一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用，其制備方法如下：（1）原料粉碎、過篩，采用生物酶發(fā)酵；（2）發(fā)酵后原料采用超臨界CO2進(jìn)行提?。唬?）提取液再經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮等步驟，即得防風(fēng)揮發(fā)油。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單、環(huán)保、提取時(shí)間短、耗能小，產(chǎn)品得率高且品質(zhì)佳。經(jīng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)，防風(fēng)揮發(fā)油具有明顯的抗腫瘤作用，且其毒副作用小。將防風(fēng)揮發(fā)油與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料一起制成抗腫瘤的藥物，藥物的劑型為注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑和口服液中的一種。
【專利說明】一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其在制備抗腫瘤作用的藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 防風(fēng)又名屏風(fēng)、風(fēng)肉、茴蕓、茴草，為傘形科植物的干燥根，味辛、甘，性微溫，歸肺、 脾、肝經(jīng)。具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙的功效，主治感冒頭痛、風(fēng)寒濕痹、風(fēng)疹瘙癢、破傷 風(fēng)等。藥理學(xué)的研究證明，防風(fēng)中主要含有揮發(fā)油性色原酮類。香豆素類、多糖類、有機(jī)酸 類、聚乙炔類、甘油酯類等成分?，F(xiàn)代研究表明其揮發(fā)油有鎮(zhèn)痛活性，具有抗炎、止血作用， 有一定的自由基清除能力。
[0003] 防風(fēng)揮發(fā)油中特征成分之一為人參炔醇，常以其作為防風(fēng)揮發(fā)油質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)性 成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，人參炔醇具有抗癌、抑菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降壓抗炎和神經(jīng)細(xì)胞保 護(hù)等藥理作用，而且對(duì)實(shí)驗(yàn)性遲發(fā)型超敏反應(yīng)有顯著的抑制作用。
[0004] 國(guó)內(nèi)外對(duì)防風(fēng)上述一些化學(xué)成分提取工藝的研究已有相關(guān)報(bào)道，但關(guān)于防風(fēng)揮發(fā) 油的提取工藝很少見報(bào)道。目前，提取揮發(fā)性成分的常規(guī)工藝是水蒸氣蒸餾法、超臨界萃取 法等。水蒸氣蒸餾法提取溫度高，時(shí)間長(zhǎng)，易使對(duì)濕熱不穩(wěn)定的揮發(fā)性成分發(fā)生變化，且高 沸點(diǎn)的成分難以檢測(cè)；而超臨界流體萃取法是一種新的提取方法，提取揮發(fā)油能力強(qiáng)，具有 防止氧化、熱解及提高揮發(fā)油品質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，但該工藝需要高壓設(shè)備，技術(shù)要求高，設(shè)備費(fèi)用 投資大，應(yīng)用還不普遍。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法及其在制備抗腫瘤藥物中的 應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明包括以下步驟： a. 將防風(fēng)干燥粉碎，過40目篩，加入相當(dāng)于防風(fēng)粉末重量1~2%的纖維素酶后溶于 〇. 5?1倍的ρΗ4. (Γ5. 0的檸檬酸/檸檬酸鈉鈉緩沖溶液中，密封，于4(T50°C發(fā)酵Γ6天； b. 將發(fā)酵后的原料置于超臨界CO2萃取裝置中，設(shè)置萃取壓力為2(T30MPa、萃取溫度 4(T50°C，分離釜壓力1(T15 MPa、溫度2(T30°C，CO2流量為20?301711，經(jīng)過2?311的萃取后 收集萃取物； c. 所得萃取物用有機(jī)溶劑萃取2~3次，合并萃取液，再經(jīng)無水硫酸鈉干燥脫水、減壓濃 縮，即得防風(fēng)揮發(fā)油。
[0007] 步驟a中所述的纖維素酶的活性為4(T60U/mg。
[0008] 步驟c中所述的有機(jī)溶劑為石油醚、乙醚中的任意一種。
[0009] 防風(fēng)揮發(fā)油可用于制備具有抗腫瘤作用的藥物中，在劑型方面可采用各種劑型， 如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑或緩釋劑。
[0010] 防風(fēng)揮發(fā)油抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)： 1、受試提取物：防風(fēng)揮發(fā)油 2、細(xì)胞株：肺癌細(xì)胞株GLC4、結(jié)腸癌細(xì)胞株COLO。
[0011] 3、給藥劑量和方法 防風(fēng)揮發(fā)油組：l〇mg/kg/天,灌胃給藥,隔一天一次,共五天。
[0012] 陰性對(duì)照組：10mg/kg/天，生理鹽水肌注給藥，隔一天一次，共五天。
[0013] 陽性對(duì)照組：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注給藥，隔一天一次，共五天。
[0014] 灌胃后2h，用HPLC檢測(cè)血漿藥物濃度。
[0015] 4、種植瘤模型的建立與給藥 (1)皮下種植：分別將上述細(xì)胞培養(yǎng)至90%融合，收集細(xì)胞，取2X10 6細(xì)胞懸液，注射 至小鼠肋下皮下組織，于術(shù)后15天取材，稱量瘤重。另取同樣模型，觀察30天，計(jì)算藥物對(duì) 模型動(dòng)物存活率的影響。
[0016] (2)肺內(nèi)種植瘤肺轉(zhuǎn)移模型：取2 X 10 6細(xì)胞懸液注射至小鼠肺包膜內(nèi)，于術(shù)后15 天取肺，測(cè)量瘤重和肺轉(zhuǎn)移數(shù)。
[0017] (3)給藥方式：種植瘤細(xì)胞同時(shí)給藥。
[0018] 5、結(jié)果 結(jié)果如表1、表2和表3顯示，防風(fēng)揮發(fā)油組用藥均有不同程度的抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移 的作用，可延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)小鼠的生存期。
[0019] 表1防風(fēng)揮發(fā)油對(duì)種植瘤的抑制作用（n=20,i±S)

【權(quán)利要求】
1. 一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： a. 將防風(fēng)干燥粉碎，過40目篩，加入相當(dāng)于防風(fēng)粉末重量1~2%的纖維素酶后溶于 〇. 5?1倍的ρΗ4. (Γ5. 0的檸檬酸/檸檬酸鈉鈉緩沖溶液中，密封，于4(T50°C發(fā)酵Γ6天； b. 將發(fā)酵后的原料置于超臨界C02萃取裝置中，設(shè)置萃取壓力為2(T30MPa、萃取溫度 4(T50°C，分離釜壓力1(T15 MPa、溫度2(T30°C，C02流量為20?301711，經(jīng)過2?311的萃取后 收集萃取物； c. 所得萃取物用有機(jī)溶劑萃取2~3次，合并萃取液，再經(jīng)無水硫酸鈉干燥脫水、減壓濃 縮，即得莪術(shù)揮發(fā)油。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，其特征在于，步驟a中所述的纖 維素酶的活性為4(T60U/mg。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防風(fēng)揮發(fā)油的制備方法，其特征在于，步驟c中所述的有 機(jī)溶劑為石油醚、乙醚中的任意一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求Γ3所述方法制備的防風(fēng)揮發(fā)油在制備具有抗腫瘤作用的藥物的應(yīng) 用，特征在于防風(fēng)揮發(fā)油與藥學(xué)上適用載體混合，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑或 緩釋劑。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104274506SQ201410550558
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司