本申請(qǐng)要求于2014年10月29日提交的印度專利申請(qǐng)?zhí)?087/DEL/2014、以及于2014年2月21日提交的印度專利申請(qǐng)?zhí)?99/DEL/2014的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，這些專利申請(qǐng)的披露內(nèi)容通過(guò)引用以其全文結(jié)合在此。領(lǐng)域本發(fā)明涉及(除其他之外)癌癥化學(xué)療法的領(lǐng)域并且涉及通過(guò)向患有癌癥的個(gè)體給予與另一種藥理活性劑組合的一種長(zhǎng)效IL-2Rαβ選擇性激動(dòng)劑來(lái)治療該患者。背景白介素-2受體(IL-2R)是在某些免疫細(xì)胞(諸如淋巴細(xì)胞)的表面上表達(dá)的結(jié)合IL-2細(xì)胞因子并且對(duì)IL-2細(xì)胞因子有反應(yīng)的異三聚體蛋白。該IL-2受體由3個(gè)亞基-IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ組成，其中IL-2Rα和IL-2Rβ各自具有對(duì)IL-2的結(jié)合親和力，而單獨(dú)IL-2Rγ不具有明顯親和力。泰茲(Thèze)等人(1994)當(dāng)今免疫學(xué)(Immunol.Today)17(10):481-486。此外，當(dāng)結(jié)合IL-2時(shí)對(duì)比單獨(dú)任一鏈，IL-2Rαβ異二聚體具有更快的締合速率和更慢的解離速率。利帕羅托(Liparoto)等人，分子識(shí)別雜志(J.Mol.Recognit.)12(5):316-321。CD4+調(diào)控性T細(xì)胞(其負(fù)責(zé)抑制免疫應(yīng)答)優(yōu)先表達(dá)IL-2R的IL-2Rαβ形式。因此，給予為IL-2Rαβ的激動(dòng)劑的化合物可以預(yù)期抑制免疫應(yīng)答。CD8+記憶T細(xì)胞(其負(fù)責(zé)增強(qiáng)免疫應(yīng)答)優(yōu)先表達(dá)IL-2R的IL-2Rβ形式。因此，給予為IL-2Rβ的激動(dòng)劑的化合物可以預(yù)期增強(qiáng)免疫應(yīng)答(通過(guò)例如增加CD8+記憶T細(xì)胞的增殖)。因此，給予IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑將有益于患有某些癌癥的患者，因?yàn)檫@樣做預(yù)期降低調(diào)控性T細(xì)胞的免疫抑制作用，同時(shí)增加CD8+記憶T細(xì)胞，由此募集患者自身的免疫系統(tǒng)來(lái)消除癌細(xì)胞。最佳地，這樣一種IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑還將在給藥之后展現(xiàn)出相對(duì)長(zhǎng)的暴露，由此進(jìn)一步提高患者對(duì)治療的應(yīng)答。在癌癥的治療中經(jīng)由給予IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑(其直接免疫活化)募集癌癥患者的免疫系統(tǒng)可以通過(guò)給予免疫抑制途徑的拮抗劑(例如，CTLA-4和PD-1的拮抗劑)而進(jìn)一步增強(qiáng)。因此，本發(fā)明尋求通過(guò)例如向患有癌癥的患者給予與免疫抑制途徑的基于藥理學(xué)的拮抗劑組合的IL-2Bβ選擇性激動(dòng)劑來(lái)解決(除其他之外)對(duì)于提供更有效的癌癥治療的持續(xù)需要。本發(fā)明解決了本領(lǐng)域中的該需要以及其他需要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，提供一種方法，該方法包括向癌癥患者給予以下各項(xiàng)的步驟：(a)IL-2Rβ活化量的一種長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑；以及(b)CTLA-4途徑抑制量的一種抗CTLA-4抗體或PD-1途徑抑制量的一種抗PD-1抗體。為清楚起見，關(guān)于根據(jù)該方法的步驟的順序，除非另外指明，該方法不限于上述步驟順序并且步驟(a)可以在執(zhí)行步驟(b)之前、之后或同時(shí)執(zhí)行。本發(fā)明的另外實(shí)施例在以下說(shuō)明和權(quán)利要求書中進(jìn)行闡述。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1、圖2和圖3分別是與CT26腫瘤模型上與一種抗CTLA-4抗體組合的一種受體選擇性長(zhǎng)效IL-2激動(dòng)劑的功效研究相關(guān)的平均腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積和體重的曲線圖，該研究在實(shí)例2中進(jìn)一步描述。圖4、圖5和圖6分別是與EMT6腫瘤模型上與一種抗CTLA-4抗體組合的一種受體選擇性長(zhǎng)效IL-2激動(dòng)劑的功效研究相關(guān)的持續(xù)30天的平均腫瘤體積、持續(xù)106天的平均腫瘤體積和體重的曲線圖，該研究在實(shí)例3中進(jìn)一步描述。圖7和圖8分別是與EMT6腫瘤模型上相較于與一種抗CTLA-4抗體組合的阿地白介素(Proleukin)，與一種抗CTLA-4抗體組合的一種受體選擇性長(zhǎng)效IL-2激動(dòng)劑的功效研究相關(guān)的腫瘤體積和體重的曲線圖，該研究在實(shí)例4中進(jìn)一步描述。圖9和圖10分別是與EMT6腫瘤模型上涉及與一種抗CTLA-4抗體組合的一種受體選擇性、長(zhǎng)效IL-2激動(dòng)劑的流式細(xì)胞術(shù)分析的功效研究相關(guān)的持續(xù)11天的腫瘤體積和體重的曲線圖，該研究在實(shí)例5中進(jìn)一步描述。圖11和圖12各自分別包括對(duì)應(yīng)于在實(shí)例5中進(jìn)一步描述的流式細(xì)胞術(shù)分析的免疫細(xì)胞群體的腫瘤和脾的圖。圖13和圖14分別是與CT26腫瘤模型上與一種抗PD-1抗體組合的一種受體選擇性長(zhǎng)效IL-2激動(dòng)劑的功效研究相關(guān)的平均腫瘤體積和體重的曲線圖，該研究在實(shí)例6中進(jìn)一步描述。圖15示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的I期之后的平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。圖16示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的I期之后的相對(duì)平均腫瘤體積和體重變化的兩個(gè)曲線圖。圖17示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的II期之后的相對(duì)體重變化的一個(gè)曲線圖。圖18示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的II期之后的平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。圖19示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的III期之后的平均腫瘤體積的一個(gè)曲線圖。圖20示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究的III期之后的體重變化和相對(duì)體重變化的兩個(gè)曲線圖。圖21示出在實(shí)例7中進(jìn)一步描述的一個(gè)三階段再激發(fā)研究過(guò)程中的平均腫瘤體積和個(gè)體腫瘤體積的兩個(gè)曲線圖。圖22示出與在實(shí)例8中進(jìn)一步描述的RSLAIL-2和抗CTLA-4組合研究有關(guān)的從第0天到第11天的平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。圖23示出與在實(shí)例8中進(jìn)一步描述的RSLAIL-2和抗CTLA-4組合研究有關(guān)的從第0天到第11天的相對(duì)平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。圖24示出與在實(shí)例8中進(jìn)一步描述的RSLAIL-2和抗PD-1組合研究有關(guān)的從第0天到第11天的平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。圖25示出與在實(shí)例8中進(jìn)一步描述的RSLAIL-2和抗PD-1組合研究有關(guān)的從第0天到第11天的相對(duì)平均腫瘤體積和體重的兩個(gè)曲線圖。詳細(xì)說(shuō)明如在本說(shuō)明書中所使用的，單數(shù)形式“一個(gè)(a)”、“一種(an)”和“該”包括復(fù)數(shù)個(gè)指示物，除非上下文中另外明確指明。在描述和要求本發(fā)明時(shí)，將依據(jù)以下所描述的定義使用以下術(shù)語(yǔ)。“水溶性的、非肽聚合物”指的是一種聚合物，該聚合物在室溫下在水中是至少35％(按重量計(jì))可溶的，優(yōu)選地大于70％(按重量計(jì))、并且更優(yōu)選地大于95％(按重量計(jì))可溶的。典型地，一種“水溶性”聚合物的一種未過(guò)濾的水性制劑傳輸相同溶液在過(guò)濾后傳輸?shù)墓獾牧康闹辽?5％(更優(yōu)選至少95％)。然而，最優(yōu)選的是該水溶性聚合物是至少95％(按重量計(jì))可溶于水的或完全可溶于水的。關(guān)于為“非肽的”，一種聚合物當(dāng)具有少于35％(按重量計(jì))的氨基酸殘基時(shí)是非肽的。術(shù)語(yǔ)“單體”、“單體亞單元”和“單體單元”在此可互換使用并且指的是一種聚合物的基本結(jié)構(gòu)單元之一。在均聚物的情況下，一個(gè)單一的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元形成該聚合物。在共聚物的情況下，兩個(gè)或更多個(gè)結(jié)構(gòu)單元重復(fù)出現(xiàn)--以一個(gè)模式或隨機(jī)地--以形成該聚合物。與本發(fā)明相結(jié)合使用的優(yōu)選的聚合物是均聚物。該水溶性的、非肽的聚合物包括一個(gè)或多個(gè)串聯(lián)附接的單聚體以形成一個(gè)單聚體鏈。如在此使用的“PEG“和“聚乙二醇”意指包括任何水溶性的聚(環(huán)氧乙烷)。除非另外指明，“PEG聚合物”或聚乙二醇是這樣一種物質(zhì)，其中基本上所有的(優(yōu)選所有的)單體亞單元是環(huán)氧乙烷亞單元，但是，該聚合物可以包含不同的封端部分或官能團(tuán)，例如用于共軛。用于在本發(fā)明中使用的PEG聚合物將包括兩種以下結(jié)構(gòu)之一：“(CH2CH2O)n-”或“-(CH2CH2O)n-1CH2CH2-”，取決于末端的一個(gè)或多個(gè)氧是否被置換(例如在合成轉(zhuǎn)化期間)。如上所述，對(duì)于這些PEG聚合物，該變量(n)的范圍是從約3到4000，并且整個(gè)PEG的末端基團(tuán)和架構(gòu)可以變化。關(guān)于一種聚合物的幾何學(xué)或整體結(jié)構(gòu)而言的“分支的”指的是具有從一個(gè)分支點(diǎn)伸出的兩個(gè)或更多個(gè)聚合物“臂”的聚合物。一個(gè)“生理學(xué)上可裂解的”或“可水解的”或“可降解的”鍵是與水在生理學(xué)條件下進(jìn)行反應(yīng)(即，被水解)的一個(gè)相對(duì)不穩(wěn)定的鍵。鍵在水中水解的趨勢(shì)可能不僅取決于在一個(gè)給定的分子之內(nèi)連接兩個(gè)原子的連接鍵的一般類型，而且取決于附接至這些原子上的取代基。適當(dāng)?shù)乃獠环€(wěn)定的或弱的連接鍵包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酸酐、縮醛、縮酮、酰氧基烷基醚、亞胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯以及碳酸酯?！懊缚山到獾倪B接鍵”意指經(jīng)受一種或多種酶降解的一個(gè)連接鍵。一個(gè)“穩(wěn)定的”連接鍵或鍵指的是在水中基本穩(wěn)定的一個(gè)化學(xué)鍵，也就是說(shuō)在生理?xiàng)l件下經(jīng)一段延長(zhǎng)的時(shí)間沒有經(jīng)受任何明顯程度的水解。水解穩(wěn)定的連接鍵的實(shí)例包括但不限于以下：碳碳鍵(例如在脂肪鏈中)、醚、酰胺、聚氨酯、胺等。大體上，一個(gè)穩(wěn)定的連接鍵是在生理?xiàng)l件下展示小于約1％-2％的每日水解率的一個(gè)連接鍵。代表性的化學(xué)鍵的水解速率可以在大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)教科書中發(fā)現(xiàn)。“實(shí)質(zhì)上”或“基本上”表示幾乎全部的或完全的，例如一些給定的數(shù)量的95％或更大、更優(yōu)選97％或更大、仍更優(yōu)選98％或更大、甚至更優(yōu)選99％或更大、還又更優(yōu)選99.9％或更大，最優(yōu)選99.99％或更大。“藥學(xué)上可接受的賦形劑”或“藥學(xué)上可接受的載體”指的是可以包含在本發(fā)明的組合物中的一種組分，對(duì)于患者該組分不會(huì)引起顯著的不良毒理學(xué)效應(yīng)。術(shù)語(yǔ)“患者”指的是患有或易發(fā)可通過(guò)給予如在此所述的本發(fā)明的一種化合物來(lái)預(yù)防或治療的病癥的活生物體，并且包括人和動(dòng)物兩者。如上文所指示，本發(fā)明涉及(除其他之外)一種方法，該方法包括向患有癌癥的患者給予以下各項(xiàng)的步驟：(a)IL-2Rβ活化量的一種長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑；以及(b)CTLA-4途徑抑制量的一種抗CTLA-4抗體或PD-1途徑抑制量的一種抗PD-1抗體。關(guān)于給予步驟(a)和(b)，這些給予步驟可以按任一順序(以及同時(shí)地)執(zhí)行并且本發(fā)明不在此方面進(jìn)行限制。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，給予步驟(a)將在給予步驟(b)之前進(jìn)行。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，給予步驟(b)將在給予步驟(a)之前進(jìn)行。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，兩個(gè)給予步驟(a)和(b)將同時(shí)進(jìn)行。此外，在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，步驟(a)和/或(b)將重復(fù)給予。此外，在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，步驟(a)和(b)將僅進(jìn)行一次。在此描述的治療方法可以持續(xù)長(zhǎng)達(dá)監(jiān)督患者的護(hù)理的臨床醫(yī)生認(rèn)為該治療方法有效的時(shí)間。指示該治療方法有效的非限制性參數(shù)包括以下各項(xiàng)：腫瘤收縮(就重量和/或體積而言)；個(gè)體腫瘤集落數(shù)目的減少；腫瘤消除；以及無(wú)進(jìn)展存活。與根據(jù)所要求方法的治療過(guò)程相關(guān)的示例性時(shí)間長(zhǎng)度包括：約一周；兩周；約三周；約四周；約五周；約六周；約七周；約八周；約九周；約十周；約十一周；約十二周；約十三周；約十四周；約十五周；約十六周；約十七周；約十八周；約十九周；約二十周；約二十一周；約二十二周；約二十三周；約二十四周；約七個(gè)月；約八個(gè)月；約九個(gè)月；約十個(gè)月；約十一個(gè)月；約十二個(gè)月；約十三個(gè)月；約十四個(gè)月；約十五個(gè)月；約十六個(gè)月；約十七個(gè)月；約十八個(gè)月；約十九個(gè)月；約二十個(gè)月；約二十一個(gè)月；約二十二個(gè)月；約二十三個(gè)月；約二十四個(gè)月；約三十個(gè)月；約三年；約四年、以及約五年。關(guān)于給予該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑的頻率，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將能夠確定一個(gè)適當(dāng)?shù)念l率。例如，臨床醫(yī)生可以決定相對(duì)不頻繁地(例如，每?jī)芍芤淮?給予該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑并且逐漸縮短如由患者耐受的給藥之間的周期。關(guān)于給予該抗CTLA-4抗體和抗PD-1抗體的頻率，可以按類似的方式來(lái)確定這些藥劑的頻率。此外，因?yàn)橐恍╅L(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑、抗CTLA-4抗體、抗PD-1抗體處于高級(jí)臨床測(cè)試中或可商購(gòu)獲得，所以還可能的是參考文獻(xiàn)來(lái)獲得一個(gè)適當(dāng)?shù)慕o藥頻率(記住鑒于治療方案的組合作用，一些調(diào)整可能是必要的)。在此描述的方法涉及給予長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑。在此方面，本發(fā)明不限于任何特定長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑，只要該激動(dòng)劑展現(xiàn)出的對(duì)IL-2Rβ的體外結(jié)合親和力比在相同體外模型中對(duì)IL-2Rαβ的結(jié)合親和力大至少5倍(更優(yōu)選地大至少10倍)，并且具有比IL-2大至少十倍的有效體內(nèi)半衰期(基于IL-2的體內(nèi)消失的半衰期)。作為舉例，有可能測(cè)量針對(duì)IL-2的結(jié)合親和力作為一種標(biāo)準(zhǔn)。在此方面，在本披露的實(shí)例1中提及的RSLAIL-2展現(xiàn)出相對(duì)于IL-2，對(duì)IL-2Rαβ的親和力的約60倍降低；但是相對(duì)于IL-2，對(duì)IL-2Rβ的親和力的僅約5倍降低。在WO2012/065086中描述了長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑的非限制性實(shí)例。一種示例性長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑是在本申請(qǐng)中的實(shí)例1中提及的RSLAIL-2。在此方面，RSLAIL-2是一種包含由以下化學(xué)式所涵蓋的化合物的組合物：其中IL-2是IL-2的一個(gè)殘基，以及其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，該組合物包含不超過(guò)10％(基于摩爾量)、優(yōu)選地不超過(guò)5％(基于摩爾量)的由以下化學(xué)式所涵蓋的化合物其中IL-2是IL-2的一個(gè)殘基，(n)是選自下組的一個(gè)整數(shù)，該組由以下各項(xiàng)組成：1、2、3、7和>7；以及其藥學(xué)上可接受的鹽。在此描述的方法涉及給予一種抗CTLA-4抗體或一種抗PD-1抗體。關(guān)于抗CTLA-4抗體，這些是已知的并且包括曲美木單抗和伊匹單抗。關(guān)于抗PD-1抗體，這些是已知的并且包括尼沃魯單抗(nivolumab)和蘭布羅利珠單抗(lambrolizumab)、AMP-224、MDPL3280A、MEDI4736、以及MSB0010718C。用于確定一種給定的化合物是否可以充當(dāng)一種抗CTLA-4抗體或抗PD-1抗體的測(cè)定可以由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。根據(jù)在此描述的方法，該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑以IL-2Rβ活化量給予至患者。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以確定多少給定長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑足以提供IL-2Rβ處的臨床相關(guān)的激動(dòng)活性。例如，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以參考文獻(xiàn)和/或給予一系列增加量的該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑并且確定哪個(gè)或哪些量提供IL-2Rβ的臨床激動(dòng)活性。然而，在一個(gè)或多個(gè)實(shí)例中，該IL-2Rβ活化量是由以下范圍中的一個(gè)或多個(gè)所涵蓋的一個(gè)量：從約0.01mg/kg至1mg/kg；從約0.01mg/kg至約0.1mg/kg；從約1mg/kg至約1000mg/kg；從約2mg/kg至約900mg/kg；從約3mg/kg至約800mg/kg；從約4mg/kg至約700mg/kg；從約5mg/kg至約600mg/kg；從約6mg/kg至約550mg/kg；從約7mg/kg至約500mg/kg；從約8mg/kg至約450mg/kg；從約9mg/kg至約400mg/kg；從約5mg/kg至約200mg/kg；從約2mg/kg至約150mg/kg；從約5mg/kg至約100mg/kg；從約10mg/kg至約100mg/kg；以及從約10mg/kg至約60mg/kg。根據(jù)在此描述的方法，給予CTLA-4途徑抑制量的一種抗CTLA-4抗體或者給予PD-1途徑抑制量的一種抗PD-1抗體。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以確定多少給定抗CTLA-4抗體或抗PD-1抗體分別足以提供CTLA-4途徑或PD-1途徑的臨床相關(guān)抑制。例如，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以參考文獻(xiàn)和/或給予一系列增加量的該抗CTLA-4抗體或抗PD-1抗體并且確定哪個(gè)或哪些量提供CTLA-4途徑或PD-1途徑的臨床相關(guān)抑制。然而，在一個(gè)或多個(gè)實(shí)例中，這些CTLA-4和PD-1途徑抑制量是由以下范圍中的一個(gè)或多個(gè)所涵蓋的一個(gè)量：從約1mg/kg至約1000mg/kg；從約2mg/kg至約900mg/kg；從約3mg/kg至約800mg/kg；從約4mg/kg至約700mg/kg；從約5mg/kg至約600mg/kg；從約6mg/kg至約550mg/kg；從約7mg/kg至約500mg/kg；從約8mg/kg至約450mg/kg；從約9mg/kg至約400mg/kg；從約5mg/kg至約200mg/kg；從約2mg/kg至約150mg/kg；從約5mg/kg至約100mg/kg；從約10mg/kg至約100mg/kg；以及從約10mg/kg至約60mg/kg。為了確認(rèn)，如分別在此關(guān)于該抗CTLA-4抗體或抗PD-1抗體的CTLA-4和PD-1途徑抑制量所使用的，該抑制的量和程度可以廣泛變化并且這些中的任一個(gè)與該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑的組合仍可以是有效的。例如，僅分別最低限度地抑制該CTLA-4或PD-1途徑的抗CTLA-4抗體或抗PD-1抗體的量仍然可以是如在此使用的抑制量，只要所要求發(fā)明的方法產(chǎn)生一種臨床上有意義的應(yīng)答。因此，一種長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑的僅展現(xiàn)IL-2Rβ處的最小激動(dòng)活性持續(xù)一段足夠延長(zhǎng)的時(shí)間段的一個(gè)量仍然可以是一種長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑，只要所要求發(fā)明的方法產(chǎn)生一種臨床上有意義的應(yīng)答。在一些實(shí)例中，由于(例如)協(xié)同應(yīng)答，可能僅在存在該長(zhǎng)效IL-2Rβ選擇性激動(dòng)劑的情況下需要該CTLA-4或PD-1途徑的最小抑制。在仍然其他實(shí)例中，由于(例如)協(xié)同應(yīng)答，可能在存在CTLA-4和PD-1途徑抑制的情況下需要IL-2Rβ的最小激動(dòng)活性。待給予的實(shí)際劑量將取決于受試者的年齡、重量以及一般狀況，連同有待治療的病癥的嚴(yán)重程度，健康專家的判斷、以及有待給予的共軛物而改變。本發(fā)明提供一種方法，該方法對(duì)于(除其他之外)治療患有一種病癥的患者是有用的，該病癥對(duì)用該化合物治療有應(yīng)答。例如，患者可以對(duì)單獨(dú)以及組合的單個(gè)藥劑有應(yīng)答，但是對(duì)組合的應(yīng)答更強(qiáng)。作為進(jìn)一步舉例，患者可能對(duì)單個(gè)藥劑中的一種無(wú)應(yīng)答，但是對(duì)組合有應(yīng)答。作為仍然進(jìn)一步舉例，患者可能對(duì)單獨(dú)的單個(gè)藥劑中的任一種無(wú)應(yīng)答，但是對(duì)組合有應(yīng)答。該方法包括經(jīng)由注射給予治療有效量的多種活性劑。還考慮了其他給藥方式，諸如經(jīng)肺、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、經(jīng)直腸、經(jīng)舌下、以及經(jīng)皮給藥。如在此所使用，術(shù)語(yǔ)“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、心臟內(nèi)、鞘內(nèi)、以及肌內(nèi)注射，連同輸注注射。該方法的每種藥理學(xué)組分可以分開給予?？商娲?，如果希望同時(shí)給予兩種藥理學(xué)組分--并且這兩種藥理學(xué)組分是一起且在一種給定配制品中相容的--那么該同時(shí)給予可以經(jīng)由給予單一劑型/配制品(例如，靜脈內(nèi)給予包含兩種藥理活性劑的一種靜脈內(nèi)配制品)來(lái)實(shí)現(xiàn)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以通過(guò)常規(guī)測(cè)試確定兩種給定藥理學(xué)組分是否一起且在一種給定配制品中相容。當(dāng)前描述的方法可以用來(lái)治療患有可以通過(guò)該方法補(bǔ)救或預(yù)防的任何病癥的患者。示例性的病癥是癌癥，諸如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯氏腫瘤、宮頸癌、睪丸癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、以及白血病。在此引用的所有文章、書籍、專利、專利公開及其他的公開物通過(guò)引用以其全部?jī)?nèi)容結(jié)合。倘若本說(shuō)明書的傳授內(nèi)容和通過(guò)引用結(jié)合的本領(lǐng)域之間不一致，以本說(shuō)明書中的傳授內(nèi)容和定義的含義為準(zhǔn)(特別是關(guān)于在此處所附的權(quán)利要求書中使用的術(shù)語(yǔ))。例如，其中本申請(qǐng)和通過(guò)引用結(jié)合的公開物不同地定義了相同術(shù)語(yǔ)，該術(shù)語(yǔ)的定義將保留在該定義所位于的文件的傳授內(nèi)容之內(nèi)。實(shí)驗(yàn)應(yīng)當(dāng)理解的是雖然本發(fā)明已結(jié)合某些優(yōu)選的和具體的實(shí)施例進(jìn)行了描述，但前述的描述以及以下的實(shí)例旨在說(shuō)明而非限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明范圍內(nèi)的其他方面、優(yōu)點(diǎn)和修改對(duì)本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見的。在實(shí)例2-實(shí)例7中提及的抗CTLA-4抗體對(duì)應(yīng)于從UC10-4F10-11雜交瘤細(xì)胞系(ATCC)純化的抗小鼠CLTA-4抗體。將細(xì)胞在PFHM-II培養(yǎng)基(英杰公司(Invitrogen))中維持在1×105與1×106個(gè)細(xì)胞/mL的密度之間。在純化之前，將該培養(yǎng)基離心以便除去這些細(xì)胞。用NaOH將該培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至8，并且通過(guò)用水稀釋將其傳導(dǎo)率降低至7mS/cm。將該pH/傳導(dǎo)率調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基負(fù)載到一個(gè)Q-FF柱上，并且使用NaCl梯度來(lái)洗脫該抗小鼠CLTA-4抗體?？笴TLA-4對(duì)其抗原的親和力是通過(guò)表面等離子體共振(Biacore)來(lái)測(cè)定的并且被測(cè)定為20pM。抗PD-1購(gòu)自BioXcell。它是作為具有以下特征的一種溶液獲得的：濃度：4.76mg/mL；內(nèi)毒素：<0.63EU/mg；配制：PBSpH7；純度：>95％；同種型：大鼠IgG2a；以及消光系數(shù)：1.33?？筆D-1對(duì)其抗原的親和力是通過(guò)表面等離子體共振(Biacore)來(lái)測(cè)量的并且據(jù)發(fā)現(xiàn)為1nM。將所購(gòu)買的抗體通過(guò)SDS-PAGE和SEC-HPLC針對(duì)純度進(jìn)行檢查并且被確定為純度足以用于功效研究而無(wú)需進(jìn)一步處理(workup)。實(shí)例1用mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS進(jìn)行的rIL-2的聚乙二醇化用mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS進(jìn)行的rIL-2的聚乙二醇化先前在WO2012/065085的實(shí)例2中進(jìn)行了報(bào)道。其中，合成被報(bào)道為產(chǎn)生4聚體、3聚體、2聚體和1聚體的混合物。然而，對(duì)該反應(yīng)的進(jìn)一步分析揭示，還產(chǎn)生更高的附接程度(例如，5聚體、6聚體和7聚體)。本合成表示用于使用mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS聚乙二醇化IL-2的一種按比例擴(kuò)大的方法。將1.44mg/ml的純化的rIL-2(106.4mL)裝入一個(gè)第一容器中，接著添加53.6mL的配制緩沖液(10mM乙酸鈉(pH4.5)，5％海藻糖)。測(cè)量pH為4.62，測(cè)量溫度為21.2℃。將PEG試劑C2-PEG2-FMOC-NHS-20K(如在WO2006/138572中所描述可供使用的)(13.1g)裝入一個(gè)第二容器中，接著添加73.3mL的2mMHCl。將所得溶液手動(dòng)渦旋25分鐘。將硼酸鈉(0.5M，pH9.8)添加至該第一容器以便使PH升高至約9.1，并且接著將含有該P(yáng)EG試劑的第二容器經(jīng)1至2分鐘添加至該第一容器。接著通過(guò)將8.1mL的2mMHCl裝入該第二容器并且添加至該第一容器來(lái)執(zhí)行一個(gè)沖洗步驟。在共軛反應(yīng)中，最終rIL-2濃度是0.6mg/mL，硼酸鈉濃度是120mM，PH是9.1+/-0.2，溫度是20℃-22℃，并且PEG試劑與rIL-2的摩爾比在針對(duì)該試劑的活性調(diào)整之后(取代水平)是35:1。使該共軛反應(yīng)進(jìn)行30分鐘并且接著使用75mL的2N乙酸(其中PH下降至4.01)用一種酸化反應(yīng)終止。將該反應(yīng)的產(chǎn)物用水稀釋并且使用一個(gè)0.2微米過(guò)濾器過(guò)濾所稀釋的聚乙二醇化的rIL-2溶液并且將所過(guò)濾的產(chǎn)物放置于無(wú)菌容器中。其后，通過(guò)將稀釋的聚乙二醇化的rIL-2溶液負(fù)載到填充有SP瓊脂糖凝膠FF樹脂(通用電氣醫(yī)療集團(tuán)(GEHealthcare))的一個(gè)色譜柱上來(lái)純化該溶液。在一個(gè)洗滌步驟之后，使用一種氯化鈉梯度來(lái)洗脫該聚乙二醇化的rIL-2。消除含有1聚體、2聚體或3聚體的級(jí)分，同時(shí)合并含有4聚體、5聚體、6聚體、7聚體和任何更高程度的聚乙二醇化的級(jí)分，由此產(chǎn)生主要具有4聚體、5聚體和6聚體的一種組合物(其中8聚體和更高程度的聚乙二醇化據(jù)發(fā)現(xiàn)在與色譜法相關(guān)的一個(gè)洗滌步驟期間被去除)。該組合物是與實(shí)例2-實(shí)例6結(jié)合使用的組合物并且在其中被稱為“RSLAIL-2”。使用在該實(shí)例中描述的方法，4聚體、5聚體和6聚體的產(chǎn)率據(jù)發(fā)現(xiàn)增加(其中1聚體、2聚體和3聚體伴隨減少)。實(shí)例2評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的CT26腫瘤模型上的功效該研究的目標(biāo)是評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的CT26鼠結(jié)腸癌腫瘤模型中的抗腫瘤活性。存在5個(gè)組，其中每組12只動(dòng)物。包括在第0天、第4天、第9天和第14天治療的一個(gè)媒介物對(duì)照組，兩個(gè)單一藥劑組(在第0天、第4天、第9天、第14天和第18天抗CTLA-4抗體治療或者在第0天和第9天RSLAIL-2治療)和兩個(gè)組合免疫治療組(抗CTLA-4抗體加RSLAIL-2)，其中對(duì)于一個(gè)組抗CTLA-4抗體(在第0天、第4天、第9天、第14天和第18天給予)治療與RSLAIL-2(在第0天、第4天和第9天給予)同時(shí)開始，并且對(duì)于另一個(gè)組在RSLAIL-2治療開始(在第4天、第13天和第22天給予)之前4天開始。在以2×106個(gè)細(xì)胞/部位以0.1mL注射體積接種CT26細(xì)胞之后7天進(jìn)行該研究的治療開始。將腫瘤細(xì)胞皮下注射在腹部區(qū)域中。將這些動(dòng)物基于由軟件生成的隨機(jī)化相應(yīng)地分配。在治療日(第0天)的平均腫瘤體積在從111±9mm3至115±10mm3(平均值±SEM)的范圍內(nèi)。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周監(jiān)測(cè)2至3次并且分別呈現(xiàn)在圖1和圖2中，連同關(guān)于治療方案的細(xì)節(jié)。相應(yīng)的相對(duì)腫瘤值(在該研究開始時(shí)針對(duì)個(gè)體腫瘤體積計(jì)算并且呈現(xiàn)為生長(zhǎng)百分比的標(biāo)準(zhǔn)化值)總結(jié)于圖1中(第0天至第30天)。持續(xù)106天監(jiān)測(cè)無(wú)腫瘤動(dòng)物的腫瘤再生長(zhǎng)并且自治療開始取得體重。在第11天(媒介物對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)單向方差分析(One-wayANOVA)與杜凱氏后檢驗(yàn)(Tukey'spost-test)(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行的媒介物對(duì)照動(dòng)物與治療的動(dòng)物之間的腫瘤體積的比較顯示所有治療組與該媒介物對(duì)照組顯著不同。在第11天(對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)使用以下公式評(píng)定平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×100對(duì)于抗CTLA-4抗體(第2組)治療的腫瘤存在53％平均抑制，并且對(duì)于RSLAIL-2組(第3組)存在58％平均抑制。組合免疫治療共同給予(在第0天同時(shí)開始的RSLAIL-2和抗CTLA-4抗體)產(chǎn)生74％抑制。使用在第0天開始的抗CTLA-4抗體和在4天開始的RSLAIL-2治療的組合免疫治療(第5組)產(chǎn)生這些治療之中的最大抑制(88％)。第4組中12只動(dòng)物中的一只(1/12)到第14天是無(wú)腫瘤的。到第28天總計(jì)4只動(dòng)物是無(wú)腫瘤的。在第5組中，到第14天兩只(2/12)動(dòng)物是無(wú)腫瘤的并且到第25天總計(jì)8只動(dòng)物是無(wú)腫瘤的。參見表1。來(lái)自第4組和第5組的所有這些動(dòng)物保持無(wú)腫瘤直到研究終止。(從治療開始106天)。表1腫瘤體積(平均值±SEM，mm3)1該組(包括該動(dòng)物)在第18天共同從該研究中去除。在治療日平均體重在從17.4±0.3g至18.2±0.3g(平均值±SEM)的范圍內(nèi)。未觀察到來(lái)自任何治療組的在治療階段期間低于基線的顯著平均體重?fù)p失(圖3)。實(shí)例3評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的EMT6腫瘤模型上的功效該研究的目標(biāo)是評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的EMT6鼠乳腺癌腫瘤模型上的抗腫瘤活性。存在5個(gè)組，其中每組各自12只動(dòng)物。包括在第0天、第4天、第9天和第14天治療的一個(gè)媒介物對(duì)照組，兩個(gè)單一藥劑組(在第0天、第4天、第9天、第14天和第18天抗CTLA-4抗體治療或者在第0天和第9天RSLAIL-2治療)和兩個(gè)組合免疫治療組(抗CTLA-4抗體加RSLAIL-2)，其中對(duì)于一個(gè)組抗CTLA-4抗體(在第0天、第4天、第9天、第14天和第18天給予)治療與RSLAIL-2(在第0天、第4天和第9天給予)同時(shí)開始，并且對(duì)于另一個(gè)組在RSLAIL-2治療開始(在第4天、第13天和第22天給予)之前4天開始。在以2×106個(gè)細(xì)胞/部位以0.1mL注射體積接種EMT6細(xì)胞之后7天進(jìn)行該研究的治療開始。將腫瘤細(xì)胞皮下注射在腹部區(qū)域中。將這些動(dòng)物基于由軟件生成的隨機(jī)化相應(yīng)地分配。在治療日(第0天)的平均腫瘤體積在從144±8mm3至147±10mm3(平均值±SEM)的范圍內(nèi)。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周監(jiān)測(cè)2至3次，并且腫瘤體積數(shù)據(jù)呈現(xiàn)在圖4中(第0天至第30天)，連同關(guān)于治療方案的細(xì)節(jié)。從治療開始持續(xù)106天監(jiān)測(cè)無(wú)腫瘤動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)，這呈現(xiàn)于圖5中。在第18天(媒介物對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)單向方差分析與杜凱氏后檢驗(yàn)(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行的媒介物對(duì)照動(dòng)物與治療的動(dòng)物之間的腫瘤體積的比較顯示這些媒介物對(duì)照(第1組)對(duì)比第2組(抗CTLA-4抗體治療)與第5組(在第0天開始的抗CTLA-4抗體+在第4天開始的RSLAIL-2)之間的顯著差異。在第1組(媒介物對(duì)照)對(duì)比第3組(單獨(dú)RSLAIL-2)與第4組(RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體，兩種治療均在第0天開始)之間未注意到統(tǒng)計(jì)差異。在第18天(對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)使用以下公式評(píng)定平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×100對(duì)于抗CTLA-4抗體(第2組)治療的腫瘤存在55％平均抑制，并且對(duì)于RSLAIL-2組(第3組)存在22％平均抑制。組合免疫治療共同給予(在第0天同時(shí)開始的RSLAIL-2和抗CTLA-4抗體)產(chǎn)生27％抑制。使用在第0天開始的抗CTLA-4抗體和在4天開始的RSLAIL-2治療的組合免疫治療(第5組)產(chǎn)生這些治療之中的最大抑制(92％)。該媒介物對(duì)照組中的一只動(dòng)物上的腫瘤據(jù)觀察到第11天完全自消退。盡管如此，當(dāng)該組共同從該研究去除時(shí)，到第18天平均腫瘤體積是1789mm3±196(平均值±SE，N＝12)。第4組中12只動(dòng)物中的一只到第18天也是無(wú)腫瘤的。當(dāng)該整個(gè)組從該研究中去除時(shí)(第18天)，該組的剩余部分的平均腫瘤體積是1361±214mm3。第5組中12只動(dòng)物的五只(5/12)到第14天是無(wú)腫瘤的。到第18天總計(jì)10只動(dòng)物是無(wú)腫瘤的。所有10只動(dòng)物保持無(wú)腫瘤直到研究終止(從治療開始106天)。參見表2。表2腫瘤體積(平均值±SE，mm3)1該組(包括該動(dòng)物)在第18天共同從該研究中去除。在治療日平均體重在從17.8±0.3g至18.4±0.4g(平均值±SEM)的范圍內(nèi)(圖6)。未觀察到來(lái)自任何治療組的顯著體重?fù)p失。實(shí)例4評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2相較于阿地白介素與抗CTLA-4抗體治療在雌性BALB/c小鼠中的EMT6腫瘤模型上的功效該研究的目標(biāo)是評(píng)估與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的EMT6鼠乳腺癌腫瘤模型上的抗腫瘤活性并且將其與阿地白介素的抗腫瘤活性進(jìn)行比較。存在7個(gè)組，其中每組10只動(dòng)物。包括在第0天、第4天、第8天和第13天給予的抗體對(duì)照(第1組)以及三個(gè)單一藥劑組。存在在第0天、第4天、第8天、第13天和第18天給予的抗CTLA-4抗體(第2組)。阿地白介素(第3組)從第0天至第4天給予，接著從第7天至第11天給予，并且一種RSLAIL-2(第4組)在第0天和第9天給予。還包括三個(gè)組合免疫治療組。使用抗CTLA-4抗體與阿地白介素的一個(gè)組合免疫治療組(第5組)以及使用抗CTLA-4抗體與RSLAIL-2的根據(jù)不同治療方案的2個(gè)組合治療組(第6組和第7組)。對(duì)于第6組，抗CTLA-4抗體方案在第4天開始并且在第9天和第13天再次給予，而RSLAIL-2在第0天開始并且在第9天再次給予。對(duì)于第7組，抗CTLA-4抗體治療在第0天開始并且在第4天、第8天和第13天再次給予，而RSLAIL-2在第4天開始并且在第13天和第22天再次給予。治療開始(第0天)被指定為在小鼠上以2×106個(gè)細(xì)胞/部位以0.1mL注射體積接種EMT6細(xì)胞之后7天。將腫瘤細(xì)胞皮下注射在腹部區(qū)域中。將這些動(dòng)物在第0天基于由軟件生成的隨機(jī)化相應(yīng)地分配。在治療日的平均腫瘤體積在從159±7mm3至170±8mm3(平均值±SE)的范圍內(nèi)。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周監(jiān)測(cè)2至3次并且分別呈現(xiàn)在圖7和圖8中(第0天至第28天)。(從治療開始)持續(xù)99天監(jiān)測(cè)無(wú)腫瘤動(dòng)物的再生長(zhǎng)和健康狀況。在第18天(媒介物對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)單向方差分析與杜凱氏后檢驗(yàn)(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行的對(duì)照動(dòng)物與治療的動(dòng)物之間的腫瘤體積的比較顯示僅第5組(抗CTLA-4抗體+阿地白介素)和第7組(抗CTLA-4抗體+RSLAIL-2)與對(duì)照的腫瘤體積顯著不同。然而，盡管與對(duì)照顯著不同，但是這兩個(gè)治療組的平均腫瘤體積彼此并不顯著不同。在第18天(對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)使用以下公式評(píng)定平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×100對(duì)于單獨(dú)抗CTLA-4抗體治療(第2組)存在27％平均抑制。通過(guò)阿地白介素(第3組)腫瘤生長(zhǎng)的抑制是24％，并且通過(guò)RSLAIL-2(第4組)腫瘤生長(zhǎng)的抑制是5％，使用抗CTLA-4抗體和阿地白介素的組合免疫治療(第5組)產(chǎn)生26％抑制，RSLAIL-2與抗CTLA-4抗體治療(第6組)得到2％抑制，而第7組(抗CTLA-4抗體與RSLAIL-2)產(chǎn)生94％抑制。若干動(dòng)物據(jù)觀察到第18天是無(wú)腫瘤的。存在來(lái)自第5組的三個(gè)(3/10)，來(lái)自第6組的1個(gè)(1/10)以及第7組中的5個(gè)(5/10)。到研究終止(第99天)，來(lái)自第5組、第6組和第7組的無(wú)腫瘤動(dòng)物的總數(shù)分別是4/10、1/10和7/10。參見表3。表3腫瘤體積(平均值±SE，mm3)實(shí)例5在雌性BALB/c小鼠中的EMT6腫瘤模型上測(cè)試與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2的功效研究(在第0天、第3天和第11天收集樣品用于流式細(xì)胞術(shù)分析)先前的組合RSLAIL-2和抗CTLA-4抗體功效研究表明在該EMT6小鼠乳腺模型中的協(xié)同作用。該研究的目標(biāo)是評(píng)估/評(píng)定與抗CTLA-4抗體組合的RSLAIL-2在雌性BALB/c小鼠中的EMT6鼠乳腺癌腫瘤模型上的抗腫瘤活性。此外，為了鑒別負(fù)責(zé)組合功效的免疫群體，在治療開始之后的第0天、第3天和第11天收集和加工組織(腫瘤和脾)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析評(píng)估浸潤(rùn)這些組織的免疫細(xì)胞的鑒別和定量。將這些結(jié)果在治療組之間進(jìn)行比較。體內(nèi)階段在此研究中存在6個(gè)治療組，其中每組3-10只動(dòng)物。包括在第0天、第4天和第8天以100ug/小鼠給予的抗體對(duì)照IgG2a(第1組)；在第4天和第8天以100ug/小鼠給予的抗CTLA-4抗體治療(第2組)；在第4天至第8天以0.5mg/kg給予的阿地白介素治療(第3組)；以及在第4天以0.8mg/kg單次給藥給予的RSLAIL-2治療(第5組)。還包括待用抗CTLA-4抗體(100ug/小鼠，在第0天、第4天和第8天給予)與阿地白介素(0.5mg/kg，在第4天至第8天給予)的組合(第4組)或與RSLAIL-2(0.8mg/kg，在第4天給予)的組合(第6組)治療的三個(gè)組。在將這些動(dòng)物在腹部區(qū)域中皮下接種2×106個(gè)細(xì)胞/部位的EMT6鼠乳腺癌細(xì)胞(0.1mL)之后7天開始治療。將這些小鼠根據(jù)腫瘤體積分配至治療組中。在第0天(首次接受試驗(yàn)的對(duì)照)、第3天(第1組和第6組)殺死這些動(dòng)物并且收集組織(腫瘤和脾)，第3天第6組動(dòng)物在此時(shí)已經(jīng)用僅抗CTLA-4抗體給藥，添加RSLAIL-2在第4天開始添加，還在治療開始之后的第11天取得樣品(所有組)。針對(duì)每個(gè)收集日選擇三只動(dòng)物。所選擇的這些動(dòng)物具有完整腫瘤(未壞死)和最接近該天的該組平均腫瘤體積的體積。在治療第0天，對(duì)于首次接受試驗(yàn)的組，平均腫瘤體積是164±10mm3。在第3天，對(duì)于第1組和第6組，平均腫瘤體積分別是282±7mm3和333±26mm3(平均值±SEM)。在第11天，對(duì)于第1組，平均腫瘤體積是843±138mm3；對(duì)于第2組，平均腫瘤體積是1059±135mm3；對(duì)于第3組，平均腫瘤體積是814±70mm3；對(duì)于第4組，平均腫瘤體積是832±262mm3；對(duì)于第5組，平均腫瘤體積是620±103mm3；并且對(duì)于第6組，平均腫瘤體積是255±11mm3(平均值±SEM)。參見圖9。至少一周一次對(duì)動(dòng)物進(jìn)行稱重。在治療日(第0天)，對(duì)于第1組、第2組、第3組、第4組、第5組和第6組，平均體重分別是18.9±0.3克、18.6±0.3克、19.2±0.2克、18.7±0.2克、17.8±0.3克、18.9±0.3克。在第3天，對(duì)于第1組和第6組，平均體重分別是19.1±0.7克和19±0.3克。對(duì)于第1組、第2組、第3組、第4組、第5組和第6組，第11天的平均體重分別是19.8±0.2克、19.4±0.2克、19.9±0.2克、20±0.5克、19.6±0.4克和19.5±0.4克(平均值±SEM)。參見圖10。離體階段將收集的組織樣品使用解剖刀手動(dòng)切碎，接著在37℃下孵育的13分鐘酶消化。消化緩沖液的組分是于PBS/BSA中的2.5mg/mlII型膠原酶(GIBCOBRL)、2.5mg/mlIV型膠原酶(GIBCOBRL)、以及0.5mg/mlDNA酶(西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich))。在孵育之后，將該消化通過(guò)添加含有10％FBS(熱滅活的；GIBCOBRL)的維莫斯氏(Waymouth's)MB(GIBCOBRL)淬滅并且通過(guò)一個(gè)70-uM尼龍過(guò)濾器(Falcon)過(guò)濾，從而產(chǎn)生一種單細(xì)胞懸浮液。將這些細(xì)胞在HBSS中洗滌并且離心，接著再懸浮于新鮮HBSS中。從每個(gè)樣品取得一個(gè)等分試樣用于計(jì)數(shù)，接著用eFlour-450存活力染料染色。然后將這些樣品接種于一個(gè)96孔深孔板中，染色并且收集用于流式細(xì)胞術(shù)分析。將這些腫瘤和脾細(xì)胞樣品首先用一種可固定的存活力指示劑處理，并且接著針對(duì)活免疫細(xì)胞、CD3、CD4、CD8、CD25、CD44、CD122、Foxp3(內(nèi)部染色)、DX5、以及NKp46表面抗原進(jìn)行染色?；蠲庖呒?xì)胞的總量針對(duì)這些樣品(每個(gè)治療組3個(gè))中的每個(gè)進(jìn)行計(jì)數(shù)并且用于門控/收集針對(duì)CD4+、TREG+細(xì)胞、CD8+、記憶效應(yīng)CD8+細(xì)胞、總NK細(xì)胞、成熟NK細(xì)胞(其被標(biāo)準(zhǔn)化至1立方毫米的腫瘤組織)的總事件以及針對(duì)這些治療組中的每個(gè)的脾的總細(xì)胞計(jì)數(shù)。原始計(jì)數(shù)源自流式細(xì)胞儀讀數(shù)的總結(jié)的原始數(shù)據(jù)并且使用FlowJo進(jìn)行分析。流式細(xì)胞術(shù)將三只首次接受試驗(yàn)的動(dòng)物在第0天殺死。在第3天將來(lái)自第1組(已接受同種型對(duì)照)和來(lái)自第6組(已接受僅抗CTLA-4抗體治療)的三只動(dòng)物殺死，并且在治療開始之后的第11天將來(lái)自所有第1組-第6組的三只動(dòng)物殺死。數(shù)據(jù)的圖形表示可以在圖11和圖12中找到，圖11和圖12分別針對(duì)腫瘤和脾中的第11天。當(dāng)用單獨(dú)抗CTLA-4抗體治療時(shí)，CD4+或調(diào)控性T細(xì)胞群體(從第3天-第11天)中不存在差異。用抗CTLA-4抗體預(yù)先治療、接著用阿地白介素或RSLAIL-2治療增加CD4+群體；然而，在調(diào)控性T細(xì)胞群體(抗CTLA-4抗體對(duì)比抗CTLA-4抗體+RSLAIL-2或阿地白介素)中不存在差異。RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體對(duì)比單獨(dú)RSLAIL-2中在CD4+細(xì)胞方面不存在差異；然而，當(dāng)與RSLAIL-2相比較時(shí)，RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體減少調(diào)控性T細(xì)胞群體。在該RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體組中存在沒有計(jì)算在內(nèi)的較大CD4+細(xì)胞群體；這些結(jié)果表明這些細(xì)胞中的大多數(shù)不是Treg。用抗CTLA-4抗體預(yù)先治療、接著RSLAIL-2治療顯著增加CD8+群體(P＝0.0078)和記憶效應(yīng)CD8細(xì)胞(P＝0.0058)。(雙尾t檢驗(yàn)抗CTLA-4抗體+RSLAIL-2對(duì)比抗CTLA-4)。此外，當(dāng)與單獨(dú)RSLAIL-2相比較時(shí)，RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體顯著增加CD8+和記憶效應(yīng)CD8細(xì)胞。單獨(dú)抗CTLA-4抗體對(duì)總NK細(xì)胞群體不具有趨勢(shì)作用；然而，成熟NK細(xì)胞被顯著減少(從第3天至第11天，P＝0.0278)。用抗CTLA-4抗體預(yù)先治療、接著RSLAIL-2治療增加總NK群體和成熟NK細(xì)胞群體。當(dāng)與RSLAIL-2組相比較時(shí)，在RSLAIL-2+抗CTLA-4抗體組中在成熟NK細(xì)胞方面沒有差異。實(shí)例6使用RSLAIL-2和抗PD-1抗體的組合免疫治療對(duì)雌性BALB/c小鼠中的CT26鼠結(jié)腸癌腫瘤生長(zhǎng)的功效該研究的目標(biāo)是評(píng)估使用RSLAIL-2和抗PD-1抗體的組合免疫治療在雌性BALB/c小鼠中的CT26鼠結(jié)腸癌腫瘤模型上的抗腫瘤活性。存在4個(gè)組，其中每組10只動(dòng)物。包括一個(gè)媒介物對(duì)照組(第1組)、一個(gè)抗PD-1抗體治療組、一個(gè)RSLAIL-2治療組(第3組)以及首先在天用抗PD-1抗體(200ug)治療并在4天后用RSLAIL-2(0.8mg/kg)治療的一個(gè)組合治療組。將0.1mL注射體積的2×106個(gè)細(xì)胞/部位的CT26細(xì)胞在小鼠上皮下植入腹部區(qū)域中。在腫瘤細(xì)胞接種(第0天)之后七天開始治療。將這些動(dòng)物在第0天基于由軟件生成的隨機(jī)化相應(yīng)地分配。在治療日(第0天)的平均腫瘤體積在從123±5mm3至127±6mm3(平均值±SE)的范圍內(nèi)。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周監(jiān)測(cè)2至3次并且分別呈現(xiàn)在圖13和圖14中。監(jiān)測(cè)該研究持續(xù)16天。在第12天(媒介物對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)單向方差分析與杜凱氏后檢驗(yàn)(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行的對(duì)照動(dòng)物與治療的動(dòng)物之間的腫瘤體積的比較顯示所有治療組的腫瘤體積與未治療對(duì)照的腫瘤體積顯著不同。使用以下公式計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制百分比(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×100存在分別在抗PD-1抗體(第2組)和RSLAIL-2(第3組)情況下觀察到的55％和58％平均腫瘤生長(zhǎng)抑制。組合給予兩種治療的組(第4組)的腫瘤生長(zhǎng)抑制據(jù)觀察為83％。在研究終止時(shí)第4組中的五只(5/10)動(dòng)物具有體積小于其在第0天的初始體積的腫瘤。將平均腫瘤體積成四倍時(shí)間(TVQT)(腫瘤生長(zhǎng)至其初始體積的4倍所花的時(shí)間(天))使用非線性二階多項(xiàng)式分析(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行內(nèi)插以便評(píng)定腫瘤生長(zhǎng)延遲(TGD)。平均腫瘤體積成四倍時(shí)間對(duì)于對(duì)照腫瘤是5.2天，對(duì)于第3組(抗PD-1抗體)是7.6天，對(duì)于第3組(RSLAIL-2)是8.2天并且對(duì)于組合免疫治療組(第4組)是15.6天。對(duì)于第2組、第3組和第4組，平均腫瘤生長(zhǎng)延遲分別是2.4天、3.0天和10.4天。參見表4。表4腫瘤體積(平均值±SE，mm3)在第0天平均體重在從17.5±0.2g至18.1±0.2g(平均值±SEM)的范圍內(nèi)(圖13)。未觀察到顯著體重?fù)p失(圖14)，除了第2組中的一只動(dòng)物，該動(dòng)物在第12天從該研究中去除。尸體剖檢揭示肺空洞中的轉(zhuǎn)移性病灶。與使用任一單一藥劑治療的那些動(dòng)物相比，在給予抗PD-1與RSLAIL-2的組合的動(dòng)物中觀察到更大的腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)和腫瘤生長(zhǎng)延遲(TGD)。實(shí)例7再激發(fā)研究：在使用RSLAIL-2和抗CTLA-4的有效組合免疫治療之后用EMT6鼠乳腺癌腫瘤再激發(fā)無(wú)腫瘤動(dòng)物該實(shí)例的目標(biāo)是評(píng)估在用使用RSLAIL-2和一種可商購(gòu)的嚙齒動(dòng)物抗CTLA-4檢查點(diǎn)阻斷抗體的組合免疫療法治療植入有EMT6乳腺癌腫瘤的小鼠時(shí)的功效的程度和持續(xù)時(shí)間。如先前在實(shí)例2-實(shí)例6中所展示，該組合產(chǎn)生顯著無(wú)腫瘤動(dòng)物，并且通過(guò)用EMT6腫瘤細(xì)胞或CT26腫瘤細(xì)胞再激發(fā)無(wú)腫瘤動(dòng)物，對(duì)該組合引發(fā)腫瘤特異性應(yīng)答的能力進(jìn)行評(píng)估。該再激發(fā)研究以三個(gè)階段進(jìn)行。該研究的初始部分(“I期”)使用攜帶EMT6(鼠乳腺癌)腫瘤的80只雌性BALB/c小鼠。隨機(jī)選擇十只(10/80)動(dòng)物并且分配至抗體對(duì)照組(在第0天、第4天、第9天、第13天100μg，腹膜內(nèi))。將這些動(dòng)物的剩余部分(70/80)用抗CTLA-4(腹膜內(nèi))(在第0天、第4天、第9天、第13天和第18天100μg)和RSLAIL-2(靜脈內(nèi))(在第4天、第13天和第22天0.8mg/kg)的組合進(jìn)行治療。治療開始(第0天)被指定為將EMT6細(xì)胞以2×106個(gè)細(xì)胞/部位、以0.1mL注射體積皮下注射接種于腹部區(qū)域之后7天。對(duì)于該媒介物對(duì)照和治療組，治療開始時(shí)的平均腫瘤體積分別是206±15和222±8(平均值±SE)。監(jiān)測(cè)I期直到第48天。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周測(cè)量2至3次并且呈現(xiàn)在圖15中。相應(yīng)的相對(duì)腫瘤體積(在該研究開始時(shí)(第0天)針對(duì)個(gè)體腫瘤體積計(jì)算并且呈現(xiàn)為生長(zhǎng)百分比的標(biāo)準(zhǔn)化值)和體重的相對(duì)變化總結(jié)于圖16中。來(lái)自該研究的I期的這些結(jié)果顯示73％(P<0.0001)的腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)，這是使用在第14天(所有對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)對(duì)照動(dòng)物(698％)與治療的動(dòng)物(189％)之間的平均相對(duì)腫瘤體積計(jì)算的并且然后使用未配對(duì)t檢驗(yàn)與Welches校正因子(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行比較的。I期中未展現(xiàn)出對(duì)該組合免疫治療的完全應(yīng)答的這些動(dòng)物(N＝39)的平均腫瘤生長(zhǎng)延遲(TGD)是12.7天(P<0.0001)。通過(guò)利用二階多項(xiàng)式非線性回歸分析(GraphPadPrism)使用達(dá)到400％生長(zhǎng)的內(nèi)插的個(gè)體腫瘤時(shí)間來(lái)計(jì)算腫瘤體積成四倍時(shí)間(TVQT)。無(wú)腫瘤動(dòng)物(完全應(yīng)答者)不包括在針對(duì)TGD的評(píng)定中。在I期中，在第一次和第二次RSLAIL-2給藥之后大約5天，觀察到所治療的動(dòng)物皮毛粗糙(輕微)。在第三次給藥之后未觀察到皮毛粗糙。未觀察到顯著體重?fù)p失(圖16)。來(lái)自該研究的I期的這些結(jié)果的總結(jié)提供于表5中。表5I期結(jié)果總結(jié)(平均值±SE)1僅針對(duì)具有部分應(yīng)答的動(dòng)物內(nèi)插，不包括具有完全應(yīng)答的動(dòng)物(即無(wú)腫瘤)。2在第18天(對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)使用以下公式評(píng)定平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×100該研究的下一部分(“II期”)在第49天開始。總計(jì)40只動(dòng)物(10只年齡適宜的首次接受試驗(yàn)的動(dòng)物和對(duì)該RSLAIL-2+抗CTLA-4組合免疫治療完全應(yīng)答的30只動(dòng)物)用于3個(gè)組并且如在表6中所描述進(jìn)行分配。表6II期研究設(shè)計(jì)1組N用EMT6細(xì)胞激發(fā)的年齡適宜的首次接受試驗(yàn)的動(dòng)物10用CT26再激發(fā)的無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物10用EMT6再激發(fā)的無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物201無(wú)腫瘤動(dòng)物是指來(lái)自階段I的對(duì)該RSLAIL-2+抗CTLA-4治療完全應(yīng)答的攜帶EMT6腫瘤的動(dòng)物在第49天，將這些動(dòng)物植入EMT6或CT26腫瘤細(xì)胞(0.1mL培養(yǎng)基中2×106個(gè))，皮下注射在腹部區(qū)域中。來(lái)自該研究的II期的這些結(jié)果顯示這些動(dòng)物上的腫瘤攝取和生長(zhǎng)在接種之后5天(第54天)是明顯的。第1組(年齡適宜的首次接受試驗(yàn)的動(dòng)物)和第2組(用CT26再激發(fā)的無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物)中的所有動(dòng)物攜帶腫瘤，其中平均體積分別為167±22和177±11(平均值±SE)。在接種之后5天，在第3組(用EMT6再激發(fā)的無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物)中觀察到僅85％的腫瘤攝取率。腫瘤體積據(jù)觀察相對(duì)小于其他組中的腫瘤體積。平均腫瘤體積是62±8mm3。在再激發(fā)之后17天該組中20只動(dòng)物中的14只(70％)是無(wú)腫瘤的(完全排斥EMT6腫瘤植入物)并且保持無(wú)腫瘤直到II期結(jié)束(第109天)。第2組中的動(dòng)物(在I期中的組合免疫治療之后無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物且用CT26腫瘤再激發(fā))在再激發(fā)之后14天具有1257±201(平均值±SE)的平均腫瘤體積和13.6±0.8的生長(zhǎng)到1000mm3體積的平均時(shí)間。腫瘤生長(zhǎng)似乎不受I期治療影響，這暗示免疫應(yīng)答的腫瘤類型特異性。參見在表7中提供的來(lái)自該研究的II期的這些結(jié)果的總結(jié)。來(lái)自第1組的一只動(dòng)物在第14天被發(fā)現(xiàn)死亡。尸體剖檢揭示似乎是肺中的轉(zhuǎn)移性病灶(未通過(guò)組織學(xué)驗(yàn)證)和胸腔中的血性液體。除此之外，未注意到其他臨床觀察結(jié)果或顯著體重?fù)p失。參見圖17。這些年齡適宜的首次接受試驗(yàn)的動(dòng)物(1541±144mm3)與用EMT6再激發(fā)的這些無(wú)EMT6腫瘤動(dòng)物(192±107)之間的平均腫瘤體積在植入之后21天進(jìn)行比較以便評(píng)定TGI(87.5％)。由于缺乏基線腫瘤體積起始點(diǎn)，所以不能評(píng)定TVQT。代替這一點(diǎn)，對(duì)針對(duì)這些攜帶腫瘤的動(dòng)物中的每只的腫瘤生長(zhǎng)到1000mm3體積的時(shí)間進(jìn)行內(nèi)插(使用GraphPadPrism的二階多項(xiàng)式非線性回歸分析)以便有助于評(píng)定且接近腫瘤生長(zhǎng)延遲。對(duì)于第1組和第2組，生長(zhǎng)到1000mm3腫瘤體積所用的時(shí)間(天)分別是16.9±1和13.6±0.8(平均值±SE)天。將第3組中僅不完全排斥EMT6再激發(fā)的這些動(dòng)物(6/20)針對(duì)達(dá)到1000mm3生長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行評(píng)定，該時(shí)間是30.3±5.5。針對(duì)這些動(dòng)物的平均腫瘤生長(zhǎng)至1000mm3延遲被計(jì)算為13.4天。表7II期結(jié)果總結(jié)(平均值±SE)該研究的最終部分(“III期”)被指定為在第109天到第168天內(nèi)。將來(lái)自II期的完全排斥該EMT6再激發(fā)的動(dòng)物(N＝14)(在第109天)用2×106個(gè)EMT6腫瘤細(xì)胞再次接種/再激發(fā)(第2組)并且監(jiān)測(cè)持續(xù)59天。年齡適宜的動(dòng)物(N＝5)也在相同時(shí)間針對(duì)對(duì)照進(jìn)行接種(第1組)。從該研究的最終部分，觀察到腫瘤攝取和生長(zhǎng)在接種之后3天是明顯的，其中對(duì)于第1組和第2組，平均腫瘤體積分別是101±14和69±6。給予該第二再激發(fā)的動(dòng)物在腫瘤細(xì)胞植入之后21天是完全無(wú)腫瘤的(完全排斥)，而所有5只它們的年齡適宜的對(duì)應(yīng)物具有1550±401mm3的平均腫瘤體積。第2組中的動(dòng)物保持無(wú)腫瘤直到該研究結(jié)束(第168天)并且未觀察到顯著體重?fù)p失。該研究證實(shí)使用RSLAIL-2和抗CTLA4的組合免疫治療在EMT6鼠乳腺癌腫瘤(I期)中的功效以及應(yīng)答的持久性和特異性，以及該療法在對(duì)治療良好應(yīng)答的動(dòng)物中的長(zhǎng)期作用(II期和III期)。關(guān)于從開始到結(jié)束的該研究的總結(jié)以及每個(gè)階段的個(gè)體腫瘤生長(zhǎng)，參見圖21。實(shí)例8體內(nèi)耗盡研究：評(píng)定在使用RSLAIL-2和抗CTLA-4或抗PD-1的有效組合免疫治療之后細(xì)胞毒性免疫細(xì)胞群體對(duì)針對(duì)EMT6鼠乳腺癌腫瘤的抗腫瘤免疫力的貢獻(xiàn)該實(shí)例的目標(biāo)是在將RSLAIL-2與通過(guò)CTLA-4或PD-1的抗體阻斷進(jìn)行的免疫檢查點(diǎn)抑制組合時(shí)評(píng)定自然殺傷(NK)細(xì)胞和CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)抗腫瘤功效的相對(duì)貢獻(xiàn)。該研究利用攜帶EMT6(鼠乳腺癌)腫瘤的58只雌性BALB/c小鼠。隨機(jī)選擇十只(10/58)動(dòng)物并且分配至媒介物對(duì)照組(第0天、第4天、第8天，腹膜內(nèi))。將8只(8/58)動(dòng)物分配至接受抗CTLA-4(腹膜內(nèi))(在第0天、第4天和第8天100μg)與RSLAIL-2(靜脈內(nèi))(在第4天0.8mg/kg)的組合的治療組。將8只(8/58)動(dòng)物分配至CD8耗盡組，除了RSLAIL-2和抗CTLA-4的治療之外，將CD8T細(xì)胞通過(guò)連續(xù)注射大鼠抗小鼠CD8a(第-2天、第0天、第7天100μg，腹膜內(nèi))耗盡。將8只(8/58)另外動(dòng)物分配至NK耗盡組，除了RSLAIL-2和抗CTLA-4的治療之外，將NK細(xì)胞通過(guò)連續(xù)注射兔抗牛Asialo-GM1(第-2天、第0天、第7天50μl，腹膜內(nèi))耗盡。將8只(8/58)動(dòng)物分配至接受抗PD-1(腹膜內(nèi))(在第0天、第4天和第8天100μg)與RSLAIL-2(靜脈內(nèi))(在第4天0.8mg/kg)的組合的治療組。將8只(8/58)動(dòng)物分配至CD8耗盡組，除了RSLAIL-2和抗PD-1的治療之外，將CD8T細(xì)胞通過(guò)連續(xù)注射大鼠抗小鼠CD8a(第-2天、第0天、第7天100μg，腹膜內(nèi))耗盡。將8只(8/58)另外動(dòng)物分配至NK耗盡組，除了RSLAIL-2和抗PD-1的治療之外，將NK細(xì)胞通過(guò)連續(xù)注射兔抗牛Asialo-GM1(第-2天、第0天、第7天50μl，腹膜內(nèi))耗盡。治療開始(第0天)被指定為將EMT6細(xì)胞以2×106個(gè)細(xì)胞/部位、以0.1mL注射體積皮下注射接種于腹部區(qū)域之后7天，并且該研究的持續(xù)時(shí)間是11天。腫瘤體積(mm3)和體重(克)一周測(cè)量2至3次。表8呈現(xiàn)在第11天針對(duì)每個(gè)組的初始和平均相對(duì)腫瘤體積。對(duì)于使用RSLAIL-2和抗CTLA-4的組合，在圖22中呈現(xiàn)腫瘤體積和體重，而在圖23中呈現(xiàn)從第0天的相對(duì)腫瘤體積和體重變化百分比。對(duì)于使用RSLAIL-2和抗PD-1的組合，在圖24中呈現(xiàn)腫瘤體積和體重，而在圖25中呈現(xiàn)從第0天的相對(duì)腫瘤體積和體重變化百分比。該研究的這些結(jié)果顯示在RSLAIL-2和抗CTLA-4治療組中76.9％(p<0.05)的腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)，這是使用在第11天對(duì)照動(dòng)物(553％)與治療的動(dòng)物(128％)之間的平均相對(duì)腫瘤體積利用單向方差分析和杜凱氏多重比較后檢驗(yàn)(用于Windows的GraphPadPrism6.03版，GraphPad軟件，加利福尼亞州圣地亞哥)計(jì)算的。在RSLAIL-2和抗CTLA-4的治療與連續(xù)注射中和CD8a抗體組合、從而導(dǎo)致細(xì)胞毒性CD8T細(xì)胞的體內(nèi)耗盡時(shí)，該結(jié)果是治療功效的廢除，其中在第11天平均相對(duì)腫瘤體積是520％，并且腫瘤生長(zhǎng)抑制是5.98％，這與該媒介物對(duì)照相比未達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。在RSLAIL-2和抗CTLA-4的治療與連續(xù)注射中和抗Asialo-GM1抗體組合、從而導(dǎo)致NK細(xì)胞的體內(nèi)耗盡時(shí)，該結(jié)果是治療功效的廢除，其中在第11天平均相對(duì)腫瘤體積是483％，并且腫瘤生長(zhǎng)抑制是12.7％，這與該媒介物對(duì)照相比未達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。當(dāng)將RSLAIL-2與抗PD-1組合時(shí)，在第100天平均相對(duì)腫瘤體積是285％，從而產(chǎn)生48.5％(p<0.05)的腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)。在RSLAIL-2和PD-1的治療與連續(xù)注射中和CD8a抗體組合時(shí)，該結(jié)果是治療功效的廢除，其中在第11天平均相對(duì)腫瘤體積是539％，并且腫瘤生長(zhǎng)抑制是2.53％，這與該媒介物對(duì)照相比未達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。在RSLAIL-2和抗PD-1的治療與連續(xù)注射中和抗Asialo-GM1抗體組合時(shí)，該結(jié)果是治療功效的廢除，其中在第11天平均相對(duì)腫瘤體積是364％，并且腫瘤生長(zhǎng)抑制是34.2％，這與該媒介物對(duì)照相比未達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。盡管在與抗CTLA-4或抗PD-1組合時(shí)或在該治療與CD8或抗Asialo-GM1抗體消除的添加組合時(shí)未觀察到來(lái)自RSLAIL-2的顯著體重?fù)p失，但與抗Asialo-GM1組合導(dǎo)致在還接受RSLAIL-2和抗CTLA-4的組中在該研究的第8天發(fā)現(xiàn)兩只動(dòng)物死亡，并且在還接受RSLAIL-2和抗PD-1的組中在該研究的第8天發(fā)現(xiàn)三只動(dòng)物死亡。表8I期結(jié)果總結(jié)(平均值±SE)1在第18天(對(duì)照動(dòng)物存在的最后一天)通過(guò)使用以下公式評(píng)定平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(％TGI)：％TGI＝(1-(相對(duì)腫瘤體積(％)治療組÷相對(duì)腫瘤體積(％)對(duì)照組)×1002單向方差分析與多重比較，杜凱氏后檢驗(yàn)。3NS，未達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。該研究證實(shí)使用RSLAIL-2和抗CTLA-4或RSLAIL-2和抗PD-1的組合免疫治療在EMT6鼠乳腺癌腫瘤中的功效。此外，在NK細(xì)胞和CD8T細(xì)胞的體內(nèi)耗盡之后抗腫瘤功效的損失表明兩種細(xì)胞類型在該功效中的作用。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3