本發(fā)明屬于天然藥物組方與量效應(yīng)用用途的研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療更年期精神抑郁癥和非典型抑郁障礙的天然藥物組方及其用途。

背景技術(shù)：

更年期精神抑郁癥是一類(lèi)由于內(nèi)分泌紊亂、性器官功能衰退(卵巢功能衰退或衰老)導(dǎo)致精神興奮和情緒曲喪、煩惱和抑郁的心理生理癥狀的神經(jīng)癥性障礙。更年期憂郁癥初次發(fā)病年齡在更年期(男55-60歲，女45-55歲左右)，因精神焦慮、緊張、憂郁等因素而致的綜合征。臨床癥狀常見(jiàn)有焦慮不安、緊張恐懼、稍有驚動(dòng)不知所措、情緒低落、悲觀失望，?？蘅尢涮?、自責(zé)自罪、主觀臆斷、猜疑他人，或是懷疑自己患某種病，尤其是“恐癌癥”，甚則引起自傷、自殺等行為。此外，還通常伴有月經(jīng)不調(diào)、性欲減退，或出汗、怕冷、消瘦、乏力等癥。目前臨床治療更年期精神抑郁癥常用激素類(lèi)藥物進(jìn)行替補(bǔ)療法治療。但雌激素治療其經(jīng)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院報(bào)告，其在心血管、肺栓塞、腫瘤等方面其風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)大于效益指數(shù)。其顯著的副作用在臨床還是顯而易見(jiàn)的。

臨床對(duì)更年期精神抑郁癥嚴(yán)重患者多使用單胺酶氧化酶抑制劑如：苯乙肼、異唑肼、環(huán)丙胺、嗎氯貝胺等藥物，這類(lèi)藥物對(duì)非典型抑郁障礙的治療特別有效。在臨床治療已經(jīng)有一段歷史。該藥藥理作用廣泛，與許多藥物之間存在相互作用,有些相互作用可產(chǎn)生嚴(yán)重后果，產(chǎn)生廣泛的肝酶抑制作用，抑制單胺類(lèi)的正常代謝，引起血壓升高，對(duì)肝臟毒性較大，嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)高血壓危象。有人指出，單胺氧化酶抑制劑(MAOI)最適用于伴精神運(yùn)動(dòng)遲滯典型抑郁癥。Linvingston等指出，(MAOI)對(duì)于非典型抑郁癥恐慌及曠野恐怖有一定作用，并可用于疑病和過(guò)敏。

對(duì)嚴(yán)重更年期精神抑郁癥還常應(yīng)用非三環(huán)類(lèi)藥物：有帕羅西汀、曲唑酮、 米胺色林、馬普替林、佛西汀、舍曲林、西太普蘭、萬(wàn)拉發(fā)新、丁丙胺丙酮等。這類(lèi)藥物可治療廣泛性焦慮癥、失眠癥、腸易激綜合征等疾病，符合更年期精神抑郁癥典型的上述癥狀。這類(lèi)藥物在臨床臨床治療其常見(jiàn)的副作用為：乏力、便秘、頭暈、口干、頭痛、視力模糊、多汗、失眠、性功能減退、震顫、尿頻或尿潴留、惡心、嘔吐。偶見(jiàn)：焦慮、食欲改變(增強(qiáng)或減弱)、心悸、感覺(jué)異常、味覺(jué)改變、肝功能異常、體重變化(減輕或增加)、肌痛、肌無(wú)力、直立性低血壓、血管神經(jīng)性水腫、低鈉血癥、蕁麻疹。還有錐體外系反應(yīng)如靜坐不能、肌張力低下、肌張力不協(xié)調(diào)等。若突然停用非三環(huán)類(lèi)藥物帕羅西汀，還會(huì)產(chǎn)生停藥綜合征.出現(xiàn)服藥前精神抑郁如睡眠障礙、激動(dòng)、焦慮、頭痛、等癥狀的重現(xiàn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種治療更年期精神抑郁癥和非典型抑郁障礙的天然藥物組合物及其用途，該天然藥物組合物配伍適合、劑量安全、顯效快、療效顯著，能夠有效解決現(xiàn)有的藥物在治療更年期及嚴(yán)重更年期精神抑郁癥時(shí)存在的副作用及療效差的問(wèn)題。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明公開(kāi)的治療精神抑郁癥的天然藥物組合物，組合物構(gòu)成以質(zhì)量百分比計(jì)，由70％～97.5％(g/g)沙棘果油和2.5％～30％(g/g)三七莖葉總皂苷組成。

組合物構(gòu)成以質(zhì)量百分比計(jì)，由90％(g/g)的沙棘果油和10％(g/g)的三七莖葉總皂苷組成。

該天然藥物組合物以沙棘果油和三七莖葉總皂苷為活性成分配伍制成軟膠囊劑或口服液制劑；其中，沙棘果油由去籽的沙棘鮮果提取制得，三七莖葉總皂苷是由三七莖葉提取得到。

其中，藥效含量以沙棘果油中含有的十六碳一烯酸與十六碳酸的質(zhì)量比為(1.02～1.20)：1；三七莖葉總皂苷中含有的Rb3：Rb1質(zhì)量比為1：(0.16～0.20)。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述天然藥物組方在制備治療更年期、更年期精神抑郁癥或非典型抑郁障礙的藥物和/或保健品中的應(yīng)用。

所述的藥物和/或保健品為調(diào)節(jié)血清中標(biāo)志性分子含量比值的藥物和/或保健品。

所述的藥物和/或保健品為升高血清中cAMP/cGMP的含量比值的藥物和/或保健品。

所述的藥物和/或保健品為降低促卵泡生成激素和升高催產(chǎn)素含量的藥物和/或保健品。

所述的藥物和/或保健品為降低去氫表雄酮含量和二氫睪酮比值的藥物和/或保健品。

所述的藥物和/或保健品為提高多巴胺和五羥色胺含量比值和降低去甲腎上腺素含量比值的藥物和/或保健品。

所述的藥物和/或保健品為下調(diào)免疫白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8細(xì)胞因子含量的藥物和/或保健品。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

本發(fā)明公開(kāi)的治療更年期、更年期精神抑郁癥及非典型抑郁障礙藥物的組方，由沙棘果油和三七莖葉總皂苷作為原料藥按一定的配比(70％～97.5％沙棘果油和2.5％～30％(g/g)的三七莖葉總皂苷)組成。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該天然藥物組合物與精神抑郁模型大鼠模型組比較以及與陽(yáng)性藥非三環(huán)類(lèi)西藥帕羅西汀和逍遙丸比較其顯著的專(zhuān)屬性效果，具體表現(xiàn)為：天然藥物組方組可有效調(diào)節(jié)精神抑郁癥模型大鼠血清中：1)信號(hào)分子環(huán)磷酸腺苷(CAMP)和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(CGMP)兩者含量的比值；2)調(diào)節(jié)性激素二氫睪酮和雌性激素兩者含量的比值；3)調(diào)節(jié)性激素促卵泡生成激素(FSH)和催產(chǎn)素(OT)比值；4)調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素NA與多巴胺和五羥色胺的比值；5)下調(diào)免疫細(xì)胞因子白介素-6和白細(xì)胞介素-8細(xì)胞因子含量，其白介素-2呈劑量量效關(guān)系，復(fù)方高劑量藥物呈下調(diào)血 清白介素-2的作用，復(fù)方藥物低劑量呈上調(diào)血清白介素-2的作用。

本發(fā)明為藥食同源的的天然藥物組方，配伍合理，劑量安全，對(duì)人體無(wú)任何副作用，克服了臨床常用的單胺酶氧化酶抑制劑和非三環(huán)藥物如帕羅西汀的缺點(diǎn)，藥效顯效快，療效顯著，其血清標(biāo)志性指標(biāo)顯著并優(yōu)于市場(chǎng)更年期、更年期精神抑郁癥和非典型抑郁障礙的同類(lèi)中西藥，能夠有效解決現(xiàn)有的藥物在治療更年期、更年期精神抑郁癥和非典型抑郁障礙癥存在的副作用及療效差的問(wèn)題。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。

1.組方原料制備方法、組方配比范圍、日服劑量的量效百分比

本發(fā)明公開(kāi)的治療治療精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組方，以質(zhì)量百分比計(jì)，由70％～97.5％(g/g)沙棘果油和2.5％～30％(g/g)三七總皂苷組成。

本發(fā)明的原料制劑的制備方法可采用以下三種：

1)沙棘果油的制備，常用方法有以下：

①物理壓榨離心分離：沙棘成熟鮮果(去籽)經(jīng)螺旋桿壓榨(脫籽)獲得的沙棘果汁和沙棘果泥渣。其果泥渣加溫水50-55℃浸泡2-3次，浸泡時(shí)間1.5h，分次離心分離，得沙棘果油提油率1.6％～2.2％(g/g)。

②CO2超臨界萃?。荷臣墒祯r果(去籽)，經(jīng)恒溫干燥，獲得干燥沙棘果泥渣。工業(yè)生產(chǎn)提取條件：提取壓力35MPa，萃取溫度45℃。提取時(shí)間1.5h，分離溫度45℃。提油率可達(dá)到5.0％-5.6％(g/g)。按1:1比例加水進(jìn)行水化除雜，然后加入3％～5％白土進(jìn)行脫色，離心脫水，得87％(g/g)的純化精制沙棘果油。

③正己烷溶劑萃取：取沙棘干果浸泡適度，采用滾軸將果實(shí)擠壓(除去籽)得果泥渣。經(jīng)45-55度恒溫干燥，使沙棘果泥渣顆粒度達(dá)40目，用正己烷溶劑 萃取，按料：溶劑等于1:8比例，提取時(shí)間50分鐘，提取溫度60℃，可獲得沙棘果油提率4.8-5.3％(g/g)。純化精制，得86％(g/g)純化精制沙棘果油。

2)三七莖葉總皂苷的制備：

三七莖葉有效部位三七莖葉總皂苷的傳統(tǒng)醇提?。簩?0目三七粉物料，按物料1:7比例，80％乙醇溶液提取放于容器中回流提取，沸騰回流提取2次，提取1.5小時(shí)/次，合并濾液得率9.6％(g/g)，經(jīng)HPD-400大孔樹(shù)脂濃縮，80％乙醇洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮，干燥，得到純化三七葉總皂苷產(chǎn)品。

80％乙醇溶液提取法與2015年版中國(guó)藥典采取水提法比較,其三七葉總皂苷得率略高于水提法,但從經(jīng)濟(jì)成本,水提法經(jīng)濟(jì)價(jià)廉.

2.復(fù)方藥物組合物比例及服藥方法及治療周期(組方實(shí)例)

1)組方實(shí)例

實(shí)施例1

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方，是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：96.7％(g/kg)的沙棘果油、3.3％(g/kg)的三七總皂苷。

實(shí)施例2

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方，是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：84.0％(g/kg)的沙棘果油、16.0％(g/kg)的三七總皂苷。

實(shí)施例3

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方，是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：90.0％(g/kg)的沙棘果油、10.0％(g/kg)的三七總皂苷。

實(shí)施例4

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方， 是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：96.7％(g/kg)的沙棘果油、3.3％(gk/g)的三七總皂苷。

實(shí)施例5

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方，是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：70.0％(g/kg)的沙棘果油、30％(g/kg)的三七總皂苷。

實(shí)施例6

治療更年期和/或更年期精神抑郁癥、非典型抑郁障礙的天然藥物組組方，是以下述質(zhì)量百分比的原料藥制備而成的藥劑：92.5％(g/kg)的沙棘果油、7.5％(g/kg)的三七總皂苷。

2)復(fù)方藥物組合物配比、日服藥量、服藥周期

沙棘果油和三七莖葉總皂苷藥物的組合比例量為(重量/重量)％(g/g)：

沙棘果油：三七總皂苷為70.0％～97.5％(g/g)：30％～2.5.0％(g/g)范圍；

制備動(dòng)物大鼠的沙棘果油和三七莖葉總皂苷組合藥物日服劑量范圍為3.0g～0.5g:0.15g～0.05g/kg；

本品的大鼠量效服用配比優(yōu)效劑量為1.0g:0.1g或0.6:0.06g范圍之間為顯效作用最佳比例范圍。

人用臨床等效組方比例量為：

沙棘果油：三七莖葉總皂苷70％～97.5％(g/g):30％～2.5％(g/g)：

人(g/60g)日服用劑量范圍30g～5g:1.5g～0.5g/60kg；

本品的人服用量效配比劑量為10.0g:1.0g/60kg或6g:0.6g/60kg范圍之間為顯效作用最佳比例范圍。其中10.0g:1.0g/60kg作用強(qiáng)度大于6g:0.6g/60kg；

本復(fù)方藥物，服藥周期3個(gè)月，可使神經(jīng)內(nèi)分泌、激素、環(huán)核苷酸分子以及行為學(xué)紊亂態(tài)調(diào)整至正常態(tài)。

3、復(fù)方藥物模型大鼠其血清標(biāo)志性指標(biāo)(神經(jīng)內(nèi)分泌、激素、環(huán)核苷酸 分子)特征

1)復(fù)方藥物組與更年期、更年期抑郁模型組比較，使更年期及更年期精神抑郁癥大鼠血清蛋白質(zhì)受體第二信使物環(huán)核腺苷酸CAMP：環(huán)核鳥(niǎo)苷酸CGMP含量比值從1.4:1(失調(diào)值)上調(diào)至2.5:1(接近正常健康值)；

2)復(fù)方藥物組與模型組比較，使更年期及更年期精神抑郁癥大鼠的二氫睪酮與去氫表雄酮的比值由2.0-1.25:1(失調(diào)值)下調(diào)為1.05-1.0：1(正常健康值)；

3)復(fù)方藥物組與模型組比較，降低促卵泡生成激素含量和提高催產(chǎn)素(愛(ài)情激素)OT比值，由FSH 2.0-1.44(比例失調(diào)值):(OT)1.0下調(diào)為1.05-1.0(FSH)：1(OT)(正常健康值)；

4)復(fù)方藥物組與模型組比較，使更年期及更年期精神抑郁癥大鼠神經(jīng)遞質(zhì)紊亂狀態(tài)去甲腎上腺素(NA)：多巴胺(DA)由7.0-6.0:1(比例失調(diào)值)下調(diào)至3.0-2.0:1(恢復(fù)到正常健康態(tài))；

5)復(fù)方藥物組與模型組比較，使更年期及更年期精神抑郁癥大鼠紊亂狀態(tài)二氫睪酮DHT：雌性激素含量?jī)烧弑戎党?：1(比例失調(diào)值)下調(diào)其1.04：1(正常健康態(tài))。

上述特征對(duì)CAMP和CGMP的比值、對(duì)性激素，F(xiàn)SH和OT的比值、對(duì)DHT和DHEA比值、DHT和E2比值；神經(jīng)遞質(zhì)NA與DA比值；含量比值的上調(diào)或下調(diào)，使其從失調(diào)態(tài)調(diào)至健康態(tài)是該復(fù)方藥物治療更年期及更年期精神抑郁癥藥物的優(yōu)勢(shì)特征。

通過(guò)復(fù)方藥物調(diào)節(jié)更年期及精神抑郁癥上述血清標(biāo)志性指標(biāo)(神經(jīng)內(nèi)分泌、激素、環(huán)核苷酸信號(hào)分子)的特征顯示，更年期及精神抑郁癥由于血清的神經(jīng)遞質(zhì)、激素、環(huán)核苷酸信號(hào)分子等內(nèi)分泌影響因子嚴(yán)重紊亂，導(dǎo)致行為學(xué)異常。本發(fā)明藥物沙棘果油和三七莖葉總皂苷組合的復(fù)方藥物，可有效調(diào)整更年期及精神抑郁癥模型大鼠其血清的神經(jīng)遞質(zhì)、激素、環(huán)核苷酸信號(hào)分子等內(nèi)分泌標(biāo)志性信號(hào)分子及影響因子相互間的含量比例關(guān)系，糾正并治療更年期及精神抑 郁癥的行為學(xué)異常。

4、服藥后行為學(xué)測(cè)定結(jié)果

1)3個(gè)周期后各組在給藥前和給藥后的行為學(xué)對(duì)比結(jié)果

敞箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表1)顯示：復(fù)方高劑量組、逍遙丸組、帕羅西汀組在給藥后的水平得分明顯高于給藥前的得分(P<0.01)，復(fù)方中劑量組、復(fù)方低劑量組在給藥后的水平得分均高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；更前期、更年期精神抑郁、假手術(shù)組在給藥前后的水平得分無(wú)顯著差異。

復(fù)方中劑量組在給藥后的垂直得分高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其余各個(gè)給藥組、更前期、更年期抑郁、假手術(shù)組在給藥前后的垂直得分無(wú)顯著差異。對(duì)于糞便重量各個(gè)給藥組、更前期、更年期精神抑郁、假手術(shù)組給藥前后比較均無(wú)顯著性差異。

表1各組大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)給藥前后統(tǒng)計(jì)結(jié)果

備注：*P<0.05，**P<0.01

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表2)顯示：復(fù)方高劑量組、復(fù)方中劑量組、復(fù)方低劑量組、逍遙丸組、帕羅西汀組在給藥后的飲水潛伏期明顯高于給藥前的得分(P<0.01)，更年期組、假手術(shù)組在給藥后的飲水潛伏期均高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)更年期抑郁組在給藥前后的飲水潛伏期無(wú)顯著差異。

復(fù)方中劑量組、復(fù)方低劑量組、逍遙丸組、帕羅西汀組在給藥后的飲水時(shí) 間明顯高于給藥前的得分(P<0.01)；混合高劑量組、假手術(shù)組在給藥后的飲水時(shí)間均高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，更前期組在給藥前后的飲水時(shí)間無(wú)顯著差異。

表2各組大鼠曠場(chǎng)飲水實(shí)驗(yàn)給藥前后統(tǒng)計(jì)結(jié)果

備注：*P<0.05，**P<0.01

如表3(續(xù))：復(fù)方中劑量組、復(fù)方低劑量組、逍遙丸組在給藥后的靠近水瓶次數(shù)明顯高于給藥前的得分(P<0.01)，復(fù)方高劑量組、帕羅西汀組在給藥后的靠近水瓶次數(shù)均高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，更年期、假手術(shù)、更年期抑郁組在給藥前后的靠近水瓶次數(shù)無(wú)顯著差異。

復(fù)方中劑量組、逍遙丸組、帕羅西汀組在給藥后的站立次數(shù)明顯高于給藥前的得分(P<0.01)，復(fù)方低劑量組在給藥后的站立次數(shù)均高于給藥前的得分，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，復(fù)方高劑量組、更年期、假手術(shù)、更年期抑郁組在給藥前后的站立次數(shù)無(wú)顯著差異。

表3(續(xù))各組大鼠曠場(chǎng)飲水實(shí)驗(yàn)給藥前后統(tǒng)計(jì)結(jié)果

備注：*P<0.05，**P<0.01

2)給藥結(jié)束后各組與更年期抑郁癥組的行為學(xué)比較結(jié)果

①敞箱實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表4)顯示：與假手術(shù)組比較，模型組的水平得分顯著降低(P<0.05)，低劑量組、帕羅西汀、更年期組水平得分均顯著高于模型組(P<0.01)，復(fù)方高劑量、復(fù)方中劑量、逍遙丸組的水平得分均高于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；

與假手術(shù)組比較，模型組的垂直得分用統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中，更年期組的垂直得分顯著高于模型組(P<0.01)，復(fù)方高劑量、復(fù)方中劑量、復(fù)方低劑量組、逍遙丸組垂直得分均高于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，帕羅西汀組的垂直得分與模型組比較，無(wú)顯著性差異；對(duì)于糞便重量各個(gè)給藥組與模型組比較均無(wú)顯著性差異。

表4各組大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)的水平得分、垂直得分和糞便重量的變化

備注：與更年期模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

②曠場(chǎng)飲水實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表5)顯示：與假手術(shù)組比較，模型組的飲水潛伏期顯著降低(P<0.01)，復(fù)方中劑量組、逍遙丸、帕羅西汀、更年期組飲水潛伏期均顯著高 于模型組(P<0.01)，低劑量組的飲水潛伏期比模型組的值高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，高劑量組的飲水潛伏期與模型組比較，無(wú)顯著性差異；

與假手術(shù)組比較，模型組的飲水時(shí)間顯著降低(P<0.01)，其中，逍遙丸、帕羅西汀組均顯著高于模型組(P<0.01)，復(fù)方中劑量組、復(fù)方低劑量組飲水時(shí)間均高于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，高劑量組的飲水時(shí)間與模型組比較，無(wú)顯著性差異。

表5各組大鼠曠場(chǎng)飲水實(shí)驗(yàn)的飲水潛伏期、飲水時(shí)間和靠近水瓶次數(shù)、站立次數(shù)的變化

備注：與更年期模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

如表6(續(xù))：與假手術(shù)組比較，模型組的靠近水瓶次數(shù)顯著降低(P<0.01)，復(fù)方中劑量組、帕羅西汀、更年期組均顯著高于模型組(P<0.01)，復(fù)方高劑量組、復(fù)方低劑量組、逍遙丸組的靠近水瓶次數(shù)與模型組比較，無(wú)顯著性差異。

與假手術(shù)組比較，模型組的站立次數(shù)降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中，更年期組顯著高于模型組(P<0.01)，復(fù)方中劑量組站立次數(shù)多于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，復(fù)方高劑量組、復(fù)方低劑量組、逍遙丸、帕羅西汀組的站立次數(shù)與模型組比較，無(wú)顯著性差異。

表6(續(xù))

備注：與更年期模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

5、大鼠血清神經(jīng)內(nèi)分泌、激素及環(huán)核苷酸信號(hào)分子標(biāo)志性指標(biāo)的調(diào)治變化

1)標(biāo)本采集及處理方法略

動(dòng)物序灌給藥3周期后處死，處死前，動(dòng)物空腹12小時(shí)，用3％戊巴比妥鈉腹腔麻醉，給藥劑量0.1ml/100g。取全血8ml于離心管內(nèi)，以4000r/min離心15min，離心后分離血清并做好標(biāo)記，分裝保存于-20℃冰箱中；

2)用ELISA方法測(cè)定方法如下：

檢測(cè)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。但本次測(cè)定樣本較多，根據(jù)實(shí)際情況，我們選擇做單孔。

步驟1：分別設(shè)立空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、待測(cè)樣品孔中加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加樣盡量將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不接觸孔壁，輕輕晃動(dòng)均勻。蓋上封板膜后置于37℃溫育30min。

步驟2：將洗滌液用蒸餾水稀釋30倍后備用。

小心揭掉封板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作5次。

步驟3：每孔加入50ul的酶標(biāo)試劑，空白孔除外，輕輕振蕩混勻，37℃溫 育30min。

小心揭掉封板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作5次。

步驟4：每孔加入顯色劑A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育避光顯色10min。

步驟5：取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。以空白孔調(diào)零，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

步驟6：用標(biāo)準(zhǔn)物濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和D(λ)作標(biāo)準(zhǔn)曲線；各孔數(shù)值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出。將樣品OD值代入方程，計(jì)算出樣品濃度。

酶標(biāo)測(cè)定基本原理：利用連接于固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體分別與樣品中被檢測(cè)抗原分子上兩個(gè)抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物。由于反應(yīng)系統(tǒng)中固相抗體和酶標(biāo)抗體的量相對(duì)于待測(cè)抗原是過(guò)量的，因此復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗原的含量成正比(在方法可檢測(cè)范圍內(nèi))。測(cè)定復(fù)合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物質(zhì)量(OD值)，即可確定待測(cè)抗原含量。該方法具有穩(wěn)定性高，保存期長(zhǎng)，操作簡(jiǎn)便，特異性高，無(wú)放射性核素污染的優(yōu)點(diǎn)。

3)血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果：

①各試驗(yàn)藥物對(duì)促腎上腺皮質(zhì)激素的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表7)顯示：組方復(fù)方高劑量組和復(fù)方中劑量組及(正常組)假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清促腎上腺皮質(zhì)激素含量顯著降低(P<0.05)，其它給藥組與更年期抑郁癥組比較促腎上腺皮質(zhì)激素含量有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

表7藥物對(duì)大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素含量的影響

備注：與更年抑郁癥組比較:*P<0.05，**P<0.01

②各試驗(yàn)藥物對(duì)單胺類(lèi)遞質(zhì)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表8)所示：復(fù)方高劑量，復(fù)方中劑量，假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清去甲腎上腺素含量顯著升高(P<0.01)，低劑量、帕羅西汀組與更年期抑郁癥組比較血清去甲腎上腺素含量升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；逍遙丸給藥組、更年期組與更年期抑郁癥組比較血清去甲腎上腺素含量有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

血清5-羥色胺含量與更年期抑郁癥組比較，復(fù)方高劑量組顯著升高(P<0.01)，逍遙丸組及假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清5-羥色胺含量升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余各給藥組與更年期抑郁癥組比較血清5-羥色胺含量有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

復(fù)方高劑量，復(fù)方中劑量，低劑量組及假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較，血清多巴胺含量顯著升高(P<0.05)，其余各給藥組與更年期抑郁癥組比較血清多巴胺含量有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

表8藥物對(duì)大鼠血清去甲腎上腺素、5羥色胺、多巴胺含量的影響

備注：與更年抑郁癥組比較:*P<0.05，**P<0.01

③各試驗(yàn)藥物cAMP/cGMP的影響

表9結(jié)果顯示：復(fù)方高劑量，復(fù)方中劑量，復(fù)方低劑量組，逍遙丸及假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清cAMP含量顯著升高(P<0.05)；血清cGMP含量與更年期抑郁癥組比較，復(fù)方低劑量組及假手術(shù)組顯著降低(P<0.01)，復(fù)方中劑量組及帕羅西汀組與更年期抑郁癥組比較，血清cGMP含量降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方高劑量，復(fù)方中劑量，復(fù)方低劑量組及假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清cAMP/cGMP含量顯著升高(P<0.01)，逍遙丸組與更年期抑郁癥組比較血清cAMP/cGMP含量升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表9藥物對(duì)大鼠血清cAMP、cGMP及cAMP/cGMP比值含量的影響

備注：與更年抑郁癥組比較:*P<0.05，**P<0.01

表10結(jié)果顯示：復(fù)方低劑量組與更年期抑郁癥組比較血清促卵泡生成激素(FSH)含量顯著降低(P<0.05)；其余各組與更年期抑郁癥組比較血清(FSH)含量有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；復(fù)方中劑量組與更年期抑郁癥組比較血清催產(chǎn)素(OT)含量顯著升高(P<0.05)；高劑量組、逍遙丸組、帕羅西汀、假手術(shù)組其血清催產(chǎn)素(OT)都有升高趨勢(shì)。顯示精神抑郁癥大鼠血清的催產(chǎn)素和促卵泡 生成激素含量關(guān)系。試驗(yàn)藥物復(fù)方高中低劑量組可使精神抑郁癥模型大鼠血清含量FSH：OT兩者比值關(guān)系為2：1(模型組失調(diào)態(tài))，經(jīng)藥物服藥后調(diào)整比值關(guān)系約為1：1(復(fù)方藥物組與正常組假手術(shù)組均呈正常態(tài))。

表10藥物對(duì)大鼠血清催產(chǎn)素、促卵泡生成激素含量的影響

備注：與更年抑郁癥組比較:*P<0.05，**P<0.01

表11結(jié)果顯示：復(fù)方中劑量組與更年期抑郁癥組比較血清二氫睪酮素(DHD)含量顯著升高(P<0.05)；其余各服藥組與更年期抑郁癥組比較血清(DHD)含量有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與更年期及精神抑郁癥組比較(DHD)和雌激素的比值關(guān)系，顯示更年期及精神抑郁癥模型大鼠血清二氫睪酮(DHT)含量與雌激素含量E2：由2：1(失調(diào)態(tài))調(diào)整比值約1.1：1(正常態(tài))。

表11藥物對(duì)大鼠血清二氫睪酮及雌二醇含量的影響

備注：與更年抑郁癥組比較:*P<0.05，**P<0.01

表12結(jié)果顯示：復(fù)合高劑量，復(fù)合中劑量，復(fù)合低劑量組，帕羅西汀組及假手術(shù)組與更年期抑郁癥組比較血清白細(xì)胞介素-6含量顯著降低(P<0.01)；血清白細(xì)胞介素-2含量與更年期抑郁癥組比較，復(fù)合高劑量組顯著降低(P<0.01)，但復(fù)合低劑量可使血清白細(xì)胞介素-2含量升高；帕羅西汀組與更年期抑郁癥組比較，血清白細(xì)胞介素-2含量降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；除逍遙丸試驗(yàn)組外其各對(duì)復(fù)方藥物組和陽(yáng)性對(duì)照組與更年期抑郁癥組比較血清白細(xì)胞介素-8含量均可降低至健康組(假手組水平)?？紤]試驗(yàn)樣本數(shù)量原因，本實(shí)驗(yàn)未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；IL-8為嗜中性粒細(xì)胞因子，是炎癥性疾病的重要介質(zhì)，在抗感染、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)以及抗腫瘤方面發(fā)揮重要作用。

表12藥物對(duì)大鼠血清IL-6、IL-2、IL-8含量的影響

綜上結(jié)果，本復(fù)方藥物組與精神抑郁模型大鼠模型組比較以及與陽(yáng)性藥非三環(huán)類(lèi)西藥帕羅西汀和逍遙丸比較其顯著的專(zhuān)屬性效果表現(xiàn)為：復(fù)方藥物組可有效調(diào)節(jié)精神抑郁癥模型大鼠血清：1)環(huán)磷酸腺苷(CAMP)和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(CGMP)信號(hào)分子兩者含量的比值；2)調(diào)節(jié)二氫睪酮和雌性激素兩者含量比值；3)調(diào)解促卵泡生成激素(FSH)和催產(chǎn)素(OT)比值；4)調(diào)節(jié)去甲腎上腺素NA：多巴胺比值。5)下調(diào)免疫白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8細(xì)胞因子含量，其白介素-2呈劑量量效關(guān)系，復(fù)方高劑量藥物呈下調(diào)血清白介素-2的作用，復(fù)方藥物低劑量呈上調(diào)血清白介素-2的作用。

6.本品治療更年期精神抑郁癥的可能機(jī)制：

本品可通過(guò)體內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶-環(huán)磷酸腺苷(AC-cAMP)系統(tǒng)功能：即通過(guò)對(duì)機(jī)體靶受體的激活，使調(diào)節(jié)體內(nèi)血清環(huán)磷酸腺苷-cAMP和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷-cGMP含量比例，對(duì)生殖性激素：促卵泡生成激素、催產(chǎn)素、二氫睪酮激素；腎上腺激素：促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH、皮質(zhì)酮Cor；對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)：去甲腎上腺激素NA、五羥基色胺5-HT、多巴胺DA；對(duì)免疫白細(xì)胞因子白介素-6和白細(xì)胞介素-8細(xì)胞因子及白介素-2等諸多影響因子的含量進(jìn)行正負(fù)性平衡的調(diào)節(jié)；由于復(fù)方藥物組能夠?qū)褚钟舭Y模型大鼠的內(nèi)分泌、神經(jīng)遞質(zhì)、性激素、免疫等靶受體分泌的活性標(biāo)志物含量進(jìn)行有效的上調(diào)或下調(diào)(或稱(chēng)正負(fù)性平衡的調(diào)節(jié))，使神經(jīng)內(nèi)分泌的諸多影響因子從紊亂失調(diào)態(tài)調(diào)至健康態(tài)。本復(fù)方藥物優(yōu)于市場(chǎng)同類(lèi)更年期精神抑郁癥的中西藥。

申請(qǐng)人長(zhǎng)期從事沙棘藥物(沙棘果油)單味及復(fù)方藥物的研究，通過(guò)藥理、有效成分、體內(nèi)生化及營(yíng)養(yǎng)代謝方面的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究工作，尤其通過(guò)對(duì)天然復(fù)方沙棘果油與三七莖葉總皂苷正交設(shè)計(jì)篩選組方的藥理學(xué)對(duì)作用受體靶標(biāo)生物影響因子的系統(tǒng)研究后得出，沙棘果油與三七莖葉總皂苷比“沙棘果油和沙棘葉提取物在制備治療精神抑郁癥藥物中的應(yīng)用”專(zhuān)利號(hào)：ZL2005100962820的療效進(jìn)行比較，顯示其組合物具有增效減量強(qiáng)效作用，且功效作用更加顯著更加全面。

申請(qǐng)人在沙棘果油研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合精神抑郁癥疾病的病因機(jī)制：與中醫(yī)臨床的血淤及氣滯有關(guān)。為解決在治療精神抑郁癥疾病的病機(jī)本質(zhì)，發(fā)明人在沙棘果油單味藥中加入三七莖葉總皂苷組合天然復(fù)方藥物，發(fā)現(xiàn)經(jīng)配伍的組方比例和服藥劑量，通過(guò)一定的服藥周期，可使模型大鼠血清的內(nèi)分泌性激素、神經(jīng)遞質(zhì)、免疫細(xì)胞因子以及環(huán)核苷酸信號(hào)分子的含量比例紊亂或失調(diào)態(tài)得以糾正、調(diào)節(jié)到正常健康態(tài)，從而得以治療更年期及精神抑郁疾病。與申請(qǐng)人前期的專(zhuān)利：ZL2005100962820的療效進(jìn)行比較，該復(fù)方組合物，除顯示其作用 靶標(biāo)分子的藥理藥效作用更加全面和有更加顯著外，其服藥劑量對(duì)調(diào)整更年期及精神抑郁疾病的腺苷酸環(huán)化酶-環(huán)磷酸腺苷-cAMP和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷-cGMP含量比例，對(duì)生殖性激素：促卵泡生成激素、催產(chǎn)素、二氫睪酮激素；腎上腺激素：促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH、皮質(zhì)酮Cor；對(duì)免疫白細(xì)胞因子白介素-6和白細(xì)胞介素-8細(xì)胞因子及白介素-2等諸多影響因子的含量進(jìn)行正負(fù)性平衡的調(diào)節(jié)；是前述ZL2005100962820專(zhuān)利所未探及的新發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域。

迄今為止，除本人申請(qǐng)的專(zhuān)利外，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)采用沙棘果油和三七莖葉總皂苷復(fù)方藥物治療精神抑郁癥疾病的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。至今市場(chǎng)上沒(méi)有較理想的防治上述疾病的安全、精簡(jiǎn)、的藥物。

限于對(duì)文件字?jǐn)?shù)的控制，對(duì)非典型抑郁障礙的臨床病例觀察，暫未提供，需要可隨時(shí)提供。上述實(shí)施例只說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的使熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。