本發(fā)明提供一種藻類萃取物的組合物，該藻類萃取物含有藻藍(lán)蛋白，能有效抑制口腔病原菌包括牙齦卟啉單胞菌和伴放線桿菌的生長，并降低該病原菌所造成的發(fā)炎反應(yīng)，使牙周病患者的齒槽骨流失現(xiàn)象減緩，而達(dá)到預(yù)防及治療牙周病的效果。

背景技術(shù)：

牙周病為一慢性疾病，而且在世界各地皆有很高的流行比例。根據(jù)牙周病醫(yī)學(xué)會的統(tǒng)計，臺灣成年人罹患牙周病比例高達(dá)九成以上，這些患者除了牙齒外觀不美麗外，更容易引起其他口腔疾病及口臭等現(xiàn)象，嚴(yán)重影響人際關(guān)系與社交生活。造成牙周病的主要因子為細(xì)菌，其他的因素包括抽煙、遺傳、壓力、飲食、年齡、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、艾滋病感染、放射線的照射及抑制免疫能力藥物的服用等，皆可能增加罹患牙周病的風(fēng)險，并加速牙周致病菌的破壞發(fā)生的速度。

在牙齦與牙齒交接的地方有一溝槽，稱之為牙齦溝，在這個地方會因為口腔衛(wèi)生不良，而造成細(xì)菌滋生，逐漸形成生物膜(biofilm)。這些細(xì)菌主要是牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)以及伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)，它們藉由黏連因子附著于生物膜上，并可彼此吸附與聚集，形成牙菌斑(plaque)。

牙菌斑內(nèi)的細(xì)菌會入侵牙齒周圍組織，并逐漸形成牙周囊袋。入侵的細(xì)菌本身及其所分泌的毒素，亦會刺激宿主細(xì)胞制造發(fā)炎前驅(qū)因子，其中包括環(huán)氧化酶(COX)的產(chǎn)物及誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(inducible NO synthase，iNOS)的代謝物等，直接或間接地再造成牙齒周圍組織的破壞。

在臨床上，觀察患者牙周齒槽骨的高度是非常重要的，因為齒槽骨的高度會直接影響到牙齒的存留。體內(nèi)骨質(zhì)的存在乃沉積與吸收兩者不斷交互作用的結(jié)果，當(dāng)沉積多于吸收，骨質(zhì)增加，若吸收多于沉積，則骨質(zhì)減少，而牙周齒槽骨高度之決定亦然。骨質(zhì)的沉積與吸收決定于成骨細(xì)胞(osteoblast)與蝕骨細(xì)胞(osteoclast)，當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入齒槽骨后，會破壞毛細(xì)血管，阻斷營養(yǎng)供給，降低成骨細(xì)胞活性。另一方面，細(xì)菌所誘導(dǎo)的發(fā)炎因子(例如TNF-α、IL-1)及免疫細(xì)胞(例如T細(xì)胞)會促使蝕骨細(xì)胞大量產(chǎn)生并活化，進(jìn)而造成齒槽骨萎縮、骨質(zhì)流失，最終導(dǎo)致牙床降低、牙根暴露、牙齒松動脫落。

綜觀而論，牙菌斑中的細(xì)菌是造成牙周病的主要元兇，因此減少該病原菌的聚集及增生是預(yù)防及治療牙周病的首要目標(biāo)。此外，目前牙周病除外科治療外，藥物治療仍沒有很好的效果，因此值得進(jìn)一步研究與開發(fā)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防或/和治療牙周病的組合物，所述組合物為藻類萃取物，包含有效濃度的藻藍(lán)蛋白。

本發(fā)明實施例中，所述組合物的藻藍(lán)蛋白的有效濃度≥50μg/ml。

本發(fā)明實施例中，其中所述組合物的藻藍(lán)蛋白的有效濃度為50μg/ml ～600μg/ml。

本發(fā)明另提供一種用于預(yù)防牙周病的藻類萃取物的組合物，其中所述組合物包含有效濃度的藻藍(lán)蛋白。

本發(fā)明的實施例中，其中所述組合物的藻藍(lán)蛋白的有效濃度≥50μg/ml，優(yōu)選為50μg/ml～600μg/ml。

本發(fā)明提供一種藻類萃取物的組合物，能有效抑制口腔病原菌的生長。

本發(fā)明的實施例中，所述口腔病原菌為牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)或伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)。

本發(fā)明提供一種藻類萃取物的組合物，能有效減緩牙周病患者齒槽骨流失的現(xiàn)象。

本發(fā)明提供一種藻類萃取物的組合物，能有效降低因口腔病原菌感染所導(dǎo)致的發(fā)炎現(xiàn)象。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻藍(lán)蛋白是選自藻藍(lán)素、藻紅素或異藻藍(lán)素中的一種或多種。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻藍(lán)蛋白含有C-藻藍(lán)素。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物可以制作成膏狀、針劑或貼片等型式使用。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物能添加于潔牙產(chǎn)品，如牙膏、潔牙粉、漱口水或牙線等。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物能涂抹于牙齒矯正工具，如牙套，或假牙上。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物能添加于應(yīng)用在牙套 或假牙等相關(guān)的產(chǎn)品中，如黏著劑或洗潔液等。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物能添加于補(bǔ)牙物料，如銀粉、合成樹脂等。

本發(fā)明的實施例中，其中所述藻類萃取物的組合物能混合于口香糖、薄荷錠或口腔清新劑等產(chǎn)品。

本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藻類萃取物的組合物用于制備治療牙周病的用途，其中所述組合物包含有效濃度的藻藍(lán)蛋白，且該治療牙周病的機(jī)制系透過抑制口腔病原菌的生長。

本發(fā)明的實施例中，其中所述組合物的藻藍(lán)蛋白的有效濃度為≥50μg/ml；優(yōu)選為50μg/ml～600μg/ml。

本發(fā)明亦提供一種藻類萃取物的組合物用于制備預(yù)防牙周病的用途，其中所述組合物包含有效濃度的藻藍(lán)蛋白，且該預(yù)防牙周病的機(jī)制是通過抑制口腔病原菌的生長。

本發(fā)明的實施例中，其中所述組合物的藻藍(lán)蛋白的有效濃度≥50μg/ml，優(yōu)選為50μg/ml～600μg/ml。

附圖說明

圖1A為本發(fā)明不同劑量的含藻藍(lán)蛋白萃取物對牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)的抑制結(jié)果圖；

圖1B圖為本發(fā)明不同劑量的含藻藍(lán)蛋白萃取物對伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)的抑制結(jié)果圖；

圖2A為大白鼠口腔牙齒結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2B為動物牙周病誘發(fā)實驗操作圖；

圖3為誘發(fā)動物牙周病的實驗的設(shè)計流程圖；

圖4A為斷層掃描觀察動物齒槽骨流失的現(xiàn)象的掃描圖；

圖4B為動物齒槽骨流失的牙釉質(zhì)交接到齒槽骨的距離的統(tǒng)計結(jié)果圖；

圖4C為顯示在不同條件處理下的動物的牙齦組織病理切片圖，其中：d為象牙質(zhì)，g為牙齦，pl為牙周韌帶，ab為齒槽骨。

具體實施方式

實施例一：抗菌測試

1.牙周病主要致病菌種培養(yǎng)

參考Jeong et al.,2000以及Zhou et al.,2006兩篇期刊，培養(yǎng)牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)及伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)兩種主要牙周致病菌株。

2.抗菌試驗

依據(jù)抑制50％細(xì)菌生長的實驗設(shè)計指標(biāo)，觀察本發(fā)明不同濃度(25、50、100、150、300、600μg/ml)的含藻藍(lán)蛋白萃取物，對牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)(如圖1A)及伴放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)(如圖1B)的抑制現(xiàn)象。其中，圖1A與圖1B的橫坐標(biāo)表示加入不同濃度(μg/ml)的含藻藍(lán)蛋白萃取物，而縱坐標(biāo)則表示于波長660nm下所測到的吸光值，并以百分比例顯示。由圖1A的結(jié)果可知：本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物抑制50％牙齦卟啉單胞菌生長的有效劑量約為150μg/ml，而圖1B顯示其抑制50％伴放線桿菌生長的有效劑量則大約為100μg/ml，但對大腸桿菌(E.coli),金黃色葡萄球菌(S.aureus)、變形鏈球菌(Streptococcus mutans)以及紅色毛癬菌(T.rubrum)無抑制效果，因此 本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物具有抑制牙周致病菌的生長效果。

實施例二：齒槽骨流失現(xiàn)象的觀察

1.實驗動物

本發(fā)明采用Sprague Dawley(SD)品系的雄性大白鼠進(jìn)行試驗，每只大白鼠的體重約為280-310公克。大白鼠來源為國家動物中心(臺北市南港區(qū)研究院路二段128號)，并飼養(yǎng)在國防醫(yī)學(xué)院動物中心(臺北市內(nèi)湖區(qū)民權(quán)東路六段161號)，該飼養(yǎng)環(huán)境為溫度23-25℃，光照周期控制在日夜各12小時，其中光周期的時間為8:00-20:00，并充份供應(yīng)飼料與飲水。此外，飼養(yǎng)房調(diào)控在適當(dāng)?shù)臐穸?，并供給獨立過濾的空氣。

2.牙周病疾病動物模式建立

依據(jù)Cai et al.,2008所發(fā)表的期刊，以結(jié)扎線方式誘發(fā)牙周病模式(Ligature-induced periodontal disease model)，以下簡稱為ligation。首先大白鼠以腹腔注射的方式給予麻醉藥后，將結(jié)扎線放置在下顎兩側(cè)第一大臼齒齒頸部及上顎第二大臼齒齒頸部，參考圖第2A及2B，并將線結(jié)放置在頰側(cè)近心面。

3.實驗設(shè)計

將大白鼠隨機(jī)分成五組，包括(1)正常組(control)、(2)誘發(fā)組(ligation)、(3)結(jié)扎線+本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物50mg/kg、(4)結(jié)扎線+本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物100mg/kg、(5)結(jié)扎線+本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物200mg/kg。按照圖3的操作流程進(jìn)行試驗，于試驗開始，即給予生理食鹽水(normal saline)或不同濃度的本發(fā)明含藻藍(lán)蛋白萃取物，一直持續(xù) 給予到試驗第10天，其中于試驗第3天以結(jié)扎線誘發(fā)牙周病產(chǎn)生，并于試驗第11天犧牲大白鼠，觀察其齒槽骨的高度改變情形。

4.齒槽骨高度測量

去除大白鼠下顎的軟組織后，確認(rèn)牙釉質(zhì)交接(cemento-enamel junction,CEJ)的位置，并測定CEJ到齒槽骨(alveolar bone crest，ABC)的距離。圖4A是斷層掃描觀察大白鼠齒槽骨的高度變化掃描圖，結(jié)果顯示在結(jié)扎線誘發(fā)牙周病的組別(Ligation)中，不管是從舌側(cè)或頰側(cè)觀測，都有著嚴(yán)重骨基質(zhì)吸收的情況。而在給予本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白(C-PC)萃取物后，可觀察到當(dāng)給予劑量為100mg/kg及200mg/kg皆可降低牙釉質(zhì)交接(CEJ)到齒槽骨(ABC)的距離，但此兩種劑量彼此間并無差異性，如圖4B所示。

另外，在牙齦組織病理切片中觀察大白鼠齒槽骨流失的現(xiàn)象，如圖4C，圖中d為象牙質(zhì)(dentin)的標(biāo)示，g為牙齦(gingiva)的標(biāo)示，pl為牙周韌帶(periodontal ligament)的標(biāo)示，ab為齒槽骨(alveolar bone，白色框線范圍)的標(biāo)示。結(jié)果顯示誘發(fā)組(ligation)的牙周組織相對于正常組(Control)具有嚴(yán)重的齒槽骨流失現(xiàn)象產(chǎn)生，而給予本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白(C-PC)萃取物100mg/kg后，相對于誘發(fā)組，齒槽骨破懷情況獲得改善，因此，本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物可有效改善齒槽骨流失的現(xiàn)象。

綜合以上結(jié)果，可證明本發(fā)明的含藻藍(lán)蛋白萃取物的組合物，能有效抑制牙周致病菌的生長，并降低該致病菌所造成的發(fā)炎反應(yīng)，使牙周病患者的齒槽骨流失現(xiàn)象減緩，而達(dá)到預(yù)防及治療牙周病的效果。