，抗體片段(例如包含F(xiàn)c區(qū)的抗體片段)保留當(dāng)該Fc區(qū)存在于完整抗體中時通常與其相關(guān)的生物功能中的至少一種，諸如FcRn結(jié)合、抗體半衰期調(diào)節(jié)、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在一個實施方案中，抗體片段是具有大體上類似于完整抗體的體內(nèi)半衰期的單價抗體。例如，這樣的抗體片段可以包含連接至能夠賦予該片段體內(nèi)穩(wěn)定性的Fc序列的抗原結(jié)合臂?？贵w片段的實例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab')2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；和由抗體片段形成的多特異性抗體。

除非另外說明，否則本文所使用的術(shù)語“標(biāo)靶”是指來自任何脊椎動物來源的任何天然分子，脊椎動物來源包括哺乳動物，例如靈長類動物(例如，人類)和嚙齒動物(例如，小鼠和大鼠)。該術(shù)語包括“全長”未加工的標(biāo)靶以及通過在細(xì)胞中處理所得到的任何形式的標(biāo)靶。該術(shù)語還包括標(biāo)靶的天然存在的變體，例如剪接變體或等位基因變體。

在本文中可互換使用的術(shù)語“淀粉樣蛋白β”、“β-淀粉樣蛋白”、“Abeta”、“淀粉樣蛋白β”和“Aβ”是指在淀粉樣前體蛋白(“APP”)被β-分泌酶1(“BACE1”)裂解時產(chǎn)生的APP的片段，以及其修飾物、片段和任何功能等效物，包括但不限于Aβ1-40和Aβ1-42。已知Αβ以單體形式存在，也締合形成低聚物和原纖維結(jié)構(gòu)，其可以作為淀粉樣蛋白斑的組成成員被發(fā)現(xiàn)。此類Αβ肽的結(jié)構(gòu)和序列是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，并且產(chǎn)生所述肽或從腦和其它組織中提取它們的方法描述于例如Glenner和Wong，Biochem Biophys Res.Comm.129:885-890(1984)。此外，Aβ肽還可以以各種形式購得。人類Aβ1-42的示例性氨基酸序列為DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAED VGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQ ID NO:1)。

術(shù)語“抗標(biāo)靶抗體”和“結(jié)合標(biāo)靶的抗體”是指這樣的抗體，其能夠以足夠的親和力結(jié)合標(biāo)靶，從而使得該抗體可以作為診斷劑和/或治療劑用于靶向標(biāo)靶。在一個實施方案中，抗標(biāo)靶抗體與無關(guān)的非標(biāo)靶蛋白質(zhì)的結(jié)合程度小于該抗體與標(biāo)靶的結(jié)合的約10％，如例如通過放射免疫分析(RIA)或biacore分析所測量。在某些實施方案中，結(jié)合標(biāo)靶的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10^-8M或更小，例如10^-8M至10^-13M，例如10^-9M至10^-13M)的解離常數(shù)(Kd)。在某些實施方案中，抗標(biāo)靶抗體與標(biāo)靶的表位結(jié)合，該表位在不同物種之間是保守的。

“抗Αβ免疫球蛋白”、“抗Aβ抗體”和“結(jié)合Αβ的抗體”在本文中可互換使用，并且是指與人類Αβ特異性結(jié)合的抗體。抗Aβ抗體的非限制性實例是克雷內(nèi)治單抗。抗Aβ抗體的其它非限制性實例為蘇蘭珠單抗、貝平珠單抗、阿達(dá)魯單抗和格特魯單抗。

術(shù)語“克雷內(nèi)治單抗”和“MABT5102A”在本文中可互換使用，并且是指結(jié)合Aβ的單體、低聚物和原纖維形式的特異性抗Aβ抗體，其與CAS登記號1095207相關(guān)聯(lián)。在一個實施方案中，所述抗體包含圖2中列出的HVR區(qū)序列。在另一個這樣的實施方案中，所述抗體包含：(1)含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1；(2)含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2序列；(3)含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3序列；(4)含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L1序列；(5)含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L2序列；和(6)含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的HVR-L3序列。在另一個實施方案中，特異性抗Aβ抗體包含具有圖3中列出的氨基酸序列的VH和VL結(jié)構(gòu)域。在另一個這樣的實施方案中，所述特異性抗Aβ抗體包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH結(jié)構(gòu)域和含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的VL結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，抗體是IgG4抗體。在另一個這樣的實施方案中，IgG4抗體包含在其恒定結(jié)構(gòu)域中的突變，使得絲氨酸228被脯氨酸替代。

如本文中所使用，術(shù)語“淀粉樣變性”是指由淀粉樣蛋白或淀粉樣蛋白樣蛋白引起或與其相關(guān)的一組疾病和病癥，并且包括但不限于由單體、原纖維或聚合物狀態(tài)的淀粉樣蛋白樣蛋白或所述三種的任意組合(包括淀粉樣蛋白斑)的存在或活性引起的疾病和病癥。此類疾病包括但不限于繼發(fā)性淀粉樣變性和年齡相關(guān)性淀粉樣變性，諸如包括但不限于下述的疾病：神經(jīng)系統(tǒng)病癥如阿爾茨海默氏病(“AD”)、以先天性記憶能力喪失為特征的疾病或病狀如(例如)輕度認(rèn)知障礙(MCI)、路易體癡呆癥(Lewy body dementia)、唐氏綜合癥(Down's syndrome)、遺傳性腦出血伴淀粉樣變性(Dutch型)、關(guān)島帕金森病-癡呆復(fù)合征(Guam Parkinson-Demential complex)和其它基于淀粉樣蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病，諸如進(jìn)行性核上麻痹、多發(fā)性硬化、克雅病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森病(Parkinson's disease)、HIV相關(guān)性癡呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、包含體肌炎(IBM)、成年發(fā)作型糖尿病、內(nèi)分泌腫瘤和老年心臟淀粉樣變性，以及多種眼部疾病，包括黃斑變性、玻璃疣相關(guān)性視神經(jīng)病變、青光眼和由β-淀粉樣蛋白沉積引起的白內(nèi)障。

青光眼為涉及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGC)損失的一組視神經(jīng)疾病，它們是視神經(jīng)病變的特征模式。RGC是將視覺信號從眼睛傳輸至腦部的神經(jīng)細(xì)胞。半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-8是細(xì)胞凋亡過程中的兩種主要的酶，它們在導(dǎo)致RGC凋亡的過程中被激活。半胱天冬酶-3使淀粉樣前體蛋白(APP)裂解產(chǎn)生神經(jīng)毒性片段，包括Aβ。沒有APP的保護(hù)作用，Aβ在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層中累積，導(dǎo)致RGC的死亡和不可逆的視力損失。

青光眼通常(但不總是)伴有眼壓增高，這可能是由于液體循環(huán)或其引流的阻塞而導(dǎo)致的。盡管眼內(nèi)壓升高是發(fā)展為青光眼的重要風(fēng)險因素，但是無法限定導(dǎo)致青光眼的決定性眼內(nèi)壓閾值。損害還可能由于對重要視神經(jīng)纖維的不良血液供給、神經(jīng)結(jié)構(gòu)的脆弱和/或神經(jīng)纖維自身的健康問題而引起。未治療的青光眼造成視神經(jīng)的永久損害和隨后的視野損失，這可能發(fā)展為失明。

不同類型的青光眼可以分類為開角型青光眼(如果病狀是慢性的)或閉角型青光眼(如果急性青光眼突然發(fā)生)。青光眼通常影響兩只眼睛，但是疾病在一只眼睛中較在另一只眼睛中的進(jìn)展可能更迅速。

慢性開角型青光眼(COAG)也稱為原發(fā)性開角型青光眼(POAG)，它是最常見類型的青光眼。COAG是由小梁網(wǎng)中的微小阻塞而引起，它減少液體外流到輸淋氏管(Schlemm's canal)中的引流并提高眼內(nèi)壓(IOP)。POAG通常影響兩只眼睛，并且與年齡以及陽性家族史密切相關(guān)。其發(fā)生率在老年人群中增加，因為眼部引流機(jī)制可能隨著年齡增加而逐漸阻塞。受慢性開角型青光眼影響的受試者中眼內(nèi)壓增加不伴發(fā)任何癥狀，直到感覺到中樞視覺區(qū)域的損失。

急性閉角青光眼(AACG)或閉角型青光眼是相對罕見類型的青光眼，其特征在于眼內(nèi)壓突然增加至35至80mmHg，導(dǎo)致嚴(yán)重疼痛和不可逆的視力損失。壓力的突然增加是由于過濾角的閉合和引流管的阻塞而引起。具有窄角的個體具有增加的角突然閉合的風(fēng)險。AACG通常在一只眼睛中發(fā)生，但是風(fēng)險存在于兩只眼中。年齡、白內(nèi)障和假性剝脫綜合癥也是風(fēng)險因素，因為它們與晶狀體的增大以及角的擠塞或狹窄有關(guān)。青光眼的突然發(fā)作可以與嚴(yán)重的眼痛和頭痛、眼部發(fā)炎、惡心、嘔吐以及視力模糊相關(guān)。

混合或合并機(jī)制青光眼為開角型和閉角型青光眼的混合體或組合體。它影響急性ACG患者(在激光虹膜切開術(shù)后角開放，但是繼續(xù)需要控制IOP的藥物治療)以及POAG患者或假性剝脫性青光眼患者，后者逐漸發(fā)展為角狹窄。

正常眼壓性青光眼(NTG)也稱為低眼壓性青光眼(LTG)，其特征在于漸進(jìn)性視神經(jīng)損害和類似于在其它類型青光眼中所見的周邊視力喪失；然而，眼內(nèi)壓在正常范圍內(nèi)，或者甚至低于正常范圍。

先天性(嬰兒期)青光眼是相對罕見的遺傳類型的開角型青光眼。引流區(qū)域的發(fā)育不足導(dǎo)致眼壓增加，這會導(dǎo)致由于視神經(jīng)損害而引起的視力喪失和眼睛變大。早期診斷和治療對于受疾病影響的嬰兒和兒童的視力保護(hù)是至關(guān)重要的。

繼發(fā)性青光眼可能是由于眼損傷、眼虹膜炎癥(虹膜炎)、糖尿病、白內(nèi)障或在類固醇敏感性個體中使用類固醇而引起。繼發(fā)性青光眼還可能與視網(wǎng)膜脫落或視網(wǎng)膜靜脈阻塞或堵塞有關(guān)。

色素性青光眼的特征在于色素顆粒從虹膜脫離。所述顆粒導(dǎo)致眼睛的引流系統(tǒng)的阻塞，使得眼內(nèi)壓升高并損害視神經(jīng)。剝脫性青光眼(假性剝脫綜合癥)的特征在于薄片狀物在前囊上和眼角中的沉積。薄片狀物的累積堵塞引流系統(tǒng)并使得眼壓升高。

青光眼的診斷可以使用各種測試進(jìn)行。眼壓測量法通過測定眼表面的緊張性或硬度來確定眼內(nèi)的壓力。多種類型的眼壓計可以用于該測試，最常見的是壓平眼壓計。角膜測厚法測定角膜的厚度，其進(jìn)而衡量眼內(nèi)壓。前房角鏡檢查法允許檢查過濾角和眼睛的引流區(qū)域。前房角鏡檢查法還可以確定異常血管是否可能阻斷水性流體流出眼睛。眼膜曲率鏡法允許檢查視神經(jīng)，并且可以檢測神經(jīng)纖維層下降或視盤改變或該結(jié)構(gòu)的壓痕(杯狀凹陷)，這可能是由于眼內(nèi)壓升高或軸突掉出而導(dǎo)致。前房角鏡檢查法還可以用于評估由于血流不良或眼內(nèi)壓升高而導(dǎo)致的神經(jīng)損害。視野測試主觀地繪制視野圖，它可以檢測青光眼對視神經(jīng)的損害的征象。這是由視野損失的特定模式來代表。光學(xué)相干斷層掃描(神經(jīng)纖維層損失的客觀測量)是通過經(jīng)由光透射通過損害的軸突組織的差異觀察視神經(jīng)纖維層的厚度(在青光眼中有改變)來進(jìn)行。

作為參考抗體的“結(jié)合相同表位的抗體”是指在競爭分析中阻斷參考抗體與其抗原的結(jié)合達(dá)50％或更多的抗體，且相反地，該參考抗體在競爭分析中阻斷抗體與其抗原的結(jié)合達(dá)50％或更多。本文提供了示例性競爭分析。

術(shù)語“治療劑”是指用于治療疾病的任何藥劑，包括但不限于治療疾病的癥狀的藥劑。

如本文所使用，“治療”(和其語法變型，treatment/treat/treating)是指試圖改變所治療的個體中的自然過程的臨床干預(yù)，并且可以在臨床病理學(xué)的過程中進(jìn)行。期望的治療效果包括但不限于減輕或改善一種或多種癥狀、減少或延遲疾病的任何直接或間接病理結(jié)果的出現(xiàn)或惡化、降低疾病進(jìn)展的速率以及改善或緩和疾病狀態(tài)。在一些實施方案中，抗體被用于延緩疾病的發(fā)展或減緩疾病的進(jìn)展。

如本文所使用，術(shù)語“治療出現(xiàn)的”是指在施用第一劑量的治療劑后發(fā)生的事件。例如，“治療出現(xiàn)的不良事件”是在臨床研究中的第一劑量的治療之時或之后確定的事件。

“治療方案”是指劑量、施用頻率或治療持續(xù)時間與添加或不添加第二藥物的組合。

“有效治療方案”是指將對接受治療的患者提供有益反應(yīng)的治療方案。

“改變治療”是指改變治療方案，包括改變劑量、施用頻率或治療持續(xù)時間，和/或添加第二藥物。

藥劑的“有效量”或“有效劑量”是指在必要的時間段內(nèi)能有效實現(xiàn)所需結(jié)果的量或劑量。例如，“治療有效量”是在必要的時間段內(nèi)能有效治療所指示的疾病、病狀、臨床病理或癥狀(即，更改AD的進(jìn)程和/或減輕和/或預(yù)防AD的一種或多種癥狀)的量。

“親和力”或“結(jié)合親和力”是指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間的非共價相互作用總和的強(qiáng)度。除非另外指示，否則如本文所使用，“結(jié)合親和力”是指反映結(jié)合對的成員(例如抗體和抗原結(jié)合臂)之間的1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對其配偶體Y的親和力通?？梢杂山怆x常數(shù)(Kd)表示。親和力可以通過本領(lǐng)域中已知的普通方法來測量，包括本文中描述的那些方法，其中任何一種都可以用于本發(fā)明的目的。關(guān)于測量結(jié)合親和力的具體的說明性和示例性實施方案描述于本文中。

“親和力成熟的”抗體是指在一個或多個高變區(qū)(HVR)中具有一個或多個改變的抗體，與不具有這些改變的親本抗體相比，這些改變改善抗體對抗原的親和力。

如本文中所使用，術(shù)語“患者”是指需要進(jìn)行治療的任何單個受試者。在某些實施方案中，本文中的患者是人類。

本文中的“受試者”通常是人類。在某些實施方案中，受試者是非人類哺乳動物。示例性的非人類哺乳動物包括實驗室、家養(yǎng)、寵物、運(yùn)動和家畜動物，例如小鼠、貓、狗、馬和牛。通常，受試者適于接受治療，例如，展現(xiàn)疾病的一種或多種標(biāo)記。通常，這樣的受試者或患者適于接受針對淀粉樣變性例如AD的治療。在一個實施方案中，這樣的合格受試者或患者是正在經(jīng)歷或已經(jīng)歷AD的一種或多種征象、癥狀或其它指標(biāo)或已被診斷為患有AD(無論是例如初診、先前診斷或有發(fā)展為AD的風(fēng)險)的受試者或患者。AD的診斷可以基于臨床病史、臨床檢查和確立的成像模式來進(jìn)行。本文中的“患者”或“受試者”包括適于接受治療的任何單個人類受試者，其正在經(jīng)歷或已經(jīng)歷AD的一種或多種征象、癥狀或其它指標(biāo)。意欲被包括來作為受試者的是參與臨床研究試驗的任何受試者，或參與流行病學(xué)研究的受試者，或曾經(jīng)被用作對照的受試者。受試者可能早先已經(jīng)用抗Aβ抗體或其抗原結(jié)合片段或另一種藥物治療過，或沒有經(jīng)過這樣的治療。受試者在本文中的治療開始時可以未經(jīng)過額外藥物的治療，即，受試者可能早先沒有用例如除抗Aβ以外的療法在“基線”處(即，在本文的治療方法中施用第一劑量的抗Aβ之前的設(shè)定時間點，諸如在治療開始前篩選受試者的當(dāng)天)進(jìn)行治療。此類“未經(jīng)過治療的”受試者通常被認(rèn)為是使用此類額外藥物進(jìn)行治療的候選者。

如本文所使用，受試者的“壽命”是指受試者在開始治療后的生命的剩余部分。

如本文所使用，術(shù)語“單克隆抗體”是指從大體上同質(zhì)性抗體的群體(即，除了可以少量存在的可能的天然存在的突變外，構(gòu)成該群體的個別抗體是相同的)獲得的抗體。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原。此外，與通常包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相反，每個單克隆抗體是針對抗原上的單一決定簇。

單克隆抗體在本文中具體包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而所述鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源；以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物活性(美國專利號4,816,567；和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。

抗體的“類別”是指其重鏈所具有的恒定結(jié)構(gòu)域或恒定區(qū)的類型。有五種主要的抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且這些中的若干個可以被進(jìn)一步分成亞類(或同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應(yīng)于不同免疫球蛋白類別的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別被稱為、、、和。

非人類(例如鼠科動物)抗體的“人源化”形式是包含來源于非人類免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。對于主要部分，人源化抗體是人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中該受體的高變區(qū)的殘基被具有所需特異性、親和力和能力的非人類物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)的高變區(qū)的殘基替換。在一些情形中，人類免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基被相應(yīng)的非人類殘基替換。此外，人源化抗體可以包含在受體抗體或在供體抗體中不存在的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體性能。通常，人源化抗體將包含大體上所有至少一個和通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或大體上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人類免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或大體上所有FR是人類免疫球蛋白lo序列的FR。人源化抗體任選地還將包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)(通常是人類免疫球蛋白的恒定區(qū))的至少一部分。更多細(xì)節(jié)參見Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。還參見以下綜述文章和其中引用的參考文獻(xiàn)：Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。

“人類抗體”是包含與由人類或人類細(xì)胞生成的抗體相對應(yīng)的氨基酸序列和/或已衍生自利用人類抗體全集或其它人類抗體編碼序列的非人類來源的抗體，所述人類抗體是例如使用如本文所公開的任何制備人類抗體的技術(shù)而制得。此類技術(shù)包括但不限于：篩選人源性組合文庫，諸如噬菌體展示文庫(參見例如Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)和Hoogenboom等人，Nucl.Acids Res.,19:4133-4137(1991))；使用用于生成人類單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人雜交骨髓瘤細(xì)胞系(參見例如，Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第55-93頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991))；以及在能夠在不產(chǎn)生內(nèi)源性免疫球蛋白的情況下產(chǎn)生人類抗體的完整全集的轉(zhuǎn)基因動物(例如小鼠)中生成單克隆抗體(參見例如，Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,90:2551(1993)；Jakobovits等人，Nature,362:255(1993)；Bruggermann等人，Year in Immunol.,7:33(1993))。人類抗體的這種定義明確排除含有來自非人類動物的抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。

“分離的”抗體是已經(jīng)從其天然環(huán)境的組分中鑒別和分離和/或回收的抗體。其天然環(huán)境的污染物組分是將干擾抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，并且可以包括酶、激素和其它蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在一些實施方案中，抗體被純化至大于95％或99％的純度，如通過例如電泳法(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細(xì)管電泳)或色譜法(例如離子交換或逆相HPLC)所測定。關(guān)于抗體純度的評估方法的綜述，參見例如Flatman等人，J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。

術(shù)語“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域”是指抗體重鏈或輕鏈的涉及抗體與抗原的結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(分別為VH和VL)通常具有類似的結(jié)構(gòu)，其中每個結(jié)構(gòu)域包含四個保守框架區(qū)(FR)和三個高變區(qū)(HVR)。(參見例如，Kindt等人Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.,第91頁(2007)。)單個VH或VL結(jié)構(gòu)域可以足以產(chǎn)生抗原結(jié)合特異性。此外，使用來自結(jié)合特定抗原的抗體的VH或VL結(jié)構(gòu)域以分別篩選互補(bǔ)的VL或VH結(jié)構(gòu)域文庫可以分離結(jié)合該抗原的抗體。參見例如Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。

術(shù)語“高變區(qū)”、“HVR”或“HV”當(dāng)在本文中使用時是指抗體可變結(jié)構(gòu)域的在序列上高變和/或形成結(jié)構(gòu)定義環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個高變區(qū)；三個在VH中(Hl、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。許多高變區(qū)描述是在用的并且包括在本文中。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)是基于序列變異性并且是最常用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。而Chothia是指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM高變區(qū)代表Kabat CDR與Chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，并且被Oxford Molecular's AbM抗體建模軟件使用。“接觸”高變區(qū)是基于可用的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)的分析。來自這些HVR中的每個的殘基注釋如下。

高變區(qū)可以包含如下的“延伸高變區(qū)”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或49-56或50-56或52-56(L2)和89-97(L3)以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)?？勺兘Y(jié)構(gòu)域殘基是按照Kabat等人(同上)針對這些定義中的每一個進(jìn)行編號。

“框架”或“FR”殘基是除如本文所定義的高變區(qū)殘基以外的那些可變結(jié)構(gòu)域殘基?？勺兘Y(jié)構(gòu)域的FR一般由四個FR結(jié)構(gòu)域組成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列一般按以下順序出現(xiàn)在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

“受體人類框架”就本文的目的來說是包含源自如下所定義的人類免疫球蛋白框架或人類共有框架的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)框架或重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)框架的氨基酸序列的框架?！把苌浴比祟惷庖咔虻鞍卓蚣芑蛉祟惞灿锌蚣艿氖荏w人類框架可以包含其相同的氨基酸序列，或其可以包含氨基酸序列變化。在一些實施方案中，氨基酸變化的數(shù)量為10個或更少、9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少或2個或更少。在一些實施方案中，VL受體人類框架的序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列相同。

“人類共有框架”是代表在人類免疫球蛋白VL或VH框架序列的選擇中最常出現(xiàn)的氨基酸殘基的框架。一般來說，人類免疫球蛋白VL或VH序列的選擇來自可變結(jié)構(gòu)域序列的子組。一般來說，序列的子組是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中的子組。等等。

術(shù)語“淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-水腫”或“ARIA-E”包括腦血管性水腫和腦溝積液。

術(shù)語“淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-出血”或“ARIA-H”包括微出血和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表面鐵沉積癥。

在本文中可與“載脂蛋白Ε4陽性”或“ApoE4陽性”互換使用的“載脂蛋白Ε4載體”或“ApoE4載體”是指具有至少一個載脂蛋白Ε4(或“ApoE4”)等位基因的個體。具有零個ApoE4等位基因的個體在本文中被稱為“ApoE4陰性”或“ApoE4非載體”。還參見Prekumar等人，1996,Am.J Pathol.148:2083-95。

術(shù)語“腦血管性水腫”是指血管內(nèi)流體或蛋白質(zhì)在大腦的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外空間中的過量累積。腦血管性水腫可以通過例如腦MRI(包括但不限于FLAIR MRI)進(jìn)行檢測，并且可以是無癥狀的(“無癥狀性血管性水腫”)或與諸如意識錯亂、頭暈、嘔吐和昏睡的神經(jīng)癥狀相關(guān)(“癥狀性血管性水腫”)(參見Sperling等人Alzheimer’s&Dementia,7:367,2011)。

術(shù)語“大腦大出血”是指直徑大于約1cm的區(qū)域的顱內(nèi)出血或腦中流血。大腦大出血可以通過例如腦MRI(包括但不限于T2*加權(quán)GRE MRI)進(jìn)行檢測，并且可以是無癥狀的(“無癥狀性大出血”)或與諸如暫時性或永久性局灶性運(yùn)動障礙或感覺障礙、共濟(jì)失調(diào)、失語癥和構(gòu)音困難的癥狀相關(guān)(“癥狀性大出血”)(參見例如Chalela JA,Gomes J.Expert Rev.Neurother.2004 4:267,2004和Sperling等人Alzheimer’s&Dementia,7:367,2011)。

術(shù)語“大腦微出血”是指直徑小于約1cm的區(qū)域的顱內(nèi)出血或腦中流血。大腦微出血可以通過例如腦MRI(包括但不限于T2*加權(quán)GRE MRI)進(jìn)行檢測，并且可以是無癥狀的(“無癥狀性微出血”)或可以與諸如暫時性或永久性局灶性運(yùn)動障礙或感覺障礙、共濟(jì)失調(diào)、失語癥和構(gòu)音困難的癥狀相關(guān)(“癥狀性微出血”)。參見例如Greenberg等人，2009,Lancet Neurol.8:165-74。

術(shù)語“腦溝積液”是指在大腦的腦溝或腦槽中流出的流體。腦溝積液可以通過例如腦MRI(包括但不限于FLAIR MRI)來檢測。參見Sperling等人Alzheimer’s&Dementia,7:367,2011。

術(shù)語“中樞神經(jīng)系統(tǒng)表面鐵沉積癥”是指進(jìn)入腦的蛛網(wǎng)膜下腔的流血或出血，并且可以通過例如腦MRI(包括但不限于T2*加權(quán)GRE MRI)進(jìn)行檢測。指示中樞神經(jīng)系統(tǒng)表面鐵沉積癥的癥狀包括感覺神經(jīng)性耳聾、小腦共濟(jì)失調(diào)和錐體束征。參見Kumara-N,Am J Neuroradiol.31:5,2010。

如本文中所使用，術(shù)語“進(jìn)展”是指疾病隨時間的惡化。疾病的“進(jìn)展速率”或“進(jìn)展的速率”是指疾病在被診斷為患有該疾病的患者中隨時間發(fā)展的快慢。疾病的進(jìn)展速率可以通過疾病的特定特征隨時間的可測量變化來表示。如果攜帶特定遺傳性狀的患者的疾病狀態(tài)的進(jìn)展速度比沒有這種遺傳性狀的那些患者快，則她被稱為具有或更有可能具有“增加的進(jìn)展速率”。在另一方面，響應(yīng)于治療的患者被稱為具有或更有可能具有“降低的進(jìn)展速率”，如果當(dāng)與她在治療前的疾病狀態(tài)或與沒有治療的其它患者相比時，她的疾病進(jìn)展在治療后減緩。

如本文所使用，“更有可能響應(yīng)”是指最有可能展現(xiàn)出淀粉樣變性(例如AD)的進(jìn)展的減緩或預(yù)防的患者。就AD而言，“更有可能響應(yīng)”是指最有可能展現(xiàn)出治療減少功能或認(rèn)知損失的患者。短語“響應(yīng)于”在本發(fā)明的上下文中指示罹患、被懷疑罹患或容易罹患或被診斷為患有如本文所述的病癥的患者顯示對抗Aβ治療的反應(yīng)。

如本文中所使用，短語“選擇患者”或“鑒別患者”是指使用所生成的涉及患者的樣品中等位基因的存在的信息或數(shù)據(jù)來鑒別或選擇更有可能受益于包含抗Aβ抗體的治療的患者。所使用或生成的信息或數(shù)據(jù)可以為任何形式，書面、口頭或電子的。在一些實施方案中，使用所生成的信息或數(shù)據(jù)包括傳達(dá)、呈遞、報告、存儲、發(fā)送、傳遞、提供、傳輸、分配或其組合。在一些實施方案中，傳達(dá)、呈遞、報告、存儲、發(fā)送、傳遞、提供、傳輸、分配或其組合是由計算設(shè)備、分析器單元或其組合來執(zhí)行。在一些其它實施方案中，傳達(dá)、呈遞、報告、存儲、發(fā)送、傳遞、提供、傳輸、分配或其組合是由實驗室或醫(yī)學(xué)專業(yè)人員來執(zhí)行。在一些實施方案中，所述信息或數(shù)據(jù)包括特定等位基因存在或不存在于樣品中的指示。在一些實施方案中，所述信息或數(shù)據(jù)包括患者更有可能對包含抗Aβ的療法作出響應(yīng)的指示。

“效應(yīng)子功能”是指可歸因于抗體的Fc區(qū)的那些生物活性，其隨抗體同種型而變化?？贵w效應(yīng)子功能的實例包括：C1q結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)型細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體)的下調(diào)；和B細(xì)胞活化。在本領(lǐng)域中已知野生型IgG4抗體的效應(yīng)子功能比野生型IgG1抗體低。

術(shù)語“Fc區(qū)”在本文中被用來定義免疫球蛋白重鏈的C端區(qū)域，其包含恒定區(qū)的至少一部分。該術(shù)語包括天然序列Fc區(qū)和變體Fc區(qū)。在一個實施方案中，人類IgG重鏈Fc區(qū)從Cys226或從Pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，F(xiàn)c區(qū)的C端賴氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另外指定，否則Fc區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號是按照Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所描述的EU編號系統(tǒng)(也稱為EU指數(shù))來進(jìn)行。

術(shù)語“全長抗體”、“完整抗體”和“全抗體”在本文中可互換地用來指具有大體上類似于天然抗體結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)或具有含有本文所定義的Fc區(qū)的重鏈的抗體。

術(shù)語“宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞系”和“宿主細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換使用，并且是指已將外源核酸引入其中的細(xì)胞，包括這類細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括“轉(zhuǎn)化體”和“轉(zhuǎn)化細(xì)胞”，其包括初級轉(zhuǎn)化細(xì)胞及由其衍生的后代，而不考慮傳代數(shù)。后代可能在核酸含量上與親本細(xì)胞并非完全相同，而是可以含有突變。本文包括具有如在初始轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選或選擇的相同功能或生物活性的突變體后代。

“免疫綴合物”是與一種或多種異源性分子(包括但不限于另一種治療劑)綴合的抗體。

“分離的”核酸是指已經(jīng)從其天然環(huán)境的組分中分離出的核酸分子。分離的核酸包括核酸分子，其包含在通常含有該核酸分子的細(xì)胞中，但該核酸分子存在于染色體外或其所處的染色體位置不同于其天然染色體位置。

“分離的編碼抗Aβ抗體的核酸”是指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一個或多個核酸分子，包括在單個載體或不同載體中的這類核酸分子和存在于宿主細(xì)胞中的一個或多個位置的這類核酸分子。

如本文所使用，術(shù)語“早期阿爾茨海默氏病”或“早期AD”(例如，“診斷為早期AD的患者”或“罹患早期AD的患者”)包括具有由AD所引起的輕度認(rèn)知障礙如記憶缺陷的患者和具有AD生物標(biāo)記的患者例如淀粉樣蛋白陽性患者。

如本文所使用，術(shù)語“輕度阿爾茨海默氏病”或“輕度AD”(例如，“診斷為輕度AD的患者”)是指特征在于20至26的MMSE評分的AD階段。

如本文所使用，術(shù)語“輕到中度阿爾茨海默氏病”或“輕到中度AD”包括輕度和中度AD二者，并且其特征在于18至26的MMSE評分。

如本文所使用，術(shù)語“中度阿爾茨海默氏病”或“中度AD”(例如，“診斷為中度AD的患者”)是指特征在于18至19的MMSE評分的AD階段。

“裸抗體”是指未綴合至異源部分(例如另一個治療部分)或放射性標(biāo)記的抗體。該裸抗體可以存在于藥物制劑中。

“天然抗體”是指具有不同結(jié)構(gòu)的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚體糖蛋白，它由通過二硫鍵結(jié)合的兩個相同輕鏈和兩個相同重鏈組成。從N端至C端，每個重鏈具有可變區(qū)(VH)，也稱為可變重域或重鏈可變結(jié)構(gòu)域，接著是三個恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2和CH3)。類似地，從N端至C端，每個輕鏈具有可變區(qū)(VL)，也稱為可變輕域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，接著是恒定輕(CL)結(jié)構(gòu)域。抗體的輕鏈基于其恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列可以歸于兩種類型(稱為卡帕(κ)和拉姆達(dá)(λ))中的一種。

術(shù)語“包裝插頁”是用來指通常包含在治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、聯(lián)合療法、禁忌癥的信息和/或關(guān)于使用這類治療產(chǎn)品的警告。術(shù)語“包裝插頁”還用來指通常包含在診斷產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說明書，其含有關(guān)于預(yù)期用途、測試原理、試劑的制備和操作、樣本收集和制備、分析的校準(zhǔn)和分析程序、性能和精度數(shù)據(jù)如分析的靈敏度和特異性的信息。

關(guān)于參照多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”的定義為在比對序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守性替代視為序列同一性的部分時，候選序列中與參照多肽序列中的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分比。為測定百分比氨基酸序列同一性目的進(jìn)行的比對可以以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式來實現(xiàn)，例如使用可公開獲得的計算機(jī)軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定用于比對序列的適宜參數(shù)，包括在被比較序列的全長里實現(xiàn)最大比對所需要的任何算法。然而，就本文的目的而言，使用序列比較計算機(jī)程序ALIGN-2來生成％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比較計算機(jī)程序由Genentech,Inc.創(chuàng)作，并且源代碼已與用戶文檔一起提交到美國版權(quán)局(U.S.Copyright Office),Washington D.C.,20559，其被登記在美國版權(quán)登記號TXU510087下。ALIGN-2程序可從Genentech,Inc.,South San Francisco,California公開獲得，或可以從源代碼匯編。ALIGN-2程序應(yīng)當(dāng)匯編用于UNIX操作系統(tǒng)，包括數(shù)字UNIX V4.0D。所有序列比較參數(shù)均由ALIGN-2程序設(shè)定且不改變。

在采用ALIGN-2進(jìn)行氨基酸序列比較的情況下，給定氨基酸序列A對/與/相對于給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者這可以用短語表示為對/與/相對于給定氨基酸序列B具有或包含特定％氨基酸序列同一性的給定氨基酸序列A)計算如下：

100乘以分?jǐn)?shù)(X/Y)

其中X是由序列比對程序ALIGN-2在所述程序?qū)和B的比對中評為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，而其中Y是B中氨基酸殘基的總數(shù)。應(yīng)當(dāng)了解，當(dāng)氨基酸序列A的長度不等于氨基酸序列B的長度時，A對B的％氨基酸序列同一性將不等于B對A的％氨基酸序列同一性。除非另外明確說明，否則本文中使用的所有％氨基酸序列同一性值是如在前一段中所描述的那樣使用ALIGN-2計算機(jī)程序所獲得。

術(shù)語“藥物制劑”和“藥物組合物”在本文中可互換使用并且是指這樣的制劑，其呈現(xiàn)使得包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，且不包含對將施用該制劑的受試者具有不可接受的毒性的其它組分。

“藥學(xué)上可接受的載劑”是指藥物制劑中除活性成分以外的成分，其對受試者無毒性。藥學(xué)上可接受的載劑包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。

如本文所使用，術(shù)語“載體”是指能夠使其連接的另一種核酸增殖的核酸分子。該術(shù)語包括作為自我復(fù)制核酸結(jié)構(gòu)的載體，以及摻入它所引入的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。某些載體能夠指導(dǎo)與其操作性連接的核酸的表達(dá)。此類載體在本文中被稱為“表達(dá)載體”。

“成像劑”是具有一種或多種允許直接或間接檢測到它的存在和/或位置的性質(zhì)的化合物。此類成像劑的實例包括并入允許檢測的標(biāo)記部分的蛋白質(zhì)和小分子化合物。

“標(biāo)記”是與待用于檢測或成像的分子偶聯(lián)的標(biāo)記物。此類標(biāo)記的實例包括：放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、發(fā)色團(tuán)或親和標(biāo)簽。在一個是實施方案中，所述標(biāo)記是用于醫(yī)療成像的放射性標(biāo)記例如Tc99m或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(又稱為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記諸如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳、鐵等。

方法和組合物

本公開提供了用于治療、預(yù)后、選擇和/或鑒定有淀粉樣變性的風(fēng)險或具有淀粉樣變性的患者的組合物和方法。在一個方面，本發(fā)明是部分基于改良的治療方法。

在某些實施方案中，提供了結(jié)合Aβ的抗體。本發(fā)明的抗體可用于例如診斷或治療阿爾茨海默氏病(“AD”)和其它疾病。

示例性抗體

在一個方面，本發(fā)明提供了結(jié)合Aβ的分離抗體。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了能夠以良好的親和力結(jié)合人類Aβ的單體、低聚物和原纖維形式的抗Aβ抗體。在一個實施方案中，抗Aβ抗體是結(jié)合在Aβ的殘基13-24內(nèi)的Aβ表位的抗體。在一個這樣的實施方案中，所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

在一個實施方案中，所述抗體包含在SEQ ID NO:5中列出的重鏈氨基酸序列以及在SEQ ID NO:9中列出的輕鏈氨基酸序列。在另一個實施方案中，所述抗體包含在SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的氨基酸1-112的重鏈可變區(qū)以及在SEQ ID NO:9中列出的氨基酸序列的氨基酸1-112的輕鏈可變區(qū)。在另一個實施方案中，所述抗體包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9的HVR序列。在另一個實施方案中，所述抗體包含與SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9的HVR序列95％、96％、97％、98％或99％或更多相同的HVR序列。

在任何以上實施方案中，抗Aβ抗體是人源化的。在一個實施方案中，抗Aβ抗體包含如在任何以上實施方案中的HVR，并且進(jìn)一步包含受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類共有框架。

在另一個方面，抗Aβ抗體包含與SEQ ID NO:5的氨基酸序列的氨基酸1-112具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)序列。在某些實施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列含有相對于參考序列的替代(例如，保守替代)、插入或缺失，但是包含該序列的抗Aβ抗體保留結(jié)合Aβ的能力。在某些實施方案中，SEQ ID NO:5中總共有1至10個氨基酸已經(jīng)被替代、插入和/或刪除。在某些實施方案中，替代、插入或缺失發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中(即，在FR中)。任選地，抗Aβ抗體包含SEQ ID NO:5中的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。

在另一個方面，提供了抗Aβ抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO:9的氨基酸序列的氨基酸1-112具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。在某些實施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列含有相對于參考序列的替代(例如，保守替代)、插入或缺失，但是包含該序列的抗Aβ抗體保留結(jié)合Aβ的能力。在某些實施方案中，SEQ ID NO:9中總共有1至10個氨基酸已經(jīng)被替代、插入和/或刪除。在某些實施方案中，替代、插入或缺失發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中(即，在FR中)。任選地，抗Aβ抗體包含SEQ ID NO:9中的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。

在另一個方面，提供了抗Aβ抗體，其中所述抗體包含如在任何上文所提供的實施方案中的VH和如在任何上文所提供的實施方案中的VL。

在另一方面，本發(fā)明提供了與本文所提供的抗Aβ抗體結(jié)合相同的表位的抗體。例如，在某些實施方案中，提供了與包含SEQ ID NO:5中的VH序列和SEQ ID NO:9中的VL序列的抗Aβ抗體結(jié)合相同的表位的抗體。

在本發(fā)明的另一個方面，根據(jù)任何以上實施方案的抗Aβ抗體是單克隆抗體，包括嵌合、人源化或人類抗體。在一個實施方案中，抗Aβ抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或F(ab’)2片段。在另一個實施方案中，抗體是全長抗體，例如，本文所定義的“完整IgG4”抗體或其它抗體類別或同種型。在某些實施方案中，抗體是雙特異性抗體。

在另一方面，根據(jù)任何以上實施方案的抗Aβ抗體可以并入如以下部分1-7中所描述的任何特征中的一個或組合。

在一個實施方案中，抗Aβ抗體包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L2、含有氨基酸序列SEQ ID NO:8的HVR-L3、含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。

在另一個實施方案中，所述抗體包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9的重鏈和輕鏈序列。

在另一個實施方案中，所述抗體包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:9中的可變區(qū)序列。

在任何以上實施方案中，抗Aβ抗體可以是人源化的。在一個實施方案中，抗Aβ抗體包含如在任何以上實施方案中的HVR，并且進(jìn)一步包含受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類共有框架。

1.抗體親和力

在某些實施方案中，本文提供的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10^-8M或更小，例如10^-8M至10^-13M，例如，10^-9M至10^-13M)的解離常數(shù)(Kd)。

在一個實施方案中，通過放射性標(biāo)記抗原結(jié)合分析(RIA)測量Kd，該抗原結(jié)合分析是如以下分析所描述使用受關(guān)注抗體的Fab型式和其抗原而進(jìn)行。通過在未標(biāo)記抗原的滴定系列的存在下用最小濃度的(¹²⁵I)標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體涂層板捕捉結(jié)合抗原來測量Fab對抗原的溶液結(jié)合親和力(參見例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。為了建立分析條件，用含在50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)涂覆多孔板(Thermo Scientific)過夜，且隨后在室溫(約23℃)下用含在PBS中的2％(w/v)胎牛血清封閉2-5小時。在非吸附板(Nunc#269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與受關(guān)注Fab的連續(xù)稀釋液混合(例如，與Presta等人,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中的抗VEGF抗體的評估一致)。然后過夜培養(yǎng)受關(guān)注的Fab；然而，培養(yǎng)可以持續(xù)更長時間(例如，約65小時)以確保達(dá)到平衡。之后，將混合物轉(zhuǎn)移到捕捉板用于在室溫下培養(yǎng)(例如，持續(xù)1小時)。然后移除溶液并用含在PBS中的0.1％聚山梨醇酯沖洗板8次。當(dāng)板已經(jīng)干燥時，添加150μl/孔閃爍劑(MICROSCINT-20TM；Packard)，并在TOPCOUNT TMγ計數(shù)器(Packard)上對板計數(shù)10分鐘。選擇產(chǎn)生小于或等于最大結(jié)合的20％的每個Fab的濃度用于競爭結(jié)合分析。

根據(jù)另一個實施方案，使用固定化抗原CM5芯片，以～10個反應(yīng)單位(RU)，在25℃下使用或(BLAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，利用表面等離振子共振分析來測量Kd。簡而言之，根據(jù)供應(yīng)商的說明書用N-乙基-N'(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)激活羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。將抗原用10mM乙酸鈉(pH 4.8)稀釋到5μg/ml(～0.2μM)，然后以5μl/分鐘的流速注射，以獲得約10個反應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白。在注射抗原后，注射1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。對于動力學(xué)測量來說，在25℃下將Fab的兩倍連續(xù)稀釋液(0.78nM至500nM)以約25pl/min的流速注射到含0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性劑(PBST)的PBS中。使用簡單的一對一Langmuir結(jié)合模型(Evaluation Software版本3.2)，通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖來計算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)被計算為比率koff/kon。參見例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果通過以上的表面等離振子共振分析測得結(jié)合速率超過10⁶M^-1s^-1，那么可以使用熒光淬滅技術(shù)來測定結(jié)合速率，即如在分光計例如配備了斷流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCO TM分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯所測量，在濃度漸增的抗原的存在下，測量PBS pH 7.2中的20nM抗原抗體(Fab形式)于25℃下的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)＝295nm；發(fā)射＝340nm，16nm帶通)的升高或降低。

2.抗體片段

在某些實施方案中，本文提供的抗體是抗體片段。抗體片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段以及下文描述的其它片段。關(guān)于某些抗體片段的綜述，參見Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)。關(guān)于scFv片段的綜述，參見例如Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷,Rosenburg和Moore編輯,(Springer-Verlag,New York),第269-315頁(1994)；另外參見WO 93/16185；以及美國專利號5,571,894和5,587,458。關(guān)于包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基且具有增加的體內(nèi)半衰期的Fab和F(ab')2片段的討論，參見美國專利號5,869,046。

雙抗體是具有兩個抗原結(jié)合位點的抗體片段，可以是二價或雙特異性。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。在Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中還描述了三抗體和四抗體。

單結(jié)構(gòu)域抗體是包含抗體的整個或部分重鏈可變結(jié)構(gòu)域或整個或部分輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體片段。在某些實施方案中，單結(jié)構(gòu)域抗體是人類單結(jié)構(gòu)域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利號6,248,516B1)。在某些實施方案中，兩個或更多個單結(jié)構(gòu)域抗體可以結(jié)合在一起形成具有多價親和力的免疫球蛋白構(gòu)建體(即，第一單結(jié)構(gòu)域抗體的N末端或C末端可以稠合或以其它方式連接至第二單結(jié)構(gòu)域抗體的N末端或C末端)。

可以通過各種技術(shù)來生成抗體片段，這些技術(shù)包括但不限于如本文所描述的完整抗體的蛋白水解消化以及通過重組宿主細(xì)胞生成(例如，大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)。

3.嵌合和人源化抗體

在某些實施方案中，本文提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體描述于例如美國專利號4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中。在一個實例中，嵌合抗體包括非人類可變區(qū)(例如，源自于小鼠、大鼠、倉鼠、兔子或非人類靈長類動物如猴的可變區(qū))和人類恒定區(qū)。在另一個實例中，嵌合抗體是其中類或亞類已從親本抗體發(fā)生改變的一個“類別切換”抗體。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。

在某些實施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。通常，非人類抗體被人源化以降低對人類的免疫原性，同時保留親本非人類抗體的特異性和親和力。通常，人源化抗體包含一個或多個可變結(jié)構(gòu)域，其中HVR例如CDR(或其部分)衍生自非人類抗體且FR(或其部分)衍生自人類抗體序列。人源化抗體任選還將包含人類恒定區(qū)的至少一部分。在一些實施方案中，人源化抗體中的一些FR殘基被來自非人類抗體(例如，衍生HVR殘基的抗體)的相應(yīng)殘基取代，例如用于恢復(fù)或提高抗體特異性或親和力。

人源化抗體和其形成方法綜述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中，并且進(jìn)一步描述于例如Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美國專利號5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)嫁接)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面重塑”)；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述“FR重排”)；以及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述用于FR重排的“導(dǎo)向選擇”方法)中。

可以用于人源化的人類框架區(qū)包括但不限于：使用“最佳擬合”(best-fit)方法選擇的框架區(qū)(參見例如Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))；衍生自人類抗體的特定亞組的輕鏈或重鏈可變區(qū)的共有序列的框架區(qū)(參見例如Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人，J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(體細(xì)胞突變型)框架區(qū)或人生殖系框架區(qū)(參見例如，Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和衍生自篩選FR文庫的框架區(qū)(參見例如，Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。

4.人類抗體

在某些實施方案中，本文提供的抗體是人類抗體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的各種技術(shù)來生成人類抗體。人類抗體一般地描述在van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)以及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中。

可以通過向轉(zhuǎn)基因動物施用免疫原來制備人類抗體，該轉(zhuǎn)基因動物已經(jīng)被修飾成響應(yīng)抗原攻擊而生成完整人類抗體或具有人可變區(qū)的完整抗體。此類動物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其置換內(nèi)源性免疫球蛋白基因座，或者其在染色體外存在或隨機(jī)整合入動物的染色體中。在此類轉(zhuǎn)基因小鼠中，一般已經(jīng)將內(nèi)源性免疫球蛋白基因座滅活。關(guān)于從轉(zhuǎn)基因動物獲得人類抗體的方法的綜述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。還參見例如美國專利號6,075,181和6,150,584，其描述XENOMOUSE^TM技術(shù)；美國專利號5,770,429，其描述技術(shù)；美國專利號7,041,870，其描述K-M技術(shù)；以及美國專利申請公開號US 2007/0061900，其描述技術(shù))。可以例如通過與不同人恒定區(qū)組合來進(jìn)一步修飾來自由此類動物生成的完整抗體的人可變區(qū)。

還可以通過基于雜交瘤的方法來生成人類抗體。已經(jīng)描述了用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人雜交骨髓瘤細(xì)胞系。(參見例如，Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991)。)經(jīng)由人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生成的人類抗體還描述于Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。其它方法包括描述于例如美國專利號7,189,826(其描述從雜交瘤細(xì)胞系生成單克隆人類IgM抗體)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(其描述人-人雜交瘤)中的那些方法。人類雜交瘤技術(shù)(Trioma技術(shù))還描述于Vollmers和Brandlein，Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein，Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中。

還可以通過分離選自人衍生型噬菌體展示文庫的Fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列來生成人類抗體。然后，可以將此類可變結(jié)構(gòu)域序列與所需的人恒定結(jié)構(gòu)域組合。下文描述了自抗體文庫選擇人類抗體的技術(shù)。

5.文庫衍生的抗體

可以通過在組合文庫中篩選具有所需的一種或多種活性的抗體來分離本發(fā)明的抗體。例如，用于生成噬菌體展示文庫并對此類文庫篩選擁有所需結(jié)合特征的抗體的多種方法是本領(lǐng)域中已知的。此類方法綜述于例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人，編輯,Human Press,Totowa,NJ,2001)中并且進(jìn)一步描述于例如McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury，Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編輯，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)中。

在某些噬菌體展示方法中，將VH和VL基因的全集分別通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆，并在噬菌體文庫中隨機(jī)重組，然后可以對噬菌體文庫篩選抗原結(jié)合噬菌體，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所描述。噬菌體通常以單鏈Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗體片段。來自免疫來源的文庫提供針對免疫原的高親和力抗體，而不需要構(gòu)建雜交瘤。或者，可以(例如自人類)克隆天然全集以在沒有任何免疫的情況下提供針對一系列非自身和還有自身抗原的單一來源抗體，如由Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所描述。最后，還可以通過自干細(xì)胞克隆未重排V基因區(qū)段并使用含有隨機(jī)序列的PCR引物編碼高度可變的CDR3區(qū)并在體外實現(xiàn)重排來合成生成天然文庫，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述。描述人類抗體噬菌體文庫的專利公開包括例如：美國專利號5,750,373和美國專利公開號2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。

從人類抗體文庫分離的抗體或抗體片段被視為本文中的人類抗體或人類抗體片段。

6.多特異性抗體

在某些實施方案中，本文所提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對至少兩個不同位點具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實施方案中，結(jié)合特異性之一是針對Aβ，而另一種是針對任何其它抗原。在某些實施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合Aβ的兩個不同表位。雙特異性抗體還可以用于將細(xì)胞毒性劑定位于細(xì)胞。雙特異性抗體可以制備成全長抗體或抗體片段。

用于生成多特異性抗體的技術(shù)包括但不限于具有不同特異性的兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表達(dá)(參見Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.10:3655(1991))和“結(jié)進(jìn)孔”(knob-in-hole)工程化(參見例如美國專利號5,731,168)。還可以通過下列方法來制備多特異性抗體：用于生成抗體Fc-異二聚體分子的工程化靜電操縱效應(yīng)(WO 2009/089004A1)；交聯(lián)兩個或更多個抗體或片段(參見例如，美國專利號4,676,980和Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉鏈生成雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于生成雙特異性抗體片段的"雙抗體"技術(shù)(參見例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；和使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994))；以及如例如Tutt等人，J.Immunol.147:60(1991)中所述制備三特異性抗體。

本文中還包括具有三個或更多個功能性抗原結(jié)合位點的工程化抗體，包括“章魚抗體”(參見例如US 2006/0025576A1)。

本文中的抗體或片段還包括“雙重作用FAb”或“DAF”，其包含結(jié)合Aβ以及另一種不同抗原的抗原結(jié)合位點(參見例如US2008/0069820)。

7.抗體變體

在某些實施方案中，預(yù)期了本文所提供的抗體的氨基酸序列變體。例如，可以期望改善抗體的結(jié)合親和力和/或其它生物特性?？梢酝ㄟ^將適當(dāng)?shù)男揎椧刖幋a抗體的核苷酸序列中或通過肽合成來制備抗體的氨基酸序列變體。此類修飾包括例如對抗體的氨基酸序列內(nèi)的殘基進(jìn)行刪除和/或插入和/或替代。可以進(jìn)行刪除、插入和替代的任何組合以得到最終的構(gòu)建體，只要最終的構(gòu)建體擁有所需的特征例如抗原結(jié)合。

替代、插入和缺失變體

在某些實施方案中，提供了具有一個或多個氨基酸替代的抗體變體。替代誘變的受關(guān)注位點包括HVR和FR。保守替代在表1中的“保守替代”的標(biāo)題下示出。更實質(zhì)的變化提供在表1中的“示例性替代”標(biāo)題下，并且如下文參照氨基酸側(cè)鏈類別所進(jìn)一步描述。可以將氨基酸替代引入受關(guān)注抗體中，并且對產(chǎn)物篩選所需的活性，例如保留/改善的抗原結(jié)合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。

表1

根據(jù)共同的側(cè)鏈特性，氨基酸可以分組如下：

(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；

(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；

(3)酸性：Asp、Glu；

(4)堿性：His、Lys、Arg；

(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；

(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。

非保守替代將需要用這些類別之一的成員替換另一個類別。

一種類型的替代變體涉及替代親本抗體(例如人源化或人類抗體)的一個或多個高變區(qū)殘基。通常，被選擇用于進(jìn)一步研究的所得變體相對于親本抗體將具有改變的(例如改善的)某些生物性質(zhì)(例如增加的親和力、降低的免疫原性)和/或?qū)⒕哂杏H本抗體的大體上保留的某些生物性質(zhì)。一種示例性替代變體是親和力成熟抗體。在某些實施方案中，親和力成熟抗體對靶抗原將具有納摩爾濃度或甚至皮摩爾濃度的親和力。親和力成熟抗體是通過本領(lǐng)域中已知的程序而產(chǎn)生，包括例如使用基于噬菌體展示的親和力成熟技術(shù)(諸如本文所描述的那些)。簡而言之，使一個或多個HVR殘基突變并在噬菌體上展示變體抗體，且針對特定生物活性(例如結(jié)合親和力)進(jìn)行篩選。還已知其它程序。Marks等人，Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域重排進(jìn)行親和力成熟。Barbas等人，Proc Nat.Acad.Sci,USA 91:3809-3813(1994)；Schier等人，Gene 169:147-155(1996)；Yelton等人，J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人，J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人，J.Mol.Biol.226:889-896(1992)描述了HVR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變。

可以在HVR中進(jìn)行改變(例如替代)以例如改善抗體親和力?？梢栽贖VR“熱點”(即由在體細(xì)胞成熟過程中經(jīng)歷高頻突變的密碼子編碼的殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或SDR(a-CDR)中進(jìn)行此類改變，并測試所得變體VH或VL的結(jié)合親和力。通過從二級文庫中構(gòu)建和再選擇實現(xiàn)的親和力成熟已描述于例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人編輯，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟的一些實施方案中，通過多種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向誘變)中的任一種將多樣性引入被選擇用于突變的可變基因中。然后創(chuàng)建二級文庫。然后篩選該文庫以鑒定具有所需親和力的任何抗體變體。引入多樣性的另一種方法涉及HVR引導(dǎo)方法，其中使幾個HVR殘基隨機(jī)化(例如一次4-6個殘基)。涉及抗原結(jié)合的HVR殘基可以例如使用丙氨酸掃描誘變或建模明確地識別。特別地，經(jīng)常靶向CDR-H3和CDR-L3。

在某些實施方案中，替代、插入或缺失可以在一個或多個HVR中發(fā)生，只要此類改變不大體上降低抗體結(jié)合抗原的能力。例如，可以在HVR中進(jìn)行大體上不減小結(jié)合親和力的保守性改變(例如本文提供的保守性替代)。此類改變可以在HVR“熱點”或SDR之外。在上文提供的變體VH和VL的某些實施方案中，每個HVR未改變或含有不多于一個、兩個或三個氨基酸替代。

用于鑒定抗體中可以被選為誘變目標(biāo)的殘基或區(qū)域的一種有用方法被稱為“丙氨酸掃描誘變”，如由Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述。在該方法中，鑒定殘基或靶殘基組(例如帶電殘基如arg、asp、his、Iys和glu)并用中性或帶負(fù)電荷的氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)替換，以測定是否影響抗體與抗原的相互作用?？梢栽趯ψ畛跆娲@示功能敏感性的氨基酸位置引入另外的替代?；蛘呋蛄硗?，使用抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)來鑒定抗體與抗原之間的接觸點?？梢园邢蚧蛳祟惤佑|殘基和鄰近殘基作為替代的候選?？梢院Y選變體以確定它們是否含有所需性質(zhì)。

氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端融合，其長度范圍是從一個殘基至包含一百個或更多個殘基的多肽，以及單個或多個氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的實例包括具有N端甲硫氨酰殘基的抗體?？贵w分子的其它插入變體包括使抗體的N或C端與酶(例如對于ADEPT)或增加抗體的血清半衰期的多肽融合。

糖基化變體

在某些實施方案中，改變本文所提供的抗體以提高或降低抗體糖基化的程度。可以通過改變氨基酸序列以創(chuàng)建或消除一個或多個糖基化位點來方便地實現(xiàn)對抗體的糖基化位點的添加或刪除。

在抗體包含F(xiàn)c區(qū)的情況下，可以改變其附接的碳水化合物。由哺乳動物細(xì)胞生成的天然抗體通常包含分支的雙觸角寡糖，其一般通過N-連接附接至Fc區(qū)的CH2結(jié)構(gòu)域的Asn297。參見例如，Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及附接至雙觸角寡糖結(jié)構(gòu)的“主干”中的GlcNAc的巖藻糖。在一些實施方案中，可以對本發(fā)明抗體中的寡糖進(jìn)行修飾以創(chuàng)建具有某些改善的特性的抗體變體。

在一個實施方案中，提供了抗體變體，其具有缺少附接(直接或間接)至Fc區(qū)的巖藻糖的碳水化合物結(jié)構(gòu)。例如，此類抗體中的巖藻糖量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。通過相對于附接至Asn297的所有糖結(jié)構(gòu)(例如，復(fù)合、雜合和高甘露糖結(jié)構(gòu))的總和，計算Asn297處的糖鏈內(nèi)巖藻糖的平均量來測定巖藻糖量，如通過MALDI-TOF質(zhì)譜法所測量(如例如W02008/077546中所描述)。Asn297是指位于Fc區(qū)中的約第297位的天冬酰胺殘基(Fc區(qū)殘基的Eu編號方式)；然而，Asn297還可以由于抗體中的微小序列變異而位于第297位的約±3個氨基酸的上游或下游處，即在第294位和第300位之間。此類巖藻糖基化變體可以具有改善的ADCC功能。參見例如美國專利公開號US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“脫巖藻糖基化”或“巖藻糖缺乏”抗體變體的出版物的實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能夠生成脫巖藻糖基化抗體的細(xì)胞系的實例包括缺乏蛋白質(zhì)巖藻糖基化的Lec 13CHO細(xì)胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美國專利申請?zhí)朥S 2003/0157108A1,Presta,L；和WO 2004/056312 A1,Adams等人，尤其是實施例11)，以及敲除細(xì)胞系如α-1,6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因FUT8敲除的CHO細(xì)胞(參見例如,Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。

進(jìn)一步提供了具有兩分型寡糖的抗體變體，例如其中附接至抗體Fc區(qū)的雙觸角寡糖通過GlcNAc二等分。此類抗體變體可以具有降低的巖藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此類抗體變體的實例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利號6,602,684(Umana等人)和US 2005/0123546(Umana等人)中。還提供了在附接至Fc區(qū)的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體變體。此類抗體變體可以具有改善的CDC功能。此類抗體變體描述于例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中。

Fc區(qū)變體

在某些實施方案中，可以將一處或多處氨基酸修飾引入本文所提供的抗體的Fc區(qū)中，由此生成Fc區(qū)變體。Fc區(qū)變體可以包含在一個或多個氨基酸位置包含氨基酸修飾(例如替代)的人Fc區(qū)序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc區(qū))。

在某些實施方案中，本發(fā)明預(yù)期擁有一些但不是所有效應(yīng)子功能的抗體變體，該效應(yīng)子功能使其成為如下應(yīng)用的期望候選物：其中抗體的體內(nèi)半衰期是重要的，而某些效應(yīng)子功能(諸如補(bǔ)體和ADCC)是不必要或有害的?？梢赃M(jìn)行體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性分析以確認(rèn)CDC和/或ADCC活性的降低/消減。例如，可以進(jìn)行Fc受體(FcR)結(jié)合分析以確保抗體缺乏Fc R結(jié)合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn結(jié)合能力。用于介導(dǎo)ADCC的原始細(xì)胞NK細(xì)胞僅表達(dá)FcλRIII，而單核細(xì)胞表達(dá)FcλRI、FcλRII和FcλRIII。造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)匯總于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464頁上的表3中。評估目標(biāo)分子的ADCC活性的體外分析的非限制性實例描述于美國專利號5,500,362(參見例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中?；蛘撸梢圆捎梅欠派湫苑治龇椒?參見例如用于流式細(xì)胞術(shù)的ACTI^TM非放射性細(xì)胞毒性分析(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；和CytoTox非放射性細(xì)胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。用于此類分析的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細(xì)胞。或者或另外，可以在體內(nèi)評估受關(guān)注分子的ADCC活性，諸如在動物模型諸如Clynes等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中公開的動物模型中。還可以進(jìn)行C1q結(jié)合分析以確認(rèn)抗體不能結(jié)合C1q并且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的Clq和C3c結(jié)合ELISA。為了評估補(bǔ)體激活，可以進(jìn)行CDC分析(參見例如，Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。還可以使用本領(lǐng)域中已知的方法來進(jìn)行FcRn結(jié)合和體內(nèi)清除/半衰期測定(參見例如，Petkova,S.B.等人,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。

效應(yīng)子功能降低的抗體包括具有Fc區(qū)殘基238、265、269、270、297、327和329中的一個或多個的替代的那些抗體(美國專利號6,737,056)。此類Fc突變體包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的兩處或更多處具有替代的Fc突變體，包括殘基265和297被替代為丙氨酸的所謂“DANA”Fc突變體(美國專利號7,332,581)。

描述了對FcR的結(jié)合有所改善或減弱的某些抗體變體。(參見例如美國專利號6,737,056；WO 2004/056312和Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。)

在某些實施方案中，抗體變體包含具有改善ADCC的一處或多處氨基酸替代例如在Fc區(qū)的位置298、333和/或334(殘基的EU編號方式)處的替代的Fc區(qū)。

在一些實施方案中，對Fc區(qū)做出改變，其導(dǎo)致改變(即，改善或減弱)的C1q結(jié)合和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)，例如，如美國專利號6,194,551、WO 99/51642和Idusogie等人，J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所描述。

具有增加的半衰期和改善的對新生兒Fc受體(FcRn)的結(jié)合的抗體描述于US2005/0014934A1(Hinton等人)中，新生兒Fc受體負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移至胎兒(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗體包含其中具有改善Fc區(qū)對FcRn的結(jié)合的一個或多個替代的Fc區(qū)。此類Fc變體包括在Fc區(qū)殘基238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一個或多個處具有替代，例如Fc區(qū)殘基434的替代的那些變體(美國專利號7,371,826)。關(guān)于Fc區(qū)變體的其它實例，還參見Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美國專利號5,648,260；美國專利號5,624,821；和WO 94/29351。

半胱氨酸工程化抗體變體

在某些實施方案中，可以期望形成半胱氨酸工程化抗體，例如“thioMAb”，其中抗體的一個或多個殘基被半胱氨酸殘基替代。在特定實施方案中，被替代的殘基存在于抗體的可接近位點處。通過用半胱氨酸替代那些殘基，反應(yīng)性硫醇基團(tuán)由此定位于抗體的可接近位點并且可以用于使抗體與其它部分諸如藥物部分或連接子團(tuán)-藥物部分綴合，以創(chuàng)建如本文中進(jìn)一步描述的免疫綴合物。在某些實施方案中，可以用半胱氨酸替代下列殘基中的任何一個或多個：輕鏈的V205(Kabat編號方式)；重鏈的A118(EU編號方式)；和重鏈Fc區(qū)的S400(EU編號方式)?？梢匀缋缑绹鴮＠?,521,541所描述來生成半胱氨酸工程化抗體。

抗體衍生物

在某些實施方案中，可以進(jìn)一步修飾本文所提供的抗體以含有本領(lǐng)域已知的且易于獲得的額外非蛋白質(zhì)部分。適于抗體衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環(huán)、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或隨機(jī)共聚物)、和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇和其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的穩(wěn)定性而可以在生產(chǎn)中具有優(yōu)勢。聚合物可以具有任何分子量，且可以是支鏈或無支鏈型。附接至抗體上的聚合物數(shù)量可以變化，而且如果附接了超過一個聚合物，則它們可以是相同或不同的分子。一般而言，可以基于多種考慮來確定用于衍生化的聚合物的數(shù)量和/或類型，這些考慮包括但不限于抗體要改進(jìn)的具體性質(zhì)或功能、抗體衍生物是否將用于限定條件下的治療等。

在另一個實施方案中，提供了抗體與可以通過暴露于輻射而選擇性加熱的非蛋白質(zhì)部分的綴合物。在一個實施方案中，非蛋白質(zhì)部分是碳納米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。輻射可以具有任何波長，且包括但不限于這樣的波長，其對普通細(xì)胞沒有損害，但是將非蛋白質(zhì)部分加熱至抗體-非蛋白質(zhì)部分附近的細(xì)胞被殺死的溫度。

重組方法和組合物

可以使用重組方法和組合物產(chǎn)生抗體，例如如美國專利號4,816,567中所描述。在一個實施方案中，提供了編碼本文所描述的抗Aβ抗體的分離核酸。所述核酸可以編碼包含所述抗體的VL的氨基酸序列和/或包含所述抗體的VH的氨基酸序列(例如，抗體的輕鏈和/或重鏈)。在另一個實施方案中，提供一個或多個包含所述核酸的載體(例如，表達(dá)載體)。在另一個實施方案中，提供包含所述核酸的宿主細(xì)胞。在一個這類實施方案中，宿主細(xì)胞包含(例如，已被其轉(zhuǎn)化)：(1)含有核酸的載體，該核酸編碼含有抗體的VL的氨基酸序列和含有抗體的VH的氨基酸序列；或(2)含有核酸的第一載體，該核酸編碼含有抗體的VL的氨基酸序列，以及含有核酸的第二載體，該核酸編碼含有抗體的VH的氨基酸序列。在一個實施方案中，宿主細(xì)胞是真核的，例如，中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或淋巴樣細(xì)胞(例如，Y0、NS0、Sp20細(xì)胞)。在一個實施方案中，提供制備抗Aβ抗體的方法，其中該方法包括在適于表達(dá)所述抗體的條件下培養(yǎng)如以上提供的含有編碼所述抗體的核酸的宿主細(xì)胞，并任選地從宿主細(xì)胞(或宿主細(xì)胞培養(yǎng)基)回收抗體。

就抗Aβ抗體的重組生成而言，分離例如如上所述的編碼抗體的核酸并插入到用于在宿主細(xì)胞中進(jìn)一步克隆和/或表達(dá)的一個或多個載體中。所述核酸可以使用常規(guī)程序(例如，通過使用能特異性結(jié)合編碼抗體的重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)來容易地分離和測序。

適用于抗體編碼載體的克隆或表達(dá)的宿主細(xì)胞包括本文所描述的原核或真核細(xì)胞。例如，抗體可以在細(xì)菌中產(chǎn)生，特別是當(dāng)不需要糖基化和Fc效應(yīng)子功能時。關(guān)于抗體片段和多肽在細(xì)菌中的表達(dá)，參見例如美國專利號5,648,237、5,789,199和5,840,523。(還參見Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編輯.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254頁，其描述了抗體片段在大腸桿菌中的表達(dá))。表達(dá)后，抗體可以從可溶性部分中的細(xì)菌細(xì)胞漿中分離并且可以被進(jìn)一步純化。

除了原核生物以外，真核微生物例如絲狀真菌或酵母是適用于抗體編碼載體的克隆或表達(dá)宿主，包括糖基化路徑已經(jīng)被“人源化”的真菌和酵母菌株，從而產(chǎn)生具有部分或完全人類糖基化模式的抗體。參見Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)，和Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。

適用于表達(dá)糖基化抗體的宿主細(xì)胞還源于多細(xì)胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)。無脊椎動物細(xì)胞的實例包括植物和昆蟲細(xì)胞。已經(jīng)鑒別出可以與昆蟲細(xì)胞共同使用，特別是用于轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細(xì)胞的大量桿狀病毒菌株。

植物細(xì)胞培養(yǎng)物也可以用作宿主。參見例如美國專利號5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在轉(zhuǎn)基因植物中產(chǎn)生抗體的PLANTIBODIES^TM技術(shù))。

脊椎動物細(xì)胞也可以用作宿主。例如，適于懸浮生長的哺乳動物細(xì)胞系可以是有用的。有用的哺乳動物宿主細(xì)胞系的其它實例是通過SV40(COS-7)轉(zhuǎn)化的猴腎CV1細(xì)胞系；人類胚胎腎細(xì)胞系(如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所描述的293或293細(xì)胞)；乳倉鼠腎細(xì)胞(BHK)；小鼠睪丸支持細(xì)胞(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所描述的TM4細(xì)胞)；猴腎細(xì)胞(CV1)；非洲綠猴腎細(xì)胞(VERO-76)；人宮頸癌細(xì)胞(HELA)；犬腎細(xì)胞(MDCK；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細(xì)胞(BRL 3A)；人肺細(xì)胞(W138)；人肝細(xì)胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所描述的TRI細(xì)胞；MRC 5細(xì)胞；和FS4細(xì)胞。其它有用的哺乳動物宿主細(xì)胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，包括DHFR-CHO細(xì)胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤細(xì)胞系如Y0、NS0和Sp2/0。關(guān)于適用于抗體生成的某些哺乳動物宿主細(xì)胞系的綜述，參見例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。

分析

本文所提供的抗Aβ抗體可以通過本領(lǐng)域中已知的各種分析針對其物理/化學(xué)性質(zhì)和/或生物活性來識別、篩選或表征。

結(jié)合分析和其它分析

在一個方面，測試本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合活性，例如通過已知的方法如ELISA、西方印跡法等。

在另一個方面，可以利用競爭分析來識別與本發(fā)明的抗Aβ抗體競爭地結(jié)合Aβ的抗體。在某些實施方案中，這種競爭抗體結(jié)合被克雷內(nèi)治單抗或本文所指定的另一種抗Aβ抗體結(jié)合的相同表位(例如線性或構(gòu)象表位)。用于繪制與抗體結(jié)合的表位的詳細(xì)示例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”，Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。

在示例性競爭分析中，在溶液中培養(yǎng)呈所需形式(例如，單體、低聚物或原纖維)的固定化Aβ，所述溶液包含與Aβ結(jié)合的第一標(biāo)記抗體(例如，克雷內(nèi)治單抗)和待測試其與第一抗體競爭結(jié)合Aβ的能力的第二未標(biāo)記抗體。第二抗體可以存在于雜交瘤上清液中。作為對照，在包含第一標(biāo)記抗體但不含第二未標(biāo)記抗體的溶液中培養(yǎng)固定化Aβ。在允許第一抗體與Aβ結(jié)合的條件下培養(yǎng)后，去除過量的未結(jié)合抗體，并測定與固定化Aβ相關(guān)的標(biāo)記的量。如果與固定化Aβ相關(guān)的標(biāo)記的量在測試樣品中相對于在對照樣品中大體上減少，則這指示第二抗體與第一抗體競爭結(jié)合Aβ。參見Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

活性分析

在一個方面，提供了用于鑒別具有生物活性(例如克雷內(nèi)治單抗的生物活性)的抗Aβ抗體的分析。生物活性可以包括但不限于例如防止單體Aβ聚集成低聚Aβ，或低聚Aβ解聚成單體Aβ。還提供了在體內(nèi)和/或體外具有這種生物活性的抗體。

在某些實施方案中，測試本發(fā)明抗體的這種生物活性。

用于診斷和檢測的方法和組合物

在某些實施方案中，本文所提供的任何抗Aβ抗體均可用于檢測生物樣品中Aβ的存在。如本文所使用，術(shù)語“檢測”涵蓋定量或定性檢測。在某些實施方案中，生物樣品包括細(xì)胞或組織，諸如血清、血漿、鼻拭物、痰、腦脊液、眼房水等，或從生物體獲得的組織或細(xì)胞樣品，諸如含有神經(jīng)或腦組織的樣品。

在一個實施方案中，提供了用于診斷或檢測方法中的抗Aβ抗體。在另一方面，提供了檢測生物樣品中Aβ的存在的方法。在某些實施方案中，方法包括在允許抗Aβ抗體與Aβ結(jié)合的條件下使生物樣品與如本文所述的抗Aβ抗體接觸，并檢測抗Aβ抗體與Aβ之間是否形成復(fù)合物。這種方法可以是體外或體內(nèi)方法。

可以使用本發(fā)明抗體診斷的示例性病癥是由淀粉樣蛋白或淀粉樣蛋白樣蛋白引起或與其相關(guān)的疾病和病癥。這些包括但不限于由單體、原纖維或聚合物狀態(tài)的淀粉樣蛋白樣蛋白或所述三種的任意組合(包括淀粉樣蛋白斑)的存在或活性引起的疾病和病癥。示例性疾病包括但不限于繼發(fā)性淀粉樣變性和年齡相關(guān)性淀粉樣變性，諸如包括但不限于下述的疾病：神經(jīng)系統(tǒng)病癥如阿爾茨海默氏病(“AD”)、以先天性記憶能力喪失為特征的疾病或病狀如(例如)輕度認(rèn)知障礙(MCI)、路易體癡呆癥、唐氏綜合癥、遺傳性腦出血伴淀粉樣變性(Dutch型)、關(guān)島帕金森病-癡呆復(fù)合征和其它基于淀粉樣蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病，諸如進(jìn)行性核上麻痹、多發(fā)性硬化、克雅病、帕金森病、HIV相關(guān)性癡呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、包含體肌炎(IBM)、成年發(fā)作型糖尿病、內(nèi)分泌腫瘤和老年心臟淀粉樣變性，以及多種眼部疾病，包括黃斑變性、玻璃疣相關(guān)性視神經(jīng)病變、青光眼和由β-淀粉樣蛋白沉積引起的白內(nèi)障。

在某些實施方案中，提供了標(biāo)記的抗Aβ抗體。標(biāo)記包括但不限于：直接檢測的標(biāo)記或部分(例如熒光標(biāo)記、顯色標(biāo)記、電子致密標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記和放射性標(biāo)記)；以及例如通過酶促反應(yīng)或分子相互作用間接檢測的部分，例如酶或配體。示例性標(biāo)記包括但不限于：放射性同位素³²P、¹⁴C、¹²⁵I、³H和¹³¹I；熒光團(tuán)例如稀土螯合物或熒光素和其衍生物、羅丹明(rhodamine)和其衍生物、丹磺酰、傘酮(umbelliferone)、蟲熒光素酶例如螢火蟲熒光素酶和細(xì)菌熒光素酶(美國專利號4,737,456)、蟲熒光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶；糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；雜環(huán)氧化酶例如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶，其與采用過氧化氫來氧化染料前體的酶例如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶偶聯(lián)；生物素/親和素、自旋標(biāo)記、噬菌體標(biāo)記、穩(wěn)定自由基等。

藥物制劑

本文所描述的抗Aβ抗體的藥物制劑是通過將具有所需純度的此類抗體或分子與一種或多種可選的藥學(xué)上可接受的載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編輯(1980))混合成凍干制劑或水溶液形式而制備。藥學(xué)上可接受的載劑通常在所用的劑量和濃度下對接受者無毒，且包括但不限于：緩沖液，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基芐基氯化銨、氯化六烴季銨、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯酚、丁醇或芐醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇和間甲酚)；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑例如EDTA；糖類例如蔗糖、甘露糖、海藻糖或山梨醇；成鹽抗衡離子例如鈉；金屬復(fù)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑例如聚乙二醇(PEG)。本文中的示例性藥學(xué)上可接受的載劑進(jìn)一步包括間質(zhì)性藥物分散劑例如可溶性中性-活性透明質(zhì)酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明質(zhì)酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和包括rHuPH20的使用方法描述于美國專利公開號2005/0260186和2006/0104968中。在一個方面，將sHASEGP與一種或多種額外的糖胺聚糖例如軟骨素酶組合。

在一個實施方案中，可以在精氨酸緩沖液中配制本發(fā)明的抗體。在一個方面，精氨酸緩沖液可以是精氨酸琥珀酸鹽緩沖液。在一個這樣的方面，精氨酸琥珀酸鹽緩沖液的濃度可以是50mM或更高。在另一個這樣的方面，精氨酸琥珀酸鹽緩沖液的濃度可以是100mM或更高。在另一個這樣的方面，精氨酸琥珀酸鹽緩沖液的濃度可以是150mM或更高。在另一個這樣的方面，精氨酸琥珀酸鹽緩沖液的濃度可以是200mM或更高。在另一個方面，精氨酸緩沖液制劑可以進(jìn)一步包含表面活性劑。在另一個這樣的方面，表面活性劑是聚山梨醇酯。在另一個這樣的方面，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。在另一個這樣的方面，聚山梨醇酯20在制劑中的濃度為0.1％或更小。在另一個這樣的方面，聚山梨醇酯20在制劑中的濃度為0.05％或更小。在另一個方面，精氨酸緩沖液制劑的pH在4.5與7.0之間。在另一個方面，精氨酸緩沖液制劑的pH在5.0與6.5之間。在另一個方面，精氨酸緩沖液制劑的pH在5.0與6.0之間。在另一個方面，精氨酸緩沖液制劑的pH為5.5。在任何前述實施方案和方面中，本發(fā)明的抗體可以是克雷內(nèi)治單抗。

示例性凍干抗體制劑描述于美國專利號6,267,958中。水性抗體制劑包括描述于美國專利號6,171,586和W02006/044908中的那些，后者的制劑包括組氨酸-乙酸鹽緩沖液。

本文中的制劑還可以包含多于一種治療特定適應(yīng)癥所需要的活性成分，優(yōu)選那些具有不互相產(chǎn)生不利影響的互補(bǔ)活性的活性成分。例如，可能需要進(jìn)一步提供一種或多種化合物來預(yù)防或治療阿爾茨海默氏病的癥狀。此類活性成分適合以對于預(yù)期目的有效的量組合存在。

可以將活性成分包埋在例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊)中或粗乳液中。此類技術(shù)公開于Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.編輯(1980)中。

可以制備持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適實例包括包含抗體的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)，所述基質(zhì)呈成形制品形式，例如薄膜或微膠囊。

用于體內(nèi)施用的制劑一般是無菌的?？梢岳缤ㄟ^經(jīng)無菌濾膜過濾容易地實現(xiàn)無菌性。

治療方法和組合物

如本文中所示，克雷內(nèi)治單抗的靜脈內(nèi)施用減少罹患AD的患者中的疾病進(jìn)展。具體來說，患有輕到中度AD的患者(包括患有輕度AD的患者和ApoE4陽性患者)以及具有常見于被診斷為AD的患者中的腦淀粉樣蛋白負(fù)荷的患者在經(jīng)克雷內(nèi)治單抗治療時相較于經(jīng)安慰劑治療時展現(xiàn)出降低的認(rèn)知衰退速率。所述疾病越溫和(基于漸增的MMSE評分)，治療組中的衰退減少相比于安慰劑組越大。這些結(jié)果通過由克雷內(nèi)治單抗接觸的目標(biāo)的其它跡象(包括在腦脊液中檢測到的Aβ水平的增加和淀粉樣蛋白在腦中累積的減少)進(jìn)一步證實。此外，抗體的相對高的劑量-15mg/kg-沒有增加已在其它抗Aβ抗體的試驗中觀察到的ARIA型不良事件的發(fā)生率。

因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療AD，包括輕到中度AD、輕度AD和早期AD。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療淀粉樣變性。在一個這樣的實施方案中，淀粉樣變性是輕度認(rèn)知障礙。在另一個這樣的實施方案中，淀粉樣變性是唐氏綜合癥。在另一個這樣的實施方案中，淀粉樣變性是遺傳性腦出血伴淀粉樣變性(Dutch型)。在另一個這樣的實施方案中，淀粉樣變性是關(guān)島帕金森病-癡呆復(fù)合征。在另一個這樣的實施方案中，淀粉樣變性是涉及眼睛中的玻璃疣或其它淀粉樣沉積物的眼部疾病。在一個方面，眼部疾病是黃斑變性。在另一個方面，眼部疾病是玻璃疣相關(guān)性視神經(jīng)病變。在另一個方面，眼部疾病是青光眼。在另一個方面，眼部疾病是白內(nèi)障。在任何前述實施方案和方面中，本發(fā)明的抗體可以是克雷內(nèi)治單抗。

通常首先評估患者中的一種或多種淀粉樣變性的存在，然后確定本發(fā)明的抗體用于治療該患者的合適性。作為一個非限制性實例，可以使用“NINCDS-ADRDA”(神經(jīng)和交際障礙和中風(fēng)-阿爾茨海默氏病相關(guān)病癥評估)標(biāo)準(zhǔn)診斷患者中的AD。參見McKhann等人，1984,Neurology 34:939-44。待施用本發(fā)明的一種或多種抗體的潛在患者還可以被測試一種或多種遺傳標(biāo)記的存在或不存在，所述遺傳標(biāo)記可能使該患者傾向于具有(i)該患者經(jīng)歷一種或多種淀粉樣變性的較高或較低的可能性，或(ii)該患者在本發(fā)明抗體的施用過程中經(jīng)歷一個或多個不良事件或副作用的較高或較低的可能性。作為一個非限制性實例，已知攜帶ApoE4等位基因的患者比缺乏該等位基因的患者具有大體上更高的發(fā)展AD的風(fēng)險(Saunders等人，Neurology 1993；43:1467-72；Prekumar等人，Am.J.Pathol.1996；148:2083-95)，并且此類患者在貝平珠單抗(另一個抗Aβ抗體)的臨床試驗中觀察到的ARIA型不良事件中被不成比例地表現(xiàn)(Sperling等人，Alzheimer’s&Dementia 2011,7:367-385；Salloway等人，N.Engl.J.Med.2014,370:322-333)。

在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療患者中的輕到中度AD?；颊呖梢允茿poE4陽性或ApoE4陰性。在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療輕度AD。在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療罹患輕到中度AD或輕度AD的ApoE4陽性患者。在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療罹患輕度AD的患者。

在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療具有20和30之間、20和26之間、24和30之間、21和26之間、22和26之間、22和28之間、23和26之間、24和26之間或25和26之間的MMSE評分的患者。在一些實施方案中，患者具有22和26之間的MMSE評分。如本文中所使用，兩個數(shù)字之間的MMSE評分包括在該范圍的每一端的數(shù)字。例如，22和26之間的MMSE評分包括22和26的MMSE評分。

在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療“淀粉樣蛋白陽性”患者，例如具有腦淀粉樣蛋白沉積物(它們是被診斷為AD的患者的特征)的患者或具有陽性florbetapir PET掃描的患者。在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于減少腦淀粉樣蛋白沉積物或神經(jīng)炎性斑的累積(即，減少腦淀粉樣蛋白負(fù)擔(dān)或負(fù)荷的增加)。

此外，本發(fā)明的抗體可用于治療輕到中度AD而不增加ARIA-E或ARIA-H的發(fā)生率。在一些實施方案中，患者罹患輕度AD。在一些實施方案中，患者為ApoE4陽性。在一些實施方案中，患者為ApoE4陽性且罹患輕度AD。

如本文的實施例中所證實，治療效果在患有輕度形式的AD的患者中增強(qiáng)。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明的抗體被用于治療患有早期AD的患者。在某些實施方案中，待治療的患者具有以下特性中的一個或多個：(a)由AD引起的輕度認(rèn)知障礙(MCI)；(b)指示沒有臨床可檢測缺陷的阿爾茨海默氏病的一種或多種生物標(biāo)記；(c)使用自由和暗示選擇性提醒測試(FCSRT)量化為27或更大的評分的客觀記憶喪失；24-30的MMSE；(d)0.5的總體臨床癡呆評級(CDR)；和(e)陽性淀粉樣蛋白PET掃描(如由合格的讀數(shù)器所測定)。

本發(fā)明的抗體是以與良好的醫(yī)學(xué)實踐一致的方式進(jìn)行配制、給藥和施用。在此情況下的考慮因素包括所治療的特定病癥、所治療的特定哺乳動物、個體受試者的臨床狀況、病癥的起因、藥劑的遞送部位、施用方法、施藥時間表和醫(yī)療從業(yè)人員已知的其它因素。

施用途徑

本發(fā)明的抗體(和任何其它治療劑)可以通過任何合適的方式來施用，包括腸胃外、肺內(nèi)和鼻內(nèi)施用以及如果期望用于局部治療，病灶內(nèi)施用。腸胃外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。給藥可以通過任何合適的途徑，例如通過注射如靜脈內(nèi)或皮下注射，這部分取決于施用是短暫還是長期的。在一個實施方案中，皮下注射所述抗體。在另一個實施方案中，靜脈注射所述抗體。在另一個實施方案中，使用注射器(例如，預(yù)填充的或未預(yù)填充)或自動注射器施用所述抗體。在另一個實施方案中，吸入所述抗體。

給藥

對于淀粉樣變性的治療而言，本發(fā)明抗體(當(dāng)單獨或與一種或多種其它額外的治療劑組合使用時)的適當(dāng)劑量將取決于待治療的疾病的具體類型、抗體的類型、疾病的嚴(yán)重度和病程、先前療法、患者的臨床病史和對所述抗體的反應(yīng)以及主治醫(yī)師的判斷。在一次或一系列治療中適宜地對患者施用所述抗體。本文預(yù)期了各種給藥時間表，包括但不限于在不同時間點的單次或多次施用、推注施用和脈沖輸注。

根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重度，約0.3mg/kg至100mg/kg(例如15mg/kg-100mg/kg，或該范圍內(nèi)的任何劑量)的抗體可以是無論例如通過一次或多次分開施用或通過連續(xù)輸注而施用給患者的初始候選劑量。取決于上述因素，一個典型的日劑量可以在從約15mg/kg至100mg/kg或更多的范圍內(nèi)。所述劑量可以以單劑量或分劑量(例如，30mg/kg的總劑量被分成15mg/kg的兩個劑量)來施用。對于持續(xù)數(shù)周或更長的重復(fù)施用，根據(jù)狀況，治療一般會持續(xù)至出現(xiàn)對疾病癥狀的所需抑制?？贵w的一個示例性劑量將在從約10mg/kg至約50mg/kg的范圍內(nèi)。因此，可以向患者施用約0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、3mg/kg、4.0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg的一個或多個劑量(或其任何組合)。在一些實施方案中，施用的總劑量在50mg至2500mg的范圍內(nèi)。可以向患者施用約50mg、約100mg、200mg、300mg、400mg、約500mg、約600mg、約700mg、約720mg、約1000mg、約1050mg、約1100mg、約1200mg、約1300mg、約1400mg、約1500mg、約1600mg、約1700mg、約1800mg、約1900mg、約2000mg、約2050mg、約2100mg、約2200mg、約2300mg、約2400mg或約2500mg的示例性劑量(或其任何組合)。此類劑量可以間歇地施用，例如每周、每兩周、每三周、每四周、每個月、每兩個月、每三個月或每六個月。在一些實施方案中，患者接受1至35個劑量(例如，約18個劑量的抗體)。然而，可以使用其它給藥方案。這種療法的進(jìn)展可以通過常規(guī)技術(shù)和分析來監(jiān)測。

在某些實施方案中，本發(fā)明的抗體是以15mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg的劑量或平劑量(例如300mg、500mg、700mg、800mg或更高)來施用。在一些實施方案中，通過靜脈注射每2周或每4周施用所述劑量并持續(xù)一段時間。在一些實施方案中，通過皮下注射每2周或每4周施用所述劑量并持續(xù)一段時間。在某些實施方案中，所述時間段是6個月、一年、十八個月、兩年、五年、十年、15年、20年或患者的一生。

監(jiān)測/評估對治療性治療的反應(yīng)

如本公開的方法中所用，抗體或其抗原結(jié)合片段為患者提供治療效果或益處。在某些實施方案中，治療益處是延遲或抑制AD的進(jìn)展或臨床、功能或認(rèn)知衰退的減少。在一些實施方案中，治療效果或益處反映在“患者反應(yīng)”或“反應(yīng)”(及其語法變型)中?；颊叻磻?yīng)可使用指示對患者的益處的任一終點來評估，包括(但不限于)(1)在一定程度上抑制疾病進(jìn)展，包括減緩和完全阻止；(2)斑塊數(shù)量減少或大腦淀粉樣蛋白累積減少；(3)一個或多個評估度量的改良，包括(但不限于)ADAS-Cog、iADL和COR-SOB量表；(4)患者每日活動的改良；(5)腦脊髓液中一種或多種生物標(biāo)記(例如Aβ)的濃度的增加；和(6)一種或多種生物指示AD存在的標(biāo)記降低。患者反應(yīng)的評估還可以包括評估可能出現(xiàn)的可與治療相關(guān)聯(lián)的任何不良事件。

在一個實施方案中，在利用本發(fā)明抗體的療法過程之前、在此期間和/或之后評估患者的認(rèn)知能力和日?；顒?。已開發(fā)許多認(rèn)知和活動評價工具用于對心智功能、認(rèn)知和神經(jīng)功能缺陷進(jìn)行評價、診斷和評分。這些工具包括(但不限于)ADAS-Cog，包括12項ADAS-Cog(ADAS-Cog12)、13項ADAS-Cog(ADAS-Cog13)、14項ADAS-Cog(ADAS-Cog14)；CDR-SOB，包括CDR判斷與問題解決和CDR記憶分量；工具性日常生活活動(iADL)；和MMSE。

“ADAS-Cog”是指阿爾茨海默氏病評估量表認(rèn)知子量表，即多部分認(rèn)知評估。參見Rosen等人，1984,Amer.J.Psych.141:1356-1364；Mohs等人,1997,Alzheimer’s Disease Assoc.Disorders 11(2):S13-S21。ADAS-Cog的數(shù)值評分越高，所測試患者的缺陷或障礙相對于另一具有低評分的個體越大。ADAS-Cog可以用作評價AD的治療在治療上是否有效的一種量度。ADAS-Cog評分增加指示患者的狀況變差，而ADAS-Cog評分下降表示患者的狀況得到改良。如本文所用，“ADAS-Cog性能衰退”或“ADAS-Cog評分增加”指示患者的狀況變差且可以反映AD的進(jìn)展。ADAS-Cog是評估多個認(rèn)知領(lǐng)域的檢查者實施的測試組(examiner-administered battery)，包括記憶、理解力、實踐、適應(yīng)和自然語言(Rosen等人，1984,Am J Psychiatr 141:1356-64；Mohs等人，1997,Alzheimer Dis Assoc Disord 11(S2):S13-S21)。ADAS-Cog是AD治療試驗中的標(biāo)準(zhǔn)主要終點(Mani 2004,Stat Med 23:305-14)。ADAS-Cog12是ADAS-Cog加上用于評價所學(xué)單詞列表的回憶的10點延遲單詞回憶項目的70點版本。其它ADAS-Cog量表包括ADAS-Cog13和ADAS-Cog14。

在一些實施方案中，本文所提供的治療方法提供認(rèn)知衰退的減少，如由相對于安慰劑低至少約30％、至少約35％、至少約40或至少約45％的ADAS-Cog評分所測量。

“MMSE”是指簡易智力狀態(tài)檢查，提供介于1與30之間的評分。參見Folstein等人，1975,J.Psychiatr.Res.12:189–98。26和更低的評分通常被認(rèn)為指示缺陷。MMSE的數(shù)值評分越低，所測試患者的缺陷或障礙相對于另一具有低評分的個體越大。MMSE評分增加可以指示患者狀況改良，而MMSE評分降低可表示患者狀況變差。

“CDR-SOB”是指臨床癡呆評定量表/得分總和。參見Hughes等人，1982.CDR-assesses 6components:memory,orientation,judgment/problem solving,community affairs,home and hobbies,and personal care。測試是對患者和照料者二者實施，且每一分量(或每一“盒(box)”)以0至3的標(biāo)度進(jìn)行評分。完整CDR-SOB評分基于所有6個盒的評分總和。還可以個別地針對每個盒或分量獲得子評分，例如CDR/記憶或CDR/判斷與問題解決。如本文所用，“CDR-SOB性能的衰退”或“CDR-SOB評分的增加”可以指示患者的狀況變差且可以反映AD進(jìn)展。在一些實施方案中，本文所提供的治療方法提供CDR-SOB性能的衰退相對于安慰劑至少約30％、至少約35％或至少約40％的減少。

“iADL”是指工具性日常生活活動量表(Instrumental Activities of Daily Living scale)。參見Lawton,M.P.,和Brody,E.M.,1969,Gerontologist 9:179-186。此量表測量執(zhí)行典型的日?；钚缘哪芰?，例如家務(wù)、洗衣、打電話、購物、準(zhǔn)備飯菜等。評分越低，個體在進(jìn)行日常生活活動中受到的消弱越多。在一些實施方案中，本文所提供的治療方法提供iADL量表中相對于安慰劑的至少約10％、至少約15％或至少約20％的衰退減少。

大腦淀粉樣蛋白負(fù)荷或負(fù)擔(dān)可使用神經(jīng)學(xué)成像技術(shù)和工具(例如使用PET(正電子發(fā)射斷層攝影)掃描)來測定。患者在(例如)施用治療之前和之后(或在整個治療方案過程期間以一個或多個間隔)隨時間獲得系列PET掃描，此可允許檢測大腦中增加、降低或無變化的淀粉樣蛋白負(fù)擔(dān)。此技術(shù)可以進(jìn)一步用于測定淀粉樣蛋白累積是增加還是減少。在一些實施方案中，大腦中淀粉樣蛋白沉積的檢測是使用florbetapir ¹⁸F實施。在一些實施方案中，如果基于掃描的中心化視覺讀出，其建立中度至頻繁神經(jīng)炎斑塊，那么認(rèn)為florbetapir PET掃描是陽性的。

共同施用

抗體不需要，但任選地與目前用于預(yù)防或治療所討論的病癥或其一種或多種癥狀的一種或多種藥劑一起配制。這類其它藥劑的有效量取決于抗體在制劑中的存在量、病癥或治療的類型和上述其它因素。這些藥劑通常以相同的劑量和如本文所描述的施用途徑，或本文所描述的劑量的約1至99％，或者以任何劑量和通過在經(jīng)驗/臨床上被確定為適當(dāng)?shù)娜魏瓮緩絹硎褂?。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的抗體可以與任何前述化合物同時共同施用，或可以在施用任何前述化合物之前或之后施用。

當(dāng)用本發(fā)明的抗體治療淀粉樣變性時，可以共同施用神經(jīng)藥物。該神經(jīng)藥物可以選自包括但不限于以下藥物的組：特異性靶向選自以下的標(biāo)靶的抗體或其它結(jié)合分子(包括但不限于小分子、肽、適體或其它蛋白結(jié)合劑)：β分泌酶、tau、早老素、淀粉樣前體蛋白或其部分、淀粉樣β肽或其低聚物或原纖維、死亡受體6(DR6)、晚期糖基化終產(chǎn)物的受體(RAGE)、帕金蛋白和亨廷頓蛋白；膽堿酯酶抑制劑(即，加蘭他敏、多奈哌齊、卡巴拉汀和他克林)；NMDA受體拮抗劑(即，美金剛胺)、單胺耗竭劑(即，丁苯喹嗪)；甲磺酸二氫麥角堿；抗膽堿能抗帕金森病劑(即，普環(huán)啶、苯海拉明、三己芬迪、苯托品、比哌立登和苯海索)；多巴胺能抗帕金森病劑(即，恩他卡朋、司來吉蘭、普拉克索、溴隱亭、羅替戈汀、司來吉蘭、羅匹尼羅、雷沙吉蘭、阿樸嗎啡、卡比多巴、左旋多巴、培高利特、托卡朋和金剛烷胺)；丁苯喹嗪；抗炎藥(包括但不限于非類固醇類抗炎藥)(即吲哚美辛和上文列舉的其它化合物)；激素(即，雌激素、孕酮和亮丙瑞林)；維生素(即，葉酸和煙酰胺)；二甲弗林；高?；撬?即，3-氨基丙磺酸；3APS)；血清素受體活性調(diào)節(jié)劑(即，扎利羅登)；干擾素和糖皮質(zhì)激素或皮質(zhì)類固醇。在一些實施方案中，共同施用一種或多種除克雷內(nèi)治單抗以外的抗Aβ抗體。這些抗Aβ抗體的非限制性實例包括蘇蘭珠單抗、貝平珠單抗、阿達(dá)魯單抗和格特魯單抗。術(shù)語“皮質(zhì)類固醇”包括但不限于氟替卡松(包括丙酸氟替卡松(FP))、倍氯米松(beclometasone)、布地奈德(budesonide)、環(huán)索奈德(ciclesonide)、莫米松(mometasone)、氟尼縮松(flunisolide)、倍他米松(betamethasone)和去炎松(betamethasone)?！翱晌肫べ|(zhì)類固醇”意指適用于通過吸入來遞送的皮質(zhì)類固醇。示例性可吸入皮質(zhì)類固醇為氟替卡松、二丙酸倍氯米松、布地奈德、糠酸莫米松、環(huán)索奈德、氟尼縮松和曲安奈德(triamcinolone acetonide)。

在利用本發(fā)明抗體治療為眼部疾病或病癥的淀粉樣變性時，可以選擇以下神經(jīng)疾病藥物：抗血管生成眼科用藥劑(即，貝伐珠單抗(bevacizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)和哌加他尼(pegaptanib))、眼科用青光眼藥劑(即，碳酸膽堿(carbachol)、腎上腺素、地美溴銨(demecarium bromide)、阿拉可樂定(apraclonidine)、溴莫尼定(brimonidine)、布林佐胺(brinzolamide)、左布諾洛爾(levobunolol)、噻嗎洛爾(timolol)、倍他洛爾(betaxolol)、多佐胺(dorzolamide)、比馬前列素(bimatoprost)、卡替洛爾(carteolol)、美替洛爾(metipranolol)、地匹福林(dipivefrin)、曲伏前列素(travoprost)和拉坦前列素(latanoprost))、碳酸酐酶抑制劑(即，醋甲唑胺(methazolamide)和乙酰唑胺(acetazolamide))、眼科用抗組胺劑(即，萘甲唑啉(naphazoline)、苯腎上腺素(phenylephrine)和四氫唑啉(tetrahydrozoline)、眼用潤滑劑、眼科用類固醇(即，氟米龍(fluorometholone)、脫氫皮質(zhì)醇(prednisolone)、氯替潑諾(loteprednol)、地塞米松(dexamethasone)、二氟潑尼酯(difluprednate)、利美索隆(rimexolone)、氟輕松(fluocinolone)、甲羥松(medrysone)和曲安奈德(triamcinolone)、眼科用麻醉劑(即，利多卡因(lidocaine))、丙美卡因(proparacaine)和(tetracaine))、眼科用抗感染藥(即，左氧氟沙星(levofloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、氯霉素(chloramphenicol)、枯草菌素/多黏桿菌素b(bacitracin/polymyxin b)、乙?；前?sulfacetamide)、妥布霉素(tobramycin)、阿奇霉素(azithromycin)、貝西沙星(besifloxacin)、諾氟沙星(norfloxacin)、磺胺異噁唑(sulfisoxazole)、慶大霉素(gentamicin)、碘苷(idoxuridine)、紅霉素(erythromycin)、鏈霉菌素(natamycin)、短桿菌素(gramicidin)、新霉素(neomycin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲氟尿苷(trifluridine)、更昔洛韋(ganciclovir)、阿糖腺苷(vidarabine))、眼科用抗發(fā)炎劑(即，奈帕芬胺(nepafenac)、酮洛酸(ketorolac)、氯比洛芬(flurbiprofen)、舒洛芬(suprofen)、環(huán)孢素(cyclosporine)、曲安奈德(triamcinolone)、雙氯芬酸(diclofenac)和氯酚酸(bromfenac)和眼科用抗組氨劑或去充血劑(即，酮替芬(ketotifen)、奧洛他定(olopatadine)、依匹斯汀(epinastine)、萘甲唑啉(naphazoline)、色甘酸(cromolyn)、四氫唑啉(tetrahydrozoline)、吡嘧司特(pemirolast)、貝托斯汀(bepotastine)、萘甲唑啉、苯腎上腺素、奈多羅米(nedocromil)、洛度沙胺(lodoxamide)、苯腎上腺素、依美斯汀(emedastine)和氮卓斯汀(azelastine))。應(yīng)該理解，以上制劑或治療方法中的任一個都可使用本發(fā)明的免疫綴合物替代抗Aβ抗體或除抗Aβ抗體以外使用本發(fā)明的免疫綴合物實施。

制品

在本發(fā)明的另一個方面，提供了包含可用于治療、預(yù)防和/或診斷上述病癥的材料的制品。所述制品包括容器和位于容器上或與容器相連的標(biāo)簽或包裝插頁。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、靜脈輸液袋等。容器可以由多種材料例如玻璃或塑料形成。容器內(nèi)含有單獨的組合物或與另一種有效治療、預(yù)防和/或診斷病狀的組合物組合的組合物，并且可以具有無菌接入口(例如容器可以為具有塞子的靜脈輸液袋或小瓶，塞子可被皮下注射針刺穿)。組合物中的至少一種活性劑為本發(fā)明抗體。標(biāo)簽或包裝插頁指示組合物用于治療特別的病狀。另外，所述制品可以包含(a)其中含有組合物的第一容器，其中該組合物包含本發(fā)明的抗體；和(b)其中含有組合物的第二容器，其中該組合物包含另一種細(xì)胞毒性劑或治療劑。在本發(fā)明的這個實施方案中的制品可以進(jìn)一步包括指示組合物可以用于治療特定病狀的包裝說明書?；蛘呋蛄硗?，所述制品可以進(jìn)一步包含第二(或第三)容器，其包含藥學(xué)上可接受的緩沖液，例如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)和葡萄糖溶液?？梢赃M(jìn)一步包括就商業(yè)和用戶立場而言可期望的其它材料，包括其它緩沖液、稀釋劑、過濾器、針和注射器。

應(yīng)該理解，任何上述制品都可以包括本發(fā)明的免疫綴合物來代替或補(bǔ)充抗Aβ抗體。

示例性實施方案

本文提供了用于說明的示例性實施方案。

1.一種減少被診斷為早期或輕到中度阿爾茨海默氏病(AD)的患者中的功能或認(rèn)知能力衰退的方法，其包括向罹患早期或輕到中度AD的患者施用能有效減緩所述患者中的功能或認(rèn)知能力衰退的用量的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(Aβ)抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)。

2.根據(jù)實施方案1所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

4.根據(jù)實施方案2或3所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

5.根據(jù)實施方案4所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

6.根據(jù)實施方案5所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

7.根據(jù)前述實施方案中任一項所述的方法，其中通過使用12項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)、13項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog13)或14項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)測試確定在施用所述抗體之前和之后的患者評分來評估認(rèn)知能力的衰退，任選地，其中如通過ADAS-Cog所測量的認(rèn)知衰退的減少相對于安慰劑為至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

8.根據(jù)實施方案7所述的方法，其中所述患者為ApoE4陽性。

9.根據(jù)實施方案7所述的方法，其中所述患者罹患輕度AD。

10.根據(jù)實施方案7所述的方法，其中所述患者罹患早期AD。

11.根據(jù)實施方案1至8中任一項所述的方法，其中所述患者在治療開始前具有至少20、20和30之間、20和26之間、24和30之間、21和26之間、22和26之間、22和28之間、23和26之間、24和26之間或25和26之間的MMSE評分。

12.根據(jù)實施方案11所述的方法，其中所述患者具有22和26之間的MMSE。

13.根據(jù)前述實施方案中任一項所述的方法，其中以10mg/kg至100mg/kg患者體重的劑量施用所述抗體。

14.根據(jù)實施方案13所述的方法，其中以至少15mg/kg的劑量施用所述抗體。

15.根據(jù)實施方案14所述的方法，其中以15mg/kg、30mg/kg、45mg/kg、50mg/kg或60mg/kg的劑量施用所述抗體。

16.根據(jù)實施方案13或14所述的方法，其中經(jīng)由靜脈內(nèi)注射施用所述抗體。

17.根據(jù)實施方案13至16中任一項所述的方法，其中每2周、每4周、每個月、每兩個月或每六個月施用所述抗體。

18.一種治療早期或輕到中度AD而不增加不良事件的風(fēng)險的方法，其包括向被診斷為早期或輕到中度AD的患者施用能有效治療所述AD而不增加治療出現(xiàn)的不良事件的風(fēng)險的用量的人源化單克隆抗Aβ抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)，其中所述不良事件選自：(i)淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-水腫(ARIA-E)和(ii)淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-出血(ARIA-H)。

19.根據(jù)實施方案18所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

20.根據(jù)實施方案18所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

21.根據(jù)實施方案19所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

22.根據(jù)實施方案21所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

23.根據(jù)實施方案22所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

24.根據(jù)實施方案18至23中任一項所述的方法，其中所述患者為ApoE4陽性。

25.根據(jù)實施方案18至23中任一項所述的方法，其中所述不良事件為ARIA-E。

26.根據(jù)實施方案25所述的方法，其中如果檢測到治療出現(xiàn)的ARIA-E，則停止施用所述抗體并且任選地施用針對ARIA-E的治療。

27.根據(jù)實施方案26所述的方法，其進(jìn)一步包括在解決所述ARIA-E后恢復(fù)施用所述抗體，其中所述抗體以低于停止施用前的劑量施用。

28.根據(jù)實施方案18所述的方法，其中如果在用所述抗體進(jìn)行治療期間在所述患者中檢測到一個或多個新的ARIA-E，則不再施用抗體，并且任選地向所述患者施用皮質(zhì)類固醇。

29.根據(jù)實施方案28所述的方法，其中所述患者為ApoE4陽性。

30.一種減少被診斷為早期或輕到中度阿爾茨海默氏病(AD)的患者中的功能或認(rèn)知能力衰退的方法，其包括向罹患早期或輕到中度AD的ApoE4陽性患者施用能有效減緩所述患者中的功能或認(rèn)知能力衰退的用量的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(Aβ)抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)。

31.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

32.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

33.根據(jù)實施方案31或32所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

34.根據(jù)實施方案33所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

35.根據(jù)實施方案34所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

36.根據(jù)實施方案30至35中任一項所述的方法，其中通過使用ADAS-Cog12、ADAS-Cog13或ADAS-Cog14測試確定在施用所述抗體之前和之后的患者評分來評估認(rèn)知能力的衰退，任選地，其中如通過ADAS-Cog所測量的認(rèn)知衰退的減少相對于安慰劑為至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

37.根據(jù)實施方案36所述的方法，其中所述患者具有輕度AD。

38.根據(jù)實施方案36所述的方法，其中所述患者具有早期AD。

39.根據(jù)實施方案30至37中任一項所述的方法，其中所述患者在治療開始前具有至少20、20和30之間、20和26之間、24和30之間、21和26之間、22和26之間、22和28之間、23和26之間、24和26之間或25和26之間的MMSE評分。

40.根據(jù)實施方案39所述的方法，其中所述患者具有22和26之間的MMSE評分。

41.根據(jù)實施方案30至39中任一項所述的方法，其中以10mg/kg至100mg/kg患者體重的劑量施用所述抗體。

42.根據(jù)實施方案41所述的方法，其中以至少15mg/kg的劑量施用所述抗體。

43根據(jù)實施方案42所述的方法，其中以15mg/kg、30mg/kg、45mg/kg、50mg/kg或60mg/kg的劑量施用所述抗體。

44.根據(jù)實施方案41或42所述的方法，其中經(jīng)由靜脈內(nèi)注射施用所述抗體。

45.根據(jù)實施方案41至44中任一項所述的方法，其中每2周、每4周、每個月、每兩個月或每六個月施用所述抗體。

46.一種治療早期或輕到中度AD而不增加不良事件的風(fēng)險的方法，其包括向被診斷為早期或輕到中度AD的ApoE4陽性患者施用能有效治療所述AD而不增加治療出現(xiàn)的不良事件的風(fēng)險的用量的人源化單克隆抗Aβ抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)，其中所述不良事件選自：(i)淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-水腫(ARIA-E)和(ii)淀粉樣蛋白相關(guān)成像異常-出血(ARIA-H)。

47.根據(jù)實施方案46所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

48.根據(jù)實施方案46所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

49.根據(jù)實施方案47所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

50.根據(jù)實施方案49所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

51.根據(jù)實施方案50所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

52根據(jù)實施方案46至51中任一項所述的方法，其中所述不良事件為ARIA-E。

53.根據(jù)實施方案52所述的方法，其中如果檢測到治療出現(xiàn)的ARIA-E，則停止施用所述抗體并且任選地施用針對ARIA-E的治療。

54.根據(jù)實施方案53所述的方法，其進(jìn)一步包括在解決所述ARIA-E后恢復(fù)施用所述抗體，任選地包括以低于停止施用前的劑量恢復(fù)施用所述抗體。

55.根據(jù)實施方案46所述的方法，其中如果在用所述抗體進(jìn)行治療期間在所述患者中檢測到一個或多個新的ARIA-E，則不再施用抗體，并且任選地向所述患者施用皮質(zhì)類固醇。

56.根據(jù)前述實施方案中任一項所述的方法，其中同時用選自由以下所組成的組的一種或多種藥劑治療所述患者：特異性結(jié)合標(biāo)靶的治療劑；膽堿酯酶抑制劑；NMDA受體拮抗劑；單胺耗竭劑；甲磺酸二氫麥角堿；抗膽堿能抗帕金森病劑；多巴胺能抗帕金森病劑；丁苯喹嗪；抗炎劑；激素；維生素；二甲弗林；高牛磺酸；血清素受體活性調(diào)節(jié)劑；干擾素和糖皮質(zhì)激素；除克雷內(nèi)治單抗以外的抗Aβ抗體；抗生素；抗病毒劑。

57.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是膽堿酯酶抑制劑。

58.根據(jù)實施方案57所述的方法，其中所述膽堿酯酶抑制劑選自由加蘭他敏、多奈哌齊、卡巴拉汀和他克林組成的組。

59.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是NMDA受體拮抗劑。

60.根據(jù)實施方案59所述的方法，其中所述NMDA受體拮抗劑是美金剛胺或其鹽。

61.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是特異性結(jié)合標(biāo)靶的治療劑且所述標(biāo)靶選自由以下所組成的組：β分泌酶、tau、早老素、淀粉樣前體蛋白或其部分、淀粉樣β肽或其低聚物或原纖維、死亡受體6(DR6)、晚期糖基化終產(chǎn)物的受體(RAGE)、帕金蛋白和亨廷頓蛋白。

62.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是單胺耗竭劑，任選為丁苯喹嗪。

63.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是選自由以下所組成的組的抗膽堿能抗帕金森病劑：普環(huán)啶、苯海拉明、三己芬迪、苯托品、比哌立登和苯海索。

64.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是選自由以下所組成的組的多巴胺能抗帕金森病劑：恩他卡朋、司來吉蘭、普拉克索、溴隱亭、羅替戈汀、司來吉蘭、羅匹尼羅、雷沙吉蘭、阿樸嗎啡、卡比多巴、左旋多巴、培高利特、托卡朋和金剛烷胺。

65.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是選自由非類固醇類抗炎藥和吲哚美辛組成的組的抗炎劑。

66.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是選自由雌激素、孕酮和亮丙瑞林組成的組的激素。

67.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是選自由葉酸和煙酰胺組成的組的維生素。

68.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是高?；撬幔錇?-氨基丙磺酸或3APS。

69.根據(jù)實施方案56所述的方法，其中所述藥劑是扎利羅登。

70.一種減緩被診斷為早期或輕到中度阿爾茨海默氏病(AD)的患者中的臨床衰退的方法，其包括向罹患早期或輕到中度AD的患者施用能有效減緩所述患者中的衰退的用量的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(Aβ)抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)。

71.根據(jù)實施方案70所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

72.根據(jù)實施方案70所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

73.根據(jù)實施方案71或72所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

74.根據(jù)實施方案73所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

75.根據(jù)實施方案74所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

76.根據(jù)實施方案70至75中任一項所述的方法，其進(jìn)一步包括通過使用12項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)、13項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog13)或14項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)測試確定在施用所述抗體之前和之后的患者評分所評估的認(rèn)知能力衰退，任選地，其中如通過ADAS-Cog所測量的認(rèn)知衰退的減少相對于安慰劑為至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

77.根據(jù)實施方案76所述的方法，其中所述患者為ApoE4陽性。

78.根據(jù)實施方案76所述的方法，其中所述患者罹患輕度AD。

79.根據(jù)實施方案76所述的方法，其中所述患者罹患早期AD。

80.根據(jù)實施方案70至78中任一項所述的方法，其中所述患者在治療開始前具有至少20、20和30之間、20和26之間、24和30之間、21和26之間、22和26之間、22和28之間、23和26之間、24和26之間或25和26之間的MMSE評分。

81.根據(jù)實施方案80所述的方法，其中所述患者具有22和26之間的MMSE評分。

82.根據(jù)實施方案70至80中任一項所述的方法，其中以10mg/kg至100mg/kg患者體重的劑量施用所述抗體。

83.根據(jù)實施方案82所述的方法，其中以至少15mg/kg的劑量施用所述抗體。

84.根據(jù)實施方案83所述的方法，其中以15mg/kg、30mg/kg、45mg/kg、50mg/kg或60mg/kg的劑量施用所述抗體。

85.根據(jù)實施方案82或83所述的方法，其中經(jīng)由靜脈內(nèi)注射施用所述抗體。

86.根據(jù)實施方案82至85中任一項所述的方法，其中每2周、每4周、每個月、每兩個月或每六個月施用所述抗體。

87.一種治療受試者中的早期或輕度AD的方法，其包括向罹患早期或輕度AD的患者施用能有效治療所述AD的用量的人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(Aβ)抗體，所述抗體結(jié)合在淀粉樣蛋白β(1-42)(SEQ ID NO:1)的殘基13和24內(nèi)。

88.根據(jù)實施方案87所述的方法，其中所述抗體能夠結(jié)合淀粉樣蛋白β的低聚和單體形式。

89.根據(jù)實施方案87所述的方法，其中所述抗體是IgG4抗體。

90.根據(jù)實施方案88或89所述的方法，其中所述抗體包含六個高變區(qū)(HVR)，其中：

(i)HVR-H1是SEQ ID NO:2；

(ii)HVR-H2是SEQ ID NO:3；

(iii)HVR-H3是SEQ ID NO:4；

(iv)HVR-L1是SEQ ID NO:6；

(v)HVR-L2是SEQ ID NO:7；且

(vi)HVR-L3是SEQ ID NO:8。

91.根據(jù)實施方案90所述的方法，其中所述抗體包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重鏈和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的輕鏈。

92.根據(jù)實施方案91所述的方法，其中所述抗體是克雷內(nèi)治單抗。

93.根據(jù)實施方案87至92中任一項所述的方法，其中所述用量能有效減少認(rèn)知能力的衰退，所述認(rèn)知能力的衰退是通過使用12項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)、13項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog13)或14項阿爾茨海默氏病評估量表-認(rèn)知(ADAS-Cog12)測試確定在施用所述抗體之前和之后的患者評分來評估，任選地，其中如通過ADAS-Cog所測量的認(rèn)知衰退的減少相對于安慰劑為至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

94.根據(jù)實施方案93所述的方法，其中所述患者為ApoE4陽性。

95.根據(jù)實施方案87至94中任一項所述的方法，其中所述患者在治療開始前具有至少20、20和30之間、20和26之間、24和30之間、21和26之間、22和26之間、22和28之間、23和26之間、24和26之間或25和26之間的MMSE評分。

96.根據(jù)實施方案95所述的方法，其中所述患者具有22和26之間的MMSE評分。

97.根據(jù)實施方案87至95中任一項所述的方法，其中以10mg/kg至100mg/kg患者體重的劑量施用所述抗體。

98.根據(jù)實施方案97所述的方法，其中以至少15mg/kg的劑量施用所述抗體。

99.根據(jù)實施方案98所述的方法，其中以15mg/kg、30mg/kg、45mg/kg、50mg/kg或60mg/kg的劑量施用所述抗體。

100.根據(jù)實施方案97或98所述的方法，其中經(jīng)由靜脈內(nèi)注射施用所述抗體。

101.根據(jù)實施方案97至100中任一項所述的方法，其中每2周、每4周、每個月、每兩個月或每六個月施用所述抗體。

102.根據(jù)實施方案70至101中任一項所述的方法，其中同時用選自由以下所組成的組的一種或多種藥劑治療所述患者：特異性結(jié)合標(biāo)靶的治療劑；膽堿酯酶抑制劑；NMDA受體拮抗劑；單胺耗竭劑；甲磺酸二氫麥角堿；抗膽堿能抗帕金森病劑；多巴胺能抗帕金森病劑；丁苯喹嗪；抗炎劑；激素；維生素；二甲弗林；高?；撬?；血清素受體活性調(diào)節(jié)劑；干擾素和糖皮質(zhì)激素；抗Aβ抗體；抗生素；抗病毒劑。

103.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是膽堿酯酶抑制劑。

104.根據(jù)實施方案103所述的方法，其中所述膽堿酯酶抑制劑選自由加蘭他敏、多奈哌齊、卡巴拉汀和他克林組成的組。

105.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是NMDA受體拮抗劑。

106.根據(jù)實施方案105所述的方法，其中所述NMDA受體拮抗劑是美金剛胺或其鹽。

107.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是特異性結(jié)合標(biāo)靶的治療劑且所述標(biāo)靶選自由以下所組成的組：β分泌酶、tau、早老素、淀粉樣前體蛋白或其部分、淀粉樣β肽或其低聚物或原纖維、死亡受體6(DR6)、晚期糖基化終產(chǎn)物的受體(RAGE)、帕金蛋白和亨廷頓蛋白。

108.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是單胺耗竭劑，任選為丁苯喹嗪。

109.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是選自由以下所組成的組的抗膽堿能抗帕金森病劑：普環(huán)啶、苯海拉明、三己芬迪、苯托品、比哌立登和苯海索。

110.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是選自由以下所組成的組的多巴胺能抗帕金森病劑：恩他卡朋、司來吉蘭、普拉克索、溴隱亭、羅替戈汀、司來吉蘭、羅匹尼羅、雷沙吉蘭、阿樸嗎啡、卡比多巴、左旋多巴、培高利特、托卡朋和金剛烷胺。

111.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是選自由非類固醇類抗炎藥和吲哚美辛組成的組的抗炎劑。

112.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是選自由雌激素、孕酮和亮丙瑞林組成的組的激素。

113.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是選自由葉酸和煙酰胺組成的組的維生素。

114.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是高牛磺酸，其為3-氨基丙磺酸或3APS。

115.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是扎利羅登。

116.根據(jù)實施方案102所述的方法，其中所述藥劑是除克雷內(nèi)治單抗以外的抗Aβ抗體。

實施例

實施例1--克雷內(nèi)治單抗(人源化抗Aβ單克隆抗體)在治療輕到中度阿爾茨海默氏病中的臨床研究

研究設(shè)計和目標(biāo)

使用安慰劑對照實施隨機(jī)化、雙盲II期試驗以評估人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(“Aβ”)抗體克雷內(nèi)治單抗在被診斷患有輕到中度阿爾茨海默氏病(AD)的患者中的作用。這項研究中包括的患者在篩選時年齡介于50與80之間，且根據(jù)NINCDS-ADRDA準(zhǔn)則診斷可能患有AD，其中：簡易智力狀態(tài)檢查(MMSE)評分為18至26點，老年抑郁量表(Geriatric Depression Scale)(GDS-15)評分小于6，完成6年教育(或良好的工作經(jīng)歷，無智力障礙或其它廣泛性發(fā)育障礙)。另外，對于接受同時AD治療(乙酰膽堿酯酶抑制劑或美金剛)的患者來說，確認(rèn)患者已服藥達(dá)至少3個月且在隨機(jī)化之前處于穩(wěn)定劑量達(dá)至少2個月。至少50％的招募患者為ApoE4陽性(攜帶至少一個ApoE4等位基因)。還允許招募同時接受一種或多種未排除的處方或非處方醫(yī)藥(例如非抗膽堿能抗抑郁藥、非典型抗精神病藥、非苯丙二氮呯抗焦慮劑、催眠劑、中樞作用的抗膽堿能抗組胺和中樞作用的抗膽堿能抗痙攣劑)的患者，前提是所施用劑量在隨機(jī)化之前恒定達(dá)至少1個月，并保持同一劑量達(dá)研究持續(xù)時間。

如果存在以下情況，則將個體從試驗中排除：遭受嚴(yán)重或不穩(wěn)定的醫(yī)學(xué)病況，根據(jù)研究者或贊助者的意見將干擾患者完成研究評價的能力或相當(dāng)于將需要機(jī)構(gòu)或醫(yī)藥照護(hù)；有或存在潛在影響大腦的臨床上明顯的血管疾?。挥袊?yán)重的、臨床上顯著的中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷病史(例如永久性神經(jīng)缺損或腦結(jié)構(gòu)性損害)；在篩選之前4周內(nèi)住院；先前經(jīng)過克雷內(nèi)治單抗或任何其它靶向Aβ的藥劑治療；或如果在生物療法中治療劑的5個半衰期或在篩選之前3個月的較長時間內(nèi)接受利用任何生物療法(除常規(guī)疫苗以外)的治療。

研究有三個時期，即，持續(xù)長達(dá)35天的篩選期、持續(xù)68周的治療期(在本文中稱為第1周、第2周等，直到第69周)和再持續(xù)16周的安全性隨訪期(在本文中稱為第70周等，直到第85周)。治療(或安慰劑)是經(jīng)由靜脈內(nèi)輸注施用。

將患者招募到試驗中，并以2:1(治療組:安慰劑組)隨機(jī)化比隨機(jī)分配到兩個組中的一個，治療(即，克雷內(nèi)治單抗)組和安慰劑組。在試驗中招募249名MMSE評分為18至26的患者(歸類為輕到中度AD)，其中165名接受治療劑且84名接受安慰劑。治療組中的121名患者和安慰劑中的61名患者具有介于20與26之間的MMSE評分(歸類為輕度AD)。在治療組內(nèi)，117名(或70.9％)為ApoE4陽性。在安慰劑組中，60名患者(或71.4％)為ApoE4陽性。參見圖4A-B(以患者狀況制表)。

實施43天的安全性導(dǎo)入評價以測定15mg/kg靜脈內(nèi)劑量對10mg/kg靜脈內(nèi)劑量的安全性和耐受性并選擇15mg/kg的劑量。在試驗的兩個組中的患者都是每4周接受盲性靜脈內(nèi)注射達(dá)68周；基于安全性導(dǎo)入的結(jié)果，治療組中的患者接受15mg/kg，而安慰劑組中的患者接受安慰劑的靜脈內(nèi)注射。參見圖5(方案示意圖)。

72周后針對以下評估患者：(a)ADAS-Cog12評分和CDR-SOB評分在第25周、第49周和第73周從試驗開始時的基線評分的變化，以評估疾病進(jìn)展的抑制和(b)克雷內(nèi)治單抗與安慰劑相比的安全性和耐受性。為估計任一所測量變化的統(tǒng)計顯著性，計算共變異分析、信賴區(qū)間和自基線的平均變化差異的最小平方估計。

通過測量整個實驗中治療意外不良事件的頻率和嚴(yán)重性評價克雷內(nèi)治單抗的安全性和耐受性，尤其癥狀性或無癥狀A(yù)RIA-E(包括腦血管源性水腫)、癥狀性或無癥狀A(yù)RIA-H(包括腦微出血)和腦大量出血的情形。通過液體衰減反轉(zhuǎn)恢復(fù)核磁共振成像(FLAIR MRI)評價在篩選期期間(在開始給藥之前)或在治療期期間(開始利用安慰劑或克雷內(nèi)治單抗給藥之后)腦血管源性腦水腫情況的存在和/或數(shù)量。參見例如Sperling等人，2011,Alzheimer’s&Dementia 7:367-385。通過橫向磁化松弛時間和額外非均勻退相梯度回波核磁共振成像(T2*加權(quán)GRE MRI)評價在篩選期期間(在開始給藥之前)或在治療期期間(開始利用安慰劑或克雷內(nèi)治單抗給藥之后)腦微出血的存在和/或數(shù)量。

結(jié)果

在73周的ADAS-Cog12測量證實接受克雷內(nèi)治單抗的患者顯示比接受安慰劑的患者的較小的疾病進(jìn)展。如圖6A-B中所示表和圖7-8中所示的圖表中所匯總，ADAS-Cog12評分的變化對于患有輕度AD的患者在治療組中比在安慰劑組中小約24％(p＝0.12)，且對于患有輕到中度AD的患者，在治療組中比在安慰劑組中小約16％(p＝0.19)。還在治療組對安慰劑組中的ApoE4陽性患者之間發(fā)現(xiàn)這種效應(yīng)：ADAS-Cog12評分的增加(其中ADAS-Cog12評分的增加指示疾病進(jìn)展)在接受克雷內(nèi)治單抗的患者中相對于接受安慰劑的患者小24.4％(p＝0.08，未針對多重性調(diào)整)。參見圖6A和圖9。ApoE4陽性患者包括患有輕度和中度AD的患者。當(dāng)將輕度和ApoE4陽性患者兩者的結(jié)果匯總時，這種效應(yīng)更明顯：在治療組中相對于安慰劑看到降低32.4％(p＝0.05，未針對多重性調(diào)整)。參見圖6A和圖10。治療效果隨招募時MMSE評分的增加而增加。如圖6B中所示，MMSE評分越高，在治療組中相對于安慰劑組ADAS-Cog12的減少百分比越大，其范圍在MMSE介于18與26之間的患者的約16％至高達(dá)MMSE介于25與26之間的患者的49％。還參見圖11。對于MMSE評分介于22與26之間的患者，在治療組中與安慰劑相比ADAS-Cog12的減少百分比為約35％。

CDR-SOB的變化示出類似治療效果趨勢。如圖12A中所示，對于MMSE在22與26的患者，在治療組對安慰劑中看到CDR-SOB評分變化的19％減少，且在MMSE評分在25至26的患者中，這種效果甚至更顯著，其中減少百分比為約63％(還參見圖13)。圖12B示出對于MMSE在22至26的患者，在查看記憶或判斷與問題解決分量評分時，減少百分比分別為約42％和30％。

研究進(jìn)一步證實克雷內(nèi)治單抗在以15mg/kg的劑量施用時不會增加ARIA型事件的發(fā)生率。在研究中，在接受克雷內(nèi)治單抗的患者中觀察到單一、無癥狀A(yù)RAI-E事件。ARAI-H事件的數(shù)量在治療組與安慰劑組之間達(dá)成平衡。

這些數(shù)據(jù)證實，當(dāng)在患有輕到中度AD的患者，具體地說患有輕度AD和/或為ApoE4陽性的患者中以15mg/kg的劑量施用時，克雷內(nèi)治單抗抑制疾病進(jìn)展，而不會增加治療意外不良事件(例如ARIA-E或ARIA-H)的發(fā)生率。

實施例2--克雷內(nèi)治單抗(人源化抗Aβ單克隆抗體)在治療輕到中度阿爾茨海默氏病和評估對淀粉樣蛋白負(fù)荷的影響的臨床研究研究設(shè)計和目標(biāo)

使用安慰劑對照實施隨機(jī)化、雙盲II期試驗以評估人源化單克隆抗淀粉樣蛋白β(“Aβ”)抗體克雷內(nèi)治單抗在被診斷患有輕到中度阿爾茨海默氏病(AD)的患者中的作用。這項研究中包括的患者在篩選時年齡介于50與80之間，且根據(jù)NINCDS-ADRDA準(zhǔn)則診斷可能患有AD，其中：簡易智力狀態(tài)檢查(MMSE)評分為18至26點，老年抑郁量表(Geriatric Depression Scale)(GDS-15)評分小于6，完成6年教育(或良好的工作經(jīng)歷，無智力障礙或其它廣泛性發(fā)育障礙)。只招募在篩選時具有陽性florbetapir PET(“淀粉樣蛋白陽性”)掃描的患者，這指示大腦淀粉樣蛋白負(fù)荷增加在被診斷患有AD的患者所預(yù)計的范圍內(nèi)，如通過florbetapir-PET掃描所評價。另外，至少50％的招募患者為ApoE4陽性。

將患者招募到試驗中，并以2:1(治療組:安慰劑組)隨機(jī)化比隨機(jī)分配到兩個組中的一個，治療(即，克雷內(nèi)治單抗)組和安慰劑組。在試驗的兩個組中，52名患者都是每4周接受盲性靜脈內(nèi)注射達(dá)73周。在治療組中，患者接受15mg/kg劑量的克雷內(nèi)治單抗。根據(jù)以下將患者分層：ApoE4狀態(tài)(載劑對非載劑)和MMSE評分。

收集以下數(shù)據(jù)的變化：ADAS-Cog12、淀粉樣蛋白負(fù)擔(dān)(如使用florbetapir-PET所測量)和腦脊髓液(CSF)中的Aβ含量。在篩選時、12個月和18個月隨訪時使用florbetapir 10mCi獲得Florbetapir PET掃描，其中50-min吸收期和30min發(fā)射掃描。將來自6X5分鐘框(或在無動態(tài)性能的掃描儀上1X15分鐘框)的影像正規(guī)化為標(biāo)準(zhǔn)空間，其中使用模板來自若干感興趣區(qū)域(ROI)提取平均信號。使用基線T1加權(quán)MRI掃描來精修模板ROI的容積。使用小腦皮質(zhì)或皮質(zhì)下白質(zhì)作為參考區(qū)域?qū)嵤┓治觥Ｔ诤Y選時和在第18個月施用之前收集CSF。測量CSF Aβ、tau和p-tau(181)。使用重復(fù)測量的ANCOVA或混合模型用于在研究終點的治療差異的統(tǒng)計分析。

患者特性、不良事件和PET掃描、MRI掃描和CSF取樣的時間示于圖14A-B中。

結(jié)果。在治療期結(jié)束時ADAS-Cog12測量值證實，接受克雷內(nèi)治單抗比接受安慰劑的患者示出更小的疾病進(jìn)展。在初始MMSE評分介于20與26之間的患者中觀察到認(rèn)知衰退減少54.3％(p＝0.2)。與此示出疾病進(jìn)展的觀察結(jié)果相一致，在利用克雷內(nèi)治單抗治療的患者對接受安慰劑的患者中，通過PET分析(利用皮質(zhì)下白質(zhì)參考區(qū)域)也觀察到淀粉樣蛋白沉積的累積降低。參見圖15A。此外，在治療組中檢測到Aβ的腦脊髓液濃度增加，這與靶標(biāo)由克雷內(nèi)治單抗結(jié)合相一致。參見圖15B。在每2周利用300mg皮下施用克雷內(nèi)治單抗治療的患者中對接受安慰劑的患者檢測到Aβ的腦脊髓液濃度的類似增加。

這些數(shù)據(jù)表明克雷內(nèi)治單抗結(jié)合其靶標(biāo)淀粉樣蛋白β，且在患有輕到中度AD的患者，具體地說患有輕度AD的患者中(包括具有通常被診斷患有AD的患者中所見的大腦淀粉樣蛋白負(fù)擔(dān)的患者中)以15mg/kg的劑量施用時抑制疾病進(jìn)展。

盡管已經(jīng)通過說明和實施例描述了上述發(fā)明的一些細(xì)節(jié)，但這些描述和實施例不應(yīng)該被視為限制本發(fā)明的范圍。本文所引用的所有專利申請和出版物以及科學(xué)文獻(xiàn)的公開內(nèi)容明確地通過引用整體并入以供所有目的使用。

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