本發(fā)明涉及包含調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)的組合物，更具體地，通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)皮脂的生成的同時(shí)能夠改善皮膚問題，并提供抗氧化效果以預(yù)防毛孔擴(kuò)大，并且能夠防御皮膚刺激的生成的組合物。
背景技術(shù)：
：血型抗原是指在血液的紅血球表面的糖蛋白質(zhì)或糖脂質(zhì)中表達(dá)的具有特定抗原性的結(jié)構(gòu)。代表性的有ABO血型抗原(ABH抗原)、路易斯(Lewis)血型抗原等，血型根據(jù)特定結(jié)構(gòu)的糖基化端基結(jié)構(gòu)而被決定。ABO血型抗原和路易斯血型抗原不僅在紅血球中被表達(dá)，還在人體的多個(gè)部位中被表達(dá)，特別是，眾所周知，ABO血型抗原根據(jù)個(gè)人的血型在人體內(nèi)的食道、胃腸、小腸等上皮中也會(huì)被表達(dá)，并且也在皮膚表皮的顆粒層中被表達(dá)。這種ABO血型抗原在表皮的顆粒層中的表達(dá)的解剖學(xué)上的位置是在皮膚的最外層中顯示，因此與皮膚相關(guān)的疾病，特別是與炎癥疾病有密切關(guān)系。如此，ABO血型抗原是成為輸血和臟器移植的排異反應(yīng)的主要原因的非常重要的抗原，但是自1900年發(fā)現(xiàn)ABO血型抗原以來，一直沒有研究針對排異反應(yīng)之外的生理功能。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為此，本發(fā)明人確認(rèn)了調(diào)節(jié)ABH抗原表達(dá)與調(diào)節(jié)皮脂、改善皮膚問題、預(yù)防毛孔擴(kuò)大等有所相關(guān)，并完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的是提供一種通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)，從而對調(diào)節(jié)皮脂或改善皮膚問題有效的組合物。此外，本發(fā)明的另一目的是提供一種包含通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)以對預(yù)防毛孔縮小或擴(kuò)大、預(yù)防皮膚老化有效的物質(zhì)的組合物。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種皮脂調(diào)節(jié)用組合物，該皮脂調(diào)節(jié)用組合物含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分。此外，本發(fā)明提供一種皮膚問題改善用組合物，該皮膚問題改善用組合物含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分。此外，本發(fā)明提供一種毛孔收縮用組合物，該毛孔收縮用組合物含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分。此外，本發(fā)明提供一種毛孔擴(kuò)大預(yù)防用組合物，該毛孔擴(kuò)大預(yù)防用組合物含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分。此外，本發(fā)明提供一種皮膚老化預(yù)防用組合物，該皮膚老化預(yù)防用組合物含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分。本發(fā)明的組合物通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)，從而提供優(yōu)異的皮脂調(diào)節(jié)或皮膚問題改善效果的同時(shí)，通過去除活性氧和促進(jìn)膠原蛋白合成而收縮毛孔，并且，通過優(yōu)異的抗氧化力來防御皮膚刺激的生成的效果卓越。附圖說明圖1是示出ABH抗原和路易斯血型抗原的結(jié)構(gòu)的圖。圖2是示出利用調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)，在HaCatT細(xì)胞株中B抗原的表達(dá)增加的圖。發(fā)明的最優(yōu)選實(shí)施方式本發(fā)明涉及含有調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)作為有效成分的組合物。特別地，本發(fā)明的組合物通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)，從而顯示出皮脂調(diào)節(jié)或皮膚問題改善效果。此外，本發(fā)明的組合物通過調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)，從而顯示出毛孔收縮、毛孔擴(kuò)大預(yù)防或皮膚老化預(yù)防效果。在本說明書中，“ABH抗原”是指在血液的紅血球表面的糖蛋白質(zhì)或糖脂質(zhì)中表達(dá)的具有特定抗原性的結(jié)構(gòu)，代表性地，ABH抗原以包括所有圖1中顯示的ABH抗原、路易斯血型抗原等ABH抗原類似物的集合體等的含義來使用。ABH抗原類似物是附加地結(jié)合有單糖類、氨基酸等的物質(zhì)，是指與ABH抗原的原先的功能起到相同功能的物質(zhì)。圖1中示出了ABH抗原和路易斯血型抗原的結(jié)構(gòu)。在本說明書中，“有效成分”是指能夠單獨(dú)顯示目標(biāo)活性或者能夠與自身沒有活性的載體一同顯示活性的成分。在本發(fā)明的組合物中，調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)包括使ABH抗原的表達(dá)增加的物質(zhì)。這種ABH抗原的表達(dá)的增加具體可以通過HaCaT細(xì)胞株中的B抗原的表達(dá)的增加來顯示。在本發(fā)明的組合物中，所述調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)包括選自由1,3-二咖啡?？崴?1,3-dicaffeoylquinicacid)(化學(xué)式1)、1,5-二咖啡?？崴?1,5-dicaffeoylquinicacid)(化學(xué)式2)以及阿曼托雙黃酮(amentoflavon)(化學(xué)式3)組成的群中的一種以上的化合物、該化合物的衍生物或藥學(xué)上可接受的該化合物的鹽。化學(xué)式11,3-二咖啡?？崴峄瘜W(xué)式21,5-二咖啡?？崴峄瘜W(xué)式3阿曼托雙黃酮在本說明書中，“衍生物”是指在所述化合物的可取代的位置上變更為其他取代基的所有化合物，這種取代基的種類沒有限制。在本說明書中，“藥學(xué)上可接受”是指以通常的醫(yī)藥服用量(medicinaldosage)利用時(shí)避免相當(dāng)大的毒性效果，并能夠獲得或已獲得政府或許可此的監(jiān)管機(jī)構(gòu)的許可或列在藥典上或公知的一般的藥典，從而能夠在動(dòng)物、更具體為人體上使用。在本說明書中，“藥學(xué)上可接受的鹽”是指藥學(xué)上可接受，根據(jù)本發(fā)明的一方面的鹽，且該鹽具有母體化合物(parentcompound)的優(yōu)選的藥理活性的。所述鹽可以包括：(1)由如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸形成的鹽；或者由如乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環(huán)[2,2,2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、己二烯二酸等有機(jī)酸形成的酸加成鹽(acidadditionsalt)；或者(2)取代存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子時(shí)形成的鹽。本發(fā)明的組合物中，調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)的含量為可以是相對于組合物總重量的0.001重量％至20重量％。將所述調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)按照上述范圍使用的情況下，不僅能夠適當(dāng)?shù)仫@示本發(fā)明試圖達(dá)到的效果，而且組合物的安全性和穩(wěn)定性均能夠得到滿足，并且相對于費(fèi)用在效果方面有用。在如上所述的觀點(diǎn)上，本發(fā)明的組合物中，調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)的含量可以是相對于組合物總重量的0.005重量％至19.5重量％、0.01重量％至19重量％、0.015重量％至18.5重量％、0.02重量％至18重量％、0.025重量％至17.5重量％、0.03重量％至17重量％、0.035重量％至16.5重量％、0.04重量％至16重量％或者0.045重量％至15.5重量％。在作為本發(fā)明的一個(gè)方面的皮脂調(diào)節(jié)用組合物中，所述組合物可以抑制5α-還原酶(5α-reductase)的表達(dá)。具體地，本發(fā)明的組合物阻礙5α-還原酶基因的表達(dá)而抑制或阻擾其表達(dá)，或者本發(fā)明的組合物阻擾5α-還原酶蛋白質(zhì)的活性，從而阻礙5α-還原酶的作用。此外，作為本發(fā)明的另一方面的毛孔收縮用或擴(kuò)大預(yù)防用組合物中，所述組合物促進(jìn)活性氧的去除和膠原蛋白的合成而收縮毛孔，并能夠預(yù)防毛孔擴(kuò)大或皮膚老化，并且通過優(yōu)異的抗氧化力，抑制活性氧簇的生成而抑制皮膚炎癥，從而防御皮膚刺激的生成。在作為本發(fā)明的一個(gè)方面的組合物中，所述組合物可以是化妝品組合物。所述化妝品組合物的劑型不受特殊限制，可以根據(jù)目的適當(dāng)進(jìn)行選擇。例如，可以用選自由柔膚化妝水(潤膚水和浮液)、營養(yǎng)化妝水、精華素、營養(yǎng)霜、按摩霜、面膜、凝膠、精華素、眼霜、眼部精華素、清潔霜、洗面奶、洗面水、面膜、散粉、潤膚露、潤膚霜、潤膚油和潤膚精華素組成的群中的一個(gè)以上的劑型來制備，但是不限于此。同時(shí)，所述化妝品組合物可以包括以軟膏、貼片等形式用作皮膚外用劑的劑型。根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物可以提供為適合于局部應(yīng)用的所有劑型。例如，可以提供為溶液、將油相分散于水相中而得到的乳液、將水相分散于油相中而得到的乳液、懸浮液、固體、凝膠、粉末、膏體、泡沫(foam)或噴霧組合物的劑型。這些劑型的組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域的通常方法來制備。根據(jù)本發(fā)明的組合物,除上述物質(zhì)之外，在不破壞主要效果的范圍內(nèi)，可以優(yōu)選地包括能夠?qū)χ饕Ч鸬皆鰪?qiáng)效果的其他成分。此外，根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物還可以包括保濕劑、潤膚劑、紫外線吸收劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、有機(jī)和無機(jī)顏料、香料、涼爽劑或止汗劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員在不破壞本發(fā)明的目的和效果的范圍內(nèi)可以選定所述成分的配入量，該配入量以組合物整體重量為基準(zhǔn)，可以是0.01重量％至5重量％，具體地，可以是0.01重量％至3重量％。作為本發(fā)明的一個(gè)方面的組合物中，所述組合物可以是藥學(xué)組合物。根據(jù)本發(fā)明的藥學(xué)組合物的劑型可以是溶液劑、懸浮劑、乳液劑、凝膠、滴劑、栓劑、貼片或噴霧劑，但是不限于此。所述劑型可以根據(jù)本發(fā)明的通常方法被容易地制備，可以適當(dāng)?shù)厥褂觅x形劑、水和劑、乳化促進(jìn)劑、懸浮劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽或緩沖劑、著色劑、香辛料、穩(wěn)定劑、防腐劑、保鮮劑或其他常用的輔助劑。本發(fā)明的藥學(xué)組合物的有效成分根據(jù)投予對象的年齡、性別、體重、病理狀態(tài)以及其嚴(yán)重性、投予路徑或處方者的判斷而不同?；谶@種因子的應(yīng)用量的決定屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平之內(nèi)，其一天的投予用量可以是例如0.000025mg/g/天至0.025mg/g/天，較具體地，可以是0.00025mg/g/天至0.01mg/g/天，但不限于此。本發(fā)明的藥學(xué)組合物可以通過口服或經(jīng)皮膚投予，但是不限于此。此外，本發(fā)明提供調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)的篩選方法，所述方法包括：1)確認(rèn)在試驗(yàn)皮膚細(xì)胞中表達(dá)的ABH抗原的表達(dá)水平的步驟；2)在所述試驗(yàn)皮膚細(xì)胞中處理后補(bǔ)物質(zhì)的步驟；3)在所述步驟2)的細(xì)胞中確認(rèn)ABH抗原的表達(dá)水平的步驟；以及4)比較所述步驟1)和步驟3)的結(jié)果，并決定是否為使ABH抗原的表達(dá)增加的物質(zhì)的步驟。作為本發(fā)明的一個(gè)觀點(diǎn)的篩選方法中，所述調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)是具有抑制皮脂生成或緩解皮膚問題的活性的物質(zhì)。此外，作為本發(fā)明的另一方面的篩選方法中，所述調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)是具有毛孔收縮或抑制毛孔擴(kuò)大的活性的物質(zhì)，或者是具有抑制皮膚老化的活性的物質(zhì)。在本發(fā)明的方法中，所述調(diào)節(jié)ABH抗原的表達(dá)的物質(zhì)是選自由1,3-二咖啡酰奎尼酸(1,3-dicaffeoylquinicacid)(化學(xué)式1)、1,5-二咖啡?？崴?1,5-dicaffeoylquinicacid)(化學(xué)式2)以及阿曼托雙黃酮(amentoflavon)組成的群中的一種以上的化合物、該化合物的衍生物或藥學(xué)上可接受的該化合物的鹽。具體實(shí)施方式以下，通過實(shí)施例，將更加詳細(xì)地說明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于示例本發(fā)明，對于本領(lǐng)域中具有通常知識(shí)的人，不言自明的是本發(fā)明的范圍不應(yīng)該解釋為受這些實(shí)施例的限制。[試驗(yàn)例1]在HaCaT細(xì)胞株中B抗原的表達(dá)增加效果試驗(yàn)了多個(gè)種類的化合物對ABH抗原的表達(dá)所產(chǎn)生的影響。為此，將HaCaT細(xì)胞(提供自Prof.Dr.N.E.Fusenig,DKFZHeidelberg；德國)在35mm培養(yǎng)皿中用10％的FBS-DMEM培養(yǎng)24小時(shí)之后，用0％的FBS-DMEM培養(yǎng)24小時(shí)，從而制備成饑餓狀態(tài)。重新更換為0％的FBS-DMEM培養(yǎng)基，并將多個(gè)種類的化合物作為試驗(yàn)物質(zhì)分別以2μg/ml的濃度在HaCaT細(xì)胞中進(jìn)行處理之后，培養(yǎng)48小時(shí)。此時(shí)，為了比較，對照群中將DMS處理成與試料相同的濃度。試驗(yàn)物質(zhì)中確認(rèn)了有益地增加了ABH抗原的表達(dá)的三種物質(zhì)，即：1,3-二咖啡?？崴?1,3-dicaffeoylquinicacid)、1,5-二咖啡?？崴?1,5-dicaffeoylquinicacid)以及阿曼托雙黃酮(amentoflavon)(數(shù)據(jù)未示出)，在處理這三種化合物的時(shí)，從細(xì)胞提取蛋白質(zhì)，并加載同量的細(xì)胞溶解物，通過蛋白質(zhì)免疫印跡(WesternBlot,WB)調(diào)查了B型抗原的表達(dá)。作為對照群使用了α-微管蛋白(α-tubulin)。測定結(jié)果示出在圖2中。見圖2，可以確認(rèn)1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮在HaCaT細(xì)胞株中均具有增加B型抗原的表達(dá)的效果。[試驗(yàn)例2]5α-還原酶的活性抑制效果為了確認(rèn)5α-還原酶的活性抑制效果，在HEK293-5αR2細(xì)胞中測定[14C]睪酮變換成[14C]雙氫睪酮的比率。HEK293細(xì)胞對p3×FLAG-CMV-5αR2進(jìn)行形質(zhì)轉(zhuǎn)染(transfection)，在24孔板上的每個(gè)孔中放入2.5×105細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)(Parketal.,2003,JDS.Vol.31,pp191-98)。第二天，換成裝有酶基質(zhì)和阻礙劑的新的培養(yǎng)基。作為培養(yǎng)基的基質(zhì)，使用了0.05μCi[14C]睪酮(AmershamPharmaciabiotech,UK)。為了確認(rèn)阻礙程度，分別放入2μg/ml的作為試驗(yàn)物質(zhì)的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮，并在37℃、5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)。此時(shí)，為了比較，作為陰性對照群使用了不含有所述試驗(yàn)物質(zhì)中的任何一個(gè)的培養(yǎng)基，作為陽性對照群使用了將2μg/ml的非那雄胺(Finasteride)加入培養(yǎng)基中并在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)基。收集培養(yǎng)基，并用800μl的乙酸乙酯萃取睪酮。分離上部的有機(jī)溶劑層并進(jìn)行干燥之后，再次用50μl的乙酸乙酯溶解剩余的殘留物，在硅膠塑料片材硅膠60F254(SilicaplasticsheetkieselgelF254)上作為展開溶劑使用乙酸乙酯-己烷(1:1)而進(jìn)行展開。將塑料試料在空氣中進(jìn)行干燥之后，為了測定同位元素的量而使用了巴斯系統(tǒng)，將干燥的塑料片和X射線膠片一同放入暗盒內(nèi)，一周之后測定了殘留于膠片上的睪酮和雙氫睪酮的同位元素量。其結(jié)果示出在下表1中。表1試料轉(zhuǎn)換率(％)阻礙率(％)1,3-二咖啡酰奎尼酸30381,5-二咖啡?？崴?038阿曼托雙黃酮3233對照群48-陽性對照群(非那雄胺)2744(1)轉(zhuǎn)換率：DHT區(qū)域中的放射能/總放射能(2)阻礙率：100*(對照群的轉(zhuǎn)換率-試料的轉(zhuǎn)換率)/對照群的轉(zhuǎn)換率5α-還原酶將睪酮轉(zhuǎn)換成雙氫睪酮，并使雙氫睪酮與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的水溶體蛋白質(zhì)結(jié)合并進(jìn)入核內(nèi)，從而促進(jìn)皮脂腺細(xì)胞活化并分化，從而使皮脂腺內(nèi)的皮脂過度分泌。從上述表1的結(jié)果可知，本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮能夠有效地抑制5α-還原酶的活性，從而阻斷睪酮向雙氫睪酮的轉(zhuǎn)換。因此，本發(fā)明的1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡酰奎尼酸以及阿曼托雙黃酮具有優(yōu)異的5α-還原酶的活性抑制效果，從而對抑制皮脂過度分泌有效。[參照例1]實(shí)施例1～3和比較例1的制備根據(jù)下表2中記載的組成，采用通常的制備方法制備了潤膚液劑型的實(shí)施例1～3和比較例1。表2<實(shí)施例和比較例的制備方法>1)將所述11～14成分加熱至70℃并均勻混合，從而制備了水相部分。2)將所述1～10成分加熱至70℃并均勻混合，從而制備了油相部分。3)在所述1)的水相部分中投入所述2)的油相部分，并在7200rpm上進(jìn)行均相混合6分鐘。4)將所述3)的混合物冷卻至室溫。[試驗(yàn)例3]皮脂分泌抑制效果為了獲知所述實(shí)施例1～3和比較例1的皮脂分泌抑制效果，進(jìn)行了如下的評價(jià)。選定認(rèn)為皮脂分泌多的被試者男女40人，分成四個(gè)組，每組10人，對各個(gè)組分別在指定部位涂抹實(shí)施例1～3和比較例1的潤膚液，并在4周內(nèi)每天進(jìn)行涂抹。對于皮脂減少效果的判定，使用皮脂量測定器(Sebumeter815,Germany)進(jìn)行了測定，其結(jié)果示出在下表3中。表3從上述表3的結(jié)果可知，含有根據(jù)本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡酰奎尼酸以及阿曼托雙黃酮的實(shí)施例1～3與不含有這些物質(zhì)的比較例1相比，能夠有效地抑制過度分泌的皮脂。因此，根據(jù)本發(fā)明的皮膚外用劑組合物具有優(yōu)異的皮脂分泌抑制效果。[試驗(yàn)例4]皮膚炎癥因子的表達(dá)減少效果為了測定本發(fā)明的1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮抑制作為皮膚炎癥因子的PGE-2的表達(dá)的效果，實(shí)施了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA，EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay)(SEDunsmore,etal.,JBiolChem,271:24576-24582,1996)。在24孔試驗(yàn)板中分別放入5×104的從人體的表皮組織分離的角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte)，并附著24小時(shí)。替換成不包含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基，進(jìn)行阿司匹林處理，從而去除了生物合成酶(前列腺素H2合成酶或環(huán)氧化酶)的活性。在進(jìn)行阿司匹林處理2小時(shí)后，用PBS清洗裝有角質(zhì)形成細(xì)胞的各個(gè)孔2次，并在各個(gè)孔中加入100μl的PBS。在該角質(zhì)形成細(xì)胞中利用紫外線B(UVB)燈(Model:F15T8,UVB15W,SankyoDennki社,Japan)照射30mJ/cm2的紫外線之后，去除PBS并在各個(gè)孔中添加250μl的角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)液(keratinocytegrowthmedia,CloneticsBioWhittacker社,MD,USA)。在此，將所述物質(zhì)1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮以2μg/ml的量進(jìn)行處理之后，培養(yǎng)16小時(shí)。適當(dāng)提取培養(yǎng)上層液，并以16小時(shí)生物合成的PGE-2的量為基準(zhǔn)，從而判斷了1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮的前列腺素抑制效果。PGE-2的表達(dá)抑制效果通過下述數(shù)學(xué)式1算出，其結(jié)果示出在下表4中。數(shù)學(xué)式1PGE-2的表達(dá)抑制率(％)＝(A-B)/A*100A：沒有添加試驗(yàn)物質(zhì)的孔的吸光度B：添加了試驗(yàn)物質(zhì)的孔的吸光度表4區(qū)分PEG-2表達(dá)抑制率(％)對照群-1,3-二咖啡?？崴?8.11,5-二咖啡?？崴?2.5阿曼托雙黃酮30.9從上述表4的結(jié)果可確認(rèn)，在本發(fā)明的組合物中所含有的1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮能夠有效地抑制作為皮膚炎癥因子的PGE-2的表達(dá)。因此，可知的是在本發(fā)明的組合物中所含有的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮抑制皮膚炎癥因子的表達(dá)，從而防止皮膚問題的效果優(yōu)異。[試驗(yàn)例5]活性氧簇(reactiveoxygenspecies)生成抑制效果在24孔(well)細(xì)胞培養(yǎng)板的各個(gè)孔中放入5×104的從人體的表皮組織分離的角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte)，并附著24小時(shí)。去除培養(yǎng)液之后，在各個(gè)孔中加入100μl的磷酸緩沖鹽液(PBS)。在該角質(zhì)形成細(xì)胞中利用紫外線B(UVB)燈(Model:F15T8,UVB15W,SankyoDennki社,Japan)照射30mJ/cm2的紫外線之后，去除PBS并在各個(gè)孔中添加200μl的角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)液。在此，分別處理2μg/ml的作為試驗(yàn)物質(zhì)的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮，并在每個(gè)一定時(shí)間段內(nèi)定量因刺激增加的活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ROS)的量。此時(shí)，為了比較，還測定了不處理(無處理)試驗(yàn)物質(zhì)且不進(jìn)行紫外線刺激的活性氧簇的量以及不處理試驗(yàn)物質(zhì)且進(jìn)行紫外線刺激的活性氧簇的量。ROS的量參考了測定因ROS而氧化的二氯熒光素-雙乙酸鹽(DCF-DA，dichlorofluorescindiacetate)的熒光的Tan的方法而進(jìn)行了定量(Tanetal.,1998,J.CellBiol.Vol.141,pp1423-1432)，并將相對于對照群的ROS的比率示出在下表5中。表5從上表5中示出的結(jié)果可確認(rèn)，本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮能夠有效地抑制被公知為因紫外線引起皮膚細(xì)胞損傷的ROS的生成，因此，可知的是這些物質(zhì)的抗氧化效能優(yōu)異。因此，在本發(fā)明的組合物中所含有的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮能夠抑制活性氧簇的生成而抑制皮膚炎癥，從而防御皮膚刺激的生成，此外，防止皮膚細(xì)胞損傷而防止皮膚老化，從而預(yù)防毛孔擴(kuò)大。[試驗(yàn)例6]促進(jìn)膠原蛋白的生物合成與TGF-β比較而測定了在本發(fā)明中所使用的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮對膠原蛋白的生物合成的促進(jìn)效果。首先，在24孔板的各個(gè)孔中接種105個(gè)成纖維細(xì)胞(fibroblast)，并培養(yǎng)至成長到90％程度。將其用無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)之后，在此分別將1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮與TGF-β以2μg/ml的量進(jìn)行處理，并在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。取出其的上層液，并利用前膠原型(I)ELISA試劑盒(procollagentype(I))觀察了前膠原(procollagen)的增減與否。其結(jié)果示出在表6中，將非處理群定為100而對比了膠原蛋白的合成性能。表6區(qū)分膠原蛋白合成性能(％)非處理群100TNF-β183.5±13.11,3-二咖啡酰奎尼酸142.1±13.11,5-二咖啡?？崴?44.2±11.0阿曼托雙黃酮147.7±15.8從上述表6中示出的結(jié)果可確認(rèn)，本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮顯示出了如作為陽性對照群的TGF-β的高的膠原蛋白合成性能。因此，可知的是本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡酰奎尼酸以及阿曼托雙黃酮能夠增加毛孔周圍的膠原蛋白生成量而收縮擴(kuò)大的毛孔。[試驗(yàn)例7]評價(jià)皮膚毛孔收縮效果與生育酚和EGCG比較而測定了1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡酰奎尼酸以及阿曼托雙黃酮的毛孔收縮效果。將60只犀鼠分成6個(gè)組，每個(gè)組10只，在各個(gè)組的犀鼠上分別涂覆了0.5ml的1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮、生育酚或EGCG的1％溶液(作為溶劑，使用1,3-二咖啡?？崴幔阂掖迹?:3)。此時(shí)，為了比較，在一個(gè)組中僅涂覆了0.5ml的溶劑。處理物質(zhì)一周，并在最后處理24小時(shí)之后，活檢了背部。分離表皮而在0.5％的乙酸中浸泡之后，固定在10％福爾馬林中之后，垂直切割成6mm。用蘇木精和伊紅進(jìn)行染色之后，利用機(jī)械目鏡測微尺(Mechanicaleyepiecemicrometer)測定了毛孔大小。其結(jié)果示出在下表7中。表7物質(zhì)毛孔大小(mm)對照群65生育酚64EGCG601,3-二咖啡酰奎尼酸531,5-二咖啡?？崴?4阿曼托雙黃酮50如上述表7中所示，可知的是本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮與生育酚和EGCG比較，收縮毛孔大小的效果優(yōu)異。[參照例2]實(shí)施例4～6和比較例2的制備根據(jù)下表8中記載的組成，用通常的制備方法制備了柔膚化妝水(潤膚液)劑型的實(shí)施例4～6和比較例2(單位：重量％)。表8配入成分實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3比較例1精制水剩余量剩余量剩余量剩余量1,3-二咖啡酰奎尼酸0.1---1,5-二咖啡?？崴?0.1--阿曼托雙黃酮--0.1-丁二醇2.02.02.02.0丙二醇2.02.02.02.0羧乙烯聚合物0.10.10.10.1PEG-12辛基苯基醚0.20.20.20.2聚山梨酯800.40.40.40.4乙醇10.010.010.010.0三乙醇胺0.10.10.10.1防腐劑、色素、香料適量適量適量適量[試驗(yàn)例8]針對毛孔收縮的感官評價(jià)作為實(shí)驗(yàn)對象，在20～50歲的女性層中，將油性皮膚的所有者60人隨機(jī)地分成四個(gè)組，每個(gè)組15人。使各個(gè)組洗臉后，經(jīng)過一定時(shí)間之后，使他們分別涂覆實(shí)施例4至實(shí)施例6或比較例2的產(chǎn)品，以早晚分別執(zhí)行，從而一天執(zhí)行2次之后，4周后用肉眼測定了毛孔大小。其結(jié)果示出在下表9中(評價(jià)等級：0：完全沒有收縮；5：收縮很多)表9區(qū)分評價(jià)等級實(shí)施例13.3實(shí)施例23.2實(shí)施例33.7比較例10.8從上表9的結(jié)果可知，含有本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡酰奎尼酸以及阿曼托雙黃酮的組合物與任何一個(gè)都不含有的比較例的組合物相比，毛孔收縮效果更優(yōu)異，如此應(yīng)答的使用者尤其之多。因此，可知的是含有本發(fā)明的1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴嵋约鞍⒙须p黃酮的皮膚外用劑組合物的毛孔收縮效果優(yōu)異。以下，將說明根據(jù)本發(fā)明的組合物的劑型例，但是藥學(xué)組合物和化妝品組合物可以以多種劑型進(jìn)行應(yīng)用，這不是為了限定本發(fā)明，而只是為了具體說明。[劑型例1]化妝水根據(jù)通常的方法，以下表10中記載的組成制備化妝水。表10[劑型例2]營養(yǎng)霜根據(jù)通常的方法，以下表11中記載的組成制備營養(yǎng)霜。表11[劑型例3]按摩霜根據(jù)通常的方法，以下表12中記載的組成制備按摩霜。表12[劑型例4]面膜根據(jù)通常的方法，以下表13中記載的組成制備按摩霜。表13[劑型例5]凝膠根據(jù)通常的方法，以下表14中記載的組成制備凝膠。表14[劑型例6]軟膏根據(jù)通常的方法，以下表15中記載的組成制備了軟膏。表15[劑型例7]軟膠囊混合0.0025g的選自由1,3-二咖啡酰奎尼酸、1,5-二咖啡酰奎尼酸、阿曼托雙黃酮組成的組中的一種以上的化合物、0.0025g的維生素C、2mg的棕櫚油、8mg的氫化棕櫚油、4mg的黃蠟以及6mg的卵磷脂，并根據(jù)通常的方法在每個(gè)膠囊里填充400mg，從而制備了軟膠囊。[劑型例8]片劑混合0.0025g的選自由1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴?、阿曼托雙黃酮組成的組中的一種以上的化合物、0.0025g的維生素C、100mg的葡萄糖、96mg的淀粉以及4mg的硬脂酸鎂，并添加40mg的30％乙醇而形成顆粒之后，在60℃下進(jìn)行干燥，并利用壓片機(jī)壓片成片劑。[劑型例9]顆粒劑混合150mg的選自由1,3-二咖啡?？崴?、1,5-二咖啡?？崴帷⒙须p黃酮組成的組中的一種以上的化合物、150mg的維生素C、100mg的葡萄糖以及600mg的淀粉，并添加100mg的30％乙醇而形成顆粒之后，在60℃下進(jìn)行干燥而形成顆粒之后填充至藥包中，內(nèi)容物的最終重量為1g。[劑型例10]飲劑混合0.0025g的選自由1,3-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴帷⒙须p黃酮組成的組中的一種以上的化合物、0.0025g的維生素C、10g的葡萄糖、2g的檸檬酸以及187.8g的精制水，并填充至瓶中，內(nèi)容物的最終容量為200ml。以上詳細(xì)記述了本
發(fā)明內(nèi)容的特定部分，對于本領(lǐng)域具有通常知識(shí)的人，應(yīng)明白的是這種具體記述僅為優(yōu)選的實(shí)施形式，本發(fā)明的范圍不受此限制。因此，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)的范圍應(yīng)由添附的權(quán)利要求和其等價(jià)物來定義。當(dāng)前第1頁1 2 3