本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物及其藥物制劑。
背景技術(shù)：
隨著經(jīng)濟高速發(fā)展和工業(yè)化進展的加速，人類健康面臨的非傳染性疾病威脅正日益增重，其中，糖尿病和隨之而來的并發(fā)癥更是危害健康的無情殺手。目前，糖尿病以危及人類健康“三大殺手”之一高居諸病前鋒，在全世界構(gòu)成龐大的患者群。據(jù)報道，在中國，其年發(fā)病率在3.2％以上，且呈不斷上升趨勢，發(fā)展形勢日趨嚴峻。糖尿病患者的皮膚易受損傷，糖尿病病人的皮膚損傷簡稱為糖尿病創(chuàng)傷。糖尿病創(chuàng)傷在損傷后往往反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，形成難愈性潰瘍，可能導(dǎo)致壞疽及截肢，是糖尿病并發(fā)癥的嚴重后果之一。
盡管目前報道了多種針對糖尿病創(chuàng)傷的治療方法，例如手術(shù)治療、物理治療和中醫(yī)治療，但是總體上來說，糖尿病創(chuàng)傷的日常治療至今仍無便捷而有效的方法，很多患者往往因延誤治療而致殘，嚴重則危及生命。在糖尿病創(chuàng)傷的治療中，藥物治療因其方法簡便易行，深受廣大患者青睞，但是目前尚沒有能夠有效治療糖尿病創(chuàng)傷的藥物。糖尿病創(chuàng)傷成為了頑疾，嚴重影響了糖尿病病人的生活。目前，全世界都在尋求治療糖尿病創(chuàng)傷的高效藥物及其藥物制劑，廣大患者更是渴望日常創(chuàng)傷能夠及時自我處理的普及性藥物制劑。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物及其藥物制劑。本發(fā)明提供的藥物組合物中各個組分之間產(chǎn)生了協(xié)同增效作用，顯著提高了藥效，該藥物組合物可應(yīng)用于治療皮膚創(chuàng)傷，且可制備成多種藥物制劑，更有利于其推廣和使用。
本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
本發(fā)明提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物，其包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；
其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)所述表皮細胞生長因子：(10～25U)所述胰島素：(1～5g)所述多糖。
在本發(fā)明中，表皮細胞生長因子是指具有表皮細胞生長因子活性的蛋白質(zhì)，其能夠刺激細胞增殖、分化和遷移。本發(fā)明中的表皮細胞生長因子可以為天然活性肽，也可以為重組表皮細胞生長因子；且不受物種限制，優(yōu)選為哺乳動物表皮細胞生長因子。在本發(fā)明的一些實施例中，所用表皮細胞生長因子選自豬表皮細胞生長因子、牛表皮細胞生長因子或人表皮細胞生長因子。
發(fā)明人在利用異體胰島細胞移植治療糖尿病的研究中發(fā)現(xiàn)哺乳動物腺體細胞經(jīng)體外培養(yǎng)仍可釋放出多種天然活性肽物質(zhì)，其主要成分之一為表皮細胞生長因子(EGF)，該物質(zhì)可刺激皮膚細胞的生長與修復(fù)。據(jù)文獻報道，表皮細胞生長因子(EGF)是機體內(nèi)天然存在的一種生長因子，其主要功能是促進皮膚細胞的分裂增殖。研究發(fā)現(xiàn)，EGF能促進上皮細胞、成纖維細胞的增殖；增強表皮細胞的活力；延緩表皮細胞的老化，使肌膚各組成成份保持最佳生理狀態(tài)。此外，它還能刺激細胞外一些大分子(如透明質(zhì)酸和膠原白等)的合成與分泌、滋潤皮膚，是決定肌膚活力和健康的源泉。
在本發(fā)明中，胰島素是指具有胰島素活性的蛋白質(zhì)，其由胰臟內(nèi)的胰島β細胞分泌，能夠促進細胞對葡萄糖的攝取和利用，降低血糖；促進糖原、脂肪、蛋白質(zhì)的合成。本發(fā)明中的胰島素可以為天然活性肽，也可以為重組胰島素；且不受物種限制，優(yōu)選為哺乳動物胰島素。在本發(fā)明的一些實施例中，所用胰島素選自豬胰島素、牛胰島素或人胰島素。
在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中的表皮細胞生長因子由表皮細胞生長因子提取液提供。
在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中，當由表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子時，所述表皮細胞生長因子提取液的制備方法包括：
獲得下頜腺組織，切碎后，采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞，培養(yǎng)6～9天，收集上清液，即得。
在本發(fā)明中，表皮細胞生長因子提取液的制備方法中的下頜腺組織來自于哺乳動物；優(yōu)選豬、牛或人。在本發(fā)明的一些實施例中，所用的下頜腺組織來自于豬。
在本發(fā)明中，表皮細胞生長因子提取液的制備方法中，以體積百分比計，組織塊培養(yǎng)法所用的培養(yǎng)基為含20％FCS的1640培養(yǎng)液。
在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中，當由表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子時，所述表皮細胞生長因子提取液的制備方法具體為：
摘取哺乳動物下頜腺活體組織，剪為碎塊，經(jīng)Hanks液自然沉淀洗滌后，置于含有20％FCS的1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)6～9天；細胞培育過程中，培養(yǎng)液保持清澈，分次收集全部上清液，即得。
在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中的胰島素由胰腺提取液提供。
在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中，當由胰腺提取液提供胰島素時，所述胰島素提取液的制備方法包括：
摘取哺乳動物胰腺活體組織，剪為碎塊，經(jīng)Hanks液自然沉淀洗滌后，置于含有20％FCS的1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)6～9天；細胞培育過程中，培養(yǎng)液保持清澈，分次收集全部上清液，即得。
在本發(fā)明提供的藥物組合物中，表皮細胞生長因子、胰島素和多糖都有各自的作用機制，但是針對糖尿病病人的皮膚創(chuàng)傷的治療，在單獨使用時，效果不明顯。本發(fā)明大膽將表皮細胞生長因子、胰島素和多糖進行組合，通過大量的創(chuàng)造性勞動，獲得本發(fā)明提供的藥物組合物。實驗結(jié)果證實，本發(fā)明提供的藥物組合物能夠刺激細胞生長、促進創(chuàng)傷愈合，且不同的組分之間產(chǎn)生了協(xié)同增效作用。發(fā)明人還意外發(fā)現(xiàn)，當由所述表皮細胞生長因子提取液提供表皮細胞生長因子、采用所述胰島素提取液提供胰島素時，在各個組分含量相同的情況下，所得的藥物組合物的活性要優(yōu)于表皮細胞生長因子、胰島素和多糖藥物組合物，差異顯著(P＜0.05)。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物組合物中的低聚多糖選自：動物性食物纖維。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物選自：殼聚糖、殼寡糖、D-氨基葡萄糖鹽酸鹽或羧甲基殼聚糖。
更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物為殼聚糖。本發(fā)明中的殼聚糖包括高密度殼聚糖、水溶性殼聚糖，但不僅限于這兩類殼聚糖。進一步優(yōu)選地，本發(fā)明中所用的殼聚糖的性質(zhì)優(yōu)選為水溶性殼聚糖。
在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中的低聚多糖衍生物為殼聚糖。海洋生物殼體組織的提取物甲殼素及其改性衍生物殼聚糖具有一系列優(yōu)良的理化性能和藥物功效，它具有很強的生物兼容性：其分子中的氨基和羥基與生物大分子蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、酶類具有良好親合性。研究報道，殼聚糖對創(chuàng)傷具有促愈作用，還具有抑癌效應(yīng)和免疫活性、且無熱源反應(yīng)、無皮膚刺激反應(yīng)、無皮膚致敏反應(yīng)、無全身過敏反應(yīng)，對眼結(jié)膜及角膜無刺激性，與生物材料亦無溶血反應(yīng)。殼聚糖良好的藥理功能和安全性在研究和實踐等廣泛領(lǐng)域獲得公認。
在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物中，所述組分還包括珍珠粉和/或三七粉。
珍珠粉和/或三七粉的作用：珍珠粉是優(yōu)質(zhì)中藥材，它對皮膚具有潤滑、滋養(yǎng)、美白、斂瘡等多種功效。三七粉具有化瘀、止血，活血定痛的功效。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物組合物所針對的皮膚創(chuàng)傷選自糖尿病相關(guān)的創(chuàng)傷、潰瘍、燒傷、曬傷、老化皮膚創(chuàng)傷、角膜潰爛創(chuàng)傷、炎性胃腸道疾病創(chuàng)傷、腸炎性疾病創(chuàng)傷、克羅恩氏病創(chuàng)傷、潰瘍性結(jié)腸炎、褥瘡、大皰性表面松解癥創(chuàng)傷、皮膚起皰創(chuàng)傷、牛皮癬創(chuàng)傷、視網(wǎng)膜病創(chuàng)傷、口腔創(chuàng)傷、裂傷、手術(shù)切口創(chuàng)傷或手術(shù)后粘連創(chuàng)傷。在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的藥物組合物所針對的皮膚創(chuàng)傷具體為糖尿病相關(guān)的創(chuàng)傷。
本發(fā)明還提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物，其由本發(fā)明提供的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料組成；
該藥物組合物包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；
其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)所述表皮細胞生長因子：(10～25U)所述胰島素：(1～5g)所述多糖。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物的劑型為軟膏劑、乳劑、噴劑或涂膜劑。
本發(fā)明還提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑，100mL藥物制劑中包括如下含量的各個組分：
其中，所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑中的助溶劑選自聚乙二醇、乙酰胺、硼砂、碘化鉀或苯甲酸鈉。更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑中的助溶劑為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量為370-630。進一步優(yōu)選地，聚乙二醇的分子量為370～460。在本發(fā)明的一些實施例中，所用助溶劑具體為聚乙二醇400。
本發(fā)明還提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑，100ml藥物制劑中包括如下含量的各個組分：
其中，所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供的治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑中的助溶劑選自聚乙二醇、乙酰胺、硼砂、碘化鉀或苯甲酸鈉。更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的治療皮膚創(chuàng)傷的噴劑中的助溶劑為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量為370-630。進一步優(yōu)選地，聚乙二醇的分子量為370～460。在本發(fā)明的一些實施例中，所用助溶劑具體為聚乙二醇400。
本發(fā)明提供了一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物及其藥物制劑，該藥物組合物包括表皮細胞生長因子、胰島素和多糖；所述多糖為低聚多糖和/或低聚多糖衍生物；其中，各個組分的含量之比為：(8～12mg)表皮細胞生長因子：(10～25U)胰島素：(1～5g)所述多糖。本發(fā)明提供的藥物組合物中各個組分之間產(chǎn)生了協(xié)同增效作用，顯著提高了藥效，實驗結(jié)果證實，該藥物組合物可用于頑固 的糖尿病創(chuàng)傷，治療效果顯著，為糖尿病病人日常生活創(chuàng)傷的防范和治療提供了新方法，且該藥物組合物可制成多種藥物制劑，更有利于其推廣和使用。
具體實施方式
本發(fā)明公開了一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物及其藥物制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考本文內(nèi)容，使用該方法，制備獲得該藥物組合物，實現(xiàn)其應(yīng)用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明的藥物組合物、其藥物制劑及其制備方法和應(yīng)用已經(jīng)通過較佳的實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文的藥物組合物、其藥物制劑、制備方法和應(yīng)用進行適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
本發(fā)明提供的一種治療皮膚創(chuàng)傷的藥物組合物及其藥物制劑中所用到的試劑盒原料均可由市場購得。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于此，實施例中的制備方法均為常規(guī)制備方法，此處不再詳述。
實施例1藥物組合物的制備
(1)表皮細胞生長因子提取液的制備：
在無菌控制條件下摘取豬幼仔(約出生8-12小時)下頜腺活體組織，快速稱重為350mg，之后剪為碎塊，經(jīng)Hanks液自然沉淀洗滌3次后，置于含有20％FBS的1640培養(yǎng)基16ml的培養(yǎng)瓶(50ml)中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-9天，細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液應(yīng)保持清澈，分次收集全部上清液，置于-20℃，備用。
采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測其中的表皮細胞生長因子，從第1天到第9天，獲取的表皮細胞生長因子含量逐天遞減，高值至低值為30～5mg/ml。
(2)胰島素提取液的制備：
在無菌控制條件下摘取豬幼仔(約出生8-12小時)胰腺活體組織，快速稱重為450mg，之后剪為碎塊，經(jīng)Hanks液自然沉淀洗滌3次后，置于含有20％FBS的1640培養(yǎng)基16ml的培養(yǎng)瓶(50ml)中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6-9天，細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液應(yīng)保持清澈，分次收集全部上清液，置于-20℃，備用。
采用胰島素放射免疫藥盒(雙抗--PEG法)檢測其中的胰島素，從第1天到第9天，獲取的胰島素含量逐天遞減，高值至低值為23-2.6U/ml。
(3)藥物組合物的制備：
將準確稱量的表皮細胞生長因子、胰島素、水溶性殼聚糖、珍珠粉(或三七粉)、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例2藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例3藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例4藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例5藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、珍珠粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例6藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、三七粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例7藥物制劑的制備
按照如下配方準確稱量各個組分，備用：
按照如下方法制備獲得含藥物組合物的噴劑：
將準確稱量的表皮細胞生長因子提取液(按照實施例1提供的表皮細胞生長因子提取液的制備方法制備獲得)、胰島素提取液(按照實施例1提供的胰島素提取液的制備方法制備獲得)、水溶性殼聚糖、珍珠粉、聚乙二醇400混合，加入約50ml的水，充分溶解后，加水至100ml，滅菌，分裝，即得。
實施例8藥效實驗
試驗材料：Wistar大白鼠30只，體重150-180克(g)，雌雄各半，購自濟南磐升生物技術(shù)有限責任公司。實施例2制備獲得的藥物制劑為試驗組，“百多邦”莫匹羅星軟膏為對照組、生理鹽水為空白對照組。
試驗方法：
1、動物模型：深Ⅱ度燙傷模型的制備。將大鼠背部皮膚去毛后，浸入85℃恒溫水浴中，持續(xù)15秒，造成深Ⅱ度燙傷，面積4*6cm，體表面積的10％。
2、動物分組：采用雌雄分別隨機均衡分組法，共分三組：(1)空白對照組10只，涂抹生理鹽水。(2)對照組10只，涂抹“百多邦”莫匹羅星軟膏(主要成份：莫匹羅星)。(3)試驗組10只，涂抹“實施例2制備獲得的藥物制劑”。上述三組每天換藥一次，每次每cm2涂藥2ml，觀察15天，記錄三組大白鼠的創(chuàng)面愈合時間(天)和愈合率(％)，實驗結(jié)果見表1。
表1觀察記錄表
試驗結(jié)果討論：
試驗組10只受試物創(chuàng)面7天左右愈合，愈合率達到100％。涂抹生理鹽水的空白對照組15天后，受試物創(chuàng)面愈合率為0％。對照組12±2天，受試物創(chuàng)面愈合率為20％。試驗表明，與空白對照組和對照組相比較，實施例2制備獲得 的藥物制劑可以促進創(chuàng)面愈合，具有顯著的皮膚修復(fù)作用(P≤0.01)。
分別采用實施例3至實施例7制備獲得的藥物制劑，按照相同的試驗方法檢測各個藥物制劑的活性，得到了相似的實驗結(jié)果，說明本發(fā)明提供的藥物組合物、藥物制劑能夠有效促進創(chuàng)面愈合，具有皮膚修復(fù)作用，可作為治療皮膚創(chuàng)傷的藥物。
實施例9臨床觀察實驗
材料：實施例2制備獲得的藥物制劑。
治療方法：糖尿病患者的瘡面經(jīng)生理鹽水或硫酸慶大霉素注射液洗瘡后，將消毒藥棉浸漬適量藥液鋪于瘡面上，或?qū)⑺幰褐苯油坑诨继幵俑采w輔料，每天或隔日換藥一次療程7-15天。
附病例1：
王XX，女，68歲，患Ⅱ型糖尿病15余年，于2013年6月患帶狀皰疹，左胸、背部簇集性血疹，水皰，皮疹，皮膚潮紅，呈帶狀分布。用實施例2制備獲得的藥物制劑治療后，10天左右上述皮疹自行吸收，皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。
附病例2：
田XX，男，60歲，患Ⅱ型糖尿病5年。2013年10月，左小腿因外傷引起紅斑、丘疹，滲出液瘙癢，3周后發(fā)展為全身泛性濕疹，住院16天經(jīng)控制糖尿病和抗過敏治療雖全身丘疹治愈，但左小腿的創(chuàng)傷仍未愈，自動出院。左小腿患處潰爛，其面積為20×20cm2。用多種中、西藥膏均過敏，用實施例2制備獲得的藥物制劑治療后，2周左右皮膚痊愈，痊愈后皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。
附病例3：
張XX，女，65歲，患Ⅱ型糖尿病10余年，2013年6月因摔傷，大腿三處骨折，進行外科手術(shù)，術(shù)后刀口有3處，刀口分別長10cm/8cm/5cm。術(shù)后拆線，用實施例2制備獲得的藥物制劑治療7天后，刀口痊愈，無明顯疤痕。
附病例4：
鄧XX，男，60歲，患Ⅱ型糖尿病6年，2012年7月開水燙傷右上肢前端呈水皰，但未感染，其面積為4×9cm2。用實施例2制備獲得的藥物制劑治療5天后痊愈，痊愈后皮膚光滑同正常皮膚，無瘢痕。