豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用，其抗菌肽氨基酸序列如SEQ No.1所示。本發(fā)明首先分析豬凝血酶的氨基酸組成特點，發(fā)現(xiàn)碳末端富含有疏水性和正電荷的氨基酸殘基，從而通過截取碳末端的方式獲得不同長度的衍生肽；然后使用多肽合成儀，進行固相合成法合成多肽粗品；最后使用高效液相色譜對多肽粗品進行純化，并用電噴霧質(zhì)譜法進行鑒定。通過最小抑菌濃度和溶血試驗測定衍生抗菌肽的抑菌活性，篩選出具有較高活性的多肽PT17。本發(fā)明的優(yōu)點：該多肽衍生自豬凝血酶的碳末端，屬于天然衍生物，安全性較好，具有廣譜抗菌活性和低毒性；肽鏈較短，制備方法和技術(shù)成熟，合成成本低。
【專利說明】豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制備方 法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 傳統(tǒng)抗生素在飼料獸藥中的應(yīng)用提高了 了動物的生產(chǎn)性能，降低了疾病發(fā)生率； 但同時也導(dǎo)致藥物殘留、耐藥性菌株、環(huán)境污染等問題的產(chǎn)生，因此需要發(fā)現(xiàn)新型的抗菌制 劑。益生菌、中草藥、抗菌肽等作為重要的替代物，受到人們的廣泛關(guān)注，其中抗菌肽是機體 免疫的重要組成部分，因為其獨特由膜介導(dǎo)的抑菌機制而不易使細菌產(chǎn)生耐藥性、安全無 毒性等特點而備受青睞?？咕囊话愣季哂惺杷院驼齼綦姾傻奶攸c，殘基長度也從十以 下到幾十不等。
[0003] 結(jié)合生物信息學(xué)等分析方法，發(fā)現(xiàn)凝血、消化和補體系統(tǒng)中的某些重要絲氨酸蛋 白酶的碳末端富含疏水性和正電荷殘基。因此，本發(fā)明以豬凝血酶為目標，通過截取其碳末 端而獲得氨基酸長度從11到19不等的5條抗菌肽序列，通過化學(xué)合成和活性測定，篩選抑 菌活性優(yōu)異的衍生肽。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽及其制備方法和應(yīng)用。本 發(fā)明通過截取豬凝血酶碳末端的方式獲得氨基酸長度不等的衍生肽，通過活性測定篩選得 到活性優(yōu)異的衍生抗菌肽。
[0005] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0006] 1、一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽，序列如SEQ No. 1所示。
[0007] 2、如上所述的一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽，制備方法如下：
[0008] (1)根據(jù)豬凝血酶的氨基酸組成特點，發(fā)現(xiàn)碳末端富含有疏水性和正電荷的氨基 酸殘基，從而通過截取豬凝血酶碳末端的方式獲得氨基酸長度為11、13、15、17、19不等的5 條衍生肽PTll，PT13，PT15，PT17，PT19，序列分別如如SEQNo·2、SEQNo·3、SEQNo·4、SEQ No. 1、SEQ No. 5 所示；
[0009] (2)采用固相化學(xué)合成法，通過多肽合成儀合成這五條多肽粗品；
[0010] (3)將合成的多肽使用反相高效液相色譜進行純化，并利用電噴射質(zhì)譜法對合成 的多肽進行鑒定，完成多肽的制備。
[0011] 3、一種如上所述的豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽在治療革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰 性菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的有益效果：（1)該多肽衍生自豬凝血酶的碳末端，屬于天然衍生物，安全 性較好，具有廣譜抗菌活性和低毒性；（2)該多肽由17個氨基酸組成，肽鏈較短，制備方法 和技術(shù)成熟，合成成本低。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 圖1為抗菌肽PTll的質(zhì)譜圖。
[0014] 圖2為抗菌肽PT13的質(zhì)譜圖。
[0015] 圖3為抗菌肽PT15的質(zhì)譜圖。
[0016] 圖4為抗菌肽PT17的質(zhì)譜圖。
[0017] 圖5為抗菌肽PT19的質(zhì)譜圖。

【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此。
[0019] 實施例1 :
[0020] 豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽的設(shè)計
[0021] 通過NCBI獲取豬凝血酶的氨基酸全序列，以該酶碳末端的第一個氨基酸為起點， 通過截取方式，獲得氨基酸長度從11至19不等的5條衍生肽PTlI，PT13, PT15, PT17, PT19。 如表1所示。
[0022] 表1豬凝血酶衍生抗菌肽的氨基酸序列和分子量
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽，其特征在于，序列如SEQ No. 1所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽的制備方法，其特征在于， 步驟如下： (1) 根據(jù)豬凝血酶的氨基酸組成特點，發(fā)現(xiàn)碳末端富含有疏水性和正電荷的氨基酸殘 基，從而通過截取豬凝血酶碳末端的方式獲得氨基酸長度為11、13、15、17、19不等的5條衍 生肽？1'11、？1'13、？1'15、？1'17、？1'19，序列分別如如5￡〇吣.2、5￡〇吣.3、5￡〇吣.4、5￡〇吣.1、 SEQ No. 5 所示； (2) 采用固相化學(xué)合成法，通過多肽合成儀合成這五條多肽粗品； (3) 將合成的多肽使用反相高效液相色譜進行純化，并利用電噴射質(zhì)譜法對合成的多 肽進行鑒定，完成多肽的制備。
3. -種如權(quán)利要求1所述的豬凝血酶碳末端衍生抗菌肽在治療革蘭氏陽性菌或革蘭 氏陰性菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K38/48GK104498465SQ201410855264
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月25日
【發(fā)明者】馬清泉, 畢重朋, 單安山, 呂希婷 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)