一種紫杉烷衍生物tm-2的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法
【專利摘要】一種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法屬醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。該注射液包含以下成分：TM-2、注射用油、乳化劑、膽固醇、聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物、輔助乳化劑、穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水。其制備方法為按上述制劑質(zhì)量計，將TM-2與油溶性介質(zhì)混合均勻后，在分散在水相中，經(jīng)過高速攪拌制備初乳后，再進(jìn)行高壓均質(zhì)過程，制劑采用高壓旋轉(zhuǎn)滅菌法滅菌。與參比制劑紫杉醇脂質(zhì)微球注射液相比，TM-2脂質(zhì)微球注射液顯示出更好的抗腫瘤活性。本發(fā)明公開的TM-2脂質(zhì)微球注射液不僅藥效好于參比制劑紫杉醇脂質(zhì)微球注射液，而且其穩(wěn)定性好，降低了TM-2的毒性，提高了療效，同時可以耐受熱壓滅菌，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液及 其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的一大頑癥，每年全世界因癌癥而死亡的人不計其數(shù)。 攻克癌癥難關(guān)已成為醫(yī)藥工作者和化學(xué)工作者當(dāng)務(wù)之急的任務(wù)。因此尋找有效的抗癌藥物 成為研究的熱點。抗癌藥物的研發(fā)是當(dāng)今的一個世界課題，特別是從天然產(chǎn)物中篩選抗癌 新藥，已成為抗癌藥物研發(fā)的熱點。
[0003] 紫杉醇（Paclitaxe, Taxol TAX)最初是由美國科學(xué)家Wall和Wani于1971年從 太平洋短葉紅豆杉（Taxus drevifolia)的樹皮中提取分離得到的，后由Albert Einstein 醫(yī)學(xué)院的生化教授SchifT和Horwitz報道其獨特作用后被廣泛重視的一種天然活性產(chǎn)物。 近四十年來，紫杉醇作為一種抗癌機(jī)理獨特、抗癌效果顯著、抗癌譜廣的一線抗癌藥物至今 仍成為全世界藥物學(xué)家研究的焦點，其中代表藥物紫杉醇和多西紫杉醇已被美國食品藥品 監(jiān)督管理局（FDA)批準(zhǔn)用于乳腺癌、宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌以及前列腺癌的臨床治療。紫 杉烷類化合物可與微管蛋白的亞基結(jié)合以及通過激活多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋 亡。盡管紫杉烷類化合物具有理想的抗腫瘤效果，但制劑開發(fā)卻一直受到其極差的水溶性 的制約，時至今日美國FDA批準(zhǔn)上市的制劑也屈指可數(shù)。為解決這一問題，傳統(tǒng)制劑學(xué)采取 了大量加入表面活性劑（聚氧乙烯蓖麻油、吐溫-80)的做法，但會直接導(dǎo)致如過敏反應(yīng)、神 經(jīng)毒性等嚴(yán)重不良反應(yīng)。開發(fā)不含或低含量表面活性劑的紫杉烷制劑，已成為其制劑研究 的主要問題。此外，長期的化療給藥導(dǎo)致的多藥耐藥也限制了對癌癥病人的成功治療。多 藥耐藥（MDR)主要歸因于P-糖蛋白（P-gp)在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，P-gp外排泵能夠顯著降 低細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度。近年來隨著多藥耐藥腫瘤的出現(xiàn)，紫杉烷類藥物的抗腫瘤效果 大打折扣。因此，現(xiàn)有的紫杉烷衍生物制劑不但毒副作用較大，療效降低，而且降低了病人 的順應(yīng)性，不利于臨床應(yīng)用。這些問題的解決往往有賴于新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)和獨特作用機(jī)制化 合物的發(fā)現(xiàn)。
[0004] 近十幾年來，紫杉醇對敏感腫瘤細(xì)胞和耐藥腫瘤細(xì)胞的構(gòu)效關(guān)系一直是人們研究 的重點和熱點。紫杉醇對敏感腫瘤細(xì)胞的構(gòu)效關(guān)系研究結(jié)果表明：C-13側(cè)鏈、C-4、C-5的 四元氧環(huán)及C-4位的乙酰氧基取代、C-2位酯基與細(xì)胞毒性密切相關(guān)。紫杉醇的對P-gp過 表達(dá)機(jī)制引起的多藥耐藥腫瘤（MDR)的構(gòu)效關(guān)系研究結(jié)果表明：紫杉醇C-13側(cè)鏈的C-3' 苯甲?；氨交鶇^(qū)域、C-7位及10位的羥基為P-糖蛋白識別并結(jié)合的結(jié)合高度敏感區(qū)域， 將這些區(qū)域進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造可顯著增強(qiáng)對多藥耐藥（MDR)腫瘤的活性。根據(jù)此研究基礎(chǔ)，由 法國制藥公司Sanofi-Aventis投資研發(fā)了骨架結(jié)構(gòu)較為新穎的紫杉烷類化合物-拉洛他賽 (Larotaxel，XRP9881)，其結(jié)構(gòu)特點是將多西他賽的C-IO位乙?；珻-7、C-8、C-19成三元 環(huán)。拉洛他賽的臨床研究證明，人們對拉洛他賽顯著的抗癌療效，較低的副作用非常滿意， 尤其是對于過表達(dá)多藥耐藥基因的卵巢癌、乳腺癌療效更佳。而新一代紫杉烷衍生物TM-2 是以拉洛他賽（LarotaXel，XRP9881)為先導(dǎo)化合物，用叔丁基替換C-13側(cè)鏈的C-3'位苯 環(huán)，設(shè)計而成。與拉洛他賽相比，TM-2對敏感腫瘤細(xì)胞和耐藥腫瘤細(xì)胞的活性均有顯著提 高，同時，由于側(cè)鏈C-3'位苯環(huán)對位也是細(xì)胞色素P450酶系統(tǒng)的代謝位點，此部位叔丁基 的引入在一定程度上可使藥物代謝穩(wěn)定性增加，藥物作用時間延長。
[0005] 以紫杉醇和多西他賽為陽性對照而進(jìn)行的各體內(nèi)體外抗腫瘤活性研究結(jié)果表明， TM-2對多種人源腫瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用均顯著強(qiáng)于陽性對照，尤其是針對MDR腫瘤細(xì) 胞（MCF-7/ADR、KB/VCR)與紫杉醇相比具有3-5個數(shù)量級活性的提高，與多西他賽相比具有 1-3個數(shù)量級活性的提高，與拉洛他賽相比具有1-2個數(shù)量級活性的提高。TM-2作為新一 代具有抗多藥耐藥性的半合成紫杉烷衍生物，在抗腫瘤活性、抗耐藥性、生物利用度、抗代 謝等方面均有顯著優(yōu)勢，因此TM-2的開發(fā)與應(yīng)用具有重大的社會價值。
[0006] 處方前研究結(jié)果表明TM-2難溶于水，且水中穩(wěn)定性差，但其脂溶性極佳，其在油 中的溶解度明顯優(yōu)于多西他賽等現(xiàn)有的紫杉烷類衍生物，TM-2的降解主要發(fā)生在水中，而 在油中幾乎不發(fā)生降解。因此采用高壓均質(zhì)技術(shù)將TM-2載入0/W型脂質(zhì)微球的油相或界 面膜中，提高其在制劑中的溶解性能及化學(xué)穩(wěn)定性，同時以脂質(zhì)微球的高效、低毒的優(yōu)勢充 分發(fā)揮TM-2抗腫瘤活性并降低毒副作用，以促進(jìn)和推廣TM-2的應(yīng)用。
[0007] 靜脈注射脂肪乳劑作為腸外能量的重要補(bǔ)給方式應(yīng)用于臨床已近半個世紀(jì)，是 根據(jù)乳糜微粒的組成、結(jié)構(gòu)與特點而設(shè)計，主要是由甘油三酯和磷脂組成的乳劑顆粒溶 液。由于藥物包裹于脂肪乳劑的脂質(zhì)核心部分，該結(jié)構(gòu)類似于微球，因此脂質(zhì)微球（Lipid Microsphere, LM)的名稱也應(yīng)用而生。載藥脂質(zhì)微球最主要的優(yōu)點是解決了脂溶性藥物難 溶于水的問題，避免了有機(jī)溶劑的加入，而且藥物大部分分散在油相，少部分分散在油水界 面層，減少了藥物與血管的直接接觸，從而減少了對血管的刺激性；其乳化形成的乳滴與人 體的乳糜微粒極為相似，易為人體吸收、利用；另外，載藥脂質(zhì)微球也具有靶向定位作用，淋 巴系統(tǒng)和MPS靶向性顯著，S卩乳劑中的藥物可被動靶向至淋巴液及富含MPS的臟器組織。 利用這一特點，將抗癌藥物制成靜脈注射用脂質(zhì)微球注射液，注入體內(nèi)后可明顯提高在肝、 脾、肺及淋巴等部位的藥物濃度，增強(qiáng)療效，減輕不良反應(yīng)；而且較高的淋巴藥物濃度可有 效防止癌細(xì)胞從淋巴途徑轉(zhuǎn)移。高曉黎等制備的去氫駱駝蓬堿靜脈注射用脂質(zhì)微球注射 液，可顯著提高藥物在肝、脾、淋巴等器官的分布，減少向腦組織的轉(zhuǎn)運，表明其可提高去氫 駱駝蓬堿治療肝、脾等部位癌癥的療效并降低其對神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)。Wang等制備了阿 克拉霉素A乳劑，并進(jìn)行了小鼠藥物動力學(xué)、組織分布、急毒和藥效學(xué)研究。結(jié)果表明，乳劑 可提高療效并降低藥物的心臟毒性，急毒和藥效學(xué)研究也證實了這項推測。鑒于脂質(zhì)微球 給藥系統(tǒng)有上述諸多優(yōu)勢，該劑型已經(jīng)成為抗癌藥物的良好載體。通過系統(tǒng)的處方及工藝 摸索，載藥脂質(zhì)微球存在的粒徑、滅菌及穩(wěn)定性等三大難題也已基本得以解決，為實現(xiàn)其 工業(yè)化生產(chǎn)提供了有力的保證。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供一種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液及其制備方法，目的在于 不使用聚氧乙烯蓖麻油、Tween-80、有機(jī)溶劑，解決TM-2水溶性差及物理和化學(xué)穩(wěn)定性問 題，增加藥物的包封率，延長藥物的半衰期，制備能耐受熱壓滅菌的長期放置穩(wěn)定的TM-2 脂質(zhì)微球注射液。該制劑刺激性小、穩(wěn)定性好、成本低、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0009] -種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，該注射液包含以下成分：TM-2、注射 用油、乳化劑、膽固醇、聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物、輔助乳化劑、穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑及 注射用水，各組成成分按質(zhì)量百分比組成為：TM-20. 001% -1%、注射用油5-25%、乳化劑 0.8-8%、膽固醇0.03% -0. 15%、聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物0.05% -1%、輔助乳化劑 0. 2-0. 8%、穩(wěn)定劑0. 02-0. 2%、等滲調(diào)節(jié)劑1. 5-3. 5%，余量為注射用水。
[0010] 所述注射液中TM-2結(jié)構(gòu)式為：
[0011]

【權(quán)利要求】
1. 一種紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于該注射液由TM-2、注射用 油、乳化齊IJ、膽固醇、聚乙二醇聚氨基酸、輔助乳化齊IJ、穩(wěn)定齊IJ、等滲調(diào)節(jié)劑及注射用水組成； 各組成成分按質(zhì)量百分比為：TM-2 0. 001% -1%、注射用油5-25%、乳化劑0. 8-8%、膽固 醇0.03% -0. 15%、聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物0.05% -1 %、輔助乳化劑0.2-0. 8%、穩(wěn) 定劑0. 02-0. 2%、等滲調(diào)節(jié)劑1. 5-3. 5%，余量為注射用水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述 TM-2結(jié)構(gòu)式為：
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述注射 用油選自紅花油、大豆油、玉米油、中鏈脂肪酸甘油三酯、薏茌油、沙棘油、紫蘇油、橄欖油、 蓖麻油或鴉膽子油中的一種或幾種混合。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述的乳 化劑選自天然磷脂或合成磷脂中的一種或幾種；其中所述天然磷脂為蛋黃卵磷脂、大豆磷 脂；所述合成磷脂為磷脂酰甘油酯或二硬脂酰磷脂酰膽堿。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述聚乙 二醇-聚氨基酸材料為親水性的聚乙二醇（分子量2000-10000Da)與疏水性的聚天冬氨酸 (分子量1000?5000Da)構(gòu)成的嵌段共聚物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述的輔 助乳化劑選自泊洛沙姆188和聚山梨酯-80中的一種或幾種的混合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述的穩(wěn) 定劑為油酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液，其特征在于所述等滲 調(diào)節(jié)劑為甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖中的一種或其混合物。
9. 一種如權(quán)利要求1所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液的制備方法，其特征 在于包括如下步驟： (1) 將處方量TM-2、乳化劑、穩(wěn)定劑、膽固醇分散在適量注射用油中，置磁力攪拌器中 加入60?80°C至混合均勻，作為油相； (2) 將處方量的輔助乳化劑、等滲調(diào)節(jié)劑、聚乙二醇-聚天冬氨酸材料加入適量注射用 水中，置磁力攪拌器中加入60?80°C至混合均勻，作為水相； (3) 利用組織搗碎機(jī)，緩慢將水相加入油相或?qū)⒂拖嗉尤胨嘀校悦糠昼?, 000? 20, 000轉(zhuǎn)攪拌3?5分鐘，即得初乳，將出初乳冷卻，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至 4-7左右，用注射用水定容至全量； (4) 將初乳轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，在20-80MPa，30°C?60°C條件下勻化4-15次； (5) 裝瓶，封罐氮氣，旋轉(zhuǎn)式高壓蒸汽滅菌，冷水浴迅速降溫即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的紫杉烷衍生物TM-2的脂質(zhì)微球注射液的制備方法，其 特征在于所述處方量為：按質(zhì)量百分比為：TM-2 0.001%-1%、注射用油5-25%、乳化劑 0.8-8%、膽固醇0.03% -0. 15%、聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物0.05% -1%、輔助乳化劑 0. 2-0. 8%、穩(wěn)定劑0. 02-0. 2%、等滲調(diào)節(jié)劑1. 5-3. 5%，余量為注射用水。
【文檔編號】A61K9/107GK104323990SQ201410512919
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】唐星, 王艷嬌, 張巖, 何海冰 申請人:沈陽藥科大學(xué)