本發(fā)明屬于天然藥物有效成分的制備分離領(lǐng)域，具體涉及一種利用大孔吸附樹脂制備分離桑葉中綠原酸類成分的工藝。

背景技術(shù)：

桑葉，為?？浦参锷５母稍锶~，又名家桑、荊桑、桑椹樹、黃桑等，全國大部分地區(qū)多有生產(chǎn)。具有降血壓、血脂、抗炎等作用，主要功能為疏散風(fēng)熱，清肺潤燥，清肝明目。用于風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中稱桑葉為“神仙草”，具有補(bǔ)血、疏風(fēng)、散熱、益肝通氣、降壓利尿之功效?！侗静菥V目》中明確記載：“煎汁代茗，能止消渴”?，F(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)桑葉中含有黃酮類、生物堿、多糖、多酚類、植物甾醇、脂類、揮發(fā)油、氨基酸、維生素及微量元素等多種活性化學(xué)成分，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗菌和抗病毒、抗氧化等多種藥理作用。

有關(guān)桑葉中有效成分的提取方法的報(bào)道和專利已有不少，但通過文獻(xiàn)查詢，從桑葉中分離純化綠原酸類成分的專利較少。中國專利申請(qǐng)?zhí)枮?01210255122.6公開了“一種具有抑菌活性的桑葉酚酸提取物制備方法和應(yīng)用”，該專利涉及采用超聲提取、樹脂分離桑葉多酚的方法以及應(yīng)用。中國專利申請(qǐng)?zhí)枮?00810219728.8公開了“一種桑葉多酚的制備方法及其微膠囊和應(yīng)用，”采用超聲-微波協(xié)調(diào)萃取、超濾、大孔吸附樹脂純化等工藝獲得桑葉多酚并用微膠囊技術(shù)制備多酚微膠囊，應(yīng)用于抗氧化和護(hù)肝功效的功能食品。上述方法中，多酚類成分的監(jiān)控未能有具體的指標(biāo)成分，而是以大類總體成分作為指標(biāo)，比較粗糙?，F(xiàn)有的專利未涉及以綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸為指標(biāo)來監(jiān)控桑葉提取物的質(zhì)量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種桑葉中綠原酸類成分的大孔樹脂分離純化方法，是將桑葉提取液經(jīng)樹脂吸附、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得桑葉提取物。

本發(fā)明提供的一種提取分離桑葉中綠原酸類成分的樹脂純化方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

（1）將桑葉粉碎，用10～16倍一定濃度的乙醇回流提取1～3小時(shí)，提取2～3次，合并提取液。

（2）將醇提取液加酸調(diào)Ph至2～5，快速通過大孔樹脂吸附，先用1～5倍樹脂體積的純化水沖洗，柱下液棄去，再用1～4倍樹脂體積的堿溶液洗脫，再用2～5倍純化水洗脫，收集堿以及水洗脫液。

（3）將步驟（2）中的堿以及水洗脫液加酸調(diào)Ph至2～5后，上大孔樹脂吸附，再用50%～80%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液。

（4）將醇洗脫液減壓濃縮，噴霧干燥，既得桑葉提取物。

步驟（1）中的乙醇濃度為50%～90%

步驟（2）中的堿可選碳酸鈉、氨水、碳酸氫鈉、碳酸氫鈣。大孔樹脂型號(hào)可以為AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD427、HPD600、HPD722、HPD826中的一種；酸可選鹽酸、磷酸或硫酸的一種；藥材重量:樹脂體積為1:1～1:3。

步驟（3）中的酸可選鹽酸、磷酸或硫酸的一種。大孔樹脂型號(hào)可以為AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD427、HPD600、HPD722、HPD826中的一種。藥材重量:樹脂體積為1:0.5～1:1。乙醇用量為樹脂體積的2～5倍。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、本發(fā)明提供的桑葉中綠原酸類成分的樹脂純化方法操作簡便、快捷；

2、所選用的大孔樹脂具有吸附量大、解析率大，可再生重復(fù)使用；

3、用本發(fā)明純化桑葉，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸三種成分總量能達(dá)到40%以上。

附圖說明

圖1為桑葉中綠原酸類成分的純化工藝流程圖。

圖2為三種綠原酸類成分的高效液相色譜檢測(cè)圖譜。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

將桑葉藥材10kg，粉碎，用12倍量70%乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，加硫酸調(diào)節(jié)Ph至3，用15L的HPD826大孔樹脂吸附，用20L純化水沖洗，棄去洗脫液，再用1%的碳酸氫鈣溶液20L洗脫，并加60L純化水續(xù)洗，收集堿及水續(xù)洗液；將洗脫液加硫酸調(diào)Ph至4，用10L的HPD600大孔樹脂吸附，再用80%乙醇30L洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥，得桑葉提取物121g，三種綠原酸類成分（綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸）含量之和為52%。

實(shí)施例2

將桑葉藥材10kg，粉碎，用10倍量90%乙醇回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，加鹽酸調(diào)Ph至4，用20L的D101大孔樹脂吸附，用30L純化水沖洗，棄去洗脫液，再用2%的碳酸納溶液40L洗脫，并加50L純化水續(xù)洗，收集堿及水續(xù)洗液；將洗脫液加鹽酸調(diào)Ph至3，用8L的HPD400大孔樹脂吸附，再用60%乙醇24L洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥，得桑葉提取物103g，三種綠原酸類成分（綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸）含量之和為47%。

實(shí)施例3

將桑葉藥材10kg，粉碎，用14倍量60%乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，加磷酸調(diào)Ph至5，用10L的HPD100大孔樹脂吸附，用10L純化水沖洗，棄去洗脫液，再用3%的碳酸氫鈉溶液40L洗脫，并加50L純化水續(xù)洗，收集堿及水續(xù)洗液；將洗脫液加磷酸調(diào)Ph至2，用6L的HPD427大孔樹脂吸附，再用70%乙醇30L洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥，得桑葉提取物116g，三種綠原酸類成分（綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸）含量之和為43%。

實(shí)施例4

將桑葉藥材10kg，粉碎，用16倍量50%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，加鹽酸調(diào)Ph至2，用25L的HPD722大孔樹脂吸附，用25L純化水沖洗，棄去洗脫液，再用2%的氨水溶液50L洗脫，并加60L純化水續(xù)洗，收集堿及水續(xù)洗液；將洗脫液加鹽酸調(diào)Ph至5，用7L的AB-8大孔樹脂吸附，再用50%乙醇35L洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥，得桑葉提取物136g，三種綠原酸類成分（綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸）含量之和為42%。